细胞红蛋白对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的神经保护作用

目的 探讨细胞红蛋白(cytoglobin,CYGB)在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的神经保护作用. 方法 健康7日龄新生Sprague-Dawlay大鼠随机分为假手术组、HIBD组、HIBD+氯化高铁血红素(Hemin)组和HIBD+锌原卟啉(zinc protoporphyrin,ZnPP)组.HIBD组、HIBD+ Hemin组及HIBD+ ZnPP组大鼠分别腹腔注射0.5 ml生理盐水、Hemin(50 mg/kg)及ZnPP(50 mg/kg),12h后结扎并剪断左侧颈总动脉,缺氧2h,制成HIBD动物模型.建立模型后0、24、48 h免疫组织化学法检测各组大鼠海马及皮质中CYGB的表达情况,每组10只.HE染色观察建立模型后48 h的大鼠脑组织病理变化,每组8只.称重法检测建立模型后72h新生大鼠脑含水量,每组8只.建立模型后28 d采用Morris水迷宫实验检测海马学习记忆功能变化,每组10只.组间差异比较采用方差分析,组间两两比较使用Bonferroni法. 结果 (1)大鼠脑组织CYGB的表达水平:用平均灰度值(与蛋白表达水平成反比)表示.在0h,HIBD+ Hemin组和HIBD组皮质CYGB的平均灰度值分别为166.7±5.1和207.1±5.1,低于假手术组(232.3±3.4),而HIBD+ ZnPP组(234.9±4.5)高于假手术组(P＜0.05).随时间的增加,各HIBD组CYGB的平均灰度值递减,至48 h时,CYGB的平均灰度值HIBD+Hemin组最低(126.0±2.6),其次是HIBD组(150.9±4.5)和HIBD+ ZnPP组(163.7=6.3),最高是假手术组(232.1±5.8),差异均有统计学意义(P均＜0.01).CYGB在海马组织的表达变化与皮质一致.(2)各组脑组织病理变化:建立模型后48 h,HIBD组、HIBD+ Hemin组和HIBD+ ZnPP组新生大鼠脑组织可见典型的脑梗死和出血,HIBD+Hemin组梗死灶明显较HIBD+ZnPP组小,出血减轻.(3)脑组织含水量变化:建立模型后72 h,HIBD组和HIBD+ZnPP组左侧脑组织含水量分别为(86.5±0.4)％和(87.3±0.3)％,明显高于右脑[(85.6±0.2)％和(85.9±0.2)％],差异有统计学意义(t分别为12.57和11.32,P均＜0.01).(4)海马学习记忆功能变化:水迷宫实验中,5d总平均逃逸潜伏期HIBD+ ZnPP组最长[(76.7±29.8)s],其次是HIBD组[(71.0±30.5)s]和HIBD+ Hemin组[(46.7±34.0)s],最短为假手术组[(38.3±30.3)s],差异均有统计学意义(P均＜0.05).(5)远期脑组织病理变化:建立模型后34 d,脑组织萎缩率HIBD+ ZnPP组最高[(34.07±6.75)％],其次是HIBD组[(29.73±6.53)％],再次是HIBD+Hemin组[(18.33±4.52)％],均高于假手术组[(1.55±1.32)％],差异均有统计学意义(P均＜0.01).HIBD组及HIBD+ZnPP组大鼠脑组织可见锥体细胞层变薄,大片神经元缺失,HIBD+Hemin组仅见少量神经元缺失. 结论 CYGB的高表达可减轻HIBD脑组织近期及远期的病理损伤,保护远期的海马学习记忆功能.     

细胞外信号调节激酶信号转导通路活化在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用

目的 观察细胞外信号调节激酶(extracellular-signal regulated kinase,ERK)在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤中的作用.方法 Wistar大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血组和PD98059(ERK抑制剂)组,通过结扎右侧颈总动脉,恢复2 h后,吸入含8%氧气的氧氮混合气体2 h的方法 建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,PD98059组结扎右侧颈总动脉前10 min股静脉注射PD980592 mg/kg.各组新生大鼠于模型制作后6 h剥离结扎侧海马及皮层脑组织,分别测定脑组织丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和细胞凋亡水平.Western印迹法检测ERK1和ERK2,Bcl-2和Bax蛋白的表达.组间差异比较采用方差分析及q检验.结果 缺氧缺血组细胞凋亡率明显高于假手术组[(18.80±1.37)%和(3.53±0.34)%](q=6.06,P＜0.01),PD98059组细胞凋亡率[(15.53±0.64)%]低于缺氧缺血组(q=3.87,P＜0.01).缺氧缺血组MDA含量为(342.9±10.8)μmol/L,明显高于假手术组[(181.5±17.0)μmol/L](q=6.35,P＜0.01)和PD98059组[(252.0±17.1)μmol/L](q=5.28,P＜0.01),而SOD活性[(34.8±4.3)U/ml]明显低于假手术组[(63.4±4.3)U/ml](q=4.99,P＜0.01)和PD98059组[(51.5±3.8)U/ml](q=4.17,P＜0.01).3组总ERK1和ERK2蛋白表达差异无统计学意义.缺氧缺血组磷酸化ERK1和磷酸化ERK2蛋白表达明显高于假手术组(q分别=3.82和4.08,P均＜0.01)和PD98059组(q分别=4.79和5.12,P均＜0.01).缺氧缺血后Bcl-2和Bax蛋白表达明显高于假手术组(q分别=3.55和3.42,P均＜0.01);PD98059组较缺氧缺血组抗凋亡蛋白Bcl-2表达增加,促凋亡蛋白Bax表达降低(q分别=3.71和5.86,P均＜0.01).结论 ERK激活通过调节凋亡蛋白表达参与了新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的发生.

Abstract：

Objective To investigate the effects of extracellular-signal regulated kinase (ERK) on hypoxic-ischemic brain damage of neonatal rats.Methods The hypoxic-ischemic brain damage model of neonatal Wistar rats was established as following:first the right common carotid artery of the rats was ligated;2 h after operation,the rats began to inhale 8%-oxygen oxygen-nitrogen gas mixture lasting for 2 h.Rats were randomly divided into three groups:sham-group,hypoxic-ischemic group and ERK inhibitor PD98059 group (the rats were injected PD98059 2 mg/kg 10 min before the ligation).Six hours after the models were done,hippocampi and cortex of the ligation side of rats in the three groups were collected,and the levels of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) were measured.Apoptosis of neuron was assessed by TUNEL staining.The expression of ERK1,ERK 2,Bcl-2 and Bax were examined by Western blot.The differences among the groups were analyzed with ANOVA and q test.Results Compared with the sham-group,the MDA level [(342.9± 10.8) μmol/L vs (181.5± 17.0) μmol/L,q= 6.35,P＜0.01) and the apoptosis rate of neuron [(18.80±1.37)% vs (3.53±0.34)%,q=6.06,P＜0.01) of hypoxic-ischemic group was higher,and SOD level was lower [(34.8±4.3) U/ml vs (63.4±4.3) U/ml,q=4.99,P＜0.01].While the apoptosis rate of neuron [(15.53±0.64) %] and MDA level [(252.0± 17.1) μmol/L] of PD98059 group were lower than those of hypoxic-ischemic group(q=3.87 and 5.28,P＜0.01respectively),the SOD level [(51.5 ± 3.8) U/ml] was higher than that of hypoxic-ischemic group (q=4.17,P＜0.01).There were no differences of ERK1 and ERK2 expressions among the three groups.The phosphorylated ERK1 and ERK2 levels of hypoxic-ischemic group were higher than those of sham-group (q=3.82 and 4.08,P＜0.01) and PD98059 group (q=4.79 and 5.12,P＜0.01).The expression of Bcl-2 and Bax of hypoxic-ischemic group were higher than those of sham-group (q=3.55 and 3.42,P＜0.01).Compared with hypoxic-ischemic group,Bcl-2 expression (q=3.71,P＜0.01) of PD98059 group was higher,and Bax expression (q=5.86,P ＜ 0.01) was lower.Conclusions ERK is involved in hypoxic-ischemic brain damage of neonatal rats through regulating the expression of apoptosis protein.     

腰麻-硬膜外联合麻醉及硬膜外自控分娩镇痛始于产程潜伏期与活跃期的比较

目的 比较腰麻-硬膜外联合麻醉及硬膜外自控分娩镇痛始于产程潜伏期与活跃期的临床效果、对母婴应激反应的影响和脐带血中的罗哌卡因浓度. 方法 将80例于2009年1月至6月在首都医科大学附属北京友谊医院产科分娩且自愿接受分娩镇痛的足月、单胎、头位初产妇,随机分为潜伏期组和活跃期组(各40例),分别于潜伏期(宫口扩张0.5～2.5 cm)和活跃期(宫口扩张≥3.0 cm)于蛛网膜下腔给予罗哌卡因2 mg+芬太尼10 μg,随后采用0.1 ％ 罗哌卡因+芬太尼2 μg/ml硬膜外患者自控镇痛模式开始分娩镇痛,记录视觉模拟评分(visual analogue score,VAS)的镇痛评分、下肢肌力、产程时间、分娩方式、药物用量及产妇满意度,检测镇痛前、娩出胎儿即刻产妇静脉血和胎儿娩出后脐带血皮质醇浓度(放射免疫法)及脐带血罗哌卡因浓度(高效液相色谱法).以同期相同条件不接受分娩镇痛的40例产妇为对照组,采用x2或t检验和方差分析进行统计学比较.结果 (1)镇痛后5 min始至宫口开全过程中,潜伏期组和活跃期组VAS评分仅在宫口7.0～8.0cm及宫口开全时低于对照组[宫口7.0～8.0 cm:(2.9±1.4)分、(2.6±1.5)分与(9.2±0.7)分,F=201.50,P＜0.01;宫口开全:(4.7±2.2)分、(3.6±2.0)分与(9.1±0.7)分,F=62.07,P＜0.01].(2)胎儿娩出即刻母体血皮质醇浓度较镇痛前增高,但潜伏期组和活跃期组均比对照组增高幅度小[(761±125)μg/L、(731±184) μg/L与(902±172) μg/L,t=-3.491和-3.483,P均＜0.01],而潜伏期与活跃组2组间差异无统计学意义;3组间脐带血皮质醇浓度差异无统计学意义[(168±46) μg/L、(159±49) μg/L与(170±86) μg/L,F=0.23.P＞0.05].(3)胎儿娩出即刻潜伏期组和活跃期组脐带血罗哌卡因浓度分别为(0.21±0.10) mg/L和(0.20±0.03) mg/L(t=0.557,P＞0.05).(4)第一产程、第二产程时间,催产素使用率,新生儿体重,新生儿1 min、5 min Apgar评分3组间差异均无统计学意义(P均＞0.05).与对照组相比,潜伏期组和活跃期组自然分娩率较高(75.0％、85.0％与52.5％,P＜0.05)、剖宫产率较低(20.0％、15.0％与45.0％,P＜0.05),潜伏期组镇痛时间长于活跃期组[(215±143) min与(118±50) min,t=3.722,P＜0.01],芬太尼用量大[(28±11) μg与(17±6)μg,t=5.084,P＜0.01]. 结论 腰麻-硬膜外联合分娩镇痛能降低剖宫产率和母体应激反应,且不延长产程,不降低胎儿的应激水平;始于潜伏期并不明显增加脐带血药物浓度.     

妊娠不同时期铅暴露对大鼠胎盘细胞凋亡的影响

目的 观察妊娠不同时期铅暴露对大鼠胎盘细胞凋亡的影响。方法 研究共分为4组,每组27只Wistar大鼠,雌性18只,雄性9只。雌雄2:1合笼,以发现雌鼠阴栓次日为妊娠第0天。妊娠期全程铅暴露组大鼠妊娠期全程（妊娠1～20 d）饮服o.025％醋酸铅溶液染毒,妊娠甲.期铅暴露组大鼠妊娠早期（妊娠1～10 d）饮服0.025％醋酸铅溶液染毒,妊娠晚期铅暴露组大鼠妊娠晚期（妊娠11～20 d）饮服0.025％醋酸铅溶液染毒,对照组大鼠妊娠期全程饮服蒸馏水。原子吸收光谱法测定妊娠末期（妊娠19～21 d）血铅水平;Hoechst染色法和脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测胎盘细胞凋亡并计算凋亡指数。各组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验。 结果妊娠末期血铅水平在妊娠期全程铅暴露组[(1.74±0.19) μmol/L]、妊娠早期铅暴露组[（1.27±0.26） μmol/L.]、妊娠晚期铅暴露组[（0.60±0.11）μmol/L]和对照组[(0.04±0.01) μmol/L]依次降低,差异均有统计学意义（F=12.10,P＜0.01）。Hoechst染色法显示,铅暴露组胎盘滋养层凋亡细胞核浓染,部分核内可见致密块状荧光颗粒,对照组凋亡细胞呈散在分布。脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测显示,铅暴露组大鼠胎盘滋养层凋亡细胞核呈棕黄色,部分核中有棕黄色颗粒。凋亡细胞核较正常增大,呈椭圆形或不规则形,核内染色质聚集于边缘处。2种凋亡检测方法均显示各铅暴露组胎舷细胞凋亡指数均高于对照组,且妊娠期全程铅暴露组高于妊娠早期和妊娠晚期铅暴露组（P均＜0.05）。 结论 妊娠期铅暴露大鼠血铅水平升高,促进胎盘细胞凋亡的发生。     

轴突导向因子netrin-1在滋养层细胞侵袭中的作用

目的 探讨轴突导向因子netrin-1在滋养层细胞侵袭中的作用及其机制.方法 采用RT-PCR技术检测绒毛膜外滋养细胞株TEV-1中netrin-1的6种受体(UNCSA、UNCSB、UNCSC、UNCSD、DCC和neogenin)mRNA的表达.将培养的细胞按照加入netfin-1蛋白浓度的不同分为10μg/L组、50μg/L组、100 μg/L组、500 μg/L组、1000μg/L组、5000μg/L组和阴性对照组(netrin-1的浓度为0 μg/L)共7组,分别用细胞计数试剂盒8检测各组细胞的增殖能力[以吸光度(A)值表示],体外侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力.结果 (1)RT-PCR技术检测结果显示,netrin-1的6种受体中,仅检测到neogenin和UNC5B mRNA的表达.(2)培养72 h后,10μg/L组、50μg/L组、100μg/L组、500μg/L组、1000μg/L组和5000 μg/L组细胞的A值分别为1.55±0.29、1.72±0. 31、2. 15±0.35、1.42±0.25、1.50 ±0.27和1.38±0.23,分别与阴性对照组(1.00±0.16)比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)培养6 h后,10μg/L组、50μg/L组、100μg/L组、500μg/L组、1000μg/L组和5000 μg/L组细胞的穿膜细胞数分别为(41±4)、(47±5)、(55±6)、(44 ±5)、(43±5)和(42±5)个,分别与阴性对照组[(30±4)个]比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(4)neogenin mRNA的表达水平,10μg/L组、50μg/L组、100μg/L组、500μg/L组、1000μg/L组和5000 μg/L组分别为1.50±0.16、1.83±0.19、2.24±0.25、2.12±0.24、2.12±0.23和2.13±0.23,分别与阴性对照组(1.00±0.11)比较,差异均有统计学意义(P<0.05);10 μg/L组与50μg/L组比较,50μg/L组与100μg/L组比较,差异也均有统计学意义(P<0.05);100 μg/L组与500 μg/L组、1000 μg/L组和5000μg/L组之间两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(5)UNCSB mRNA的表达水平,10μg/L组、50μg/L组、100 μg/L组、500 μg/L组、1000 μg/L组和5000 μg/L组分别为1.09±0.11、1.47±0.14、1.61±0.16、1.85±0.19、2.21±0.21和2.42±0.23,分别与阴性对照组(1.00 ±0.07)比较,差异均有统计学意义(P<0.05);各组之间分别比较,差异也均有统计学意义(P<0.05).结论 netrin-1能促进入绒毛膜外滋养细胞的增殖和侵袭能力,这种促进作用受到其受体neogenin及UNCSB的调控.     

7硝基吲唑在缺氧缺血性脑损伤中的作用机制

目的　研究神经元型一氧化氮合酶(NOS)抑制剂 7 硝基吲唑(7-nitroindazole,7-NI)在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic ischemic brain damage,HIBD)中的作用机制。　方法　将 54只新生7日龄Wistar大鼠随机分为假手术组、HIBD组和 7-NI治疗组;其中后两组各再分为四个时点(1、2、6、8 h),检测不同时点结扎侧脑组织中NOS、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平的变化。另 18 只新生大鼠随机分为假手术组、HIBD 组和 7-NI 组,每组 6 只,应用TUNEL法观察7 NI对 HIBD 后 24 h 神经细胞凋亡的影响。　结果　假手术组 NOS(1. 555±0.223) U/mg;NO (0. 749±0. 135)μmol/g; SOD(24. 184±1. 446) nU/mg; MDA(1. 319±0. 282)nmol/mg;HIBD组NOS 1 h (3.345±0.367) U/mg , 8 h (4.469±0.275) U/mg ;NO 1 h (2.419±0.254)μmol/g,8 h (3. 556±0. 309)μmol/g; SOD 1 h (22. 052±1. 179) nU/mg, 8 h (17. 124±1.541) nU/mg;MDA 1 h (2.449±0.418) nmol/mg,8 h (4.576±0.294) nmol/mg;7 NI组NOS 1 h(1.606±0.149) U/mg,8 h (2.917±0.426) U/mg ;NO 1 h (0.879±0.169)μmol/g,8 h (1.803±0.275)μmol/g;SOD 1 h (24.045±1.219) nU/mg ,8 h (20.688±1.696) nU/mg ;MDA 1 h (1.569±0.     

碱性成纤维细胞生长因子对新生大鼠脑缺血后神经新生的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对新生大鼠脑缺血后神经新生的影响.方法 通过结扎3日龄新生SD大鼠双侧颈总动脉制备脑缺血模型,随机分为治疗组(36只):给予bFGF 10 ng/g侧脑室注射;对照组(36只)给予相同体积的生理盐水.另取36只新生大鼠,仅分离双侧颈总动脉,不结扎,不给予药物,作为假手术组.三组大鼠分别于术后第4、7、14天处死,获取脑组织标本,采用免疫荧光染色、Western印记和实时PCR方法,观察三组大鼠不同时点脑室下区巢蛋白(nestin)、Ⅲ型β-微管蛋白(Tuj1)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和少突胶质细胞NG2蛋白及其mRNA的表达变化.结果 (1)免疫荧光染色:治疗组BrdU+/nestin+细胞数目术后7 d达高峰[(48.7±5.9)个/视野],高于同时点对照组[(32.2±3.1)个/视野]和假手术组[(17.3±1.6)个/视野],差异有统计学意义(P<0.01);治疗组BrdU+/Tuj1+细胞、BrdU+/GFAP+细胞、BrdU+/NG2+细胞数目术后14 d[分别为(92.6±9.7)、(58.2±6.1)、(57.3±5.4)个/视野]达高峰,高于同时点对照组[分别为(65.8±7.1)、(42.1±4.4)、(37.8±3.2)个/视野]和假手术组[分别为(35.3±3.1)、(33.6±3.4)、(22.4±2.1)个/视野],差异有统计学意义(P<0.01).(2)Western印迹和实时PCR:与免疫荧光染色结果一致,即治疗组nestin蛋白和mRNA表达术后7 d达高峰,高于同时点对照组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.01);治疗组Tuj1、GFAP和NG2蛋白和mRNA术后14 d达高峰,高于同时点对照组和假手术组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 bFGF可促进新生大鼠脑缺血后脑室下区神经干细胞的增殖以及向功能神经细胞(神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞)的分化,可能对新生大鼠脑缺血后神经细胞的再生具有促进作用.     

促性腺激素释放激素类似物对化疗大鼠卵巢功能损害的干预作用

目的 探讨促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)和拮抗剂(GnRH-ant)对环磷酰胺(CTX)诱导的大鼠卵巢功能损害的干预作用.方法 将72只雌性SD大鼠随机分为6组,即对照组[腹腔注射生理盐水(NS)0.1 ml/d×11 d]、CTX组(第1天腹腔注射CTX 50 mg/kg,第2天起腹腔注射CTX 5 mg/d×10 d)、GnRH-a+NS组[GnRH-a 0.375 mg 1次深部肌内注射(估计释放量为12.5μg/d,持续28～30 d),于用药第14天左右(连续5 d观察阴道涂片均处于动情间期)开始注射NS,用药方法同对照组]、GnRH-a+CTX组(同GnRH-a+NS组注射GnRH-a后,于用药第14天左右的动情间期开始注射CTX,用药方法同CTX组)、GnRH-ant+NS组[GnRH-ant 0.3 mg皮下注射,以后每隔2天注射1次,共4次(估计释放量为100μg/d,共12 d),于第1次GnRH-ant皮下注射后第2天开始注射NS,用药方法同对照组]及GnRH-ant+CTX组(同GnRH-ant+NS组注射GnRH-ant后,于第1次GnRH-ant皮下注射后第2天开始注射CTX,用药方法同CTX组];每组12只.用药前后采用酶联免疫吸附法动态检测各组大鼠卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)及雌二醇水平的变化,并于结束用药后的第1周内和第4～5周内(动情间期),各组分别处死6只大鼠,观察卵泡数量、卵巢重量的变化.结果 (1)血清内分泌激素水平:用药前后,对照组的血清LH、FSH、雌二醇水平无明显变化,CTX组的血清内分泌激素水平呈上升趋势.用药中,血清LH、FSH水平GnRH-a+CTX组为(42±8)、(124±45)μg/L,GnRH-a+NS组为(47±7)、(136±32)μg/L;GnRH-ant+CTX组为(31±5)、(178±54)μg/L,GnRH-ant+NS组为(36±7)、(198±27)μg/L;对照组为(118±16)、(350±35)μg/L;CTX组为(113±15)、(289±42)μg/L;分别比较,差异均具有统计学意义(P＜0.05).血清雌二醇水平GnRH-ant+CTX组为(3.98±0.74)ng/L,GnRH-ant+NS组为(3.58±0.43)ng/L,GnRH-a+CTX组为(1.46±0.22)ng/L,GnRH-a+NS组为(0.98±0.18)ng/L分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).停药后,GnRH-a+CTX组、GnRH-a+NS组及GnRH-ant+NS组的血清LH、FSH、雌二醇水平逐渐接近对照组水平.但停药第4～5周时,GnRH-ant+CTX组LH、FSH水平[(156±12)、(520±44)μg/L]与CTX组[(178±18)、(546±36)μg/L]比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)卵巢重量:停药第1周,GnRH-a+CTX组大鼠双侧卵巢重量为(18±8)mg/100 g,GnRH-a+NS组为(12±5)mg/100 g,均明显低于其他各组[(30±9)～(37±8)mg/100 g],差异均有统计学意义(P＜0.05);停药第4～5周,GnRH-ant+CTX组大鼠双侧卵巢重量为(22±6)mg/100 g,CTX组为(20±4)mg/100 g,均明显低于其他各组,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)卵泡数量:停药第1周,GnRH-a+CTX组大鼠卵巢原始卵泡数为(689±39)个,GnRH-a+NS组为(824±45)个,明显高于GnRH-ant+CTX组[(255±24)个]和CTX组[(343±29)个];生长卵泡数GnRH-a+CTX组为(21±3)个,GnRH-a+NS组为(15±1)个,明显低于GnRH-ant+CTX组[(110±21)个]和CTX组[(87±17)个];分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).停药第4～5周,GnRH-a+CTX组和GnRH-a+NS组的生长卵泡数[(56±16)、(58±11)个]接近对照组水平[(57±9)个];GnRH-ant+CTX组及CTX组的原始卵泡数和生长卵泡数均少于其他4组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 GnRH-a对CTX诱导的大鼠卵巢功能损害具有保护作用,GnRH-ant对CTX诱导的大鼠卵巢功能损害没有明显的保护作用.     

亚低温对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤p-ERK/p38MAPK的影响

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPK)信号转导通路p-ERK/p38部分活化在亚低温治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的作用及意义.方法 实验分模型组和对照组.采用7日龄Sprague-Dawley(SD)清洁级大鼠,建立新生大鼠HIBD标准模型,随机分为常温缺氧缺血组(10只、肛温=37℃)和亚低温缺氧缺血组(10只、肛温=33℃);对照组为假手术动物,也分为常温组和亚低温组(各8只,余同上).取背侧海马冠状平面采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记(TUNEL)结合苏木素-伊红(HE)、神经元Nissl染色和电镜观察凋亡小体检测脑细胞凋亡情况.采用Western印迹检测MAPK成分磷酸化p42/44ERK(简称p-ERK1/2)、磷酸化p-38 MAPK(简称p-p38)的变化时程及其意义.结果 72 h亚低温缺氧缺血组脑细胞凋亡发生率(6.4±1.7)%,与常温缺氧缺血组(25.3±1.5)%比较P＜0.01,差异有统计学意义.而细胞坏死发生率无明显改善.HIBD后MAPK信号转导系统活化,p-ERK1/2水平在IN组结扎侧大脑组织逐渐降低,而p-p38水平却逐渐升高,二者作用相拮抗.亚低温治疗可逆转二者的反向变化. 结论 亚低温治疗可通过p-ERK/p38MAPK信号转导通路抑制HIBD后的细胞凋亡.     

体外受精子代小鼠性成熟期心血管功能的评估

目的探讨体外受精(IVF)子代心血管系统的安全性。方法利用C57BL/6J小鼠建立IVF子代小鼠模型(IVF组,n=12),以C57BL/6J自然妊娠子代小鼠为对照组(n=12),观察比较小鼠性成熟期的体质量、血压,并利用彩色超声评估其心脏结构及功能。结果 12周龄IVF组子代小鼠的体质量[(26.13±4.58)g]高于对照组[(22.50±2.37)g],差异有统计学意义(P0.05);仔鼠的血压组间无统计学差异(P0.05)。彩色超声显示仔鼠心血管功能的主要指标(对照组,IVF组),左心室射血分数(65.41%±5.26%,65.77%±6.71%)、左室短轴缩短率(35.41%±4.05%,35.81%±4.84%)、颈动脉中内膜厚度[(0.05±0.01)mm,(0.05±0.01)mm]等无统计学差异(P0.05);左房内径[(2.13±0.12)mm,(2.25±0.10)mm]、左心室质量指数[(8.24±0.46)g/m~2,(11.87±2.03)g/m~2]、主动脉内径[(1.33±0.06)mm,(1.45±0.11)mm]3项指标IVF组显著高于对照组(P0.05)。结论 IVF子代小鼠与自然妊娠小鼠相比,部分心血管指标存在差异,提示IVF对性成熟期子代小鼠的心血管结构与功能可能存在潜在的影响,需要更多的远期随访。     

邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯对妊娠大鼠的影响及锌保护作用的研究

目的 探讨邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(DEHP)对大鼠妊娠结局的影响及锌对其影响的保护作用.方法 将50只雌鼠随机分为DEHP组(50mg·kg-1 ·d-1)、DEHP+锌组(含1.2 mg锌的葡萄糖酸锌+ 50 mg·kg-·d-1 DEHP)、空白组(灌注1ml生理盐水)、玉米油组(灌注1ml玉米油)、锌组(含1.2 mg锌的葡萄糖酸锌1ml)5组,每组10只,孕前7d开始每日给予相应药物灌胃,直至孕19 d处死孕鼠,取出胎鼠.测量孕鼠体质量、各脏器质量、活胎鼠数、活胎鼠体质量及胎盘质量.结果 孕鼠体质量及肾、脾、脑、心脏等脏器质量指数各组间两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).孕鼠肝、子宫及卵巢质量指数,空白组分别为(4.4±0.7)％、(1.26±0.09)％、(0.083±0.009)％,玉米油组分别为(4.5±0.6)％、(1.29±0.10)％、(0.084±0.008)％,锌组分别为(4.4±0.4)％、(1.26±0.08)％、(0.084±0.009)％,DEHP组分别为(5.4±1.0)％、(1.11±0.08)％、(0.074±0.012)％,DEHP+锌组分别为(4.4±1.0)％、(1.28±0.10)％、(0.082±0.007)％,DEHP组与其他4组两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),其他4组间两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).活胎鼠数、活胎鼠体质量及胎盘质量,空白组分别为(12.8±2.7)只、(6.03±0.16)g、(1.00±0.03)g,玉米油组分别为(13.6±3.1)只、(6.07±0.20)g、(1.00±0.04)g,锌组分别为(13.3±3.1)只、(6.16 ±0.18)g、(1.00±0.05)g,DEHP组分别为(9.2±4.1)只、(4.03±0.09)g、(0.95±0.03)g,DEHP+锌组分别为(12.1±2.9)只、(6.09±0.17)g、(0.99±0.03)g,DEHP组与其他4组两两比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),其他4组间两两比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 妊娠期DEHP的暴露可对孕鼠及胎鼠造成损伤,预先给予锌干预可减轻DEHP暴露对妊娠的影响,保护妊娠过程.     

血浆D-乳酸水平与新生儿坏死性小肠结肠炎预后的关系

目的 探讨血浆D-乳酸水平与新生儿坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis,NEC)预后的关系.方法 采用病例对照研究方法.选择2007年1月至2010年10月入住本院新生儿重症监护病房诊断为NECⅡ、Ⅲ期的早产儿104例(NEC组)；同期因其他疾病入院的早产非NEC患儿104例(对照组),与NEC组匹配纠正胎龄、性别和出生体重,按1∶1比例进行配对.NEC组患儿于NEC确诊后24 h内,对照组患儿于相应日龄取血,采用酶联免疫吸附试验检测血浆D-乳酸水平,采用受试者工作特性曲线确定D-乳酸阳性标准.根据此标准将NEC组分为D-乳酸升高组与D-乳酸正常组,x2检验比较组间并发症及病死率.根据患儿病情转归将NEC组分为死亡组和存活组,t检验比较不同组间D-乳酸水平差异.结果 NEC组104例患儿中,NECⅡ期63例(60.6％),NECⅢ期41例(39.4％)；存活88例(84.6％),死亡16例(15.4％).NECⅢ期组D-乳酸水平最高,为(35.4±29.1)μg/ml,其次是NECⅡ期组,为(29.5±16.2)μg/ml,对照组最低[(3.7±18.4)μg/ml],差异均有统计学意义(F=5.97,P＜0.05).受试者工作特性曲线分析显示,D-乳酸水平≥6 μg/ml为阳性标准,按此标准,NEC组血浆D-乳酸水平升高者87例(83.7％,87/104).D-乳酸水平升高者新生儿危重病例评分明显低于正常者[(80.9±22.6)分与(95.8±20.5)分,t=2.417,P＜0.05],而合并新生儿败血症的比例[48.3％(42/87)与5.9％(1/17),x2=11.538,P＜0.05]及病死率[27.6％(24/87)与5.9％(1/17),x2=7.146,P＜0.05]较高.NEC组死亡患儿与存活患儿D-乳酸水平[(43.2±13.5) μg/ml与(21.9±22.9) μg/ml,t=4.572,P＜0.05]、新生儿危重病例评分[(82.4±29.1)分与(90.6±21.3)分,t=2.409,P＜0.05]以及合并败血症的比例[68.8％(11/16)与38.6％ (34/88),x2=3.445,P＜0.05]差异均有统计学意义.结论 血浆D-乳酸水平与NEC预后相关,能较好地反映NEC患儿的病情及预后.     

产前应用地塞米松对早产仔鼠脑发育的影响

目的 探讨产前孕鼠使用地塞米松不同次数对早产仔鼠脑发育的影响. 方法 孕SD大鼠分为产前地塞米松3剂组(3只):于妊娠第16、17、18天给予地塞米松0.8 mg/(kg·d)生理盐水稀释至4 ml腹腔注射;地塞米松1剂组(3只):于妊娠第16,17天腹腔注射4 ml生理盐水,第18天腹腔注射等体积的地塞米松0.8 mg/(kg·d);对照组(3只):于妊娠第16、17、18天各腹腔注射生理盐水4 ml.孕19 d处死大鼠,取仔鼠称体重及脑重,免疫组织化学法检测脑组织特异性烯醇化酶(NSE)表达,电镜观察脑超微结构.组间差异比较采用ANOVA. 结果 (1)地塞米松3剂组体重、脑重、脑重/体重分别为(1.543±0.052)g、(88.80±7.12)mg和(5.75±0.38)0A,1剂组分别为(1.584±0.035)g、(98.21±3.71)mg和(6.20±0.26)%,均低于对照组[(1.696±0.076)g、(111.53±6.29)mg和(6.59±0.48)%](P<0.01或P<0.05);且地塞米松3剂组低于1剂组(P<0.01或P<0.05).(2)地塞米松3剂组脑皮质及海马区NSE表达强度分别为0.223±0.054和0.192±0.054,1剂组分别为0.381±0.041和0.359±0.046,均低于对照组(0.590±0.064和0.529±0.068)(P均<0.01).(3)地塞米松组早产仔鼠脑超微结构可见神经元核膜断裂、线粒体空泡变性、核仁消失、神经纤维丝断裂. 结论 产前使用地塞米松可损伤早产仔鼠脑发育,且多次使用比单次使用对脑组织的损伤更大.     

碱性成纤维细胞生长因子对新生大鼠缺血脑组织转化生长因子β1及其受体mRNA表达的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对3日龄新生大鼠脑缺血后星形胶质细胞数目以及转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及其受体--Smad2mRNA表达的影响,探讨bFGF对未成熟脑缺血性损伤的保护作用机制. 方法 结扎3日龄新生SD大鼠双侧颈总动脉制备脑缺血模型,随机分为对照组(33只)、治疗组(33只).另取3日龄新生SD大鼠33只为假手术组.免疫荧光染色方法检测三组大鼠术后4 d、7 d和14 d脑室下区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)阳性细胞数目;实时荧光定量PCR(real-time PCR)技术检测三组大鼠术后4 d、7 d和14 d脑室下区TGF-β1及Srnad2 mRNA表达变化. 结果 (1)假手术组GFAP阳性细胞术后7 d达高峰[(325.4±52.5)个/视野],对照组、治疗组GFAP阳性细胞数术后14 d达高峰[分别为(533.5±75.7)、(727.2±104.5)个/视野)],三组同时点比较差异有统计学意义(P＜0.01).(2)对照组TGF-β1和Smad2 mRNA表达在术后7 d达高峰(分别为7.67±1.22和6.22±1.92),治疗组TGF-β1和Smad2 mRNA表达在术后14 d达高峰(分别为8.65±1.02和7.67±1.41),三组同时点比较差异有统计学意义(P＜0.01). 结论 未成熟脑缺血后,外源性bFGF可通过诱导TGF-β1的表达,引起星形胶质细胞反应性增生,而发挥其神经营养作用.     

多囊卵巢综合征患者子宫内膜组织中胰岛素PI3K/Akt信号通路的活化及其意义

目的 通过分析多囊卵巢综合征(PCOS)患者子宫内膜组织中胰岛素的磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路中Akt的表达及其活化程度,探讨PI3K/Akt信号通路活化在PCOS子宫内膜增生及癌变形成中的作用及意义,并分析影响该信号通路活化程度的因素.方法 选择2007年1月-2008年6月在天津医科大学总医院就诊的PCOS患者52例为PCOS组,非PCOS(输卵管因素不孕或卵巢良性肿瘤)患者32例为对照组;测定所有患者的血清生殖激素水平、空腹血糖及胰岛素水平,并取子宫内膜组织行病理检查;计算体质指数(BMI)、稳态模型评估法计算的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).对PCOS组患者根据病理检查结果分为正常子宫内膜、子宫内膜增生及癌变,根据是否存在胰岛素抵抗分为胰岛素抵抗和非胰岛素抵抗.蛋白印迹法检测子宫内膜组织中Akt、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达水平.结果(1)PCOS组患者子宫内膜组织中p-Akt蛋白的表达水平[(46±18)％]高于对照组[(33±9)％],两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(2)PCOS组子宫内膜增生及癌变患者子宫内膜组织中p-Akt蛋白的表达水平[(56±19)％]高于正常子宫内膜者[(31±12)％],两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);胰岛素抵抗患者子宫内膜组织中p-Akt蛋白的表达水平[(50±19)％]高于非胰岛素抵抗者[(34±10)％],两者比较,差异有统计学意义(P＜0.01).(3)HOMA-IR、BMI与子宫内膜组织中p-Akt蛋白的表达水平呈正相关(r=0.400、0.326,P均＜0.05).结论 PCOS患者子宫内膜存在胰岛素PI3K/Akt信号通路的过度活化,该信号通路过度活化与PCOS子宫内膜增生及癌变有关.胰岛素抵抗、肥胖可能是影响子宫内膜组织中胰岛素PI3K/Akt信号通路过度活化的独立风险因素.     

白细胞介素1与多囊卵巢综合征肥胖的相关性

目的 探讨炎症细胞因子——白细胞介素1(IL-1)β亚型(IL-1β)和IL-1受体拮抗剂(IL-1ra)与多囊卵巢综合征(PCOS)患者肥胖发生的关系.方法(1)2006年10月至2007年1月,选择在北京大学第三医院生殖医学中心就诊的PCOS患者118例,根据WHO国际肥胖特别工作组2000年提出的亚太地区肥胖标准[体质指数(BMI)≥25 kg/m2]分为PCOS肥胖组56例,PCOS非肥胖组62例.采用PCR技术检测IL-1β基因-511位点、第5外显子位点和IL-1 ra基因第2内含子的基因多态性.(2)随机抽取PCOS肥胖组患者29例和PCOS非肥胖组患者31例,采用ELISA法检测血清IL-1β、IL-1ra水平,并测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、超敏C反应蛋白水平和白细胞计数.结果(1)基因型和等位基因频率:PCOS肥胖组患者IL-1β基因-511位点T/T基因型频率及T等位基因频率分别44.6％和63.4％,PCOS非肥胖组患者分别为11.3％和39.5％,两组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);PCOS肥胖组患者IL-1 ra基因Ⅰ/Ⅴ基因型频率及Ⅴ等位基因频率分别为19.6％和9.8％,PCOS非肥胖组分别为3.2％和1.6％,两组分别比较,差异也均有统计学意义(P＜0.05).(2)血清学检测结果:PCOS肥胖组患者血清IL-1β水平为(149±36)ng/L,高于PCOS非肥胖组患者的(96±42)ng/L,PCOS肥胖组患者IL-1 ra水平为(284±97)ng/L,高于PCOS非肥胖组患者的(208±84)ng/L,两组分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).PCOS肥胖组患者FBG、FINS、超敏C反应蛋白水平和白细胞计数分别为(5.1±0.7)mmol/L、(17±9)mU/L、(1.5±0.6)mg/L、(7.0±2.3)×109/L,PCOS非肥胖组患者分别为(4.9±0.5)mmol/L、(11 ±8)mU/L、(0.9 ±0.4)mg/L、(5.9±1.3)×109/L,两组间各项指标分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)IL与BMI的相关性:PCOS患者血清IL-1β(r=0.673)、IL-1ra(r =0.557)与BMI呈线性正相关(P均＜0.05).结论 炎症因子IL-1β和IL-1ra与PCOS患者肥胖的发生明显相关,IL-1β基因-511位点携带T等位基因和IL-1ra基因携带等位基因Ⅴ的PCOS患者更有发生肥胖的倾向.