Access全自动微粒子化学发光免疫分析系统检测运动员兴奋剂122例报道

化学发光免疫分析包括三大类型: 即标记化学发光物质的化学发光免疫分析、标记荧光物质的荧光化学发光免疫分析和标记酶的化学发光酶联免疫分析.化学发光免疫分析技术可测定内分泌激素、肿瘤标志物、血药浓度、传染病和心血管疾病标志物、贫血及过敏原等项目[1].     

化学发光标记及发光免疫分析

化学发光标记及发光免疫分析张丽民上海第二军医大学，上海２００４３３化学发光标记（ＣＬＬ）及发光免疫分析（ＬＩＡ）是一种灵敏度高、特异性强、检测快速，无放射危害的分析技术。七十年代末以来，ＣＬＬ及ＬＩＡ得到了迅速发展。本文综述了该项技术的机理、实验技术...     

核酸分子的化学发光标记和化学发光检测

非同位素标记是核酸分子杂交和检测的关键技术。在已知的各种非同位素标记检测方法中,化学发光标记和检测以其灵敏度高、安全无害和操作简便等优点,愈来愈受到重视。本文对核酸分子的化学发光标记和核酸杂交分子的化学发光检测作一简要介绍。     

标记免疫分析的质量控制和标准化(二)

二标记免疫分析的标准化问题几十年来,免疫学从多克隆抗体发展到单克隆抗体的应用,标记方法从放射性核素、酶、胶体金标记的显色反应到荧光、化学发光标记测量荧光或化学发光等,形成了“标记免疫分析”这一独立学科。在应用方面,不断更新的商业化试剂盒,同时由于标记免疫分析的     

同位素标记结合免疫印迹-化学发光法鉴定小鼠神经元磷酸化蛋白质组

创建一套简单、实用、灵敏、高效的分析鉴定磷酸化蛋白质组的优化方案。采用同位素标记、双向电泳、放射自显影等技术建立小鼠神经元磷酸化蛋白质组图谱,再用免疫印迹-持久性化学发光技术选择性地鉴定三种小鼠神经元磷酸化蛋白质——PI3Kr3、MEK1、PKCα。结果显示三种磷酸化蛋白质在双向电泳放射自显影图谱和双向电泳免疫印迹-化学发光图谱上的斑点基本匹配,提示本研究建立的以同位素标记和免疫印迹-化学发光法为核心的分析鉴定磷酸化蛋白质组的一整套优化方案灵敏度高、特异性强。     

孕酮化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立具有较宽检测范围的孕酮(P)化学发光免疫分析方法.方法 采用竞争一步法原理建立P化学发光免疫分析检测体系,对各种影响因素如免疫试剂的稀释度、免疫试剂的稀释体系及温育时间等进行了考察和优化,最终选定的实验条件分别对该体系的最低检出限、线性、精密度、准确性、特异性进行评估,并与进口全自动化学发光试剂检测结果进行对比.结果 本系统线性范围为0.5~90 ng/mL,最低检出限为0.05ng/mL,批内批间变异变异系数均小于10%,与高浓度孕烯醇酮、雄烯二酮、雌二醇均无交叉反应,添加回收率在96.1%~106.2%.与进口全自动化学发光试剂同时测定175份样本的P浓度,二者测定结果的相关系数r为0.981.结论 成功建立了孕酮化学发光免疫分析法,该方法线性范围宽,灵敏度高,可作为进口化学发光试剂的替代试剂在临床进行推广.     

CLIA,TrFIA及ECLIA分析系统与临床(文献综述)

近年来,标记免疫分析技术的研究和应用取得新的进展[ 1].尤其是非放射性标记免疫技术的分析自动化已推广应用于临床.如化学发光免疫分析(CL IA)、时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)及电化学发光免疫分析(ECLIA)相继建立(以上各种分析技术的性能比较见表1).它们除与放射免疫和免疫放射同样具有高度特异性和灵敏度外, 还克服了放射性核素可能造成的环境污染、核素半衰期的影响、保存期短等缺点,得到越来越广泛的应用,成为非放射性免疫分析中最有前途的方法.     

糖类抗原50化学发光免疫分析方法的建立及评价

目的 建立以异硫氰酸荧光素(FITC)单抗包被磁微粒、吖啶酯为发光标记物的检测糖类抗原50(CA50)的磁微粒全自动化学发光免疫分析方法.方法 根据双抗体夹心法原理,选择抗-FITC单克隆抗体偶联磁微粒,FITC标记一株抗-CA50单克隆抗体,吖啶酯标记另一株抗CA50单克隆抗体,建立CA50化学发光免疫分析方法,同时对该方法的空白限、检出限、线性范围、准确度、重复性、干扰进行了验证,并与迈瑞全自动化学发光试剂检测结果进行了比对.结果 本方法最终采用两步法的反应模式,空白限为0.03U/mL,检出限为2U/mL,线性范围为4.0～500.0U/mL,样本的回收率为99.39％,高、低两份样本变异系数分别为4.05％和2.16％,与迈瑞全自动化学发光免疫测定系统同时测定131份样本,回归方程为Y=1.0177 X-3.0827,r=0.993.同时发现样本中的荧光素钠(FITC-Na)高于2μg/mL时会对本方法造成干扰.结论 成功建立了糖类抗原50的吖啶酯全自动化学发光免疫分析方法,各项指标均满足临床检测的要求,具有一定的临床应用价值.     

促甲状腺激素生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种低成本、高灵敏度的检测血清促甲状腺激素(TSH)的生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法。方法引入生物素-亲和素放大系统,一株抗TSH的单克隆抗体包被微孔板,另一株标记生物素,辣根过氧化物酶标记链亲和素,鲁米诺作为发光底物,采用夹心法,建立TSH酶促化学发光免疫分析方法。结果方法分析灵敏度为0.01mIU/L,批内变异系数为2.01%～5.40%,批间变异系数为2.96%～17.9%,回收率为90.6%～114.4%,高值促甲状腺激素血清样品经系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性关系,相关系数大于0.99,与原子高科TSH免疫放射分析方法和罗氏电化学发光分析法的测定值具有良好的相关性。结论生物素-亲和素TSH酶促化学发光免疫分析方法具有成本低、灵敏度高、特异性高和稳定性好的特点,具有广阔的应用前景。     

化学发光免疫分析定量检测乙肝病毒标志物方法学研究

采用碱性磷酸酶标记,金刚烷衍生物发光,自动化学发光分析仪测量等,进行乙肝病毒五种标志物化学发光免疫分析(CLIA)方法学研究.结果表明这五种标志物CLIA方法的精密度、灵敏度、回收率和临床符合率等技术参数均达到方法学和临床诊断的要求.CLIA方法比ELISA和RIA更简便、快速而实用,为临床诊断和科研工作提供了一种有用的检测手段.     

微粒子化学发光免疫测定促甲状腺素敏感性方法的建立与应用

目的 :建立一种低成本、高敏感性检测血清促甲状腺激素(TSH)的微粒子化学发光免疫分析 (CLEIA)方法。方法 :采用碱性磷酸酶标记的抗TSHβ亚单位特异性单克隆抗体 (mAb) ,与FITC偶联的抗TSHα亚单位的另一mAb配对 ,构成双抗体夹心免疫结合 ,用抗FITC多抗免疫磁珠做固相分离载体 ,用金刚烷胺CSPD为发光底物的非均相免疫分析法。结果 :方法灵敏度 4 μIU/L ,批内变异系数 (CV)平均为7.4 5 % ,批间CV平均为 10 .4 5 % ,回收率为 91.4 %～ 10 2 .4 %。将实际样品测定与ACS 180  系统检测的结果相比较有较好的相关性。结论 :微粒子化学发光定量测定TSH的成本低、灵敏度及特异性高和稳定性好 ,具有广阔的应用前景     

吖啶酯标记建立血清透明质酸磁微粒化学发光检测方法

目的 建立以吖啶酯为标记物检测透明质酸(H A)的磁微粒化学发光免疫分析方法.方法 采用吖啶酰肼标记的HA作为示踪物,通过抗体将透明质酸结合蛋白固定在磁微粒上,建立了基于竞争法原理的免疫分析方法,研究了该方法的空白限、检出限、线性范围、重复性、批间差、回收率、和抗干扰能力,建立了正常人参考区间,并与放射免疫分析药盒的检...     

总PSA光激化学发光免疫分析法的建立

为了采用光激化学发光免疫分析技术建立快速定量检测总前列腺特异性抗原(tPSA)的方法。用两株配对的tPSA单克隆抗体,一株tPSA单克隆抗体包被受体微球,另一株tPSA单克隆抗体用生物素标记,与链霉亲合素的供体微球共同组成检测试剂。结果:自制tPSA试剂分析灵敏度为0.006ng/ml,线性测量范围为0.006～150ng/ml,分析内和分析间的精密度分别为3.90%～6.67%、4.71%～6.90%,与AFP、CA125、CA19-9和人白蛋白无明显交叉反应,136份临床血清样本用本试剂与罗氏化学发光试剂检测,其相关系数为0.979。提示:自制tPSA光激化学发光免疫分析试剂各项指标均能达到临床要求,有望替代国外同类产品。     

平足蛋白吖啶酯化学发光免疫分析方法的建立及在乳腺癌检测中的临床应用

目的 建立一种以活化吖啶酯标记抗人平足蛋白抗体为标记物检测人血清中平足蛋白(PDPN)的磁微粒化学发光免疫检测方法并进行在乳腺癌相关疾病方面的临床应用验证。方法 以包被链酶亲和素磁微粒-活化生物素标记抗人平足蛋白抗体为固相分离载体，生物素标记一株鼠抗人平足蛋白单克隆抗体，吖啶酯标记另一株鼠抗人平足蛋白单克隆抗体，建立人血清样本中PDPN定量免疫分析方法。结果 在线性范围1.00～800.00ng/mL内，相关系数r为0.9990,检出限为0.52ng/mL;批内重复性不超过5.0%,批间差不超过10.0%;正常参考区间为小于4.50ng/mL;测定乳腺癌临床样本，特异性为88%和灵敏度为87%。结论 建立了定量检测人血清中PDPN水平的化学发光免疫分析法，对乳腺癌的发生发展起了辅助诊断作用。     

抗血管紧张素Ⅱ单克隆抗体制备及初步鉴定

目的 运用杂交瘤技术制备血管紧张素Ⅱ单克隆抗体,并对其进行初步鉴定.方法 制备血管紧张素Ⅱ免疫原免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过筛选克隆后获得细胞株并制备血管紧张素Ⅱ单克隆抗体,对抗体的亚型、效价、亲和常数、交叉反应率进行测定并评估其用于化学发光免疫分析的性能.结果 共制备出6株单克隆抗体,其中9A2、3B3株单抗具有良好的亲和力、特异性、灵敏度和稳定性,9A2株单抗用于化学发光免疫分析测定样本结果与正常人水平一致.结论 本研究成功制备出亲和力高、特异性和稳定性好的血管紧张素Ⅱ单克隆抗体,可应用于AⅡ化学发光免疫分析中,具有良好的临床检测价值.     

人血清CYFRA21-1化学发光免疫分析方法的初步建立及应用

目的:建立人血清CYFRA21-1化学发光免疫分析方法并在临床检测中的应用。方法:使用CY-FRA21-1定量测定试剂盒（化学发光法）检测308例临床血清标本,并与CYFRA21-1电化学发光全自动免疫分析方法进行对比。结果:灵敏度0.04μg/L,线性范围（1.5～100）μg/L,与NSE及CEA无交叉反应,样本中抗凝剂量的柠檬酸钠、肝素、EDTA-Na₂对测定结果没有影响。添加回收率和稀释回收率为90%～110%,分析内和分析间变异系数均<10.0%。该方法正常参考值为（0～3.4）μg/L（95%可信限）。ECLA测定结果与本法相比,临床总符合率为96.65%。结论:该方法灵敏度高、特异性好、稳定性强,检测范围宽,有良好的准确性和重复性,完全可替代进口化学发光试剂用于临床样本的检测。     

临床检验中化学发光免疫分析的应用

目的对临床检验中化学发光免疫分析技术的临床应用价值进行分析探讨。方法以我院2012年3月~2014年3月收治的40例甲状腺疾病患者作为研究组，通过化学发光免疫技术检验血浆甲状腺球蛋白水平，再随机抽取我院门诊20例健康体检者作为对照组I组，并以余小华[1]等报道的120例接受放射免疫检验的甲状腺疾病患者作为对照组I 组，对比三组的放射免疫及甲状腺球蛋白的分析结果。结果化学发光免疫检验方法的灵敏度及准确度均高于发射免疫检验方法，<0.05，差异具有统计学意义。结论化学发光免疫分析技术具有高灵敏度和准确度，操作简便，在临床上值得推广应用。     

C-肽化学发光免疫分析方法学研究

目的：建立人血清C-肽化学发光免疫分析法。方法：采用两株高特异的抗C-肽单克隆抗体，以一株包被微孔板制成固相抗体，另一株标记碱性磷酸酶，以金刚烷衍生物为底物，双抗体夹心法测定人血清C-肽浓度。结果：以5μg/ml单克隆抗体包被微孔板，酶结合物以1：5000稀释，在C-肽浓度0．1～15ng／ml范围内线性良好，线性方程为y=0．9575x-0．0869，相关系数0．99；灵敏度为0．01ng／ml，批内、批间变异系数分别为5．8％、8．4％；平均回收率98．4％，范围91．5％～105．0％。结论：文中建立的人血清C-肽化学发光免疫分析法，首次建立小分子人血清C-肽双抗体夹心化学发光免疫法测定。线性好，灵敏度较常规高出一个数量级，准确度和精密性高，能够满足一般临床诊断和科研的应用。     

胰岛素光激化学发光免疫分析法的建立

目的建立血清中胰岛素(INS)光激化学发光免疫分析的定量检测方法。方法用2株配对的INS单克隆抗体,一株INS单克隆抗体包被受体微球,另一株INS单克隆抗体用生物素标记,与链霉亲合素的供体微球共同组成检测试剂检测人血清中的INS。结果 INS-AlphaLISA的灵敏度为0.753μU/ml,线性测量范围为0.753～180μU/ml,分析内和分析间的精密度分别为7.46%～9.74%、5.24%～7.31%,与C肽无明显交叉反应、与胰岛素原有轻微交叉反应,125份临床血清样本用本试剂与罗氏化学发光试剂检测,其相关系数为0.983。结论本法建立的INS-AlphaLISA是一个各项指标均能达到临床要求的、可靠的检测,有望替代国内外同类产品用于临床。     

癌抗原15-3酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的 建立癌抗原15-3(CA15-3)酶促化学发光免疫分析方法.方法 利用双抗体夹心法建立CA15-3化学发光检测体系,分别对该体系的最低检测限、线性、分析特异性、准确度和精密度进行评估,并与进口全自动化学发光检测结果进行对比.结果 本方法灵敏度为0.26 U/mL,线性范围为0～ 300 U/mL,与CEA和CA125无交叉反应,添加回收率在97.0％ ～105.6％之间,分析内与分析间CV均小于10％,与进口全自动化学发光试剂同时检测160份样本的CA15-3浓度,检测结果的线性相关系数为0.987.结论 成功建立了CA15-3酶促化学发光免疫分析方法.该方法灵敏度高、重复性好,在临床应用中可替代进口化学发光检测试剂.