分裂原激活蛋白激酶p38信号传导通路在抑制血管内皮细胞生长因子诱导肝癌转移的实验研究

目的　研究血管内皮细胞生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)诱导肝癌转移时 p38分裂原激活蛋白激酶 (mitogen activatedproteinkinase,MAPK)信号传导通路的作用。 方法　运用Bodyenchamber膜侵袭培养系统 ,应用 p38MAPK信号传导通路特异性阻断剂SB 2 0 35 80 ,观察其对VEGF诱导肝癌细胞转移抑制作用。结果　 5ng/mlVEGF培养 5h ,向下室浸润肝癌细胞数为 16×10 4 /ml,高于对照组 1.2 5× 10 4 /ml,P <0 .0 1。预先用 5 μMSB 2 0 35 80 ,可阻断 95 %VEGF诱导肝癌转移能力。结论　VEGF通过 p38MAPK信号传导通路诱导肝癌细胞转移 ,阻断p38MAPK信号传导通路 ,可抑制VEGF诱导的肝癌细胞转移。     

血管内皮细胞生长因子对肝癌细胞钙粘附蛋白表达的影响

目的 研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)对肝癌HepG2细胞同质性粘附作用和钙粘附蛋白(E-cadherin)的影响.方法 采用3H-TdR掺入试验测定VEGF对肝癌HepG2细胞同质性粘附作用,激光扫描共聚焦显微镜检测VEGF对肝癌细胞E-cadherin表达作用.结果 1 ng/ml、5 ng/ml VEGF诱导HepG2细胞60 min、90 min 3H-TdR掺入实验(dpm/min)分别为1 758.67±289.46、1 380.03±328.55和3 124.3±2 262.14、2 245.6±273.24,10 ng/ml VEGF诱导HepG2细胞60min、90 min、120 min3 H-TdR掺入实验分别为1 232.32±201.04、2 337.5±333.04、2 236.99±237.07,显著低于对照组60、90、120分钟的2 184.49±336.03、3 560.±255.17和4 337.4±377.35.5 ng/ml VEGF降低肝癌细胞E-cadherin的表达,荧光强度为757±103,显著低于对照组的352±56.结论 VEGF降低肝癌细胞同质性粘附作用可能与其降低肝癌细胞E-cadherin有关.     

血管内皮细胞生长因子对大肠癌HT-29细胞粘附作用的影响

目的观察血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)诱导大肠癌HT-29细胞转移及其对粘附作用的影响. 方法采用3H-TdR掺入及鼠尾胶粘附实验测定VEGF对大肠癌HT-29细胞同质性和异质性粘附作用以及Bodyen-Chamber观察VEGF诱导大肠癌细胞转移.结果1,5mg/LVEGF诱导HT-29细胞60,90min 3H-TdR掺入实验(cpm)分别为1759±289,1380±329和3124±226,2246±273,10mg/L VEGF诱导HT-29细胞60,90,120min 3H-TdR掺入实验分别为1232±201,2338±333,2237±237,显著低于对照组60,90,120min的2184±336,3560±255,4337±377,(P<0.05或0.01).5,10 mg/L VEGF诱导HT-29细胞60min鼠尾胶粘附实验A值为0.263±0.021,0.238±0.034;1,5,10mg/L VEGF诱导HT-29细胞90,120min鼠尾胶粘附实验A值分别为0.269±0.023,0.373±0.083,0.393±0.081和0.371±0.061,0.390±0.074,0.433±0.122,分别高于对照组的0.130±0.025,0.143±0.036,0.210±0.028,(P<0.05或0.01).用VEGF 1,5,10mg/L培养5 h,下室浸润的肝癌细胞数分别为(5.75±1.00,17.17±2.38,10.33±0.88)×107/L,分别高于对照组(1.58±0.38)×107/L(P<0.05或0.01).结论VEGF可以促进大肠癌HT-29细胞转移,与VEGF增加细胞异质性粘附作用以及降低大肠癌细胞的同质性粘附作用有关细胞.     

p38MAPK信号传导通路调控VEGF诱导肝癌细胞黏附作用

目的:观察血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)通过p38信号传导通路诱导肝癌HepG2细胞转移及其对黏附作用的影响．方法:以p38MAPK信号通路特异性阻断剂SB203580预处理肝癌HepG2细胞,采用 3H-TdR掺入及鼠尾胶黏附实验测定不同浓度 VEGF对肝癌HepG2细胞同质性和异质性黏附作用,流式细胞术检测VEGF诱导肝癌细胞 CD44v6表达．结果:1 μg／L和5 μg／L VEGF诱导HepG2细胞60 min 3H-TdR掺入实验结果(dpm／min)分别为1 758．67±289．46、1 380．03±328．55; 90 min分别为3 124．30±2 262．14、2 245．60 ±273．24;10 μg／L VEGF诱导HepG2细胞60, 90,120 min 3H-TdR掺入实验分别为1 232．32 ±201．04、2 337．50±333．04、2 236.99± 237．07,显著低于对照组的2 184．49±336．03、 3 560．00±255．17、4 337．40±377．35(P<0．05 或0．01);经SB203580预处理的HepG2细胞,60, 90,120 min后的结果为2 634．23±375．21、 3 834．82±535．79、4 398．40±564．76,VEGF 诱导肝癌细胞同质性黏附作用降低．5 μg／L和 10 μg／L VEGF诱导HepG2细胞60 min鼠尾胶黏附实验吸光度A值为0．263±0．021、0．238 ±0．034,1,5和10 μg／L VEGF诱导HepG2细胞90 min A值分别为0．269±O．023、0．373± 0．083、0．393±0．081;120 min分别为0．371± 0．061、0．390±0．074、0．433±0．122,分别高于对照组的0．130±0．025、0．143±0．036、 0．210±0．028(P<0．05或0．01);经SB203580预处理的HepG2细胞,60,90,120 min鼠尾胶黏附实验吸光度A值分别为0．201±0．035、0．347± 0．112、0．479±0．217,VEGF诱导的肝癌细胞异质性黏附作用降低．5μg／L VEGF诱导肝癌细胞2 h后CD44v6表达阳性细胞数为32．6％± 4．2％,用SB203580阻断p384信号传导通路后, CD44v6阳性细胞数(4．3％±0．54％)显著下降 (P<0．01)．结论:VEGF可以通过p384信号传导通路增加肝癌细胞异质性黏附作用以及降低肝癌细胞的同质性黏附作用,促进肝癌HepG2细胞侵袭与转移．     

非小细胞肺癌中血管内皮生长因子对树突状细胞的抑制作用

目的　探讨非小细胞肺癌 (NSCLC)中血管内皮生长因子 (VEGF)对树突状细胞 (DC)的影响。方法　用流式细胞仪对 85例NSCLC患者 (NSCLC组 )及 14名正常人 (正常人组 )外周血DC含量进行检测 ,并用酶联免疫吸附 (ELISA)法检测血浆VEGF165浓度。体外条件下由正常人 (血站献血者 )外周血CD+ 14 单个核细胞 (PBMC)培养DC。实验分 2组 ,对照组于培养第 1天和第 4天分别加入rhGM CSF 10 0 0U/ml及rhIL 4 80ng/ml;VEGF165实验组在此基础上于培养第 1天及第 4天加入rhVEGF1655 0ng/ml,以验证其对DC分化和生存的影响 ,用流式细胞仪分析培养细胞的细胞表型及凋亡率。结果　NSCLC组患者血浆VEGF165浓度明显高于正常人组 (P <0 0 5 ) ,而外周血DC含量明显低于正常人组 (P <0 0 1)。NSCLC组患者血浆VEGF165浓度与外周血DC含量呈负相关 (P <0 0 5 ) ,两者与患者的性别、年龄、病理类型及分化程度均无明显关系 (P >0 0 5 ) ;其血浆VEGF165浓度与肿瘤的TNM分期及远处转移有密切关系 (P <0 0 5 ) ,与淋巴结转移无关 (P >0 0 5 ) ;其外周血DC含量与肿瘤的TNM分期、淋巴结转移及远处转移均有密切关系 (P <0 0 5 )。体外实验显示 :与对照组相比 ,VEGF165实验组细胞中CD+ 14 细胞比例增高 ,DC表面CD40 、CD86、人类白细胞     

TNFα诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的:探索肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以TNFα不同剂量、不同时间作用于人大肠癌Lovo细胞,经Hoechst33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳,检测DNA断裂情况。结果:TNFα1×10~5μ/ml作用12—48h和1×10~4—1×10~5μ/ml作用48h,Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变;1×10~5μ/ml作用48h,DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论 TNFα能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡,并存在时间与剂量效应。     

异丙酚通过Wnt/β-catenin信号通路对HepG2细胞表达抑制作用的研究

选取人肝癌细胞株(HepG2)平均分为三组,分别加入5μg/m L,10μg/ml和20μg/m L三种浓度的异丙酚1μL,采用ATP—Lite法测定三组48小时后对应的活细胞数,每组重复试验9次,结果取平均值。计算HepG2细胞抑制率:HepG2细胞抑制率(%)=(异丙酚组活细胞数/4×10~4)×100%;采用荧光定量PCR检测对Wnt/β-catenin信号通路的关键因子β-catenin和Tcf-4的基因表达mRNA的作用。结果随异丙酚浓度的增加,HepG2细胞抑制率明显增加,并且因子β-catenin和Tcf-4的基因表达mRNA的计量亦逐渐降低。结论异丙酚可抑制肝癌细胞增殖和侵袭,并诱导HepG2细胞凋亡,可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路在HepG2细胞的表达而发挥抗肿瘤作用。     

Flt-3L、SCF在食管癌患者外周血细胞的诱导及树突细胞的培养

目的探讨从食管癌患者外周血分离、诱导与扩增树突细胞(DC)的有效方法。方法采用密度梯度离心法从食管癌患者外周血分离单个核细胞,分别加入GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/ml)(作为对照组);GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/ml)+Flt-3L(40 ng/ml)(作为实验1组);加入GM-CSF(100 ng/ml)+IL-4(50 ng/ml)+Flt-3L(40 ng/ml)+SCF(100 ng/ml)(作为实验2组)。于37℃、5%CO2环境下进行培养,动态观察细胞生长情况,流式细胞仪检测培养第6天时DC表面分子CD1a、CD83、CD80、CD86的表达水平。结果上述不同刺激物均能从外周血单个核细胞成功诱导出DC,与对照组相比,实验组诱导出更多数量的DC,其中以实验2组最多;培养至第6天时,两实验组DC细胞表型CD1a表达率与对照组无明显差别(P>0.05),CD83、CD80、CD86表达水平明显高于对照组(P<0.01),其中以实验2组表达水平最高(P<0.01)。结论联合应用GM-CSF、IL-4、flt-3L和SCF能有效地从食管癌患者外周血诱导培养出大量具有活性的DC,为进一步的临床研究奠定基础。     

TNFα诱导大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的探索肿瘤坏死因子α(TNF_α)诱导人大肠癌细胞凋亡的可能性及其发生规律。方法用细胞体外培养方法,以TNF_α不同剂量、不同时间作用于人大肠癌Lovo细胞,经Hoechsl 33258荧光染色,光镜观察细胞的形态改变;DNA抽提、琼脂糖凝胶电泳,检则DNA断裂情况。结果TNFal×10~5μ/ml作用12-48h和J×10~4-1 x10~5μ/ml作用48h.Lovo细胞出现逐渐明显的凋亡形态学改变;1×10~5μ/ml作用48h.DNA电泳出现显示凋亡特性的梯形条带。结论TNF_α能够诱导人大肠癌Lovo细胞凋亡,并存在时间与效果效应。     

IGF-1对受损血管内皮细胞存活和增殖的影响及其机制

目的 观察胰岛素样生长因子(IGF-1)对受损血管内皮细胞(VEC)增殖的影响.方法 利用不同浓度(10、40、80、160 ng/ml)的IGF-1作用于血管内皮细胞48 h后,通过MTT法检测细胞的生长情况;采用划痕实验观察IGF-1对受损内皮细胞增殖的影响,并用PI染色观察细胞的情况,ELISA法测定VEGF含量.结果 10 ng/ml、20 ng/ml、40 ng/ml、80 ng/ml的IGF-1对血管内皮细胞的增殖都有不同程度的促进作用,IGF-1浓度为40 ng/ml、80 ng/ml的实验组与未加入IGF-1的对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),160 ng/ml的IGF-1对细胞增殖作用下降,但差异无统计学意义(P>0.05).取40 ng/ml IGF-1作用于受损血管内皮细胞48 h后,细胞增殖速度较对照组明显加快,PI染色显示实验组死亡细胞明显减少,实验组培养液上清VEGF含量较对照组高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 IGF-1对受损血管内皮细胞的增殖有促进作用,同时可减少其细胞凋亡,促进受损内皮细胞的修复,其机制可能与IGF-1促进细胞分泌VEGF有关.