湖北省手足口病肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型VP1基因特征

目的 了解湖北省手足口病肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）的VP1基因特点,研究该省EV71和Cox A16的基因型别及分子进化特征。方法 对2014-2015年湖北省26株EV71和27株Cox A16流行株的VP1基因测序,分析其同源性和遗传进化特征。结果 2014-2015年湖北省EV71和Cox A16流行株VP1核苷酸和蛋白氨基酸序列同源性均较高,EV71流行株的蛋白氨基酸和核苷酸序列同源性分别为97.6%~100.0%和92.3%~100.0%。Cox A16流行株的蛋白氨基酸和核苷酸序列同源性分别为96.6%~100.0%和92.3%~100.0%。EV71的VP1基因系统进化分析表明,湖北省流行的EV71与我国其他地区流行的EV71均位于一个大的分支上,均为C4基因型的C4a亚型。Cox A16流行株与B1b亚型代表株位于同一分支上,主要为B1b亚型。结论 2014-2015年湖北省EV71和Cox A16流行株分别为C4a亚型和B1b亚型,其核苷酸和氨基酸与国内外其他地区的手足口病病毒株均有较高同源性。     

2010年天津市手足口病病原学与分子流行病学分析

目的 对天津市2010年的手足口病(HFMD)病例进行病原学分析,并对引起该市HFMD流行的肠道EV71型和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)进行分子生物学特征分析。 方法 利用Real-time PCR检测HFMD病例标本,用人横纹肌肉瘤(RD)细胞对Real-time PCR检测阳性的部分病例标本进行病毒分离,用RT-PCR法扩增VP1全基因,使用生物学软件进行序列和系统发生分析。 结果 共检测HFMD病例1766例,肠道病毒总检测阳性率为71.52%(1263/1766),其中EV71占43.94%,Cox A16占41.65%,其他EV占14.41%。15株EV71分离株与C4亚型的C4a分支代表株具有最高的核苷酸序列同源性,均归属于C4a分支;9株Cox A16分离株与B1亚型的代表株具有最高的核苷酸序列同源性,其中8株属于B1b分支,1株属于B1a分支。 结论 导致天津市2010年HFMD流行的EV71流行株为C4亚型中的C4a病毒株,Cox A16流行株为B1亚型的B1b病毒株。     

2011-2012年杭州市手足口病的病原构成及肠道病毒71型的分子流行病学特征

目的 探讨杭州市手足口病病原谱构成及其肠道病毒71型(human enterovirus 71,EV71)的分子特征。 方法 采集210例疑似手足口病感染者的粪便标本及其相关临床资料,采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real time RT-PCR)方法进行初步检测,利用RT-PCR扩增部分EV71和柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16, Cox A16)阳性样本VP1基因区并测序分析。 结果 荧光定量RT-PCR检测表明,210例疑似感染者的粪便中, EV71、Cox A16 和其他肠道病毒的阳性率分别为60.95%(128/210)、21.43%(45/210)和9.05%(19/210)。10株EV71病毒VP1区核酸序列与JX509922、JX509924、JX509926、JX509927、 JX509928和 JX509929的同源性最高为95.7%~98.0%,且均属于EV71中 C4a亚型。 结论 EV71和Cox A16是杭州市儿童手足口病的主要病原体。因此加强EV71和Cox A16的监测特别是EV71的检测,有助于更好地预防和控制手足口病。     

2010—2012年浙江省余姚市手足口病的病原构成及Cox A16 VP1基因特征分析

目的了解浙江省余姚市引起手足口病的病原构成,研究Cox A16基因特征及变异情况。方法收集手足口病患者标本,用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)检测并分型,每年选择几个样品进行Cox A16 VP1基因的扩增和核苷酸序列测定,测序结果利用DNAstar和Blast软件进行比对分析。结果 2010—2012年从1651份标本检出柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)25.86%,肠道病毒71型(EV71)39.85%,其他肠道病毒19.38%;Cox A16 VP1蛋白氨基酸序列相似性为99.3%~100%,7株Cox A16基因分型属于B1基因亚型。结论 2010—2012年余姚市手足口病流行的主要病原体为Cox A16和EV71,流行的Cox A16属于B1基因亚型,并具有高度相似性。     

南通地区2014年肠道病毒71型的分子流行病学研究

目的分析2014年江苏南通地区肠道病毒71型(EV71)的分子流行病学特征。方法采集52例手足口病患儿咽拭子标本,提取病毒核酸,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)扩增病毒的VP1序列。获得的序列与来自其他地区的序列进行比对分析,构建系统发育树。结果 52份临床标本中分离到12株EV71 VP1序列,12株VP1序列的核苷酸、氨基酸同源性为93.4%~99.1%,进化树分析显示12株VP1序列全部属于C4基因型的C4a亚型。结论 2014年南通地区分离的EV71流行病毒株与近年来中国其他地区的流行株有相同的起源,均属于EV71C4基因的C4a亚型。     

2008-2011年湖北省宜昌市手足口病的流行特征分析

目的 了解湖北省宜昌市手足口病的流行特征, 为手足口病的综合防治提供科学依据。 方法 收集2008-2011年宜昌市包括各县(市、区)报告的手足口病疫情病例和聚集性病例的相关标本, 采用荧光定量RT-PCR方法进行检测。 结果 在473份标本中, 男女性别比为1.26:1,手足口病发病高峰在春末和夏初;疱疹液的阳性检出率高于咽拭子(2=8.026,P0.01)和口漱液(2=12.67,P0.01);共检测到肠道通用病毒阳性标本298份, 总检出率为73%,其中肠道病毒71型(EV71)阳性标本191 份,柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)阳性标本78份,其他肠道病毒为29份,EV71的检出率高于Cox A16(2=86.517,P0.01)和其他肠道病毒(2=189.089,P0.01)。 结论 宜昌市手足口病的病原体主要是EV71(64.1%)和Cox A16(26.2%), 随不同年份优势毒株稍有差异,EV71是引起宜昌市2008-2011年手足口病病例的主要优势毒株类型。     

2011年广东省深圳市手足口病的病原学监测

目的 了解2011年广东省深圳市手足口病的病原构成情况,为科学防治手足口病提供实验室依据。 方法 对2011年哨点医院上送的临床诊断为手足口病病例的粪便标本,先用荧光RT-PCR进行肠道病毒71型(Enterovirus 71, EV71)、柯萨奇病毒A组16型(Cox A16)以及肠道病毒核酸检测,再对肠道病毒核酸检测为阳性的标本进一步用巢式RT-PCR(RT-Nested PCR)的方法扩增片段,PCR产物测序后,通过Blast软件进行分型。 结果 409例病例中,5岁以下占93.64%,主要集中在1~2岁年龄组;5-9月为发病高峰期,11月出现一个小高峰。EV71阳性142例,构成比为43.83%;Cox A16阳性53例,构成比为16.36%;非EV71、非Cox A16的其他肠道病毒阳性129例,构成比为39.81%;129例其他肠道病毒阳性标本中,95例的序列测定结果Cox A6有69例,构成比为72.63%;Cox A10有12例,构成比12.63%; Cox A12、Cox A9、Cox A2、Cox A4、Cox B2、Cox B4、ECHO2、ECHO14和ECHO18各有少部分病例。 结论 2011年深圳市手足口病最主要病原为EV71,Cox A6次之,Cox A16位居第3位,应加强对手足口病的病原学监测。     

2009-2010年江苏省徐州市儿童手足口病病原学检测分析

目的了解江苏省徐州地区2009-2010年儿童手足口病流行的病原学特征。方法 2009年3-8月和2010年1-12月共采集徐州儿童医院门诊、住院及常规监测的511例疑似手足口病(HFMD)儿童患者的咽拭、肛拭标本,提取病毒RNA,用实时荧光定量PCR(real-time PCR)方法同时进行肠道病毒(EV),肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A16(Cox A16)的特异性基因检测。结果 511例疑似手足口病患儿的标本中,总肠道病毒阳性288例,占56.36%;288个肠道病毒核酸阳性病例中,EV71核酸阳性202例,Cox A16核酸阳性55例,构成比分别为70.14%和19.10%。≤5岁儿童感染的肠道病毒有EV71型、Cox A16型及非EV71非Cox A16的其他肠道病毒感染,>5岁儿童则只有EV71感染病例。结论 2009-2010年徐州地区儿童手足口病患儿以1～3岁儿童为主,其主要病原是肠道病毒EV71型,其次是Cox A16型。     

2011~2013年杭州市手足口病病原谱流行特征及柯萨奇病毒A16型VP1区基因变异研究

目的了解杭州市手足口病病原谱流行特征及柯萨奇病毒A16型(CA16)分离株的VP1基因变迁规律。方法采集杭州市2011~2013年手足口病患者的2 197份临床标本,用通用引物进行肠道病毒实时荧光定量RT-PCR检测,对阳性标本进行分型,对部分CA16感染阳性重症患者标本测定VP1基因序列并进行同源性比对和系统进化树分析。结果杭州地区肠道病毒通用型核酸检出率为56.0%(1 317/2 197),肠道病毒71(EV71)、CA16和其他肠道病毒的检出率分别为24.1%(530/2 197)、13.9%(306/2 197)和22.8%(501/2 197)。在咽拭子和粪便标本中EV71检出率均最高,分别为23.9%(301/1 258)和23.6%(148/627),而在疱疹液标本中其他型肠道病毒检出率最高,为32.6%(76/233),脑脊液标本中无CA16检出。咽拭子标本和粪便标本在发病初期的检出率较高,发病后第5天和第6天后检出率低于发病初期检出率,而脑脊液和疱疹液不同病程阶段的检出率无统计学意义。9株CA16分离株VP1基因的核苷酸同源性为90.8%~99.7%,分属于B1b亚型和B1a亚型。结论 2011~2013年杭州地区手足口病患者主要病原体以EV71和CA16为主,样本类型和采样时间是影响肠道病毒检出率的重要原因。杭州地区CA16毒株VP1区基因的变异程度较低,需进一步加强开展手足口病的监测。     

2008-2011年辽宁省锦州市手足口病病原监测结果分析

目的 了解辽宁省锦州地区手足口病的病原学特征及变化趋势,为手足口病防治工作提供参考依据。 方法 日常监测工作中收集2008-2011年锦州地区294例手足口病临床确诊患儿的330份样本检测结果,其中咽拭子274份,粪便标本56份,进行病原学检测。 结果 294例被检测患儿中246例为肠道病毒阳性,阳性率为83.67％,其中肠道病毒71型(EV71)阳性率30.61%,柯萨奇A组16型(Cox A16)阳性率32.31%,EV71、Cox A16混合感染阳性率0.34%,其他肠道病毒阳性率20.41%。330份标本中咽拭子阳性率82.12％(225／274),粪便阳性率71.43%(40/56)。2008-2011年病例的咽拭及粪便标本采用不同检测方法、不同试剂的阳性检出率差异无统计学意义(P﹥0.05)。 结论 锦州市儿童手足口病病原体以EV71和Cox A16为主,每年略有不同,近年其他肠道病毒感染率逐年增高。手足口病患者的咽拭和粪便标本的阳性检出率无差异。     

2013-2014年漳州市手足口病的病原学特征及分子流行病学研究

目的 了解2013-2014年漳州市手足口病的病原构成及分子流行病学特征,为漳州市手足口病的防治工作提供科学依据。方法 采用实时荧光定量反转录聚合酶链反应（Real-time RT-PCR）方法,检测2013-2014年漳州市哨点医院送检的1421份临床诊断手足口病疑似病例的标本,进行肠道病毒通用型、肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）的核酸检测;通过RT-PCR方法,扩增VP1区基因部分片段并测序,对非EV71及非Cox A16的肠道病毒进行分型鉴定;扩增完整VP1区基因片段并测序,构建系统进化树对EV71、Cox A16、Cox A6和Cox A10进行基因进化分析。结果 1063份标本肠道病毒通用型阳性,阳性率为74.81%,其中222份标本EV71阳性,340份Cox A16阳性,8份EV71+Cox A16阳性,493份非EV71及非Cox A16的肠道病毒阳性。随机抽取40份非EV71及非Cox A16的肠道病毒阳性标本经RT-PCR和测序进一步分型,共鉴定出38份非EV71及非Cox A16的肠道病毒,其中Cox A6型25份（65.79%,25/38）,Cox A10型8份（21.05%,8/38）,Cox A5型1份（2.63%,1/38）,Cox A4型3份（7.89%,3/38）和Cox A9型1份（2.63%,1/38）。VP1区完整基因的进化分析显示,漳州市的EV71均属C4基因亚型的C4a进化分支,Cox A16分属B1基因亚型的B1a和B1b两个分支;Cox A6和Cox A10均与原型株及国外地区分离株的亲缘关系远,与国内地区分离株的亲缘关系近。结论 2013-2014年漳州市非EV71及非Cox A16的肠道病毒在手足口病病原谱中占有重要位置;非EV71及非Cox A16的肠道病毒型别多样,Cox A6和Cox A10为其中的优势型别。漳州市的EV71、Cox A16、Cox A6和Cox A10标本在进化树上与国内地区相应分离株共进化共循环。     

2015年杭州市手足口病肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型构成变化与联合检测方法分析

目的 采用肠道病毒核酸和抗体检测,分析2015年杭州市手足口病肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）构成变化及检测方法学评价。方法 收集2015年4-8月手足口病患儿663例,采用荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测肠道病毒核酸,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清EV71-IgM、Cox A16-IgM。结果 663例手足口病患儿通用核酸阳性组58.52%（388/663）,EV71组19.16%（127/663）,与2014年比较,通用核酸阳性组比例（2=166.306,P=0.000）,EV71组比例（2=134.418,P=0.000）差异有统计学意义。手足口病患儿轻症487例,占73.45%,以通用核酸阳性组65.91%（321/487）为主;重症176例,占26.55%,EV71组43.75%（77/176）、通用核酸阳性组38.07%（67/176）位居前2位。不同组别出现重症的比例（2=98.395,P=0.000）差异有统计学意义,EV71出现重症比例最高,为60.63%（77/127）。病毒核酸检测和血清抗体检测阳性率比较差异有统计学意义（2=44.487,P=0.000）。其中,127例EV71阳性患儿,核酸和抗体检测双阳性率为59.85%（76/127）,单阳性率为40.15%（51/127）;64例Cox A16阳性患儿,核酸和抗体检测双阳性率为9.38%（6/64）;单阳性率为90.62%（58/64）。以核酸定量RT-PCR为标准,EV71/Cox A16-IgM抗体特异度86.61%,敏感度69.49%。结论 2015年与2014年比较,杭州市手足口病病原学流行特征有明显变化。采用病毒核酸和抗体联合检测,可提高实验室的检测阳性率,临床分型有助于辅助指导临床治疗;通用型重症病例增多,需寻找更适合的联合检测方法。     

2016年湖北省部分地区手足口病肠道病毒病原谱及柯萨奇病毒A6型和A10型基因特征分析

目的 了解2016年湖北省部分地区手足口病病原谱特征,对其中的柯萨奇病毒A组6型（Cox A6）和A组10型（Cox A10）基因特征进行分析。方法 采集2016年湖北省部分地区手足口病患者阳性标本,提取病毒核酸,通过一步法反转录-PCR扩增肠道病毒VP1序列并测序,经Blast比对确定病毒基因型。对其中Cox A6和Cox A10的VP1全长序列进行同源性和系统进化分析。结果 病原学监测结果显示,肠道病毒71型（EV71）阳性率为29.4%（599/2 035）,柯萨奇病毒A组16型（Cox A16）阳性率为25.7%（522/2 035）,其他肠道病毒阳性率为44.9%（914/2 035）。对该地区收集的83份肠道通用阳性的非EV71和非Cox A16进行病毒分型分析,Cox A6阳性检出率为56.6%（47/83）,Cox A10阳性检出率为22.9%（19/83）,还检测出其他肠道病毒如Cox A2（2株）、Cox A4（7株）、CB4（2株）、CB5（2株）、CB6（1株）、Echo5（1株）、Echo9（1株）和Echo25（1株）。对Cox A6和Cox A10的VP1基因同源性比对及系统进化分析显示,2016年湖北省22株Cox A6的VP1基因核苷酸同源性为95.1%~100.0%,11株Cox A10的VP1基因核苷酸同源性为95.2%~100.0%。我国与其他国家Cox A6和Cox A10可分别划分为8个（A~H）和7个基因谱系（A~G）。湖北省Cox A6与我国其他Cox A6位于H基因谱系上;湖北省Cox A10与我国其他Cox A10位于G基因谱系上。结论 2016年湖北省部分地区手足口病病原体除了EV71和Cox A16两种主要病毒外,还检测出Cox A6和Cox A10等手足口病的病原。其他肠道病毒中以Cox A6和Cox A10为主,仍需进一步加强对其他肠道病毒的监测和分子流行病学特征的分析。     

2007-2008年北京地区儿童手足口病的病原学分析

目的 通过病毒分离和鉴定了解2007-2008年春夏北京地区手足口病的病原学特征,为手足口病防治工作提供科学依据.方法 分别于2007年4-8月及2008年5-9月收集256例手足口病患儿的咽拭子和疱疹液标本共356份,其中咽拭子255份(包括10份重症患儿标本),疱疹液标本101份.将所有标本接种Vero细胞进行病毒分离,分离阳性的毒株用RT-PCR进行鉴定;对10份重症患儿标本除病毒分离外,还直接进行RT-PCR检测病毒核酸.结果 256例被检测患儿中188例为肠道病毒阳性,阳性率为73.4%.356份标本中共分离到239株肠道病毒,总阳性率为67.1%.其中疱疹液标本分离阳性率为75.2%(76/101),咽拭子标本分离阳性率63.9%(163/255),但两种标本接种细胞后出现病变的速度没有差别.重症患儿标本病毒分离阳性率50%(5/10).2007年的45例病毒分离株经肠道病毒通用引物PCR检测均为阳性,分型PCR显示,其中CA16占95.6%(43/45),EV71占4.4%(2/45);而2008年的143例病毒分离株经肠道病毒通用引物PCR检测142例为阳性,PCR分型显示,EV71占82.4%(117/142),CA16占16.8%(24/142).10份重症患儿标本直接分型检测结果均为EV71.结论 北京儿童手足口病病原体以EV71和CAV16为主,2007年与2008年流行的优势型别不同,2007年主要为CA16,而2008年主要为EV71.本组重症手足口病患儿的病原均为EV71.     

2007-2008年北京地区儿童手足口病的病原学分析

目的 通过病毒分离和鉴定了解2007-2008年春夏北京地区手足口病的病原学特征,为手足口病防治工作提供科学依据.方法 分别于2007年4-8月及2008年5-9月收集256例手足口病患儿的咽拭子和疱疹液标本共356份,其中咽拭子255份(包括10份重症患儿标本),疱疹液标本101份.将所有标本接种Vero细胞进行病毒分离,分离阳性的毒株用RT-PCR进行鉴定;对10份重症患儿标本除病毒分离外,还直接进行RT-PCR检测病毒核酸.结果 256例被检测患儿中188例为肠道病毒阳性,阳性率为73.4%.356份标本中共分离到239株肠道病毒,总阳性率为67.1%.其中疱疹液标本分离阳性率为75.2%(76/101),咽拭子标本分离阳性率63.9%(163/255),但两种标本接种细胞后出现病变的速度没有差别.重症患儿标本病毒分离阳性率50%(5/10).2007年的45例病毒分离株经肠道病毒通用引物PCR检测均为阳性,分型PCR显示,其中CA16占95.6%(43/45),EV71占4.4%(2/45);而2008年的143例病毒分离株经肠道病毒通用引物PCR检测142例为阳性,PCR分型显示,EV71占82.4%(117/142),CA16占16.8%(24/142).10份重症患儿标本直接分型检测结果均为EV71.结论 北京儿童手足口病病原体以EV71和CAV16为主,2007年与2008年流行的优势型别不同,2007年主要为CA16,而2008年主要为EV71.本组重症手足口病患儿的病原均为EV71.     

2013-2016年柳州市手足口病病原监测结果分析

目的 掌握柳州市2013-2016年手足口病病原学流行特征及病原谱变化情况,为制定柳州市手足口病预防控制措施提供科学依据.方法 收集柳州市2013-2016年医院和县级疾病预防控制中心送检的手足口病病例咽拭子、肛拭子及疱疹液标本,应用实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR) 技术对标本中的肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16 型(CoxA16)及非EV71和CoxA16的其他肠道病毒(EV)进行核酸检测.结果 2013-2016年共收集临床诊断手足口病病例标本3 503份,实验室确诊EV阳性标本2 720份;2013-2016年柳州市每年手足口病主要病原体均有变化,除EV71和CoxA16外,还存在着较高比例的EV;手足口病发病有明显季节性,主要集中在每年3-9月;5岁以下儿童为主要发病的人群,其中1～3岁儿童发病最多,男性发病例数高于女性;EV71为引起重症及死亡手足口病的主要病原体,死亡病例未见CoxA16.结论 EV是引起柳州市2013-2016年手足口病流行的主要病原体,但每年病原谱在不断变化,EV71是引起重症及死亡手足口病的主要病原体.