保护性自噬对5-FU诱导的胃癌细胞凋亡的抑制作用

目的:明确5-FU处理胃癌MGC803细胞后自噬的存在,并探讨自噬在5-FU诱导凋亡中的作用.方法:5-FU处理胃癌MGC803细胞.MTT检测细胞增殖能力.流式细胞术检测细胞凋亡.Western blot检测蛋白表达.荧光显微镜观察自噬的发生.结果:0.1-1000mg/L的5-FU作用MGC803细胞48h,抑制细...     

重组腺病毒Ad-IкBαM在5-氟尿嘧啶诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的:研究重组腺病毒Ad-IκBαM对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导胃癌细胞凋亡的作用情况,进而研究胃癌细胞抵抗5-FU的机制.方法:培养胃癌SGC-7901细胞,感染重组腺病毒Ad-IκBαM的细胞为实验组,感染Ad-IκBα及非感染的空白对照为对照组,以5 mg/L5-FU加入上述各组细胞,采用EMSA法检测5-FU处理后各组细胞内NF-κB激活情况;应用MTT和TUNEL法分别检测5-FU对各组细胞诱导凋亡的情况.结果:5-FU作用于胃癌细胞可使细胞内NF-κB激活,感染Ad-IκBαM使NF-κB活性受到明显抑制.MTT法证明,5-FU作用后,感染Ad-IκBαM细胞的凋亡(56.36%±0.60%)较感染Ad-IκBα组(47.50%±1.42%)及未感染组(42.95%±1.27%)明显,各组间比较有统计学差异(P＜0.001);TUNEL法结果与MTT相符,感染Ad-IκBαM组的凋亡率为29.7%±2.5%,明显高于感染Ad-IκBα组(20.0%±2.6%)及未感染组(12.3%±1.1%)(P＜0.01).可见,感染Ad-IκBαM可明显提高5-FU诱导的细胞凋亡.结论:感染Ad-IκBαM可通过抑制胃癌细胞NF-κB的活性增强5-FU的诱导凋亡作用.     

5-FU增强TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的实验研究

目的 观察5-FU对TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的影响,明确死亡受体5(DR5)在5-FU和TRAIL诱导凋亡中的作用.方法 采用MTT法测定细胞活力、流式细胞仪检测细胞凋亡、免疫印迹检测蛋白表达.结果 TRAIL可导致BGC823细胞轻度的增殖抑制和少量的细胞凋亡.与单药TRAIL和5-FU相比,TRAIL联合5-FU对细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强(P＜0.05).免疫印迹结果显示,TRAIL没有改变DR5的蛋白表达,而5-FU作用BGC823细胞48 h后,DR5蛋白表达上调(P＜0.05).TRAIL和5-FU联合作用后,DR5蛋白表达同样明显上调(P均＜0.05).结论 5-FU通过上调DR5蛋白表达提高了BGC823细胞对TRAIL的敏感性.     

重组腺病毒Ad-IκBαM在5-氟尿嘧啶诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的:研究重组腺病毒Ad-IκBαM对5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导胃癌细胞凋亡的作用情况,进而研究胃癌细胞抵抗5-FU的机制．方法:培养胃癌SGC-7901细胞,感染重组腺病毒Ad-IκBαM的细胞为实验组,感染Ad- IκBα及非感染的空白对照为对照组,以5 mg／L 5-FU加入上述各组细胞,采用EMSA法检测5-FU处理后各组细胞内NF-κB激活情况:应用MTT和TUNEL法分别检测5-FU对各组细胞诱导凋亡的情况．结果:5-FU作用于胃癌细胞可使细胞内NF-κB激活,感染Ad-IκBαM使NF-κB活性受到明显抑制．MTT法证明,5-FU作用后,感染Ad-IκBαM细胞的凋亡(56．36％±0．60％)较感染Ad-IκBα组(47．50％±1．42％)及未感染组(42．95％±1．27％)明显,各组间比较有统计学差异(P≤0．001);TUNEL法结果与MTT相符,感染Ad-IκBαM组的凋亡率为29．7％±2．5％,明显高于感染Ad-IκBα组(20．0％±2．6％)及未感染组(12．3％±1．1％)(P<0．01)．可见,感染Ad- IκBαM可明显提高5-FU诱导的细胞凋亡．结论:感染Ad-IκBαM可通过抑制胃癌细胞NF-κB的活性增强5-FU的诱导凋亡作用．     

Stat5反义寡核苷酸联合5-氟尿嘧啶对胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨Stat5反义寡核苷酸(Stat5AS-ON)联合5-氟尿嘧啶(5-FU)治疗胃癌的作用机制.方法:Stat5AS-ON、5-FU单用或联用处理胃癌细胞BGC823,Westernblot检测Stat5、p-Stat5、cyclinD1与Bcl-xL表达,MTT法检测细胞增殖状态,流式细胞技术检测细胞周期与凋亡.结果:Stat5AS-ON与5-FU作用于BGC823细胞72h后,G1期细胞比率由65.7%上升至78.2%,S期细胞比率分别由18.6%,下降至10.5%,凋亡细胞百分比由7.4%增加至21.6%.Stat5AS-ON与5-FU可以抑制胃癌细胞增殖,促进胃癌细胞凋亡,联合应用Stat5AS-ON与5-FU可以起协同作用,明显抑制胃癌细胞Stat5信号转导通路活化.结论:选择性阻断细胞内信号转导通路可能为治疗胃癌提供新途径.     

芦荟大黄素联合氟尿嘧啶对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨芦荟大黄素(AE)与5-氟尿嘧啶(5-FU)体外协同作用及对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响.方法 MTT法检测药物对细胞增殖抑制作用;光镜观察细胞生长状态,计数细胞分裂指数;电镜观察药物对细胞超微结构的影响;TUNEL法检测细胞凋亡.结果 AE单独应用对细胞的增殖抑制作用弱,与5-FU合用明显抑制细胞生长,呈剂量依赖性;药物作用48 h后,联合用药组细胞分裂指数显著降低,可见大量细胞皱缩,胞膜界限模糊,核膜消失,核质浓缩及凋亡小体形成;TUNEL法分析显示,联合用药组细胞凋亡率为(69.4±4.1)%,与AE组[(15.7 4±1.9)%]、5-FU组[(33.5±2.8)%]比较差异显著(P<0.05).结论 AE与5-FU联合应用能有效抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,二药具有协同增效作用.     

同源盒基因A13降低胃癌细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性及其机制研究

目的探讨同源盒基因A13(HOXA13)表达水平对胃癌细胞5-氟尿嘧啶(5-FU)敏感性的影响及其可能的机制。方法以HOXA13过表达与敲减稳转胃癌细胞株为研究工具,通过药物敏感实验检测HOXA13表达水平改变后,胃癌细胞对5-FU的敏感性有无改变。CCK-8、EdU实验检测HOXA13表达改变后对5-FU细胞增殖抑制作用的影响;流式细胞术检测HOXA13表达下调后对5-FU诱导胃癌细胞凋亡的影响;二代测序探讨HOXA13介导胃癌5-FU耐药的潜在机制。结果HOXA13表达上调后,胃癌细胞5-FU的IC25和IC50升高;下调HOXA13表达能够促进5-FU对胃癌细胞增殖的抑制作用,并促进5-FU诱导的细胞凋亡。ABC转运蛋白通路的激活可能是HOXA13引起胃癌细胞5-FU耐药的潜在机制。结论HOXA13表达异常升高后能够削弱5-FU对胃癌细胞增殖的抑制作用,引起胃癌细胞对5-FU耐药,ABC转运蛋白可能作为重要下游效应分子参与该过程。     

2′-O-meRNA对人胃癌细胞的抑制作用及对5-FU和BCNU疗效的影响

目的探讨2'-O-meRNA通过抑制端粒酶来杀伤胃癌细胞系SGC-7901的作用及对化疗药5-FU和BCNU疗效的影响.方法培养人胃癌细胞系SGC-7901,分为5-FU组、BCNU组、2'-O-meR-NA组、反义对照组、化疗药与反义抑制剂合用组,观察用药后该细胞系存活情况及端粒酶活性.结果5-FU、BCNU、2′-O-meRNA可有效抑制SGC-7901细胞的活性(P＜0.05),BCNU、2'-O-meRNA可有效抑制细胞端粒酶活性,1 μM 2′-O-meRNA可加强6.25μg/ml BCNU的疗效(P＜0.01),但是不能加强12.5μg/ml 5-FU的作用(P＞0.05).结论2'-O-meRNA抑制胃癌细胞系SGC-7901的生长.1μM 2′-O-meRNA与6.25μg/ml BCNU合用时有协同作用,2′-O-meRNA与5-FU合用时无协同作用.     

复方丹参药物血清对人胃癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨复方丹参药物血清对入胃癌细胞增殖的抑制作用.方法 给予体外培养人胃癌细胞复方丹参药物血清,用克隆形成法和流式细胞仪检测对细胞分裂增殖和细胞凋亡的影响.结果 复方丹参药物血清(3.6、7.3、15 g/kg)和5-氟脲嘧啶(5-FU)组克隆数比对照组克隆数(78.67±2.2)明显减少,克隆形成抑制率分别为13.1%、46.6%、64.0%和40.7%.复方丹参药物血清(3.6、7.3、15g/kg)组和5-FU凋亡率比对照组凋亡率(7.4%)明显增加,分别为:16.3%、24.32%、31.1%和22.1%.结论 复方丹参药物血清对人胃癌细胞分裂增殖具有明显的毒性和抑制作用.     

HCTB006联合5-FU对胃癌细胞系MKN28、7901的作用及其机制

目的:探讨肿瘤坏死因子相关诱导配体受体(DR5)的单克隆抗体HCTB006联合5-FU对人胃癌细胞系7901、MKN28的作用以及机制.方法:用ATPlite法检测HBCT006单药组、5-FU单药组及两药物合用对胃癌细胞存活率的影响,研究两者之间的关系;采用流式细胞技术检测胃癌细胞系7901以及MKN28表面DR5的表达水平;Westernblot检测上述3组用药后胃癌细胞内XIAP,caspase3的变化.结果:胃癌细胞系7901、MKN28对HCTB006不敏感;5-FU对二者的增殖抑制作用具有时间以及浓度依赖效应;联合用药组具有很好的协同抑制胃癌细胞系增殖的效果,且具有浓度依赖效应,与给药次序无关.流式细胞技术检测胃癌细胞系7901,MKN28表面死亡受体DR5的表达依次为:93.8%以及87.7%.免疫迹印结果表明,联合用药组可以引发胃癌细胞内凋亡抑制蛋白XIAP的降解,激活最终凋亡执行蛋白caspase3,引起细胞死亡.结论:HTB006与5-FU联合应用具有协同杀伤胃癌细胞的作用.胃癌细胞7901、MKN28对于HCTB006的敏感程度与细胞表面DR5的表达量不相关;联合用药作用机制可能与细胞内抑制凋亡蛋白XIAP降解有关.     

甲酰四氢叶酸钙调变5-氟脲嘧啶对胃癌原代细胞株增殖抑制效应

探讨甲酰四氢叶酸钙(CF)调变5-氟脲嘧啶(5-FU)对不同胃癌原代细胞株的增殖抑制效应。方法：采用原代细胞培养和四唑氮蓝(MTT)药物敏感试验，观察大剂量CF(相当于临床用药300mg／d)和5-FU(相当于临床用药750mg／d)单剂和联合应用对胃癌原代细胞的体外抑制作用。结果：体外对胃癌原代细胞株直接抑制作用，单剂CF为11．82％．单剂5．FU为42．25％：两者联台应用为44．54％．仅43％的胃癌原代细胞株显示CF对5．FU有一定的增效作用。结论：单剂CF对胃癌原代细胞仅有轻度抑制作用，联合应用大剂量CF和5-FU仅显示CF对部分细胞株5-FU的抑制作用有一定的增强效应，个体差异性较大，为确保CF的生化调节作用，避免其大剂量使用时毒副作用．建议用药前行MTT法药敏试验，以指导临床制订合理联台应用CF和5-FU的化疗方案。     

Celecoxib对胃癌细胞凋亡的影响

目的:研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Celecoxib对人胃癌细胞株SGC7901凋亡的影响.方法:采用MTT法测定人胃癌细胞株SGC7901分别在1×10-5,1×10-6,1×10-7,1×10-8,1×10-9mol/L的Celecoxib作用48h后生长抑制情况;流式细胞术(FCM)观察Celecoxib对SGC7901细胞凋亡的影响;采用免疫细胞化学染色观察Survivin的表达.结果:Celecoxib浓度为1×10-5-1×10-9mol/L时,对SGC7901细胞的生长均有抑制作用,以1×10-5mol/L浓度的抑制作用最为显著,其抑制率为30.03%;1×10-5mol/LCelecoxib作用12,24,48h后,细胞凋亡比例较对照组均明显增加,48h凋亡率达17.83%;1×10-5mol/LCelecoxib作用后,Survivin的表达自用药3h起下降,24h最明显.结论:Celecoxib可诱导SGC7901细胞的凋亡,其可能的作用机制为抑制细胞Survivin基因的表达.     

抑制TLR4表达在雷公藤内酯醇增强胃癌BGC823细胞对5-FU敏感性中的作用

目的:观察雷公藤内酯醇(TPL)是否可通过抑制Toll样受体4(TLR4)表达以增强胃癌BGC823细胞对5-FU的敏感性,并分析其相关的下游分子机制。方法:采用CCK-8法检测不同浓度TPL以及TPL联合5-FU对BGC823细胞的增殖的影响。将BGC823细胞分为对照组、5-FU组(仅予5-FU)、TPL+5-FU组以及脂多糖(LPS)+TPL+5-FU组;Hoechst33258染色观察细胞凋亡形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测TLR4、磷酸化AKT(p-AKT)、Survivin、活性Caspase-3蛋白表达。结果:TPL可呈浓度-时间依赖性的抑制BGC823细胞增殖。与5-FU组比较,TPL联合5-FU后对BGC823细胞的抑制率明显增加(P<0.01),其5-FU的半数抑制浓度(IC₅₀)显著降低(P<0.01)。与5-FU组比较,TPL+5-FU组凋亡细胞数和细胞凋亡率均显著增加(P<0.01);而LPS+TPL+5-FU组凋亡细胞数以及细胞凋亡率均较TPL+5-FU组显著下降(P<0.05)...     

沉默miR-345联合5-FU对胃癌MGC803细胞增殖能力及凋亡的影响

目的 观察沉默miR-345联合5-FU对胃癌MGC803细胞增殖及凋亡的影响。方法 采用脂质体介导转染miR-345反义寡核苷酸至胃癌细胞MGC803以沉默miR-345表达。应用40μg/ml 5-FU单独处理胃癌细胞MGC803或联合miR-345沉默组,克隆形成实验观察细胞的增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡水平。结果 脂质体介导转染miR-345反义寡核苷酸至胃癌细胞MGC803可以抑制miR-345的表达;细胞克隆形成实验显示,反义miR-345+5-FU联合组与单独5-FU处理组相比,克隆形成率[(4.29±0.83)%vs(7.68±0.34)%]显著降低(P0.01);流式细胞凋亡检测表明,反义miR-345+5-FU联合组细胞凋亡率显著高于反义miR-345组、5-FU组(P0.01)。结论 沉默miR-345联合5-FU能抑制5-FU对MGC803细胞增殖能力,并促进其凋亡。     

奥沙利铂联合5-FU、亚叶酸钙治疗晚期胃癌疗效观察

目的观察奥沙利铂（LOHP）联合5-氟尿嘧啶（5-FU）、亚叶酸钙（CF）治疗晚期胃癌的疗效。方法晚期胃癌患者40例,采用LOHP联合5-FU、CF治疗。结果本组治疗后CR 2例、PR 16例、SD 10例、PD 12例,有效率（RR）为45.0%;主要不良反应为神经毒性,占患者总数的80.0%。结论 LOHP联合5-FU、CF治疗晚期胃癌近期疗效好,但神经毒性反应发生率较高。     

尼美舒利和5-氟尿嘧啶联用对胃癌细胞的协同抑制作用及机制

目的 体外研究选择性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂尼美舒利和5-氯尿嘧啶（5-FU）对胃癌细胞的抑制作用及机制。方法 以胃癌细胞株MKN45、MKN28为研究对象．观察尼美舒利和5-FU单独或联合应用对细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。应用MTT法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞凋亡（FITC-Annexin-V/PI双标记）和细胞剧期，RT-PCR观察朋药前后COX-2 mRNA在两株细胞中的表达，Western免疫印迹法观察经两种药物单独和联合作用48h后细胞内凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果 在MKN45和MKN28细胞中均可观察到不同水平的COX-2 mRNA表达，尼美舒利和5FU联合应用可明显抑制COX-2 mRNA表达。尼美舒利可抑制两株细胞的增殖并诱导凋亡。尼美舒利和5-FU具有协同抑制细胞增殖及诱导凋亡的作用，该作用与两种药物作用顺序无关，但在联用时作用最强。两药协同抑制增殖的作用主要通过协同杀伤和诱导凋亡而实现。5-FU增强了凋亡诱导蛋白Bax的表达，而尼美舒利则减少凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。两药联用可明显抑制胃癌细胞株生长。结论 选择性环氧合酶-2抑制剂尼美舒利和5-FU通过抑制COX-2 mRNA的表达硬增强Bax／Bcl-2的表达比率诱导胃癌细胞凋亡．从而对胃癌细胞起到协同抑制增殖的作用。     

胃癌自发性细胞凋亡及TNF诱导凋亡的观察研究

本实验利用末端脱氧核苷酸酶转移法(TDT法)在胃癌石蜡切片上观察胃癌的自发性细胞凋亡,并用外源性重组TNF作用MKN-45胃癌细胞株,用TDT法,流式细胞仅(FCM)、DNA凝胶电泳同步观察胃癌细胞的诱发性凋亡,并用乳酸脱氢酶(LDH)活性测定评估细胞死亡情况。结果显示:胃癌细胞自发性凋亡<5％,重组TNF能诱导胃癌细胞凋亡。TDT法结果与FCM分析及DNA电泳结果相符。重组TNF能抑制细胞周期。     

胃癌及癌前病变细胞凋亡的研究

细胞凋亡是由基因控制的细胞主动死亡,参与调节机体细胞增殖与死亡间的平衡稳定。肿瘤不仅存在细胞异常增殖,同时存在细胞凋亡异常,且具有长期共存的特点 [1]。我们通过观察胃癌及其癌前病变组织细胞凋亡的情况,探讨细胞凋亡与胃癌发生发展的关系。　　一、材料与方法　　1.研究对象：胃癌标本 33例,其中源自胃镜活检标本 27例,外科手术标本 6例,均行石蜡包埋常规切片待用,并行 Lauren分型：其中肠型 18例 (包括乳头状腺癌、管状腺癌 ),弥散型 15例 (包括印戒细胞癌、未分化癌 );结合临床资料分析, 33例胃癌标本中早期胃癌 12例…     

二十二碳六烯酸联合5氟尿嘧啶对人肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用

目的研究DHA联合5-FU对肝癌细胞在抑制细胞增殖、诱导凋亡的影响。方法用Annexin-V-PE/PI荧光双标记法、Hoechst33258染色及JC-1线粒体膜电位检测法检测DHA、5-FU两药单用和联用对肝癌细胞HepG2增殖的影响。结果联合处理组细胞凋亡率较单独使用5-FU组或单独使用DHA均明显增加。Hoechst33258染色显示,5-FU联合DHA组细胞中出现明显的凋亡核表现,细胞凋亡率较单独采用5-FU及对照组细胞显著增高。JC-1线粒体膜电位检测结果显示,联合组细胞线粒体膜电位较单独使用5-FU组显著降低。结论 DHA联合5-FU对肝癌细胞的增殖抑制、诱导凋亡具有协同作用。     

5-氟尿嘧啶与阿司匹林联合用药对肺癌细胞H1299增殖和凋亡的影响及作用机制

目的体外研究5-氟尿嘧啶(5-FU)与阿司匹林联合用药对肺癌细胞H1299增殖和凋亡的影响及作用机制。方法用四甲基唑蓝比色法(MTT)检测5-FU(终浓度5、10、20、40、80μmol/L)、阿司匹林(终浓度125、250、500、1 000、2 000μmol/L)单用或两药按1∶1比例联用对H1299细胞增殖的抑制作用;根据中效方程式计算单独或联用时5-FU和阿司匹林的中效浓度(IC50)同时计算联合指数(CI)。按照5-FU(26.1μmol/L)和阿司匹林(948.7μmol/L)的IC50分别单用或联用处理H1299细胞,用流式细胞术检测对细胞凋亡的影响,Western印迹检测凋亡相关的Bcl-2、Cox-2、Bax蛋白表达变化。结果 5-FU、阿司匹林单独或联合用药都能够抑制细胞的增殖,细胞增殖抑制率随着用药浓度的提高而升高,具有剂量-效应关系;按照5-FU、阿司匹林的IC50分别单用或联用处理H1299细胞,与对照组相比,处理组H1299细胞凋亡率显著升高Bcl-2和Cox-2表达显著下调,Bax表达显著上调(均P<0.01);5-FU和阿司匹林联合用药时效果更为显著。应用中效原理计算发现,当用较小浓度联用抑制效应<0.6时,CI<1,两药呈协同作用,当用较大浓度联用时呈拮抗作用。结论 5-FU与阿司匹林联合用药能够抑制肺癌细胞H1299的增殖,并促进细胞的凋亡的发生,在较低浓度联用时两药呈协同作用,其作用机制可能与下调细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Cox-2表达,同时上调Bax的表达相关。