大鼠主动脉内皮剥脱后平滑肌细胞增殖与c-myc基因表达的研究

用Ｆｏｇａｒｔｙ导管对２５只大鼠行主动脉内皮细胞剥脱。在剥脱后的２４ｈ、５天、１０天、１５天时观察，发现主动脉平滑肌细胞增殖和内膜增厚随时间延长而降低，２０天接近基础水平。结果表明，ｃ－ｍｙｃ基因表达可能在启动平滑肌细胞增殖和内膜增厚中起重要作用。     

胰岛素对血管平滑肌细胞增殖及原癌基因c-fos和c-myc表达的影响

用３Ｈ－胸腺嘧啶核苷掺入实验及细胞计数法等观察了胰岛素对体外培养的人血管平滑肌细胞ＤＮＡ合成、细胞增殖及原癌基因：ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达的影响。结果发现，在培养基中加入不同浓度的胰岛素后，血管平滑肌细胞增殖，细胞ＤＮＡ合成增加，原癌基因ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｍｙｃ表达增加，上述三者均具有胰岛素剂量依赖性，呈现量－效关系．实验结果表明，高胰岛素血症可能通过促进平滑肌细胞增殖和原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｍｙｃ表达和来加速动脉粥样硬化的发生与发展的。     

反义c-myc RNA对大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

构建一个含1．53kb反义c－myc片段的逆转录病毒载体PAS-c-myc，将其通过Lipofectin导入PA317细胞并经G418筛选获得分泌病毒上清液的阳性克隆。病毒上清波感染血管平滑肌细胞（SMC）经G418筛选获得抗性克区。DNA印迹杂交证实了反义c-myc片段整合于SMC基因组中。RNA印迹杂交证实了反义c－mycRNA在SMC中得到了表达，且显著降低了SMC中c－mycmRNA的水平。蛋白印迹杂交证实了反义c－mycRNA抑制了c－myc蛋白的翻译。提示：c－myc基因表达在SMC增殖中起重要作用。     

大蒜素对兔血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的探讨大蒜素(Allicin)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制。方法组织贴块法体外原代培养兔主动脉VSMCs,由Hcy诱导建立细胞增殖模型,将细胞随机分为6组,对照组、Hcy刺激组(Hcy 1 mmol/L)、Allicin大剂量组(Allicin10μg/ml+Hcy 1 mmol/L)、Allicin中剂量组(Allicin 5μg/ml+Hcy 1 mmol/L)、Allicin小剂量组(Allicin 2.5μg/ml+Hcy1 mmol/L)、叶酸组(叶酸5 mmol/L+Hcy 1 mmol/L)。通过MTT比色法检测细胞的增殖活度,免疫细胞化学技术检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达及RTPCR技术观察对c-myc mRNA表达的影响。结果与对照组相比,Hcy刺激组的增殖活度、PCNA及c-myc mRNA的表达均显著升高(P<0.01);与Hcy刺激组比较,Allicin大、中、小剂量组细胞增殖活度减低,PCNA及c-myc mRNA的表达均下降(P<0.01),并呈现剂量依赖性,且Allicin大、中剂量组的抑制作用优于叶酸组(P<0.01或...     

粉防己碱对血管平滑肌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的：研究粉防己碱（Tetrandrine,Tet)对内皮素 导的大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）增殖及相关基因表达的影响。方法：采用细胞计数及^3H－TDR掺入实验检测VSMC增殖状态；应用Northern杂交检测Tet对VSMC诱导型一氧化氮合酶（iNOS)基因和ET诱导的c-jun基因表达的影响。结果：Tet可明显抑制VSMC的增殖（P＜0．05），抑制ET对VSMC的促丝裂作用（P＜0．05）；抑制原癌基因c-jun的表达，促进iNOS转录，结论：Tet可能通过调节iNOS和细胞增殖相关基因的表达而报抑制VSMC的增殖。     

大鼠主动脉内皮剥脱后平滑肌细胞增殖与c-myc基因表达的研究

用Fogarty导管对25只大鼠行主动脉内皮细胞剥脱，在剥脱后的24h,5天，10天，15天时观察，发现主动脉平滑肌细胞增殖和内膜增厚随时间延长而降低，20天接近基础水平，结果表明，c-myc基因表达可能在启动平滑肌细胞增殖和内膜增厚中起重要作用。     

川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖及表达c-myc基因的影响

为观察川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖的影响,在建立凝血酶诱导的体外培养的兔主动脉血管平滑肌细胞增殖模型后,应用免疫细胞化学方法观察川芎嗪对血管平滑肌细胞表达ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的影响;并用流式细胞术观察了血管平滑肌细胞增殖周期的变化。结果发现,川芎嗪能够显著抑制凝血酶诱导的血管平滑肌细胞ｃ－ｍｙｃ基因蛋白表达增加,使血管平滑肌处于ＧＩ期的细胞数显著增多,Ｓ期和Ｇ２＋Ｍ期的细胞数显著减少。结果提示,川芎嗪对凝血酶诱导的血管平滑肌细胞增殖有显著抑制作用,其机制与抑制ｃ－ｍｙｃ基因表达有关。     

高脂血症兔主动脉内皮剥脱后c-myc基因的表达

本实验在喂高胆固醇饲料的基础上行兔主动脉内皮剥脱术，分别于内皮剥脱术后1、2、4和6周处死动物．观察动脉粥样硬化形成过程中兔主动脉形态、平滑肌细胞超微结构的变化和c－nryc基因表述规律．实验结果发现：内皮剥脱加高胆固醇饲料能在6周内形成较典型的粥样斑块，斑块肉细胞成分主要为平滑肌细胞源性泡沫细胞，巨噬细胞源性泡沫细胞少见。在动脉粥样硬化斑块形成过程申，平滑肌细胞发生表型改变，术后一周新生内膜的平滑肌细胞中肌丝成分减少，细胞器增多，此时C－myc基因表达最高．术后2、4周内膜平滑肌细胞内含有大量细胞器，肌丝成分少见，成为典型的的合成型细胞，从2周开始合成型细胞内已开始出现数个脂滴，且随时间延长而增加，至6周时这些细胞已充满大量脂满，细胞器亦减少。成为肌源性泡沫细胞，2周后，c-myc基因表达逐渐降低。这些结果提示：兔主动脉内皮细胞剥脱能诱导c-myc基因高表达，加速实验性动脉粥样硬化形成。     

同型半胱氨酸促进血管平滑肌细胞增殖的机制及辛伐他汀的干预作用

目的:探讨同型半胱氨酸促进大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的机制及辛伐他汀的干预作用。方法:贴壁培养的大鼠原代VSMC随机分为3组。(1)对照组:用含10%胎牛血清的DMEM培养基(完全培养基);(2)同型半胱氨酸组:在完全培养基中加入同型半胱氨酸(0.05 mmol/L);(3)辛伐他汀组:在完全培养基中加入同型半胱氨酸(0.05 mmol/L)和辛伐他汀(10μmol/L)。培养24 h后,光学显微镜下观察各组细胞的形态;采用半定量PCR法检测c-myc、P27kip1的mRNA水平;用Western blot检测细胞周期蛋白(cyclin)D1、cyclin E、cyclin A和核增殖抗原(PCNA)的蛋白表达水平。结果:与对照组相比,同型半胱氨酸组c-myc mRNA水平上调,P27kip1 mRNA水平下调,下游cyclin D1、cyclin E、cyclin A和PCNA蛋白表达增加。与同型半胱氨酸组相比,辛伐他汀组上述检测指标均得到逆转。结论:同型半胱氨酸可促进大鼠VSMC c-myc、cyclin D1、cyclin E、cyclin A等增殖相关基因的表达,抑制P27kip1表达。辛伐他汀可逆转上述效应。     

同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的机制及其对血管平滑肌细胞的影响

高同型半胱胺酸血症，是动脉粥样硬化的一个独立危险因素。它通过引起氧化应激、蛋白质化或细胞内的低甲基化反应，导致血管内皮细胞功能障碍，刺激平滑肌细胞（SMC）增生，促进血小板活化。同型半胱氨酸对SMC除具有促有丝分裂原样作用外，还可以促进其合成和分泌胶原蛋白等细胞外基质以及丝氨酸蛋白酶、单核细胞趋化蛋白－1，从而破坏血管壁的正常结构，趋化炎性细胞的迁移，所有这些都促进了动脉粥样硬化的发生。     

血管肽对离体大鼠血管平滑肌细胞增殖和c-myb mRNA表达的影响

目的　观察了血管肽 (angiopeptim ,AP)对血小板源性生长因子刺激下离体大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖和c mybmRNA表达的影响 ,从分子生物学水平探讨其抗增殖作用机制。方法　采用细胞计数确定VSMC增殖状态。以Nothern印迹法测定c mybmRNA表达水平。结果　各组细胞计数分别为 (5 45± 0 5 7)× 10 4,对照组 ;(4 12± 0 13)× 10 4,30nmol L ;(3 13± 0 2 0 )× 10 4,6 0nmol L和 (2 0 3± 0 0 5 )× 10 4,12 0nmol L ;(q =10 5 0 ,10 32和 2 7 0 1,P <0 0 1)。抑制率分别为 2 9% ,5 2 %和 77%。其对VSMCc mybmRNA表达的抑制也具剂量依赖性。c mybmRNA GAPDH比值分别为1 12± 0 0 2 (对照组 ) ;0 6 1± 0 0 1,30nmol L ;0 34± 0 0 1,6 0nmol L和 0 16± 0 0 1,12 0nmol L ;q =39 2 3,6 0 0 0和 73 85 ,P <0 0 1)。结论　血管肽显著抑制VSMC增殖及c myb原癌基因表达 ,作用呈剂量依赖性。提示AP抗增殖作用与抑制晚期生长调节基因表达有关。     

Effects of heparin on the production of homocysteine-induced extracellular matrix metalloproteinase-2 in cultured rat vascular smooth muscle cells

OBJECTIVE: To study the effects of heparin on the production of homocysteine-induced extracellular matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) in cultured rat vascular smooth muscle cells. METHODS: The effects of different homocysteine levels (0 micromol/L to 1000 micromol/L) on MMP-2 production and the effects of different heparin concentrations (0 microg/mL to 100 microg/mL) on homocysteine-induced MMP-2 in cultured rat vascular smooth muscle cells were examined using gelatin zymography and Western blotting. The changes in MMP-2 were further compared with various treatments for 24 h, 48 h and 72 h. RESULTS: Homocysteine (50 micromol/L to 1000 micromol/L) increased the production of MMP-2 significantly in a dose-dependent manner. Increased production of MMP-2 induced by homocysteine was reduced by the extracellular addition of heparin in a dose-dependent manner. Production of MMP-2 with various treatment regimens for 72 h was greater than for 24 h and 48 h. CONCLUSIONS: Extracellular addition of heparin decreased homocysteine-induced MMP-2 secretion. Data suggest a mechanism by which hyperhomocysteinemia is involved in the pathogenesis of coronary artery disease and demonstrate a beneficial effect of heparin on these conditions.     

同型半胱氨酸诱导血管平滑肌细胞的增殖作用

目的 :探讨同型半胱氨酸 (Hcy)对血管平滑肌细胞 (VSMC)生长的影响。方法 :采用MTT法检测细胞数量及流式细胞术测定细胞周期。结果 :5× 10 -4mol/LHcy干预处于生长静止期的细胞 4 8、72h细胞数量较对照组明显增加 (P <0 .0 1) ,分别增加了 5 0 .75 %和 84 .83%。当采用 1× 10 -4,2 .5× 10 -4,5× 10 -4,1× 10 -3mol/L的Hcy干预细胞 72h后 ,其细胞数量分别较对照组增加了4 1.5 6 % ,5 8.4 4 % ,6 6 .2 3% ,74 .0 2 %。并且当 5× 10 -4mol/LHcy干预细胞 2 4、36、4 8h后 ,其S期、G2 /M期在细胞周期的比例也明显增加 (P <0 .0 1)。结论 :Hcy能明显诱导VSMC增殖 ,并呈现时间和剂量依赖关系 ,提示Hcy通过诱导VSMC的增殖可导致动脉粥样硬化的发生。     

全反式维甲酸对培养的大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 研究全反式维甲酸(ATRA)对培养的大鼠动脉平滑肌细胞(VSMCs)的影响。方法 血管平滑肌细胞采用组织贴块法培养。ATRA(2.5×10-6mol/L)分别作用于经PDGF—BB(10 ng/ml)和20％FCS刺激后的VSM—Cs,作用24h后分别行3H—TdR,3H—Leucine掺入实验测定。结果 ATRA明显抑制由PDGF—BB(10ng/ml)和20％FCS促进的VSMCs的DNA和蛋白质合成。结论ATRA具有抑制VSMCs增殖的作用。     

腺病毒载体介导的胞嘧啶脱氨酶/单纯疱疹病毒-1-胸苷激酶双自杀基因对血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察构建的含胞嘧啶脱氨酶／单纯疱疹病毒－1－胸苷激酶（CD／TK）双自杀基因的重组腺病毒对血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响。方法：将含CD／TK单、双自杀基因的重组腺病毒感染培养至3－5代的大鼠VSMCs。荧光显微镜观察报告基因绿色荧光蛋白的数量确定感染效率。用MTT法检测前体药物对各转基因组细胞增殖的抑制作用。结果：单、双自杀基因组腺病毒均可100％感染VSMCs。当感染复数（M．0．I）为10时，双自杀基因组靶细胞的存活率仅10％，明显低于腺病毒（Ad）－TK（43％）和Ad-CD(64%)单基因组（P＜0．05）。当M．O．I≤20时双自杀基因能够对细胞产生最大（90％）杀伤而CD、TK单基因组和单基因共转染组则不能，而且双基因组所需前体药物的浓度（无环鸟苷0．1μg/ml,5－氟胞嘧啶10μg/ml)低于单基因组（无环鸟苷0．5μg/ml，5-氟胞嘧啶50μg/ml）。双基因组的TK或CD基因单独作用时对细胞的抑制作用接近或低于相应的单基因组。结论：双自杀基因共表达腺病毒载体对VSMCs的抑制作用、安全性及可调控性均优于单基因。     

降钙素基因相关肽抑制原发性高血压患者动脉血管平滑肌细胞的增殖作用

目的 :探讨降钙素基因相关肽 (CGRP)对原发性高血压 (EH)患者动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的抑制作用。方法 :对EH患者和血压正常者的动脉进行培养 ,分别测定两组VSMC的周期和数量 ,并观察CGRP对其影响。结果 :①基础状态下 ,EH组VSMC周期的S期百分率和增殖指数 (PI)分别为 (35 .78± 1.0 0 ) %和 (5 4 .84± 1.98) % ,均显著高于正常对照组的 (2 8.88± 1.0 7) %和 (4 4 .12± 1.4 3) % ,P <0 .0 1;EH组VSME数量为 (10 .39± 1.30 )× 10 9个 /L ,显著高于正常对照组的 (7.6 7± 0 .98)× 10 9个 /L ,P <0 .0 1。②在CGRP作用下 ,EH组VSMC细胞周期中的S期百分率和PI分别为 (32 .4± 1.4 7) %和 (4 8.86± 2 .2 1) % ,均显著高于正常对照组的 (2 0 .81± 0 .94 ) %和 (33.18± 1.2 6 ) % ,P <0 .0 1;EH组细胞数量为 (7.4 8± 0 .2 2 )× 10 9个 /L ,显著高于正常对照组的 (5 .37± 0 .6 6 )× 10 9个 /L ,P <0 .0 1。③在CGRP作用下 ,两组VSMC的细胞周期中S期百分率、PI和细胞数量分别较基础状态下减低非常显著 ,P <0 .0 1。结论 :EH患者VSMC的细胞数量和细胞周期中的S期百分率、PI增加 ;CGRP使VSMC的数量和PI减低 ,抑制VSMC增殖。提示CGRP含量不足可能是EH发病的机制之一     

粉防已碱对血管平滑肌细胞增殖及相关基因表达的影响

目的 :研究粉防已碱 (Tetrandrine,Tet)对内皮素诱导的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖及相关基因表达的影响。方法 :采用细胞计数及3H TDR掺入实验检测VSMC增殖状态 ;应用Northern杂交检测Tet对VSMC诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)基因和ET诱导的c jun基因表达的影响。结果 :Tet可明显抑制VSMC的增殖 (P <0 0 5 ) ,抑制ET对VSMC的促丝裂作用 (P <0 0 5 ) ;抑制原癌基因c jun的表达 ,促进iNOS转录。结论 :Tet可能通过调节iNOS和细胞增殖相关基因的表达而抑制VSMC的增殖。     

Fas Ligand基因转染对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 :研究腺病毒介导FasLigand基因转染对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响。 方法 :常规分子生物学技术构建重组腺病毒Ad FasL、Ad βgal。免疫组化方法检测转染Ad FasL的大鼠血管平滑肌细胞FasLigand蛋白表达。用TUNEL法检测转染腺病毒的血管平滑肌细胞是否发生凋亡。结果 :10 0moiAd FasL转染大鼠血管平滑肌细胞 ,10 0 %细胞表达FasLigand蛋白 ,并发生凋亡。结论 :大鼠对Ad FasL转染诱导的凋亡易感。因此可以推断Ad FasL转染损伤后血管壁将减少血管平滑肌细胞积累。Ad FasL转染可能是有效的再狭窄治疗策略