茶多酚在体外诱导HL-60细胞的凋亡

目的：寻找新的肿瘤细胞凋亡诱导剂。方法：选用茶的主要活性成分茶多酚,采用噻唑蓝（ＭＴＴ）还原法,ＤＮＡ凝胶电泳以及透射电镜技术,在体外观察了茶多酚对人急性早幼粒白血病细胞（ＨＬ－６０）凋亡的影响。结果：被２５０ｍｇ／Ｌ茶多酚作用５ｈ后ＨＬ－６０细胞进行凝胶电泳呈现出典型的ＤＮＡ条带,透射电镜下看到凋亡小体,茶多酚对ＨＬ－６０细胞凋亡的诱导活性平行于它的细胞杀伤作用。结论：在体外培养条件下,茶多酚可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡     

TGF-β1诱导HL-60细胞株凋亡作用的研究

为探讨转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）在体外诱导早幼粒细胞白血病细胞株（ＨＬ－６０）凋亡的作用及其相关的细胞和分子机制,本实验以ＴＧＦ－β１在体外对ＨＬ－６０细胞株作用,通过电镜,ＴＵＮＥＬ法,流式细胞仪,免疫细胞化学实验方法中的实验方法,观察ＴＧＦ－β１对ＨＬ－６０细胞株凋亡的诱导作用,以及相关基因的表达变化。     

环孢素A体外诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：观察环孢素Ａ是否有诱导白血病细胞凋亡的作用。方法：应用细胞形态学检查、二苯胺法ＤＮＡ片段化定量，ＤＮＡ凝胶电泳及流式细胞术等方法观察细胞凋亡。结果：ＣｓＡ５０ｍｇ／Ｌ作用ＨＬ－６０细胞４ｈ，ＤＮＡ片段率显著增高，达（２８．２±５．８）％，而对照组仅为（１２．５±１．７）％（Ｐ＜０．０１，ｎ＝１０）。光镜及电镜检查见细胞核固缩，碎裂，有凋亡小体形成。ＤＮＡ电泳显示典型的ＤＮＡｌａｄｄｅｒ。流式细胞术检测发现ＣｓＡ５０ｍｇ／Ｌ作用ＨＬ－６０细胞６ｈ凋亡细胞率为４９．７％，而空白组仅为９．１％。ＣｓＡ诱导ＨＬ－６０细胞ＤＮＡ片段化呈剂量和时间依赖性。结论：ＣｓＡ在体外能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡。     

干扰素对IL—60细胞与维甲酸耐药IL—60细胞作用的研究

目的：探讨干扰素α对ＨＬ－６０细胞增殖发化与凋亡的作用及特点。方法：ＭＴＴ法测定细胞增殖性变化。ＮＢＴ方法测定细胞分化程度。流式细胞仪测定凋亡的发生程度。浓度递增法诱导ＨＬ－６０细胞的维甲酸耐药性。结果：ＩＦＮα体外抑制ＨＬ－６０细胞增殖,并与维甲酸产生协同抑制作用,ＩＦＮα可单独诱导ＨＬ－６０细胞分化,又能增加维甲酸诱导分化作用。单独ＩＦＮα无明显的诱导ＨＬ－６０细胞凋亡作用。维甲酸耐药ＨＬ－６     

bcl—2癌基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸诱导HL60细胞凋亡

目的 不同浓度ｂｃｌ－２癌基因反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸９ＡＳ－ＰＳ－ＯＤＮ,ＡＳＰＯ）对ＨＬ６０细胞凋亡的诱导作用。方法 ＡＳＰＯ与ＨＬ６０细胞共培养后,用吖啶橙（ＡＯ）染色法,流式细胞仪ＤＮＡ倍体分析,电镜观察、ＤＮＡ片段电沪等方法进行观察。结果 ＡＳＰＯ组与正义组比较能特异诱导ＨＬ６０细胞的凋亡,且于培养２４５小时即可出现,此时ＡＳＰＯ５、１０、２０μｍｏｌ／Ｌ浓度各组的凋亡率分别为：（９．７     

γ-射线诱导HL-60细胞凋亡的形态学研究

目的　观察γ－射线诱导ＨＬ－６０ 细胞凋亡的形态学变化。　方法　应用Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光显微镜及透射电子显微镜进行观察。　结果　γ－射线诱导ＨＬ－６０ 细胞死亡的主要方式是凋亡，凋亡细胞具有典型的形态特征，细胞核染色质凝集边聚；发现细胞核经多种形式形成核碎块；并可见具有不同内含物的凋亡小体；内质网增多，参与形成核碎块。　结论　同一因素诱导同一细胞凋亡，细胞核的变化可有多种形式。γ－射线诱导Ｋ５６２和ＣＥＭ 细胞凋亡的形态学变化与ＨＬ－６０ 细胞的不同，反映出同一因素诱导不同细胞凋亡的途径有一定的差异。     

雷公藤多甙可诱导细胞周期非特异性凋亡

细胞凋亡在维持免疫系统功能稳定方面发挥着重要作用。细胞凋亡的减弱将导致相关细胞过度增生而发生包括肿瘤和自身免疫疾病如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎在内的多种细胞增生性疾病。目前用于治疗自身免疫病的多种合成药物如糖皮质激素、细胞毒药物、非甾体抗炎药及抗疟药物均可诱导细胞凋亡。已经发现中药提取物———雷公藤多甙 (Ｔ2 )亦可诱导人前骨髓白血病细胞(ＨＬ 6 0 )的凋亡。将ＨＬ 6 0与Ｔ2共同培养不同时间后 ,采用流式细胞仪检测 ,发现 :①对照组ＨＬ 6 0细胞生长周期呈现出典型的Ｇ1/Ｇ0期、Ｇ2 /Ｍ期 Ｓ期和凋亡期三部分…     

神经酰胺介导粒细胞凋亡机理初探

目的 观察神经酰胺对ＨＬ－６０及中性粒细胞（ＰＭＮ）凋亡产生的影响,探讨其在粒细胞发生过程中可能的调节作用。方法：采用ＤＮＡ凝胶电泳,流式细胞术,光镜及ＲＴ－ＰＣＲ等技术对细胞进行凋亡鉴定及相关基因ｂｃｌ－２,ｃ－ｍｙｃ,ｍＲＮＡ表达分析。结果 神经酰胺（ｃ２－ｃｅｒａｍｉｄｅ）肿瘤坏死因子（ＴＮＦα）及长春新碱（Ｖｉｎｃｒｉｓｔｉｎｅ）均可不同程度地诱导ＨＬ－６０及成熟ＰＭＮ产生凋亡,ＣＰＫ激活     

Bcl-2过表达抗细胞凋亡的初步观察

ｂｃｌ－２是脊椎动物中相当于线虫（Ｃ．ｅｌｅｇａｎｓ）ｃｅｄ－９的“抗死亡”基因。在培养的淋巴细胞中导入ｂｃｌ－２可以保护细胞免遭细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）。本研究旨在探讨Ｂｃｌ－２过表达对人白血病ＨＬ－６０细胞凋亡的影响。ＨＬ－６０细胞常规培养...     

逆转录病毒载体介导的IL-4基因修饰对HL-60细胞增殖及T细胞功能的影响

目的观察ＩＬ－４基因转染对ＨＬ－６０增殖及Ｔ细胞功能的影响及其可能机制。方法采用逆转录病毒载体介导基因转染法将人ＩＬ－４基因导入髓系白血病细胞ＨＬ－６０,观察高表达外源性ＩＬ－４基因ＨＬ－６０株的增殖反应及其诱导的正常人ＰＢＭＣ增殖,ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ基因表达及肿瘤特异性ＣＴＬ杀伤活性。结果ｒＩＬ－４或瘤细胞产生的ＩＬ－４早期促进ＨＬ－６０细胞增殖,培养５天后则明显抑制其增殖;与ｒＩＬ－４处理的ＨＬ－６０细胞比较,ＩＬ－４基因修饰的ＨＬ－６０细胞明显促进正常人ＰＢＭＣ增殖并合成ＩＬ－２、ＩＬ－６及ＩＦＮ－γｍＲＮＡ,其诱导的特异性ＣＴＬ杀伤活性明显高于野生型ＨＬ－６０、仅导入载体的ＨＬ－６０和加入ｒＩＬ－４共育的ＨＬ－６０细胞诱导者。结论ＩＬ－４基因转染在影响ＨＬ－６０细胞增殖和分化过程的同时,可能促进某些抗原（如ＭＨＣⅠ类抗原）的抗原性,从而有利于机体建立有效的抗肿瘤免疫反应。     

米托蒽醌对HL-60细胞的促凋亡效应

目的 :探索米托蒽醌 (MTN)促HL 6 0细胞凋亡效应及其机理。方法 :取对数生长期HL 6 0细胞 ,不同浓度MTN作用不同时间后 ,利用MTT法、透射电镜、DNA电泳、流式细胞术观察MTN对HL 6 0细胞的抑制效应、促凋亡效应及凋亡相关基因Bcl 2、Bax蛋白表达情况。结果 :(1)毫微克级的MTN对HL 6 0细胞有明显的抑制效应 ,且效应具有时间、剂量依赖关系。(2 )MTN作用后的HL 6 0细胞透射电镜观察胞膜完整、出现核碎裂、凋亡小体等形态学特征。DNA电泳出现 2 0 0bp左右的梯形条带。 (3)Bcl 2、Bax蛋白表达 :MTN作用于HL 6 0细胞相同时间 ,Bcl 2蛋白及Bcl 2蛋白与Bax蛋白比值 (Bcl 2 Bax)随MTN作用时间延长而下降。结论 :MTN具有诱导HL 6 0细胞凋亡作用 ,此过程中伴Bcl 2下调和Bcl 2 Bax的降低。提示MTN可能通过Bcl 2途径诱导HL 6 0细胞凋亡     

重组灵芝免疫调节蛋白抑制HL60细胞增殖及诱导凋亡的研究

目的:探讨重组灵芝免疫调节蛋白(rLZ-8)对HL60细胞抑制作用及诱导凋亡的研究。方法:采用MTT法检测rLZ-8对HL60细胞的体外杀伤作用;通过Annexin V/PI双染检测细胞凋亡率;应用钙离子荧光探针Fluo-3/AM染色,检测rLZ-8作用HL60细胞后细胞内钙离子浓度变化;分光光度法测定细胞caspase-3活性。结果:rLZ-8可明显抑制HL60细胞增殖,随着rLZ-8浓度增加,细胞凋亡率也增加;激光共聚焦检测细胞内钙离子水平明显升高,并且细胞内caspase-3活性增高。结论:rLZ-8可诱导HL60细胞发生凋亡,细胞内钙超载及caspase-3活性增高可能是rLZ-8诱导HL60细胞凋亡的途径之一。     

脂质体转染细胞周期素B1反义脱氧寡核苷酸对HL60细胞增殖调控的影响

目的:探讨脂质体转染细胞周期素B1(cyclinB1)反义脱氧寡核苷酸(ASON)对HL60细胞增殖调控的作用。方法:用针对cyclinB1mRNA5’端编码区起始密码子(ATG/AUG)的ASON,通过脂质体导入HL60细胞共培养后,用流式细胞术(FCM)和RT-PCR分别检测cyclinB1蛋白和mRNA的表达水平,电镜和原位细胞凋亡检测法(POD)、FCM及DNA凝胶电泳法检测细胞凋亡。结果:CyclinB1ASON组与SON及空白对照组相比,ASON能特异地抑制cyclinB1蛋白及mRNA水平的表达,当ASON的浓度达到一定程度时,HL60细胞的增殖及集落形成率均明显受抑制,出现细胞凋亡,并且此作用随ASON浓度的升高而增强。结论:CyclinB1的特异ASON能封闭其蛋白及mRNA的表达水平,可剂量依赖性地抑制白血病细胞增殖,诱导细胞凋亡。     

蝌蚪提取液对HL—60细胞相关癌基因表达的影响

目的：研究蝌蚪提取液（T871－3）对白血病细胞的作用机制。方法：利用细胞形态学观察,细胞化学、TUNEL法等技术,并采用原位mRNA杂交和完整细胞原位斑点印迹技术,观察T871－3诱导HL－60细胞分化和凋亡过程中c-myc,c-myb,bcl-2癌基因表达的变化。结果：1．T871－3能抑制TH－60细胞分裂增殖。2．T871－3在低浓度时诱导HL－60细胞向单核／巨噬样细胞方向分化,高浓度时诱导细胞凋亡。3．T871－3诱导HL－60细胞分化的过程中伴随着c-myc,c-myb癌基因表达的下调,诱导HL－60细胞凋亡的过程伴随着c-myc,bcl-2癌基因的表达的下调,结论：T871－3可能通过调节癌基因的表达发挥其诱导HL－60细胞分化和调亡的作用。     

CCAAT增强子结合蛋白α对急性粒细胞白血病HL60细胞分化和凋亡的影响

目的 探讨CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)在体内和体外对急性粒细胞白血病HL60细胞分化和凋亡的影响及其可能机制.方法 将C/EBPα表达质粒pEGFP-C/EBPα经阳离子脂质体介导转染HL60细胞,用G418筛选出C/EBPα稳定表达细胞株为转染组;以转染pEGFP空载质粒HL60细胞为空载体组;未处理的HL60细胞为对照组.瑞氏染色观察细胞形态学变化;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术分析凋亡;RT-PCR及免疫印迹法(Western blot)检测c-myc基因的表达.20只BALB/c裸鼠按完全随机法分为3组:转染组7只、空载体组7只、对照组6只.将3组细胞分别皮下注射相应各组小鼠形成皮下瘤,20 d后处死小鼠,测量肿瘤质量及大小,TUNEL法检测皮下瘤组织细胞凋亡率.结果 筛选到C/EBPα基因稳定表达的细胞株pEGFP-C/EBPα-HL60,细胞出现明显分化.对照组、空载体组和转染组细胞的凋亡率分别为(5.4±1.4)%、(5.0±1.3)%、(21.9±4.5)%,转染组细胞的凋亡率显著高于对照组和空载体组(均P＜0.05).RT-PCR及免疫印迹显示C/EBPα明显抑制c-myc mRNA和蛋白的表达(均P＜0.05).对照组、空载体组和转染组细胞接种小鼠形成皮下瘤,其质量分别为(5.35±1.12)g、(5.12±1.31)g和(3.26±0.72)g,瘤体大小分别为(25±4)mm、(18±3)mm和(11±2)mm,转染组瘤体质量及瘤体大小明显低于对照组和空载体组(均P＜0.05).与对照组和空载体组比较,转染组皮下瘤组织细胞凋亡率明显增加(均P＜0.05).结论 C/EBPα在HL60细胞中具有促进细胞凋亡和抑制细胞增殖的能力,显示C/EBPα在急性粒细胞白血病中是一种肿瘤抑制因子.     

三种反义c-myc RNA对HL-60细胞凋亡的影响

目的 :了解和比较不同的反义c myc基因导入对HL 60细胞凋亡的影响。方法 :将分别载有c myc第 1、2和3外显子反义片段的三种重组逆转录病毒表达载体aM 1、aM 2和aM3导入体外培养的HL 60 ,并观察基因稳定表达对靶细胞凋亡的影响。结果 :(1 )光镜下aM2、aM 3组细胞核质比例明显缩小 ,出现凋亡小体等凋亡的形态特征 ;(2 )透射电镜下显示反义载体的导入使细胞胞质中出现了大量的自噬体和自噬泡 ,该现象的出现以aM1组为主 ;(3 )反义c myc导入引起HL 60中ACP酶活性增高 (aM1 >aM 3 >aM2 ) ,尤其是aM 1组 ,约提高了 86%。 (4 )流式细胞仪显示aM 2和aM3的瞬时和稳定表达都诱使HL 60凋亡率增高、细胞体积缩小、核质比减小 ,aM 1则无上述凋亡诱导作用。结论 :aM 2、aM3的导入促使HL 60出现了凋亡样改变 ,而aM 1则主要使细胞出现自噬。     

CpG-ODN诱导白血病HL60细胞分化和凋亡的研究

目的:研究含CpG基序的寡核苷酸对白血病HL60细胞的作用。方法:设计合成含CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)、不含CpG基序的寡核苷酸(nonCpG-ODN)和含甲基化CpG基序的寡核苷酸(ZpG-ODN)分别作用于白血病HL60细胞,MTT法测定HL60细胞抑制效应,硝基四氮唑蓝还原实验和细胞表面CD14分子表达状况分析HL60细胞诱导分化结果,流式细胞仪和透射电镜观察HL60细胞的凋亡现象,免疫组化检测HL60细胞后caspase3、Bcl-2和Bax的表达状况。结果:CpG-ODN对白血病HL60细胞有诱导分化和诱导凋亡作用,nonCpG-ODN和ZpG-ODN无此作用。结论:CpG-ODN可直接诱导白血病HL60细胞分化和凋亡,此为白血病免疫治疗提供了新的途径。     

Induction of tumor cell apoptosis via Fas/DR5

The apoptosis inducing effects on tumor cell lines MGC803, BEL7402 and HL60 by Fas ligand and anti-human DR5 monoclonal antibodies （anti-DR5 mAb） and the underlying mechanism was studied. Fas/DR5 mRNA was detected by RT-PCR. Cytotoxicity exerted by FasL/anti-DR5 mAb on tumor cell lines was measured by MTT assay and the induced apoptosis was determined by agarose gel electrophoresis. Flow cytometry was employed to analyze the mode of cell death. The mRNA expression of DR5 in MGC803 and BEL7402 cells after giving anti-DR5 mAb was up-regulated compared with control group, while it was down-regulated in HL60 cells in the same condition. The mRNA expression of Fas in HL60 was higher after giving FasL compared with control group, while it was lower in MGC803 and BEL7402. MGC803 and BEL7402 were sensitive to anti-DR5 mAb but partially to FasL, and HL60 was sensitive to FasL but less sensitive to anti-DR5 mAb. Apoptosis induced by Fas ligand and anti-DR5 mAb vary among tumor cell lines. The underlying mechanism may be relevant to Fas/DR5 mRNA expression, which was presented as the release of caspase-8 and Bcl-2.     

人细胞增殖相关激酶plk3基因逆转录病毒载体的构建及对细胞增殖的影响

目的构建人细胞增殖相关激酶基因plk3的逆转录病毒载体(RV),观察该基因对细胞增殖和细胞周期的影响。方法将plk3基因亚克隆至pMSCV-puroR载体中,经酶切和测序鉴定,制备高滴度的RV,以流动感染法高效感染,半固体集落培养法测定基因导入率。用嘌呤霉素筛选后,获得K562-plk3-puroR和HL60-plk3-puroR细胞。以野生型细胞和导入空载体的K562-puroR和HL60-puroR细胞作为对照,用PCR鉴定基因的导入,并测定细胞周期及凋亡率等,研究plk3基因导入对细胞的影响。结果获得pMSCV-plk3-puroR质粒并经酶切和测序证实。对K562和HL60细胞的基因导入率,分别达82.3%±3.70%和62.9%±4.94%(n=3)。经嘌呤霉素筛选后,转基因细胞的阳性率>99%。K562-plk3-pu-roR和HL-60-plk3-puroR转基因细胞的增殖曲线比对照细胞降低(P<0.01);而导入空载体的K562-puroR和HL60-puroR细胞的增殖曲线与野生型细胞相比较无显著差异。与K562细胞相比较,常规培养时,处于G0~G1期的K562-plk3-puroR细胞增多[(49.7±3.38)%vs(43.9±2.34)%,P=0.03]。以无血清培养基培养10h后,进入S期的K562-plk3-puroR细胞减少[(43.6±3.74)%vs(54.5±1.52)%,P=0.02],凋亡率降低[(1.3±0.31)%vs(3.4±0.37)%,P=0.01]。结论构建了plk3基因的逆转录病毒载体,发现plk3基因的导入可延缓细胞增殖,并抑制细胞进入增殖周期。