反义表皮生长因子受体RNA对U251胶质瘤细胞生长的抑制作用

目的探讨反义靶向表皮生长因子受体（EGFR）在体内外对U251细胞生长抑制作用。方法构建反义EGFR的pcDNA3表达质粒并进行了脂质体介导的U251人脑恶性胶质瘤细胞系基因转染。应用RT-PCR检测EGFR表达水平，应用MTT法、流式细胞术、Matrigel基质生长实验和Transwell方法评价肿瘤细胞转染前后的生物学行为。进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导反义EGFR基因治疗对U251细胞生长抑制作用。对肿瘤组织应用免疫组织化学的方法进行EGFR、PCNA和GFAP表达比较。结果脂质体介导反义EGFR可显著抑制U251细胞ECFR表达，MTT法分析显示反义EGFR转染组胞生长抑制率为68％；与对照组和pcDNA3转染组比较，细胞周期分析结果表明p-anti-hEGFR转染组G0～G1期细胞数没有明显变化，进入S期的细胞数较对照组减少了，而进入G2期细胞则增加。Matrigel基质生长实验显示对照组和peDNA3转染组细胞呈正常形态贴壁生长。而p-anti-hEGFR转染组细胞不能贴壁生长，呈团块状簇集生长。Transwell方法显示肿瘤细胞的体外侵袭能力显著下降。裸鼠皮下荷瘤模型实验显示反义EGFR RNA可以显著抑制皮下肿瘤生长，组织病理学分析显示治疗组EGFR表达下降而GFAP表达上调。结论反义EGFR可以显著抑制U251细胞的EGFR表达，在体内外对U251细胞生长均产生明显抑制作用。     

拉帕替尼联合曲妥珠单抗治疗人表皮生长因子受体2阳性乳腺癌病人的疗效及生存预后分析

目的 探究拉帕替尼联合曲妥珠单抗治疗人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌病人的疗效及对生存预后的影响。方法 2016年4月～2018年6月行新辅助化疗治疗的HER2阳性乳腺癌病人86例,采用随机数字表法将其分为观察组(拉帕替尼联合曲妥珠单抗治疗)及对照组(曲妥珠单抗治疗),每组各43例。比较两组治疗疗效,记录病人治疗前后血管内皮生长因子、炎性因子及凋亡因子水平变化;所有病人均随访3年或随访至其死亡,比较两组病人累积生存率,统计治疗期间不良事件发生情况。结果 观察组、对照组客观缓解率、疾病控制率分别为72.09%、86.07%和58.14%、74.42%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗后血管内皮生长因子A、血管内皮生长因子B、血管内皮生长因子C及肿瘤坏死因子-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8水平低于对照组,治疗后诱骗受体3及环氧化酶-2表达量低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);观察组、对照组3年生存率分别为46.51%(20/43)、30.23%(13/43),中位生存时间为34.5个月、26.7个月,两组比较差异...     

肝细胞生长因子受体反义寡核苷酸影响胶质瘤细胞对丝裂霉素C敏感性的研究

目的探讨肝细胞生长因子受体(c-Met)反义寡核苷酸(ASODN)增强胶质瘤细胞系 U251细胞对丝裂霉素C(MMC)敏感性的作用。方法用5 μmol／L c-Met ASODN封闭U251细胞 c-Met mRNA,将50μg/L的MMC与其共培养,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测c- Met mRNA表达,噻唑蓝(MTT)试验检测U251细胞的生长情况,免疫组织化学法检测细胞PCNA 蛋白的表达,体外检测细胞黏附率。以无义寡核苷酸处理及未处理U251细胞为对照。结果经 c-Met ASODN处理的U251细胞 ,c-Met mRNA的表达(吸光度值为62±21)明显低于经无义寡核苷酸处理U251细胞(吸光度值为150±25,P<0．05);对MMC的敏感性,细胞生长抑制率、细胞黏附率及PCNA指数分别为(53．84±12．21)％、(14．61±3．82)％和(0．35±0．02)％,明显高于相应的无义[(9．86±3．42)％、(24．84±5．90)％和(0．55±0．04)％,P<0．05]。结论 c-Met ASODN能增强胶质瘤细胞系U251细胞对MMC的敏感性,其分子机制可能与c-Met反义寡核苷酸下调了c- Met基因和PCNA蛋白的表达有关。     

表皮生长因子受体表达及其下游基因突变与结直肠癌细胞放射敏感性的关系

目的探讨表皮生长因子受体（EGFR）表达及其下游基因K-ras、B-rM和PIK3CA突变对结直肠癌细胞放射敏感性的影响。方法对9株人结直肠癌细胞株应用实时定量RT-PCR检测EGFR表达,并检测K-ras、B—raf和PIK3CA基因的突变状态;对各细胞株行梯度剂量射线照射后,行克隆形成实验明确其放射敏感性、行Hoechst33258染色凋亡形态学观察和流式细胞术检查细胞凋亡及细胞周期。结果人结直肠癌细胞株EGFR表达与放疗抵抗呈正相关（r=O．717．P=0．030）,~K3CA突变与放疗敏感性有关（t=2．401,P=0．047）,K—ras和B．raf突变与放疗敏感性无关（均P〉O．05）。放疗敏感细胞株（HCTll6）总凋亡率在低放射剂量（2Gy）时即显著增加,并随放射剂量增加而继续增加（P〈0．05）,而放疗抵抗细胞株（HT29）总凋亡率只有放射剂量较大时（6Gy）才明显增加。G1／G。期HCTll6细胞株比例随放疗剂量增加显著降低（P〈0．05）,而HT29细胞株G1／G。期比例在放疗剂量增加时无明显变化（P〉0．05）。结论EGFR通路中多个位点同时参与了结直肠癌细胞的放疗抵抗或敏感作用,EGFR高表达与放疗抵抗相关,PIK3CA突变与放疗敏感有关,放疗抵抗机制可能与抑制细胞凋亡和增加细胞在G1／Go期停顿相关。     

乳腺癌细胞中表皮生长因子对雌激素受体表达的影响及机制

目的研究表皮生长因子（EGF）在雌激素受体（ER）阳性及阴性乳腺癌细胞株中对ER表达的影响及其可能的机制。方法以逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）技术分别研究EGF途径以及抑制该途径的信号传导后，对乳腺癌细胞株中ERcxmRNA的影响。结果在ER阳性乳腺癌细胞株中，EGF能显著抑制ERα mRNA的表达（P〈0．05），而通过抑制表皮生长因子受体（EG-FR）、磷脂酰肌醇3激酶（P13K）阻断EGF信号传导可减弱上述抑制作用（P〈0．05）；在ER阴性乳腺癌细胞株中，ERα mRNA无显著变化。结论EGF能够明显抑制ER阳性乳腺癌细胞株中ER的表达，这种抑制作用可能通过EGFR、蛋白激酶B（PKB，又称AKt）信号传导途径完成；这种作用在ER阴性乳腺癌细胞株中并不明显。     

表皮生长因子受体阻断对前列腺癌细胞增殖的影响

目的：探讨阻断表皮生长因子受体（EGFR）对前列腺癌（PCa）细胞增殖的影响。方法：人PCa细胞株DU－145，分别加或不加抗EGFR单抗C225（20nmol/L)阻断EGFR体外细胞培养7d，收集细胞、计数以观察对PCa雄激素非依赖增殖的影响，并采用免疫沉淀和Western blot方法，探讨阻断EGFR后不同时相点磷酸化有丝分裂原激活下蛋白激酶MAPK，及p27^kipl的表达变化。结果：阻断EGFR与对照相比较可使DU－145细胞增殖被抑制达35％，8h后磷酸化MAPK的表达水平开始降低，p27^kip1表达开始升高，至24h最明显。结论：阻断EGFR可抑制PCa细胞增殖，可能的机制是MAPK的活性降低，使p27^kip1的表达升高而细胞周期被阻。     

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白2-胶质瘤细胞表皮生长因子受体信号网络新的调控靶点

目的 确定富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白2(LRIG2)是胶质瘤细胞系GL15中EGFR信号通路新的调控靶点.方法 培养胶质瘤细胞系GL15细胞,经表皮生长因子(EGF)100μg/L,AG1478 10 μmol/L,放线菌酮(CHX)10 mg/L体外干预后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot测定LRIG2 mRNA和蛋白表达的时间效应变化.结果 随着EGF作用时间的延长,LRIG2 mRNA先上升后恢复至正常水平.EGF作用后,表皮生长因子受体(EGFR),磷酸化EG-FR(pEGFR)均先上升后下降,LRIG2蛋白先下降,在30min时上升,120min下降至原水平的50%.CHX作用1.5 h后,再加入EGF刺激,可见LRIG2蛋白60 min降至原水平的50%.而AG1478作用1 h后,再用EGF刺激,EGFR未受明显影响,pEGFR被明显抑制,LRIG2蛋白水平变化不明显.结论 EGFR活化后可导致LRIG2 mRNA表达上升,LRIG2蛋白合成增加.     

siRNA沉默肾癌细胞EGFR基因对放疗敏感性影响的研究

目的：探讨siRNA沉默AcHN肾癌细胞的表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）对放疗敏感性的影响。方法：免疫组化及细胞免疫荧光技术证明组织水平及细胞水平EGFR的表达,化学合成针对EGFR的小干扰RNA,通过脂质体转染法转染进ACHN肾癌细胞中,利用Westernblot技术检测细胞中EGFR蛋白的表达,然后分别用0、2、4、6、8Gy剂量的x线对5组肾癌细胞（每组包含空白对照组、非异性RNA干扰组、特异性RNA干扰组）进行照射,光学显微镜下观察细胞凋亡情况,采用台盼蓝据染法检测细胞凋亡率。结果：靶向EGFR序列的特异性干扰RNA可明显抑制EGFR蛋白的表达,光学显微镜下观察到RNAi联合放疗组细胞死亡情况明显,台盼蓝拒染法检测特异性干扰EGFR基因组可显著提高AcHN肾癌细胞对放疗的敏感性（P〈O．05）。结论：体外研究表明,siRNA沉默ACHN肾癌细胞的EGFR可明显提高肾癌细胞对放疗的敏感性,为肾癌放射治疗提供了新思路。     

LRIG1基因抑制胶质瘤细胞生长的机制

目的 探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)基因与表皮生长因子受体(EGFR)在人脑胶质瘤细胞中的相互作用及其对肿瘤细胞生长影响的机制.方法 用免疫共沉淀法检测人脑胶质瘤细胞系GL15中LRIG1与EGFR的相瓦作用.构建针对LRIG1基因的干扰片段及非特异性的对照片段分别转染GL15细胞系,G418(600 mg/L)筛选出稳定株,Western blot法检测LRIG1表达的改变及其对EGFR表达的影响;嚷唑蓝(MTT)比色法检测LRIG1表达下调对胶质瘤细胞增殖的影响.结果 免疫共沉淀法表明胶质瘤细胞系GL15中LRlG1与EGFR存在相互作用.成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体,转染细胞后LRIG1基因表达下降54.7%;同时干扰组细胞EGFR蛋白水平与阴性对照组比较上升了57.1%.MTT结果显示干扰组细胞增殖率高于对照组.结论 LRIG1通过与EGFR结合发挥抑癌作用,干扰LRIG1表达可削弱这种作用.导致肿瘤细胞增殖加速.     

AG1478对U87细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的 观察表皮生长因子受体抑制剂Tyrphostin AG1478对人脑胶质瘤U87细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度Tyrphostin AG1478作用于体外培养的人脑胶质瘤U87细胞24 h后的细胞生存率,流式细胞仪检测不同浓度Tyrphostin AG1478作用于体外培养的人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞周期分布和细胞凋亡.结果 5、10、15、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞生存率分别为(7 8.93±11.95)%、(46.42±4.12)%、(42.13±7.54)%和(37.48±4.69)%;0、10、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞凋亡率分别为(10.19±3.15)%、(32.02±1.60)%和(54.35±2.80)%;0、10、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞主要分布在G0～G1期,分别为(51.20±1.21)%、(78.61±1.57)%和(82.73±0.77)%,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Tyrphostin AG1478抑制体外人脑胶质瘤细胞增殖,阻滞细胞周期在G0～G1期,诱导细胞凋亡,均呈浓度依赖性.

Abstract：

Objective To investigate the effects of Tyrphostin AG1478 on glioma U87 cells proliferation, cells cycle and apoptosis. Methods U87 cells were cultured for 24 h in the medium which contained AG1478 with different concentrations (0, 5, 10, 15, 20 μmol/L). The methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) assay was used to detect the survival rate, and the cells cycle and apoptosis of the cells were examined by using flow cytometry. Results The cells proliferation was obviously inhibited by AG1478 in a dose-dependent manner. The survival rate of the cells in 5, 10, 15, 20 μmol/L AG1478 groups was (78.93 ±11.95)%, (46.42 ±4. 12)%, (42. 13 ±7.54)% and (37.48 ±4.69)% respectively, which was all significantly higher than that in 0 μ mol/L AG1478 group (P ＜0. 05 ). The apoptotic rate in 10, 25μmol/L AG1478 groups was (32.02 ± 1.60)% and (54. 35 ± 2. 80)% respectively, significantly higher than that in 0 μmol/L AG1478 group ( P ＜ 0. 05 ). The cells cycle was obviously inhibited by AG1478 in a dose-dependent manner. The percentage of cells treated with 10 and 20 μmol/L AG1478 in Go-G1 phase was ( 78. 61 ± 1.57 ) % and ( 82. 73 ± 0. 77 ) % respectively, significantly higher than that in 0 μmol/L AG1478 group (P ＜ 0. 05 ). Conclusion The growth inhibition of glioma U87 cells caused by AG1478 may be associated with apoptotsis induction and the G0-G1 arrest. AG1478 was expected to become a new anti-tumor drug in human glioma.     

重组腺相关病毒载体表达抗表皮生长因子受体抗体对胰腺癌细胞株抑制作用的研究

目的 构建能在体内长期表达抗表皮生长因子受体(EGFR)抗体的重组腺相关病毒(rAAV)载体,观察其对人胰腺癌细胞株的抑制作用.方法 将抗人EGFR单链抗体可变区(SCFV)基因插入腺相关病毒载体的Kpn Ⅰ和BglⅡ位点,构建成含抗EGFR单链抗体基因的重组腺相关病毒载体(rAAV-anfiEGFR).设立对照组(rAAV1-EGFP组)和实验组(rAAV1-anti EGFR组),观察抗EGFR单链抗体蛋白的表达情况.采用Western blot检测抗体蛋白的表达、CCK-8法和流式细胞仪检测6种人胰腺癌细胞株(PCT-3、SW1990、Capan-1、ASPC-1、MiaPaCa-2及PANC-1细胞)的抑制率和凋亡率.两组比较采用t检验.结果 抗EGFR单链抗体蛋白能在6种人胰腺癌细胞株中表达,对照组和实验组胰腺癌ASPC-1细胞抑制率分别为1.1%±2.4%和15.1%±3.5%,两组比较,差异有统计学意义(t=6.598,P＜0.05).对照组和实验组PANC-1细胞凋亡率分别为7.0%±3.0%和11.4%±2.5%,两组比较,差异无统计学意义(t=1.952,P＞0.05);对照组和实验组SW1990、ASPC-1、Capan-1、PCT-3、MiaPaCa-2细胞凋亡率分别为1.1%±0.8%、1.5%±0.7%、1.7%±1.2%、1.1%±0.7%、2.2%±1.1%和17.6%±2.2%、46.9%±3.9%、20.0%±2.8%、12.1%±1.6%、31.1%±2.5%,两组比较,差异均有统计学意义(t=12.208,19.846,10.405,10.909,18.327,P＜0.05).结论 成功构建了携带抗EGFR单链抗体基因的rAAV载体,其表达的抗EGFR单链抗体蛋白对人胰腺癌细胞株有明显的抑制作用.     

表皮生长因子受体在前列腺癌雄激素非依赖型细胞系中表达的意义

目的探讨转化生长因子(TGF)-α和表皮生长因子(EGF)对前列腺癌雄激素非依赖型细胞系中表皮生长因子受体(EGFR)表达的调控作用.方法采用逆转录-多聚酶链式反应和免疫印迹法分别对TGF-α和EGF刺激前列腺癌雄激素非依赖型细胞系PC3、ARCaP后EGFR mRNA表达及其蛋白水平进行定量分析.结果EGF引起PC3、ARCaP的EGFR mRNA升高,分别为5.01±0.45和2.41±0.26,差异无显著性(P＞0.05);TGF-α引起各细胞系EGFR mRNA升高,分别为9.05±0.63和3.54±0.33,差异无显著性(P＞0.05).各细胞系EGFR蛋白水平TGF-α组明显高于EGF组(P＜0.05).结论TGF/EGF-EGFR通路在发生发展中起重要作用;TGFα-EGFR自分泌环在非依赖型前列腺癌中的作用强于EGF-EGFR自分泌环.     

Epidermal growth factor receptor in adenocarcinoma of the kidney

Summary Epidermal growth factor receptor (EGF-R) was estimated in Hypernephroma by saturation analysis using 125-I EGF as ligand. Tissue levels of this oncogene related protein were increased five-fold (24 to 99 fmol/mg protein) in comparison with the surrounding tumor free tissue (3 to 18 fmoles/mg protein). There was no apparent correlation to the stage of tumor growth or tumor differentiation and there was no correlation of EGF serum levels with tumor growth. EGF serum levels in the tumor patients did not exceed levels in control patients.     

表皮生长因子受体相关蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的 观察表皮生长因子受体相关蛋白(ERRP)的表达以及细胞增殖在胃癌分化和发展中的作用.方法 观察47例患者胃癌的手术标本中ERRP的表达和定位,并将其与良性胃黏膜比较,确定他们与细胞增殖和分化的关系.检测3种不同的胃癌细胞株中ERRP的表达,并用表皮生长因子(EGF)诱导EGFR磷酸化激活MKN-28胃癌细胞,检测ERRP对此效应的作用.结果 与良性胃黏膜(66％标本阳性)比较,胃癌(33％标本阳性)中ERRP的表达显著降低.正常胃黏膜的ERRP染色评分是2.9(0.3),高分化、中度分化和低分化癌的评分分别是2.6(0.6)、0.9(0.6)和1.0(0.5),ERRP表达的降低与恶性程度的组织学分级呈负相关(P＜0.05).ERRP阴性癌细胞[35.3(1.1)％;P＜0.01]中增殖程度是ERRP附性癌细胞[9.4(0.6)％]的3.5倍,ERRP在癌细胞中的表达与细胞增殖也呈负相关.与源于非转移性癌的细胞AGC比较,源于转移性胃癌细胞MKN-28和NCI-N87中ERRP的表达量分别是其的1.7倍和2倍.外源性的ERRP蛋白明显抑制了EGF诱导的胃癌细胞MKN-28中EGFR的磷酸化,抑制程度为45倍.结论 ERRP的下调可能在胃癌分化和发展中起重要的作用.ERRP对肿瘤细胞增殖具有负调控作用,其抑制作用可能部分是通过减弱EGFR的活化来实现的.     

Epidermal growth factor receptor and transformation

The action of transforming growth factor peptides is mediated by distinct membrane receptors, which in turn activate a postreceptor signaling mechanism, eventually resulting in a mitogenic response. Such a signaling pathway may be modified by oncogene expression at the receptor or postreceptor levels, as well as by alterations in the levels of expression of the growth factor itself. One of the most extensively studied group of receptors is the type I epidermal growth factor receptor family. Activation of this receptor triggers the induction of receptor dimerization, which enables cross-phosphorylation to occur between two receptor molecules. This dimerization model provides a universal mechanism to activate the type I receptor family for growth factors and subsequent transformation. Received: May 17, 2001 / Accepted: January 8, 2002     

血管内皮生长因子在脑胶质瘤中自分泌现象对增殖的影响

FR2呈强表达同时Ki-67呈弱表达1例,VEGFR2呈弱表达同时Ki-67呈强表达6例,经一致性分析Kappa=0.543,P＜0.01,两者的共表达存在一致性.结论 脑胶质瘤瘤细胞可能通过VEGF自分泌现象介导瘤细胞的增殖,尤以VEGFR2参与介导的可能性大.