阿的福韦在鸭乙型肝炎模型及2.2.15细胞中抗乙型肝炎病毒的药效研究

目的:观察阿的福韦体内抗鸭乙型肝炎病毒(DHBV)的作用及体外抗乙型肝炎病毒(HBV)效果.方法:采用鸭乙型肝炎动物模型,用阿的福韦口服治疗10天,检测用药前后血清中的DHBV DNA、DHBsAg,并取肝脏样本提取总DNA,作Southern Blot分析.此外,以2.2.15细胞为靶细胞,给药后通过检测细胞培养液中HBsAg、HBeAg和HBV DNA观察阿的福韦抗HBV效果.结果:阿的福韦各剂量组用药后均能使血清中的DHBVDNA显著降低或极显著降低(P＜0.05或P＜0.01),但停药后有DHBV DNA回升现象;用药前后DHBsAg无明显改变.肝组织Southern Blot分析亦显示用药后肝脏中DHBV DNA有明显降低,停药后DHBV DNA反跳明显.大剂量阿的福韦加入细胞培养12天,对HBsAg抑制率为17.01%,对HBeAg抑制率为26.80%,对HBV DNA抑制率为26.92%.结论:阿的福韦在鸭体内有抗鸭乙型肝炎病毒的作用,但停药后DHBVDNA有"反跳"现象;体外实验无明显抗HBV病毒作用.     

应用双重原位杂交技术定位检测肝细胞癌中乙型,丙型肝炎病毒

探索乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒是否可同时感染同一宿主细胞。联合应用地高辛标记探针和生物素标记探针的双标记方法,成功建立起非放射性双重原位杂交技术,并应用这一技术检测了１０例肝细胞性肝癌及癌周细胞细胞内乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的感染情况。     

地高辛标记探针在斑点杂交检测HBV DNA中的初步应用

应用核酸分子杂交检测血清HBV DNA已成为诊断乙肝病毒(HBV),感染及判断其复制状态的重要手段。由于同位素标记探针的半衰期短及放射性污染等缺陷,限制了该技术的推广应用。生物索标记探针的灵敏度和特异性都不十分理想。本文制备地高辛际记的HBV DNA探针,初步应用于血清斑点杂交,是一种适合临床应用的探针检测技术。     

疏肝健脾祛湿中药体内抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

目的：观察由疏肝健脾祛湿中药组成的加味四逆散醇提物体内抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）的作用。方法：采用先天感染鸭乙型肝炎病毒的广州麻鸭为动物模型，以斑点杂交法检测用药前后鸭血清DHBV—DNAOD值的变化，并以拉米夫定作阳性对照。结果：加味四逆散大剂量组用药第5天和第10天，血清DHBV—DNAOD值明显下降，与病毒对照组比较，差异有显著性（P〈0．05，P〈0．01），与自身用药前比较，差异有显著性（P〈0．05，P〈0．01）；加味四逆散中剂量组在用药第5和第10天，血清DHBV—DNAOD值明显下降，与病毒对照组比较差异有显著性（P〈0．05，P〈0．05）；与自身用药前比较，用药第10天，血清DHBV—DNAOD值明显下降，差异有显著性（P〈0．05）。结论：加味四逆散大、中剂量在鸭体内有抗乙型肝炎病毒作用。     

复方药物ZL-1在鸭乙型肝炎病毒实验感染模型中抗病毒作用的研究

目的　研究中药复方ZL 1在鸭乙型肝炎病毒 (DHBV)持续性感染模型中抗嗜肝DNA病毒的作用。方法应用中药复方ZL 1治疗实验感染鸭 ,口服给药 ,剂量 5 0 0mg·kg-1·d-1,分 2次服用 ,连续 4周。采用斑点分子杂交和Southern印迹杂交检测治疗后感染鸭血清和肝脏中病毒的动态变化。同时以拉米夫定及安慰剂作为对照组。结果　复方药物ZL 1治疗后血清中DHBVDNA均数从 3 .6× 10 10 拷贝 /ml下降至 0 .9× 10 10 拷贝 /ml(P <0 .0 1) ,抑制病毒率为 75 % ,但尚不能清除病毒血症 ,肝组织中总DHBVDNA和DHBV超螺旋型DNA量无明显减少 ,停药观察 2周 ,病毒复制反弹不明显。拉米夫定治疗后可显著降低病毒血症 (P <0 .0 1) ,抑制病毒率达 99% ,同时肝组织中总DHBVDNA和DHBV超螺旋型DNA量减少 ,但停药观察 2周 ,病毒复制反弹明显。安慰剂组 (口服生理盐水 )治疗前后病毒水平的差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　复方药物ZL 1治疗4周可使感染鸭病毒血症降低 ,但不能清除病毒血症 ,肝脏中病毒复制水平也无显著下降     

乙型肝炎病毒免疫耐受动物模型的建立与验证

用鸭乙型肝炎病毒(DHBV)感染1d龄幼鸭建立了乙型肝炎免疫耐受动物模型,随访22周,鸭乙型肝炎病毒表面及前表面抗原(DHBs/presAg)及DHBV DNA阳性不变。在持续性感染鸭血清中未能检出抗DHBs/pres或抗鸭乙型肝炎核心(DHBc)抗体。用纯化的DHBs/pres Ag及DHBcAg与鸭外周血淋巴细胞作特异性淋巴细胞增殖试验,结果也未见阳性反应。以DHBs/presAg及DHBcAg分别免疫上述免疫耐受鸭,每3周1次。连续免疫5次,也未能刺激产生相应的抗体及特异性淋巴细胞增殖反应,从而首次建立并确证了1d龄鸭感染DHBV导致的免疫耐受动物模型。     

疏肝健脾祛湿中药体内抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究

目的：观察由疏肝健脾袪湿中药组成的加味四逆散醇提物体内抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）的作用。方法：采用先天感染鸭乙型肝炎病毒的广州麻鸭为动物模型,以斑点杂交法检测用药前后鸭血清DHBV-DNAOD值的变化,并以拉米夫定作阳性对照。结果：加味四逆散大剂量组用药第5天和第10天,血清DHBV-DNAOD值明显下降,与病毒对照组比较,差异有显著性（P〈0.05,P〈0.01）,与自身用药前比较,差异有显著性（P〈0.05,P〈0.01）;加味四逆散中剂量组在用药第5和第10天,血清DHBV-DNAOD值明显下降,与病毒对照组比较差异有显著性（P〈0.05,P〈0.05）;与自身用药前比较,用药第10天,血清DHBV-DNAOD值明显下降,差异有显著性（P〈0.05）。结论：加味四逆散大、中剂量在鸭体内有抗乙型肝炎病毒作用。     

斑点杂交法检测SEN病毒感染

目的:探讨斑点杂交法检测SEN病毒(SENV)感染的应用价值.方法:应用地高辛标记、制备SENV部分基因探针并用斑点杂交技术检测SENV DNA,与聚合酶链反应(PCR)检测结果相比较. 结果: 在191份血清中,采用斑点杂交法检出6份阳性,检出率为3.1%. PCR方法检测出11份阳性,阳性率5.8%. 结论: 制备的地高辛探针具有SENV特异性,以地高辛标记的SENV探针可用于检测SENV感染.     

地高辛素标记乙型肝炎病毒DNA探针的制备及应用

采用随机引物法以地高辛素标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸(dig-II-dUTP)标记克隆的乙型肝炎病毒(HBV)DNA adw/pAM6,制得高特异性和高敏感性的HBV DNA探针。用于斑点杂交检测HBV DNA,最大敏感度为0.lpg。用于检测HBsAg阳性血清,HBV DNA阳性率为82.7％(91/110),与市售同类药盒相比,阴阳结果一致,与缺口翻译的生物索探针相比,检出率有显著提高(P<0.01)。用于肝癌组织与血清HBV DNA研究,与既往用~32P探针所得结果相符。该探针操作简单、使用方便、出结果快速、价格便宜又无需特殊设备,故适于在临床单位尤其是基层医疗单位应用推广。     

应用分子信标荧光PCR定量检测乙型肝炎病毒核酸的评价

目的：分子信标(Molecular Beacon)是近年新发展的一种荧光标记发夹形寡核苷酸探针。本目的在于对国产分子信标荧光PCR定量检测HBV核酸试剂盒(厦门泰伦生物工程有限公司的“乙型肝炎病毒荧光PCR定量检测试剂盒”)的主要性能进行评价。方法：以Roche公司的乙型肝炎病毒(HVB)定量检测试剂盒AMPLICOR HBV MONITOR^TM Test Kit为参比,对分子信标定量检测临床血清标本HBV DNA的结果,进行比较和分析。结果：根据两种试剂盒定量检测34份乙型肝炎和非肝炎血清及一份系列10倍稀释血清(含高水平HBV DNA)的数据,并以Roche试剂盒的结果为参比标准,分子信标试剂盒定量检测HBV DNA的相对敏感性、特异性和符合率均为100％(分别为：19／19,15／15和34/34);其定量检测HBV DNA的线性范围和下限分别为10^3～10^3copies/ml和10^3copies/ml;两种试剂盒定量检测HVB DNA的相关系数(r)＝0．987。结论：初步结果表明：该国产分子信标荧光PCR定量检测HBV核酸试剂盒的主要性能,与Roche公司的AMPLICOR HBV MONITOR^TM Test试剂盒相似,并具有较后更宽的线性定量范围。     

DHBVDNA在鸭胰腺组织中原位杂交的研究

目的：对慢性ＤＨＢＶ感染鸭的肝、胰、腺组织DHBVDNA作对比研究。方法：采用原位杂交技术。结果：DHBV不仅可以感染鸭肝细胞。且可感染胰、脾组织、DHBVDNA阳性细胞的分布密度以肝组织最高,胰脾次之。结论：DHBV具有组织器官泛嗜性,但其在肝外组织中的复制似不及在肝细胞中活跃。     

鸭乙型肝炎病毒核酸荧光定量PCR方法的建立及应用

目的：建立鸭乙型肝炎病毒核酸(DHBV DNA)荧光定量的方法。方法：根据DHBV DNAS基因区的序列设计扩增所需3条引物，通过偶联反应用AmpliSensor荧光信号标记半巢式引物，经过前期不对称扩增、半巢式扩增及在线检测建立DHBV DNA阳性标准品QPCR的标准曲线，并将70份鸭血清分别用荧光定量PCR方法和地高辛标记的DHBV DNA探针斑点杂交的方法检测，比较结果的相关性。结果：DHBV DNA阳性标准品经过30次循环后，扩增产物经2％琼脂糖凝胶电泳检测，可以看出有180bp、70bp两个片段，与设计的片段大小相符，扩增产物的浓度与标准品的起始浓度成正比，扩增指数的数值大小与该循环时己合成的扩增产物的量成正比，起始浓度的大小与要合成的一定扩增产物的量所需的循环次数成反比。用荧定量PCR方法和斑点杂交的方法检测血清中DHBV DNA的结果有良好的相关性(r＝0．97，P＜0.01，ν＝58)。结论：荧光定量PCR方法可作为检测DHBV DNA含量的一个重要手段。     

鸭乙型肝炎病毒表面抗原的纯化及应用

目的：从鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）感染鸭血清中纯化表面抗原（ＤＨＢsAg),初步应用于病毒感染后复制的研究。方法：用蔗糖密度梯度离心纯化病毒表面抗原,经Bradford法定量血清中该蛋白含量;建立DHBsAgELISA检测方法,并与DHBVDNA斑点杂交相比较。结果：纯化DHBsAg经ELISA检测OD490nm≥1.0,Western杂交显示主要肽分子量为17KDa和35KDa:Bradford法定量血清蛋白含量为2.85-5.10ug/ml,DHBsAgELISA检测100份血清标本阳性数为84例,斑点杂交检测阳性数为88例,两者吻合率为94%。结论：DHBsAg的制备及ELISA方法的建立,为进一步研究病毒感染后复制及体内免疫应答状况奠定了基础。     

一种快速、简便检测鸭乙型肝炎病毒抗原、抗体的方法

本文报道检测鸭乙型肝炎表面抗原(DHBsAg)及抗体的斑点酶免疫测定法(Dot Euzyme Immunoassay,Dot EIA)。以硝基纤维素膜为载体依次加被检血清、抗DHBV免疫血清、辣根过氧化物酶标记葡萄球菌A蛋白(SPA-酶结合物),可测标本中DHBsAg。依次加纯化DHBV、被检血清、SPA-酶结合物则可测血清中抗体及效价。用此法检测自然感染鸭血清40份,实验感染鸭血清220份,并与DHBV核酸斑点杂交法比较分析,两种方法符合率94.2％。用本方法测定本室制备的兔抗DHBV免疫血清,抗体效阶为1/3200。Dot EIA简单、快速、敏感、特异,是研究DHBV较有实用价值的一种方法。     

芒果苷在鸭体内抑制鸭乙型肝炎病毒感染的实验研究

[目的]观察芒果苷对鸭乙型肝炎病毒感染模型的抑制作用。[方法]采用1日龄北京鸭静脉注射强阳性鸭乙型肝炎病毒后,口服给予芒果苷50、100和200mg/kg 3个剂量,每日2次,连续给药10d,于给药前、给药后第5、10天以及停药后第3天采血,分离血清,采用斑点杂交方法及放射自显影方法,观察鸭血清乙肝病毒DNA(DHBV-DNA)的动态变化。[结果]芒果苷100mg/kg、200mg/kg在给药期间对DHBV-DNA有明显抑制作用;且在停药后未见明显反跳现象。[结论]提示芒果苷有良好的抑制DHBV感染作用,且停药后不易出现反跳现象。     

逆向斑点杂交.斑点杂交和电镜检测鸭乙型肝炎病毒的比较

本文将逆向斑点杂交同时检测鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV DNA)及其特异DNA多聚酶(DNAp)的结果,与斑点杂交检测DHBV DNA和电镜检测DHBV颗粒的结果作了比较。174份鸭血清用逆向斑点杂交和斑点杂交进行了配对检测,两者结果在统计上无差别。77份用逆向斑点杂交和电镜作了配对检测,结果也无统计学差别。部分样品用三种方法重复检测多次,结果以逆向斑点杂交检测的重复性最好。并认为逆向斑点杂交具有方法简单、可靠、重复性好和一次能同时检测DHBY DNA和特异DNAp两个指标的优点,是研究体内嗜肝病毒复制较为理想的方法。     

DHBV DNA在鸭胰脾组织中原位杂交的研究

目的：对慢性DHBV感染鸭的肝、胰、脾组织DHBV DNA作对比研究。方法：采用原位杂交技术。结果：DHBV不仅可以感染鸭肝细胞,且可感染胰、脾组织,DHBV DNA阳性细胞的分布密度以肝组织最高,胰脾次之。结论：DHBV具有组织器官泛嗜性,但其在肝外组织中的复制似不及在肝细胞中活跃。     

野水鸭等携带鸭乙型肝炎病毒的研究初报

本文应用斑点分子杂交（Dotblot）和斑点酶免疫测定法（DotEIA）对广州和海南地区3个鸭种携带鸭乙型肝炎病毒（DHBV）进行了调查，38只野水鸭血清标本DHBV自然感染率为63．2％（24／38）．其一日龄雏鸭DHBVDNA阳性率为80％（8／10）。在国内外未见类似报导。应用野水鸭阳性DHBVDNA血清以0．02～0．2ml／只量感染8只1日龄DHBVDNA阴性的广州麻鸭，获得100％感染，且病毒血症至少可持续60天，该野水鸭经鉴定为驯养的野生绿头鸭种，此将为DHBV基因分析比较与建立一种慢性感染的鸭乙肝实验模型提供良好的线索。     

Lumiget PPD化学发光法检测HCMV DNA

在ＤＩＧ标记及检测系统中，以Ｌｕｍｉｇｅｔ ＰＰＤ作为ＡＰ底物，经ｄｏｔ－Ｂｌｏｔ杂交后进行化学发光法检测ＨＣＤＭＶ ＤＮＡ，并与ＮＢＴ义物显色法比较，结果显示：Ｌｕｍｉｇｅｔ ＰＰＤ法可检出０．１Ｐｇ，同源ＤＮＡ，非同源性ＨＢＶ ＤＮＡ，ＨＳＶ－Ⅰ，ＨＳＶ－Ⅱ，ＤＮＡ不能检出；Ｌｕｍｉｇｅｔ ＰＰＤ底物作用只需３ｈ即可获得清晰稳定的结果，优于ＮＢＴ底物显色法。     

"911"抗鸭乙型肝炎病毒作用的实验研究

目的：评价药物“911”在鸭实验动物模型中抗鸭乙型肝炎病毒（DHBV）的效果。方法：北京鸭足静脉注射DHBV，第1次试验随机分为空白，Ara-AMP对照和20，40，80mg/kg3个治疗组，于感染后第7d,给药后第5，10d和停药后第5d采血，第2次试验设空白对照和40．80mg/kg2个治疗组，用药后第5，10d及停药后第5d各组分别处死3只鸭取肝脏检测肝HDBV DNA，采用DOT EIA法检测血清DHBsAg，斑点分子杂交法检测DHBV DNA，Southern转膜杂交检测鸭肝DHBV DNA。结果：第1次试验结果表明，血清DHBsAg及DHBV DNA在20mg/kg组基本无变化，在40mg/kg组治疗后明显下降，但效果无80mg/kg组明显；80mg/kg组DHBsAg 及DHBV DNA水平治疗效果最明显，与用药前及空白对照比较均有统计学意义。第2次试验与第1次试验的结果基本吻合，鸭肝脏DHBV DNA检测表明，80mg/kg治疗组对鸭肝DHBV DNA复制有明显抑制作用。可减少鸭肝DHBV DNA含量。结论：“911”有较好的抗DHBV感染效果，具有明显的剂量反应关系和可重复性。