人重组TFAR19蛋白对白血病细胞株HL-60的促凋亡效应

目的：对一种新发现的凋亡相关基因ＴＦＡＲ１９进行蛋白质水平的促凋亡效应研究,并对其作用机理进行初步的探讨。方法：利用离子交换层析对大肠杆菌表达的人重组ＴＦＡＲ１９蛋白进行纯化,将其加入到培养的白血病细胞株ＨＬ－６０,通过ＤＮＡ片段化,ＰＩ及Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ标记进行流式细胞仪分析,观察ＴＦＡＲ１９蛋白的促凋亡效应。利用ＦＩＴＣ标记ＴＦＡＲ１９蛋白,分析其与细胞的结合及定位。     

VP—16对HL—60细胞凋亡的影响

为探讨ＨＬ 6 0细胞分化与凋亡的关系 ,我们在诱导ＨＬ 6 0细胞凋亡[1 ] 的基础上 ,仍以鬼臼乙叉甙 (ＶＰ 16 )为凋亡诱导剂 ,选择全反式维甲酸 (ａｌｌ ｔｒａｎｓｒｅｔｉｎｏｉｃａｃｉｄ ,ＡＴＲＡ)等作为分化诱导剂 ,对经不同分化诱导剂诱导分化的ＨＬ 6 0细胞的凋亡情况进行了初步研究。1　材料和方法1 1　细胞培养 :ＨＬ 6 0细胞培养按参考文献 1的方法。1 2　药物处理 :1 2 1　诱导分化组 :调整细胞浓度至 5× 10 5 ｍＬ ,分别加入0 1ｍｇ ＬＶＰ 16 (Ｓｉｇｍａ产品 ,ＤＭＳＯ配制 )、5× 10 - 7ｍｏｌ ＬＡＴＲＡ(上海第六制药…     

雷公藤多甙对哮喘患者痰液IL-5和嗜酸细胞凋亡的影响

目的　探讨雷公藤多甙 (TP)对哮喘患者的治疗作用。方法　选择 70例轻、中度哮喘缓解期患者 ,随机分成A组 (TP治疗组 )和B组 (对照组 ) ,治疗前后分别采用ELISA法测定患者痰液白细胞介素 5 (IL 5 )和可溶性白细胞介素 2受体 (sIL 2R) ,应用流式细胞仪检测痰液嗜酸细胞 (EOS)凋亡。结果　缓解期哮喘患者痰液中IL 5和sIL 2R明显升高。A组经TP治疗后 ,IL 5和sIL 2R明显降低 ,EOS凋亡率明显升高 ,B组治疗前后上述各项指标差异无显著性。结论　TP可能通过抑制哮喘患者T细胞和B细胞的活化 ,增加EOS的凋亡 ,从而减少机体免疫 炎症反应。     

端粒酶在高三尖杉酯碱诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的 研究高三尖杉酯碱（homoharringtonine,HHT)对HL－60细胞端粒酶活性的影响及诱导凋亡作用。方法 采用端粒重复序列扩增法－酶联免疫吸附试验检测了HL－60细胞的端粒酶活性变化；用细胞形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳和DNA片段原位末端标记法检测了细胞凋亡现象。结果 0.005-0.50μg/ml HHT处理HL－60细胞0－48小时，HL－60细胞端粒酶活性呈剂量依赖性和时间依赖性下降。同时，HL－60细胞发生了凋亡。结论 HHT有效抑制HL－60细胞的端粒酶活性，诱导细胞凋亡。     

雷公藤多甙对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗及炎症浸润细胞凋亡的影响

目的 观察雷公藤多甙（TWP）能否抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）模型的发病、病变程度以及对中枢神经系统（CNS）炎症浸润细胞凋亡的影响，为临床应用提供实验依据。方法将雌性豚鼠随机分为对照组、EAE组和喂服TWP组，EAE组和TWP组豚鼠采用颈背部皮下多点注射完全弗氏佐剂-豚鼠全脊髓匀浆（CFA-GPSCH），并辅以注射百日咳疫苗（BPV），诱导豚鼠建立EAE模型。观察各组EAE的发病情况，在光学显微镜下计数中枢神经系统炎症细胞浸润程度，并用3’末端脱氧核糖核苷酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）检测其凋亡情况。结果 TWP治疗组豚鼠发病数较EAE对照组减少，起病时间相对延迟，临床表现明显减轻，炎性细胞浸润明显减少。与EAE对照组相比，TWP治疗组的中枢神经系统炎症浸润细胞的凋亡率明显增高。结论 TWP可有效地抑制EAE的发病，其机制可能与其抑制中枢神经系统炎症细胞的浸润及增加炎症细胞的凋亡有关，提示该药有临床应用前景。     

CpG-ODN诱导白血病HL60细胞分化和凋亡的研究

目的:研究含CpG基序的寡核苷酸对白血病HL60细胞的作用。方法:设计合成含CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)、不含CpG基序的寡核苷酸(nonCpG-ODN)和含甲基化CpG基序的寡核苷酸(ZpG-ODN)分别作用于白血病HL60细胞,MTT法测定HL60细胞抑制效应,硝基四氮唑蓝还原实验和细胞表面CD14分子表达状况分析HL60细胞诱导分化结果,流式细胞仪和透射电镜观察HL60细胞的凋亡现象,免疫组化检测HL60细胞后caspase3、Bcl-2和Bax的表达状况。结果:CpG-ODN对白血病HL60细胞有诱导分化和诱导凋亡作用,nonCpG-ODN和ZpG-ODN无此作用。结论:CpG-ODN可直接诱导白血病HL60细胞分化和凋亡,此为白血病免疫治疗提供了新的途径。     

CpG基序诱导HL60细胞分化和凋亡作用的初步研究

研究发现细菌表面的肽聚糖、脂磷壁酸等菌体成份有直接的抗肿瘤作用 ,然而源于细菌DNA的CpG基序以及含CpG基序的寡核苷酸 (CpG oligodeoxynu cletides,CpG ODN)对肿瘤细胞的直接作用如何尚不明了 ,因此 ,初步研究了CpG ODN对白血病HL6 0细胞的直接作用及其可能机制。设计合成CpG ODN序列为 5′ TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT 3′;不含CpG基序的寡核苷酸 ,即nonCpG ODN序列为 5′ TGCTGCTTCCCCCCCCCCCC 3′;含甲基化CpG基序的寡核苷酸 ,即ZpG ODN序列为 5′ TQGTQGTTTTGTQGTTTTGTQGTT 3′,该序列中Q…     

无血清培养体系中CD3AK细胞诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：采用无血清培养体系,研究CD3单克隆抗体激活的杀伤（CD3AK）细胞诱导HL－60细胞凋亡情况。方法：用血清代用品代替人血清培养CD3AK细胞,将诱导生成的CD3AK细胞与HL－60细胞共同孵育后,通过观察细胞形态、琼脂糖凝胶电泳检测DNA条带及充式细胞仪（FCM）检测分析HL－60细胞凋亡情况。结果：与CD3AK细胞孵育7h后的HL－60细胞出现凋亡细胞形态特征,DNA凝胶电泳典型梯状电泳带,FCM检测凋亡细胞比例为24.59%。结论：无血清培养条件下CD3AK细胞可诱导HL－60细胞凋亡。     

雷公藤多甙对aGVHD小鼠T细胞及相关细胞因子的影响

目的探讨雷公藤多甙对小鼠移植物抗宿主病的作用.方法供鼠BALB/C,雌性,受鼠C57BL/6,雄性.无菌取供鼠脾脏及双侧股骨骨髓,制成混合细胞悬液.受鼠在骨髓移植前24h内应用直线加速器全身照射,总剂量为1800cGy,剂量率为200Gy/min,将制成的混合细胞悬液经尾静脉输给受鼠0.5mL,含骨髓细胞1×106个,脾淋巴细胞1×107个,制成小鼠aGVHD模型.随机分成5组同基因移植组,异基因移植组,CsA+MTX组,GTT组,GTT+CsA组.CsA+MTX组受鼠骨髓移植后第1-10d,每日腹腔注射CsA2.5mg*kg-1*d-1,第1、3、5、9d腹腔注射氨甲蝶呤(7mg/M2).GTT组受鼠骨髓移植后第1-10d,每日腹腔注射GTT5mg*kg-1*d-1.GTT+CsA组受鼠骨髓移植后第1-10d,每日腹腔注射GTT2.5mg*kg-1*d-1、CsA2.5mg*kg-1*d-1,第11d处死各组受鼠,用ELISA法检测血清中细胞因子IL-2、TNF-α、IL-4、IL-10的浓度.用流式细胞仪检测脾T淋巴细胞及表面粘附分子的阳性表达率.结果(1)雷公藤多甙组小鼠11d生存率明显高于异基因移植组、CsA+MTX组.(2)雷公藤多甙组小鼠CD+3、CD+4、CD+8、CD+4CD11a+、CD+4CD18+、CD+8CD11a+、CD+8CD18+细胞的百分率明显低于异基因移植组.(3)雷公藤多甙组小鼠血清TNFα、IL-2浓度低于、IL-10高于异基因移植组.结论(1)雷公藤多甙可明显提高aGVHD小鼠的生存率.(2)其机制与①雷公藤多甙可降低T细胞及亚群数量及其相关粘附分子的表达有关.②雷公藤多甙降低促进aGVHD的细胞因子-TNFα、IL-2的表达,提高抑制aGVHD的细胞因子-IL-10的表达有关.     

雷公藤多甙对佐剂性关节炎模型大鼠的作用

目的探讨雷公藤多甙(TWH)对佐剂性关节炎(AA)模型大鼠的预防、治疗作用。方法用氟氏完全佐剂(FCA)诱导大鼠形成关节炎,经TWH进行预防和治疗处理后,观察大鼠足跖关节肿胀度,关节炎症指数及踝关节滑膜的病理改变。结果TWH预防组能阻止大鼠继发性病变的发生,而治疗组能显著减轻大鼠足跖关节肿胀度,关节炎症指数,减轻踝关节滑膜病理改变。结论TWH不仅能改善大鼠佐剂性关节炎模型关节炎症状、抑制炎症反应,而且能预防继发性病变的出现。     

雷公藤多甙对耐顺铂人上皮卵巢癌细胞体外活性的影响及机制研究

目的：探讨传统中药雷公藤多甙（Tripterygium Wilfordii HookF,GTW）对耐顺铂人上皮卵巢癌细胞体外活性的影响及机制研究。方法：将顺铂、不同浓度雷公藤多甙及二者联合处理SKOV3/DDP细胞24 h,于倒置相差显微镜及荧光倒置显微镜下观察细胞形态学变化;采用Hochest 33258染色法计算细胞平均凋亡率;流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot检测P13K/Akt/NF-κB信号通路相关因子PI3K、T-AKT、p-AKT(ser473)、IκBα、NF-κB、Bcl-2的表达变化。结果：SKOV3/DDP细胞经不同浓度雷公藤多甙处理24 h后,出现典型的凋亡样改变;且凋亡率呈浓度依赖性,顺铂联合组凋亡率较相应单药组明显升高;SKOV3/DDP细胞经雷公藤多甙处理24 h后,S期细胞比例明显升高,升高程度呈浓度依赖性（P<0.05）,雷公藤多甙与顺铂联合组S期细胞比例与相应单药组相比均明显升高;雷公藤单药及雷公藤、顺铂联合处理SKOV3/DDP细胞24 h后,p-AKT、NF-κB、Bcl-2蛋白表达明显下调。结论：雷公藤多甙可使耐顺铂人上皮卵巢癌SKOV3/DDP细胞周期阻滞于S期并诱导其凋亡,与小剂量顺铂联用效用明显增加,其机制可能与p-AKT、 NF-κB、 Bcl-2表达下调,抑制P13K/Akt/NF-κB信号通路有关。     

Suppression of carrageenan-induced inflammation in vivo by an extract of the Chinese herbal remedy Tripterygium wilfordii Hook F

OBJECTIVE AND DESIGN: The current studies investigated the effect of subacute administration of an ethyl acetate extract of the Chinese herbal remedy, Tripterygium wilfordii Hook F (TWHF) on the inflammatory response induced by carrageenan in the rat. MATERIALS AND SUBJECTS: F344 rats were randomly divided into 3 groups of seven animals. TREATMENT: The rats were treated orally for 5 days with either vehicle or an ethyl acetate extract of TWHF at a dose of 270 mg/kg, equivalent to 1/5 of the dose causing death in 50% of the animals. METHODS: Air pouches were induced subcutaneously on the backs of rats and injected with carrageenan on the last day of treatment. Sixteen hours after carrageenan challenge, the air pouches were removed and analyzed. Student's t-test was employed for statistical analysis. RESULTS: The number of exudate cells and the concentration of PGE2, nitrite and TNF-alpha in the exudate obtained from TWHF-treated animals were significantly reduced (by 69%, 78%, 57% and 77%, respectively) compared to that from vehicle-treated animals. mRNA for cyclooxygenase-2 was markedly suppressed in the air pouch lining tissue of TWHF treated rats (p < 0.001). In contrast, PGE2 content of the kidney and stomach and the production of PGE2, nitrite and TNF-alpha by spleen cells was not affected by treatment with TWHF. CONCLUSIONS: These results indicate that TWHF exerts a significant anti-inflammatory activity in vivo.     

雷公藤多甙在糖尿病大鼠胰腺移植中的作用研究

目的 探讨雷公藤多甙(TⅡ)对同种异体大鼠胰腺移植排斥反应的影响.方法 本实验应用32只胰腺移植Wistar大鼠,分为两组:对照组,TⅡ组;分别于术后每日监测血糖,ELISA检测术后3、7天血清IL-2浓度,取移植物标本行病理学检查.结果 TⅡ组大鼠移植后血糖低于对照组;血清IL-2浓度对照组明显高于TⅡ组;TⅡ组移植胰腺排斥反应较对照组轻.结论 雷公藤多甙能诱导一定程度的免疫耐受.     

佛波酯对人早幼粒白血病细胞系细胞分化和凋亡的诱导作用

目的: 探讨佛波酯(TPA)对人早幼粒白血病细胞系(HL-60)分化和凋亡的影响。方法: 利用TPA体外培养HL-60细胞, 依据形态学和细胞化学的变化, DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪等技术进行分析。结果: 7.2×10^-6 mol/L的TPA可使HL-60细胞出现向单核/巨噬细胞分化的形态特征, 随培养时间延长, 可见HL-60细胞核固缩、染色体断裂、凋亡小体形成等细胞凋亡的形态学改变。TPA处理24 h可使酸性非特异酯酶(α-NAE)的活性和四氮唑蓝(NBT)还原能力显著增强, DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的“梯子”状带纹。TPA处理0、24、48 h凋亡细胞百分数分别为(4.31±1.23)%、(15.10±1.31)%和(23.20±3.36)%, 在整个实验过程中细胞周期时相、Bcl-2蛋白含量无明显变化。结论: TPA可诱导HL-60细胞向单核/巨噬样细胞分化与凋亡, 且此凋亡过程可能与细胞周期时相、Bcl-2蛋白无关。     

雷公藤多甙对佐剂性关节炎模型大鼠ICAM-1的影响

目的:探讨口服雷公藤多甙对大鼠佐剂性关节炎(adjuvant arthritis AA)的治疗作用,以及对外周淋巴器官中细胞黏附分子ICAM-1水平的影响.方法:制备大鼠AA模型,应用免疫组化法检测口服和未口服雷公藤多甙的大鼠淋巴器官中ICAM-1水平的变化;观察口服雷公藤多甙前后关节的肿胀度.结果:口服雷公藤多甙的AA大鼠的外周淋巴器官中ICAM-1的水平明显低于未口服雷公藤多甙的AA大鼠,关节炎症状明显改善.结论:口服雷公藤多甙可以有效降低ICAM-1水平,从而治疗佐剂性关节炎.     

介质阻挡放电等离子体诱导白血病细胞凋亡及其机制研究

目的 探索介质阻挡放电(DBD)等离子体对肿瘤细胞的杀伤作用并分析其凋亡机制.方法 利用噻唑蓝(MTT)检测低温等离子体在不同作用时间下对正常脾脏白细胞和大鼠急性早幼粒白血病细胞(LT-12)细胞毒性的影响,检测等离子体处理后细胞内活性氧(ROS)含量的变化,利用Annexin V/PI双染法检测不同作用时间剂量下细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR和Western Blot检测相关凋亡基因和蛋白的表达变化.结果 MTT结果表明,等离子体对细胞的杀伤呈作用时间剂量和时间依赖性,随着作用时间从30 s到240 s,处理8h后细胞的存活率从98％降至63％.在相同作用时间下,如240 s,细胞的存活率从2h的78％降至24 h的39％;Annexin V/PI双染法结果显示,等离子体作用可引起细胞凋亡,凋亡率不仅与等离子体作用时间剂量呈正相关,还与作用后的时间相关,等离子体处理后时间越长,其凋亡率越高,如处理12h后,细胞的凋亡率从60 s的48％增至120 s的55.3％;流式细胞仪检测的ROS的产生也显示了时间相关性,等离子体作用后其ROS立即增至1.24倍,至20 h急剧增高至5.39倍;qRT-PCR和Western Blot的实验结果表明,在等离子体处理后8～12 h Caspase家族和Bcl-2家族基因和蛋白表达非常活跃.结论 本研究表明低温等离子体能有效杀伤肿瘤细胞,凋亡是其主要的致死机制,并初步阐述了低温等离子体促进肿瘤细胞凋亡的分子机制.     

雷公藤片诱导小鼠脾脏抑制细胞活性的研究

本文从体内及体外两方面探讨了雷公藤片对小鼠脾脏抑制细胞活性的影响。雷公藤片0.2克/日/只灌胃5天及9天后,小鼠脾脏抑制细胞活性明显增高,达26.9±23.9%及37.9±22.7%;与正常对照组相比(-14.4±37.9%)差异非常显著(P<0.01)。而给药12及15天后抑制细胞活性则有的明显增高,有的明显降低。给药5天后脾细胞对ConA应答明显降低。停药后7天,小鼠脾细胞对ConA应答已部分恢复,但抑制细胞活性仍然保持在较高水平。雷公藤片体外诱导2天后的脾细胞可明显抑制正常脾细胞对ConA的应答,抑制率达47.0±14.8%。本文还对雷公藤片的作用机理加以初步探讨。     

survivin反义寡核苷酸在体外诱导胰癌细胞凋亡

目的：探讨survivin反义核酸对胰腺癌细胞株Panc-1细胞凋亡的影响.方法：用脂质体瞬时转染法介导survivin反义核苷酸处理胰腺癌Panc-1细胞后,MTT试验测定转染细胞的相对存活率,RT-PCR检测survivin mRNA表达,琼脂糖凝胶电泳分析其对Panc-1细胞的凋亡诱导作用.结果：转染survivin反义核酸的Panc-1细胞增殖明显受抑制,与对照进行比较,具有显著性差异（P＜0.05）;经琼脂糖凝胶电泳,转染survivin反义核酸的Panc-1细胞可见到DNA梯形条带,而对照细胞未见到.结论：survivin反义核酸能够诱导Panc-1细胞凋亡.     

维生素K3对HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的:观察维生素K₃(VK₃)对HL-60细胞凋亡的诱导作用。方法:通过形态学、DNA电泳、Annexin V标记法检测VK₃作用后HL-60细胞的凋亡发生情况。结果:2、5、10、20 μmol/L的VK₃作用于HL-60细胞48h后凋亡发生率分别为8.76%、9.7%、18.54%、75.4%;10 μmol/L的VK₃作用于HL-60细胞24、48、72、96 h后凋亡发生率分别为11.35%、18.54%、21.22%、37.54%。结论:VK₃能诱导HL-60细胞发生凋亡,并具有一定的量效和时效关系。