干扰素治疗前后慢性乙型肝炎患者外周血单核细胞Toll样受体4水平的变化

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者干扰素治疗前后外周血单核细胞Toll样受体(TLR)4水平的变化及其意义.方法 用流式细胞仪检测30例健康人、65例CHB患者外周血单核细胞表面TLR4的表达,ELISA法检测上述患者血清白细胞介素(IL)-6的水平,鲎试验检测血清内毒素.结果 CHB患者组与正常对照组比较,外周血单核细胞TLR4表达水平、血清IL-6及内毒素水平均升高,具有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).患者应用干扰素针治疗12周时TLR4水平及IL-6水平均下降,但无显著性差异(P＞0.05),内毒素水平下降较明显(P＜0.05);治疗24周时,患者TLR4水平、血清IL-6水平及内毒素水平均明显下降,与治疗前比较有显著性差异(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01).结论 外周血单核细胞TLR4表达水平与CHB的发病及治疗转归有关,且TLR4水平与IL-6及内毒素水平密切相关.     

肝硬化患者外周血单核细胞内毒素受体表达与慢性炎症反应关系的临床意义

背景:内毒素受体在内毒素、细胞因子等介导的炎性信号转导过程中具有重要作用。目的:了解肝硬化患者外周血单核细胞(PBMC)内毒素受体的表达变化与慢性炎症反应关系的临床意义。方法:应用荧光素标记的抗人Toll样受体(TLR)4/抗人CD14单抗,以流式细胞术检测40例肝硬化患者和15名健康志愿者PBMC内毒素受体TLR4和CD14蛋白的表达;以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内毒素受体TLR4 mRNA、CD14 mRNA和信号转导分子MyD88 mRNA的表达;以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清白细胞介素(IL)-1β、IL-10和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;以偶氮基质显色法测定血浆内毒素水平。结果:肝硬化患者PBMC内毒素受体TLR4和CD14蛋白的表达水平显著高于对照组(P<0.05),但不同Child-Pugh分级组间差异无统计学意义;与对照组相比,PBMC内毒素受体TLR4 mRNA、CD14 mRNA和信号转导分子MyD88 mRNA的表达水平也有增高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);肝硬化患者血清细胞因子IL-1β、IL-10和TNF-α水平,以及血浆内毒素水平均较对照组显著升高(P<0.05),且高内毒素水平患者内毒素受体的表达显著高于低内毒素水平患者(P<0.05),细胞因子水平也较低内毒素水平者增高。结论:肝硬化患者PBMC内毒素受体的表达明显上调,与患者的慢性炎症反应状态一致。     

2型糖尿病患者单核细胞TLR4表达及其与血浆TNF-α相关性研究

目的 探讨2型糖尿病患者单核细胞TLR4表达的变化及其与血浆炎症因子TNF-α的关系.方法 应用实时定量PCR及流式细胞仪检测22例2型糖尿病患者及20例健康对照者外周血单核细胞TLR4mRNA表达及TLR4阳性单核细胞比率,应用ELISA法检测血浆TNF-α浓度.结果 2型糖尿病患者外周血单核细胞TLR4mRNA相对表达量及TLR4阳性单核细胞比率为3.05±0.56、(14.93±3.48)%明显高于对照组1.48±0.30、(7.79±1.63)%(P＜0.05),血浆TNF-α浓度为(49.29±7.09)ng/L,高于对照组(39.55±5.22)ng/L(P＜0.05),TLR4阳性单核细胞比率与血浆TNF-α浓度正相关(r=0.543,P＜0.05).结论 2型糖尿病患者单核细胞TLR4表达增高,单核细胞TLR4可能参与了2型糖尿病的炎症反应.     

溃疡性结肠炎患者外周血单核细胞中Toll样受体4、NF-κB的表达及其临床意义

目的 分析溃疡性结肠炎(UC)患者外周血单核细胞中Toll样受体4(TLR4)、核因子-κ,B(NF-κB)水平的变化,探讨两者在UC发病中作用.方法 根据结肠镜检和病理活检结果,106例UC患者分为活动期组(57例)和缓解期组(49例),另同期健康体检患者50例作为对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)技术,测定所有对象外周血单核细胞中TLR4和NF-κB的表达情况.结果 与对照组比较,UC患者外周血单核细胞TLR4、NF-κBmRNA表达水平显著升高,且活动期组与缓解期组间比较差异有统计学意义(P＜0.05):按病理分级与Ⅰ级比较,Ⅱ级、Ⅲ级患者外周血单核细胞TLR4、NF-κB mRNA表达水平显著升高,且随着病理分级升高,TLR4 、NF-κB mRNA表达依次增加(P ＜0.05).UC患者TLR4与NF-κB mRNA表达均呈线性正相关,相关系数r=0.753(P ＜005).结论 UC患者外周血单核细胞中TLR4及NF-κB呈高表达状态,且TLR4的表达与NF-κB的表达密切相关.     

CD14和Toll样受体4的表达在内毒素致肝炎重型化中的意义

目的 探讨CD14和Toll样受体4(TLR4)在内毒素(LPS)诱导机体炎性因子分泌过程中的作用,阐明乙型肝炎重型化的机制. 方法 采用流式细胞学方法和逆转录聚合酶链反应等技术,检测30例慢性重型乙型肝炎患者,30例慢性乙型肝炎患者和20名健康者(对照组)的外周血单核细胞的mCD14水平及CD14 mRNA,TLR4 mRNA表达水平,同时应用动态浊度法测定患者血浆LPS水平,应用酶联免疫吸附法检测患者血清肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)-1 β,IL-6的含量.数据的统计分析采用SPSS11.5统计软件完成,分别采用单因素方差分析、非参数检验、Nemenyi法和直线相关分析.结果 外周血单个核细胞mCD14表达水平:慢性重型乙型肝炎组为74.2%±12.3%,慢性乙型肝炎组为63.6%±11.8%,对照组为60.3%±7.20/;CD14mRNA和TLR4 mRNA的相对表达:慢性重型乙型肝炎组分别为2.92±0.67和1.86±0.45,慢性乙型肝炎组分别为1.34±0.51和0.93±0.18,对照组分别为0.92±0.58和0.73±0.16,慢性重型乙型肝炎组均明显高于慢性乙型肝炎组和对照组,F值分别为11.473、85.037和102.328,P值均<0.01,差异有统计学意义.血浆LPS、IL-l,IL-6水平:慢性重型乙型肝炎组分别为(1.87±1.61)Eu/ml,(0.96±0.16)pg/ml和(68.34±48.30)pg/ml,慢性乙型肝炎组分别为(0.11±0.11)Eu/ml、(0.19±0.02)pg/ml,(19.28±4.65)pg/ml,对照组分别为(0.03±0.03)Eu/ml、(0.15±0.01)pg/ml、(12.01±3.88)pg/ml,慢性重型乙型肝炎组均明显高于慢性乙型肝炎组和对照组,χ2值分别为32.065、83.472、36.236,P值均<0.01.外周血TNFα表达水平:慢性重型乙型肝炎组为(19.78±9.25)pg/ml、慢性乙型肝炎组分别为(7.26±6.52)pg/ml、对照组分别为(4.15±4.06)pg/ml、F=35.092,P<0.01.相关分析显示,在慢性重型乙型肝炎组LPS水平与mCD14、CD14:mRNA,TLR4 mRNA表达水平呈明显的相关性,n=0.865、r2=0.415、r3=0.524,P值均<0.05.结论 LPS可能通过以CD14和TLR4为主的LPS受体激活及其信号传导,刺激炎性因子分泌的途径,在肝炎重型化过程中发挥重要作用.     

长期有氧运动对老年男性原发性高血压患者外周血单核细胞Toll样受体4的影响

目的观察16 w有氧运动对老年男性原发性高血压患者血液动力学、血浆肿瘤坏死因子(TNF)-α含量以及外周血单核细胞Toll样受体(TLR)4表达的影响。方法 60例老年男性原发性高血压患者按主观意愿分为运动组(E组)和对照组(C组)。E组进行16 w有氧运动,C组保持日常生活习惯不变。分别于试验前后测定心率和血压ELISA法测定血浆TNF-α含量,流式细胞术检测外周血单核细胞TLR4表达(阳性率)水平。结果与试验前比较,试验后E组安静心率和血压降低(P<0.01),血浆TNF-α含量下降(P<0.01),外周血单核细胞TLR4表达(阳性率)下调(P<0.01);C组各指标均无显著性变化(P>0.05)。试验后与C组比较,E组上述各指标均显著性降低(P<0.01)。结论长期有氧运动可降低老年男性原发性高血压患者血压水平,其机制可能与抑制TLR4信号通路并下调炎症因子表达有关。     

二草清肝汤对内毒素性肝损害防护作用的实验研究

目的：探讨中药二草清肝汤对内毒素/脂多糖（LPS）性肝损害的防护机制。方法：采用LPS腹腔注射（10mg/kg）制备小鼠内毒素血症肝损害模型,BALB/c小鼠200只随机分为正常对照组、LPS组、二草清肝汤小剂量组和二草清肝汤大剂量组;光镜观察肝组织病理学改变,全自动生化分析仪检测血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平,酶联免疫吸附法检测血浆白细胞介素-12（IL-12）、肿瘤坏死因子（TNF）-α浓度,免疫组织化学法检测Toll样受体4（TLR4）表达水平,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝组织TLR4 mRNA表达水平。结果：二草清肝汤能明显提高小鼠存活率,肝组织病理损害程度减轻;二草清肝汤小剂量组及大剂量组小鼠的IL-12、TNF-α水平显著低于LPS组,差异有显著性意义（均P（0.05）;二草清肝汤小剂量组和大剂量组小鼠肝组织TLR4 mRNA水平也明显低于LPS组,差异均有显著性意义（均P（0.05）,但二草清肝汤大、小剂量组间差异无显著性意义（P〉0.05）。结论：二草清肝汤能明显减轻LPS所致的肝损害,其机制可能与其下调肝脏各种细胞的TLR4表达,同时下调IL-12、TNF-α的水平有关。     

丙泊酚对LPS刺激人单核细胞分泌TNF-α及TLR4表达的影响

将不同浓度丙泊酚作用于脂多糖(LPS)激活的人外周血单核细胞24 h,ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α的水平,流式细胞仪检测单核细胞表面TLR4的表达变化.结果 随丙泊酚浓度的升高,LPS刺激单核细胞引起的TLR4表达逐渐降低.相关分析示,TNF-α与TLR4表达呈正相关.证实丙泊酚可抑制LPS刺激单核细胞引起的TNF-α释放,且呈剂量依赖性;其机制可能为降低单核细胞TLR4的表达.     

干扰素调节因子3在慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞中的表达及意义

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞中干扰素调节因子3(interferon regulatefactor 3, IRF3)在HBV诱导的抗病毒免疫反应中的表达及作用.方法:选取HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者28例,健康对照者27例,用免疫磁珠细胞分选(MACS)法获得纯化的CD14 单核细胞,RPMI1640培养基培养,用hGM-CSF、 hIL-4诱导单核细胞成为未成熟的MoDC, 加入PolyI: C刺激,获得成熟的MoDC. PolyI:C刺激后0、12、24、48h收集细胞培养的上清液及细胞,Real-Time PCR法检测,IRF3和Toll样受体3(TLR3)的表达,ELISA方法检测MoDC细胞上清液中IFN-β的浓度变化.结果:12h健康对照组MoDC中IRF3 mRNA表达水平明显升高,并达高峰与0h相比差异显著(P<0.05),24、48h表达逐渐下降.而患者组MoDC中IRF3 mRNA的表达上升不明显.24h健康对照组MoDC中TLR3表达上调显著(86.27%±14.74% vs 70.78%4±11.1 6%, P<0.05),48h TLR3表达与0h相比无显著性差异,而患者组0、12、24h TLR3表达上调不明显,48h TLR3表达上调显著(85.46%±6.87% vs 69.17%±20.43%, P<0.05).健康对照组IFN-β mRNA表达及细胞上清液中的浓度与0h相比显著升高(P<0.05),较患者组0、12、24和48h IFN-β的表达显著升高(P<0.05).结论:HBV慢性感染患者在感染病毒后不能激活IRF3从而导致宿主不能分泌足够的IFN-β以清除病毒,这可能是HBV慢性持续感染的原因之一.     

肝硬化患者外周血单核细胞表面TLR4和TLR2表达的临床意义

目的:探讨肝硬化患者外周血中单个核细胞(PBMC)表面Toll样受体4(Toll-likereceptor4,TLR4)、TLR2表达与肝硬化患者细菌感染的关系,观察抗生素治疗对TLR4与TLR2表达的影响.方法:采用三色荧光染色法,荧光素标记的抗TLR2/抗TLR4/抗CD14mAb对42例肝硬化患者及正常人的血液单核细胞表面TLR2、TLR4及CD14分子进行免疫荧光染色,应用流式细胞仪检测.结果:肝硬化腹水组TLR2和TLR4表达(n=30,TLR2,47.65±0.75;TLR4,22.28±0.80)与正常对照组(n=15,TLR2,24.40±2.77;TLR4,14.45±3.23)比较有显著性差异(P<0.05),肝硬化腹水患者治疗前(n=20,TLR2,47.79±0.76;TLR4,28.58±0.79)和治疗后(n=20,TLR2,17.22±2.48;TLR4,12.37±0.35)比较有显著性差异(P<0.05);肝硬化腹水患者与肝硬化无腹水患者组(n=12,TLR2,25.37±1.62;TLR4,14.81±0.29)比较有显著性差异(P<0.05);肝硬化无腹水患者组与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05).结论:肝硬化腹水患者TLR4与TLR2的表达显著上调,抗生素治疗后显著下调.     

萝卜硫素对慢阻肺患者TLR4、MyD88以及下游炎性因子的影响分析

目的探讨萝卜硫素对慢性阻塞性肺病(简称:慢阻肺)患者Toll样受体(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)及炎性因子的影响作用。方法选取40例稳定期慢阻肺患者作为病例组,同期健康体检者40例作为健康组,采集患者外周静脉血,分离单核细胞,诱导形成单核细胞源性巨噬细胞(MDM),将MDM分为脂多糖、萝卜硫素、萝卜硫素+脂多糖、及不处理(空白组)。健康组不给予任何处理措施,采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)检测TLR4 mRNA、My D88 mRNA,免疫荧光染色法检测TLR4、My D88蛋白,采用ELISA法检测炎性因子肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、白细胞介素-6(IL-6)。结果慢阻肺患者的TLR4 mRNA、My D88 mRN、蛋白表达到水平显著高于健康组(P0.05),不同处理方式下慢阻肺患者TLR4 mRNA、My D88 mRNA、蛋白表达水平组间比较为脂多糖组空白组萝卜硫素+脂多糖萝卜硫素组且差异均具有统计学意义(P0.05)。慢阻肺患者的TNF-ɑ、IL-6表达水平显著的高于健康组(P0.05),不同处理方式下慢阻肺患者TNF-ɑ、IL-6表达水平组间比较结果为脂多糖组空白组萝卜硫素+脂多糖萝卜硫素组且差异均具有统计学意义(P0.05)。结论慢阻肺患者的外周血巨噬细胞Toll样受体(TLR4)、髓样分化因子88(My D88)高表达,萝卜硫素可以降低TLR4、My D88、高表达,从而减轻慢阻肺患者的炎症反应。     

乙型肝炎肝硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体2、4的表达

目的 探讨乙型肝炎(乙肝)肝硬化患者中Toll样受体(TLR)2、4表达与细胞因子的相关性.方法 采用随机数字表法随机收集35例乙肝肝硬化患者与35例健康对照者的静脉抗凝血.ELISA检测血TNF-α含量.分离两组外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞仪检测PBMC表面TLR2、4表达.实时荧光定量PCR检测每份PBMC中TLR2、4 mRNA的表达水平.正态分布均数比较采用t检验和单因素方差分析,非正态分布数据采用Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis H检验和Spearman相关分析.结果 肝硬化组的血TNF-α水平明显高于对照组(33.52 ng/L比6.07 ng/L,Z=6.584,P<0.01),且随着Child-Pugh评分的增加而升高.肝硬化组PBMC中TLR2阳性细胞率明显高于对照组(20.65%比12.04%,Z=-4.458,P<0.01),与血TNF-α水平存在正相关(r=0.448 3,P<0.05),且随着Child-Pugh评分的增加而升高.两组PBMC中TLR4阳性率差异无统计学意义.肝硬化组PBMC中TLR2/还原型磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)mRNA表达水平明显高于对照组(0.234 2比0.043 1,Z=-6.83,P<0.01),与血TNF-α水平存在正相关(r=0.411 1,P<0.05),且随着Child-Pugh评分的增加而升高.两组PBMC中TLR4 mRNA表达水平差异无统计学意义.结论 肝硬化患者PBMC中TLR2表达水平明显增高,与血TNF-α水平及肝硬化的严重程度呈正比,但TLR4表达水平无明显变化,提示在乙肝肝硬化患者中,是TLR2而非TLR4在肝硬化的进展过程中具有重要作用.     

活化的类风湿关节炎患者外周血单个核细胞Toll样受体4诱导Th17细胞分化

目的 研究类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs) Toll样受体4(TLR4)通过诱导Th17细胞分化参与RA疾病发生发展的意义.方法 采集22例RA患者和20名健康对照外周血,流式细胞术检测Th17细胞频率,脂多糖刺激PBMCs 2 d,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测PBMCs TLR4 mRNA水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测上清液白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量.收集上清液与CD4+脐带血单个核细胞(CBMCs)培养3d,RT-qPCR检测CBMCsIL-17 mRNA水平.ELISA检测上清液IL-17含量.统计学处理采用成组t检验.结果 与健康对照组比较,RA患者Th17细胞频率[(0.53±0.14)％与(1.57±0.68)％]、TLR4 mRNA显著升高(P均＜0.01);PBMCs经脂多糖刺激后,RA患者TLR4 mRNA升高3.5倍,而健康对照组下降到0.11倍;RA患者PBMCs产生的IL-6、TNF-α较健康对照组明显增加(P＜0.01);RA患者PBMCs上清液诱导CD4+CBMCs IL-17 mRNA水平、IL-17含量与健康对照组相比均显著升高(P＜0.01);而未经脂多糖刺激,2组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 RA患者PBMCs的TLR4表达及对脂多糖的刺激的反应性增加,且具有较强的诱导Th17细胞分化能力.     

聚肌胞刺激后慢性乙型肝炎患者树突状细胞内Toll样受体3的表达变化

目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)患者树突状细胞(DC)内Toll样受体3(TLR3)的表达变化,探讨HBV持续感染与TLR3表达之间的关系.方法 选取CHB患者60例(CHB组)及健康对照者20名(对照组)为研究对象,应用免疫磁珠细胞分选法获得CD14~+单核细胞,体外诱导培养成未成熟的髓样树突状细胞(imDC),并以聚肌胞(poly I;C)刺激以获取成熟的树突状细胞(mDC).刺激48 h后测定细胞内TLR3蛋白及mRNA的表达,表面标志CD80和人白细胞抗原(HLA)-DR的蛋白表达.计量资料采用t检验,计数贤料采用卡方检验.结果 poly I:C刺激前,对照组和CHB组imDC内TLR3的流式平均荧光密度(MFI)分别为1192.95±301.40和1212.05±250.80,组间差异无统计学意义(t=0.280,P>0.05);刺激后MFI均明显升高,对照组与CHB组分别为1593.00±349.65和1352.98±313.67,前者比后者升高更显著(t=2.880,P<0.05).polyI:C刺激后,对照组与CHB组mDC胞内TLR3 mRNA的表达水平均明显升高,分别为0.1780±0.0664和0.1204±0.0267,前者升高更显著(t=3.909,P<0.05).CHB组内再分为HBeAg(+)和HBeAg(-)组,刺激后两组mDC内TLR3的MFI和mRNA水平均较imDC有明显升高,但组间比较差异均无统计学意义(t=0.366,P>0.05).结论 poly I:C刺激后,对照组和CHB组中mDC胞内TLR3的表达均明显升高,但CHB患者升高的程度显著低于健康者,提示CHB患者的TLR3合成不足可能与HBV持续感染相关.     

Altered expression of TLR homolog RP105 on monocytes hypersensitive to LPS in patients with primary biliary cirrhosis

BACKGROUNDS/AIMS: Toll-like receptors (TLRs) have emerged as a key component of the innate immune system that triggers antimicrobial responses. Altered monocyte responses to ligands for TLRs have been reported in patients with primary biliary cirrhosis (PBC), yet the precise mechanism remains unknown. METHODS: We investigated in vitro responses to a TLR4 ligand, lipopolysaccharide (LPS), using peripheral blood mononuclear cells and monocytes from 25 patients with PBC, 10 patients with chronic viral hepatitis (CVH), and 20 healthy individuals. RESULTS: After stimulation with LPS, we found significantly higher amounts of IL-1beta, IL-6, and IL-8 production in PBC patients. Through the TLR4 signaling pathway, activation of NF-kappaB and expression of MyD88 mRNA were significantly increased in PBC patients, and the level of TLR4 expression was significantly increased on PBC monocytes as compared with CVH patients and controls. Of significance, the surface expression of RP105, which has recently been shown to be involved in negative regulation of TLR4 signaling, on PBC monocytes was significantly decreased in comparison with CVH patients (P=0.016) and controls (P<0.001). CONCLUSIONS: These results suggest that expression of RP105 and TLR4 is altered on PBC monocytes, which appear to be hypersensitive to LPS, resulting in increased secretion of pro-inflammatory cytokines.     

锌指蛋白A20抑制Toll样受体4介导的人单核细胞炎症反应的实验研究

目的:观察锌指蛋白A20过度表达对人单核细胞膜Toll样受体(TLR4),下游促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素(IL)-12,以及抗炎因子IL-10表达的影响,探讨锌指蛋白A20对单核细胞炎症反应的抑制作用及可能的调节机制。方法:Ficoll细胞分离液分离人外周血单核细胞,随机分为对照组、脂多糖(LPS)组、A20转染组与LPS+A20转染组。荧光显微镜检测GFP报告基因,免疫组织化学检测A20蛋白的表达,RT-PCR检测A20及TLR4的mRNA表达,流式细胞检测技术检测TLR4的蛋白表达,ELISA方法检测上清液TNF-α、IL-12及IL-10表达水平。结果:LPS刺激后,单核细胞TLR4和内源性A20的mRNA和蛋白、TNF-α、IL-12和IL-10表达较对照组均明显升高(均P<0.01);TNF-α/IL-10和IL-12/IL-10均明显高于对照组(均P<0.01);转染A20基因的单核细胞,在无LPS刺激的条件下,上述指标与对照组相比均差异无统计学意义;转染A20基因的单核细胞在LPS刺激后,TLR4mRNA和蛋白、TNF-α、IL-12的表达以及TNF-α/IL-10和IL-12/IL-10均显著低于LPS组,而IL-10的表达明显高于对照组和LPS组(均P<0.01)。结论:TLR4激活介导单核细胞的炎症反应,且正反馈调节其自身受体TLR4和内源性A20的表达;A20参与单核细胞TLR4激活所介导的炎症反应,其表达增加与TLR4表达的增加有关;单纯提高A20表达对未被激活的单核细胞TLR4及其信号通路影响不大;A20过表达可抑制TLR4激活所介导的单核细胞的炎症反应。     

乙型肝炎e抗原对外周血单核细胞Toll样受体2表达的影响

目的 探讨HBeAg对外周血单核细胞表面Toll样受体2(TLR2)表达的影响.方法 对68例慢性乙型肝炎(CHB)患者(其中HBeAg与HBV DNA刚性37例,HBeAg阴性、HBVDNA阳性14例,HBeAg与HBV DNA阴性17例)和16名健康人的外周血肝素抗凝,加入Pam3CSK4在37℃、5%CO2条件下刺激3 h,用特异性TLR2单克隆抗体标记,经流式细胞仪检测CD14+细胞表面TLR2表达的百分率;比较刺激前后各组之间的差异.定量检测HBV DNA和血清HBV标志物,分析TLR2表达水平与HBeAg、HBV DNA的关系.用HBeAg与健康人及HBeAg阴性CHB患者的抗凝血在37℃、5%CO2条件下共培养6 h,用流式细胞仪定量分析HBeAg刺激后CD14+细胞表面TLR2的表达水平. 结果 HBeAg阳性CHB患者外周血CD14+细胞TLR2的表达率为47.57%±21.40%,明显低于健康对照组(76.51%±7.46%)和HBeAg阴性组(HBV DNA阳性组为73.2%±14.2%、HBV DNA阴性组为75.2%±11.3%,P<0.05);TLR2的表达水平在HBeAg阴性的HBV DNA阳性或阴性CHB患者组与健康对照组的差异无统计学意义.HBeAg阳性CHB患者外周血单核细胞经Pam3CSK4刺激后,TLR2的表达率明显升高,大部分患者TLR2的表达水平能够达到健康人或HBeAg阴性患者未经配体刺激的水平.健康人或HBeAg阴性CHB患者的外周血与HBeAg共孵育6 h后,CD14+细胞表面TLR2表达水平较HBeAg刺激前明显下降(P<0.05).结论 HBeAg阳性的CHB患者外周血CD14+细胞TLR2的表达水平明显低于HBeAg阴性患者和健康人,HBeAg能够抑制CD14+细胞TLR2的表达,提示HBeAg能够引起CHB患者外周血单核细胞表面TLR2表达的下调,这可能是HBV持续感染的重要因素之一;CHB患者HBVDNA水平可能不影响单核细胞表面TLR2的表达;Pam3CSK4可以明显提高HBeAg阳性CHB患者单核细胞表面TLR2的表达水平,TLR2配体有可能成为CHB免疫治疗的一个潜在靶位.     

慢性重型肝炎患者外周血单个核细胞中TLR2、TLR3和TLR9的mRNA表达

目的观察慢性重型肝炎患者外周血单个核细胞（PBMC）TLR2、TLR3和TLR9的mRNA表达,为慢性重型肝炎发病机制的研究提供思路。方法用密度梯度离心法分离慢性重型肝炎患者PBMC后,提取总RNA,并逆转录为cDNA,采用实时荧光定量PCR方法检测TLR2、TLR3和TLR9表达,并以肝硬化患者作为对照。结果慢性重型肝炎患者PBMC中TLR2和TLR9的mRNA表达较肝硬化患者明显增高,慢性重型肝炎患者TLR2和TLR9表达分别为肝硬化患者的2.73和2.52倍,而慢性重型肝炎患者TLR3的mRNA表达较肝硬化患者减少,慢性重型肝炎患者TLR3表达为肝硬化患者的88%。结论 TLR2、TLR9上调和TLR3下调可能参与了慢性重型肝炎的发病过程;动态观察患者体内TLRs表达可能更有助于揭示TLRs在慢性重型肝炎发病机制中的作用。     

DNA甲基化在成人特发性血小板减少性紫癜发病机制中的作用

目的 从DNA甲基化角度探讨成人特发性血小板减少性紫癜(ITP)的发病机制.方法 应用SYBR Green实时定量PCR方法测定48例成人ITP患者与36例正常对照者外周血单个核细胞DNA甲基转移酶1(DNMTl)、DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)和DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)的mRNA的相对表达水平.采用反相高效液相技术(HPLC)检测ITP患者与正常对照血浆中S-腺苷蛋氨酸(SAM)和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)含量.运用流式细胞术检测ITP患者与正常对照外周血CD_4~+和CD_8~+T细胞表面淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)亚单位C11a的表达水平.结果 成人ITP患者外周血单个核细胞DNMT3A和DNMT3B mRNA表达水平较对照组减低(P<0.01);DNMTl mRNA表达水平与对照组相比有降低趋势,但差异无统计学意义(P>0.05).成人ITP患者血浆SAH与对照组相比增高,差异有统计学意义(P<0.05);而血浆SAM和SAM/SAH比率与正常对照组相比差异无统计学意义(P值均>0.05).成人ITP患者外周血CD_8~+CD_(11a)~+细胞比例显著高于对照组(P<0.01),而CD_4~+CD_(11a)~+细胞比例和CD_4~+CD_(11a)~+/CD_4~+CD_(11a)~+比率较对照组显著降低(P值均<0.01),差异有统计学意义.结论 成人ITP患者外周血存在淋巴细胞低甲基化状态以及T细胞亚型上存在异常的CD_(11a)/LFA-1表达.DNA甲基化可能在ITP的发病中起一定的作用,但确切的作用机制还有待于进一步深入研究.