血管内皮生长因子对关节软骨细胞基质金属蛋白酶-13表达的影响

目的 观察血管内皮生长因子(VEGF)对体外培养的关节软骨细胞基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达的影响.方法 体外培养SD乳鼠关节软骨细胞,分为4组,每组加入不同处理因素进行干预,A组:(对照组)不加任何处理因素;B组:10 μg/L VEGF;C组:10 μg/L白细胞介素(IL)-1β;D组:10 μg/L VEGF+ 10 μg/L IL-1β.采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测MMP-13 mRNA的表达,蛋白免疫印迹法检测MMP-13蛋白的表达.结果 B组(0.88±0.47)、C组(3.69 ±0.45)及D组(3.85 ±0.48)的MMP-13 mRNA表达水平均显著高于A组(0.73±0.56),D组软骨细胞MMP-13的mRNA表达水平明显高于B组(P＜0.01)及C组(P＜0.05).与A组(0.36 ±0.17)比较,B组(0.63±0.21)、C组(0.76±0.24)及D组(0.99±0.26)的MMP-13蛋白表达水平显著升高,D组MMP-13的蛋白表达水平明显高于B组(P＜0.05)及C组(P＜0.05).结论 在骨关节炎的发病过程中VEGF可能通过上调软骨细胞MMP-13的表达发挥重要作用.     

阿仑膦酸钠对IL-1β体外诱导培养的大鼠膝关节软骨细胞影响的实验研究

目的二膦酸盐类药物可抑制骨重塑,通过观察阿仑膦酸钠(alendronate,ALN)对IL-1β体外诱导培养的大鼠膝关节软骨细胞的影响,探讨ALN治疗骨性关节炎(osteoarthritis,OA)的可行性。方法取15只1月龄SPF级SD大鼠(雌雄不限,体重100～150g)膝关节软骨,体外培养软骨细胞并传至第3代。倒置相差显微镜下观察细胞形态并进行鉴定。将第3代软骨细胞分为3组:空白对照组(A组)软骨细胞用常规DMEM完全培养液培养5d;IL-1β诱导组(B组)软骨细胞以10ng/mL重组人IL-1β培养2d后更换为常规DMEM完全培养液培养3d;IL-1β诱导后加ALN培养组(C组)软骨细胞以10ng/mL重组人IL-1β培养2d后更换为浓度为1×10-6mol/L的ALN培养3d。培养后取各组细胞进行免疫细胞化学染色及实时PCR检测,观察细胞中Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,ColⅡ)、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase13,MMP-13)和β-连环蛋白(β-catenin)的表达水平。结果甲苯胺蓝染色示培养的细胞呈异染性,证实为软骨细胞。免疫细胞化学染色显示:A、B、C组ColⅡ表达积分吸光度(IA)值分别为15.3770±0.5718、5.4632±0.4504、10.2907±0.4992,C组高于B组,但低于A组,差异有统计学意义(P<0.05);MMP-13表达IA值分别为2.7775±0.1996、6.9981±0.3297、3.0686±0.2056,C组明显低于B组(P<0.05),但与A组比较差异无统计学意义(P>0.05);β-catenin表达IA值分别为4.3903±0.5519、11.7999±0.3487、6.6117±0.3818,C组低于B组,但高于A组,差异均有统计学意义(P<0.05)。实时PCR检测示,C组ColⅡmRNA表达高于B组,MMP-13及β-catenin的mRNA表达低于B组,比较差异均有统计学意义(P<0.05);ColⅡ和β-catenin mRNA表达高于A组,MMP-13mRNA表达低于A组,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 ALN可能通过抑制IL-1β诱导的大鼠膝关节软骨细胞中ColⅡ的降解并下调MMP-13及β-catenin因子的表达,对软骨细胞具有一定的保护作用。     

兔骨关节炎中基质金属蛋白酶-1、3与白细胞介素-1β表达及关节软骨细胞凋亡的研究

目的 观察骨关节炎(OA)中基质金属蛋白酶(MMP)-1、3与白细胞介素-1β(IL-1β)的表达及关节软骨细胞凋亡,探讨其在OA发病机制中的作用.方法 将20只中国大白兔随机分成正常组(A组)、实验组(B组),每组10只,A组未造模,B组采用Hulth法制成OA模型,4周后取胫骨平台关节软骨进行组织病理学检查,采用免疫组织化学和原位末端标记细胞凋亡检测法分别检测关节软骨和滑膜中的MMP-1、3、IL-1β及软骨细胞凋亡指数(AI)的水平.结果 组织病理学检查可见,B组关节软骨退变程度明显重于A组,符合OA关节软骨退变特征;通过检测MMP-1、3,IL-1β和AI,A组的结果分别是21.005±9.406、18.697±8.225、0.100±0.040和14.900±3.400,B组的结果分别是56.147±22.340、46.182±20.561、0.180±0.060和25.400 ±5.200;B组MMP-1、3和AI的水平均明显高于A组(P＜0.01),B组IL-1β水平高于A组(P＜0.05).结论 MMP-1、MMP-3、IL-1β的表达及关节软骨细胞凋亡在OA发病机制中作用重要,其异常升高与OA关节软骨退变和炎症反应密切相关.     

血睾屏障组分在γ射线致不育症小鼠中的变化及影响

目的 探讨γ射线损伤致不育症小鼠中血睾屏障重要组分Claudin-3、Claudin-11表达的变化. 方法 2011年7月至2011年10月我们选取42只雄性昆明小鼠,6～8周龄,体质量20～25g.随机分为7组,每组6只,分别为空白对照A组;接受60Coγ射线单剂量射线下腹局部照射的B、C、D组,照射剂量分别为2、6、10 Gy;接受6 Gy剂量照射后应用雌二醇1、2、4μg/d干预4周的E、F、G组.于末次给药后2周,处死各组小鼠并收集睾丸,计算各组小鼠睾丸曲细精管分化指数(tubule differentiation index,TDI),应用逆转录-荧光定量聚合酶链式反应检测睾丸组织抑制素βB、Claudin-3、Claudin-11 mRNA的水平,蛋白质印迹法检测睾丸Claudin-11蛋白的表达情况. 结果 与A组(100.0)比较,B、C、D组睾丸TDI显著下降(68.5±6.4、35.0±6.1、16.3±5.7),差异均有统计学意义(P＜0.05),且D组睾丸组织抑制素βB mRNA显著降低(0.5±0.2比1.0±0.1),差异有统计学意义(P＜0.05);C、D组Claudin-3 mRNA水平分别为A组的2.17倍和3.49倍,Claudin-11蛋白水平分别为A组的2.18倍和2.23倍.与C组(35.0±6.1)比较,F、G组TDI显著增高(61.7±7.2、55.8±11.9),差异均有统计学意义(P＜0.05),抑制素βB mRNA虽升高,但差异无统计学意义(均P＞0.05);F、G组Claudin-3 mRNA水平分别为1.3±0.2和1.6±0.3,低于C组(2.2±0.2),差异均有统计学意义(P＜0.05),且F组Claudin-11 mRNA水平(1.2±0.2)和蛋白表达水平(1.5±0.5)均显著低于C组(1.79±0.2和2.17±0.3),差异均有统计学意义(P＜0.05).TDI与Claudin-3 mRNA、Claudin-11 mRNA水平均呈负相关(rs=-0.884,P＜0.05;rs=-0.758,P＜0.05). 结论 γ射线照射可使小鼠血睾屏障组分Claudin-3、Claudin-11表达水平升高.     

TGF-β1和VEGF在结肠癌组织中的表达和临床意义

目的:研究转化生长因子β 1 (TGF-β1)与血管内皮生长因子(VEGF)在结肠癌组织中的表达、相互关系及临床意义.方法:采用免疫组织化学SP法检测65例结肠癌组织标本中 TGF-β 1、VEGF蛋白表达,RT-PCR检测其mRNA表达,并选择39例正常人结肠黏膜组织作为正常对照.结果:免疫组化法检测TGF-β 1、VEGF蛋白在结肠癌组织中的阳性率较正常对照组明显增高(P＜0.05),RT-PCR检测TGF-β1、VEGF mRNA表达量癌组织高于正常组织.免疫组化检测的TGF-β1和VEGF表达阳性率在T3～T4高于T1～T2;有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组DukesC～D期表达阳性率高于DukesA～B期,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);VEGF和TGF-β1之间存在较明显的相关性(P＜0.05).结论:TGF-β 1、VEGF在结肠癌组织中呈高表达,与浸漓深度、淋巴结转移、Dukes分期密切相关,两者也存在相关性,与肿瘤进展及预后相关,可作为结肠癌判断预后的参考指标.     

人IL-1受体拮抗蛋白重组逆转录病毒载体的构建、鉴定及在骨关节炎软骨细胞中的表达

目的 构建含人IL-1受体拮抗蛋白(IL-1 receptor antagonist, IL-1Ra)逆转录病毒表达载体(PLXRN-IL-1Ra),体外转染人骨关节炎(osteoarthritis, OA)软骨细胞,研究其相关特性.方法 利用细菌内同源重组技术快速构建PLXRN-IL-1Ra逆转录病毒重组质粒,经测序及酶切鉴定正确后转染PT67细胞,包装成为重组PLXRN-IL-1Ra逆转录病毒,并使用小鼠肾成纤维细胞系NIH/3T3对病毒进行滴度测定.实验分为3组未转染组(A组)、PLXRN空质粒转染组(B组)、PLXRN-IL-1Ra转染组(C组),病毒感染人OA软骨细胞后,RT-PCR检测细胞内IL-1Ra基因的转录和表达;ELISA法检测细胞培养上清液中人IL-1Ra蛋白表达.结果 酶切鉴定及基因测序证实重组逆转录病毒质粒中含有人IL-1Ra cDNA,测定包装的病毒滴度为3 × 104 CFU/mL.原代软骨细胞体外培养呈多角形或梭形,甲苯胺蓝染色见细胞内有紫色异染颗粒.RT-PCR结果显示在C组出现311 bp人IL-1Ra mRNA片段,A、B组未见人IL-1Ra mRNA的表达带,GAPDH在各组均有表达.ELISA检测发现C组细胞上清有一定量的人IL-1Ra表达,蛋白浓度为(60.47±15.13)ng/L,A组和B组均无人IL-1Ra表达.结论 构建的IL-1Ra逆转录病毒表达载体成功地感染人OA软骨细胞,并在体外获得稳定表达,为将表达人IL-1Ra基因的人OA软骨细胞用于OA基因治疗提供了实验依据.     

丹参抑制转化生长因子-β1诱导的肌源性干细胞向肌成纤维母细胞分化

目的 观察丹参对失神经骨骼肌肌源性干细胞(MDSCs)向肌成纤维母细胞分化的抑制作用.方法 采用差速贴壁法分离出大鼠失神经骨骼肌MDSCs,加入转化生长因子-β1(TGF-β1)和丹参进行干预,将细胞分为3组:A:对照组;B:10 μg/L TGF-β1组;C:10 μg/L TGF-β1+ 150 mg/L丹参组.荧光实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测各组细胞在干预后5个时间点α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和波形蛋白(Vimentin) mRNA和蛋白表达.结果 与A组比较,B组和C组细胞α-SMA、Vimentin的mRNA在干预后第2、3、5、7天均明显升高(P＜0.05),其蛋白表达在干预后第3、4、6、8天亦显著升高(P＜0.05);与B组比较,C组细胞α-SMA、Vimentin的mRNA和蛋白在对应时间点均明显降低(P＜0.05).结论 丹参能抑制TGF-β1诱导的失神经骨骼肌MDSCs向肌成纤维母细胞的分化.     

肿瘤相关成纤维细胞培养液上清促进肿瘤细胞增殖和血管生成的研究

目的 探讨在体外实验条件下,肿瘤相关成纤维细胞如何通过旁分泌机制促进肿瘤细胞的增殖和血管生成.方法 分别提取原代卵巢癌相关成纤维细胞(TAFs)与正常卵巢相关成纤维细胞(N Fs)的培养液上清(CM);实验组为2ml TAFs-CM处理卵巢癌细胞(SKOV-3,1×105/孔),对照组为2 ml NFs-CM处理卵巢癌细胞(SKOV-3,1×105/孔),空白组为正常培养的卵巢癌细胞(SKOV-3,1×105个/孔),干预组为在实验组中加入20 μmol转化生长因子-β(TGF-β)特异性小分子抑制剂SB-431542(10 μmol/ml);应用流式细胞仪分析各组细胞生长周期;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血管内皮生长因子(VEGF) mRNA的表达,Western blot法检测各组细胞TGF-β1、α-SMA、VEGF蛋白的表达.结果 实验组卵巢癌细胞增殖较对照组显著增加(细胞S期比例:实验组22.10±1.84比对照组12.77±1.43,P＜0.05);而加入SB431542干预后则可明显抑制促增殖作用(细胞S期比例:干预组12.33±1.12比实验组22.10±1.84,P＜0.05);RT-PCR提示实验组PCNA、α-SMA、VEGF mRNA较其他组表达显著上调(P＜0.05),Western blot结果提示实验组TGF-β1、α-SMA、VEGF蛋白表达亦显著上调(P＜0.05),在加入SB-431542后以上基因及蛋白的表达均受到抑制(P＜0.05).结论 卵巢癌相关成纤维细胞可以通过旁分泌机制促进卵巢癌细胞的增殖,并上调血管生成相关基因及蛋白的表达,而通过抑制TGF-β信号通路作用后则可以有效抑制这类作用.     

抑制Kupffer Cell对大鼠肝脏切除微循环障碍的影响

目的 探讨应用Kupffer cell封闭剂对肝脏微循环障碍的影响.方法 切除大鼠左肝叶建立肝脏切除模型60只健康SPF雄性级大鼠随机分为4组:假手术组(A),缺血再灌注组(B),缺血再灌注+肝叶切除+生理盐水组(C)和缺血再灌注+肝叶切除+三氯化钆组(D).术前1d和2d,向D组注射氯化钆(浓度为0.25％,10 ml/kg),C组注射同等浓度的生理盐水.各组分别于术后1天处死.检测血中丙胺酸氨基转移酶(ALT),天冬氨酸氨基转移酶(AST),内皮素-1(ET-1)及一氧化氮(NO)的水平;病理学检查各组术后肝组织的病理改变.提取肝组织中RNA,应用RT-PCR法检测ET-1,eNOs,iNOs及HO-1mRNA的表达.结果 A组肝细胞无明显异常,C组肝细胞炎症和坏死的程度明显高于B组和D组.B,C,D组大鼠血清中ALT,AST.ET-1的水平明显高于A组(P＜0.05),NO的水平明显低于A组(P＜0.05);肝组织中织ET-1、eNOS、iNOS及HO-1 mRNA表达水平较A组显著升高(P＜0.05);C组大鼠血清中ALT,AST.ET-1的水平明显高于B组和D组(* *P＜0.05,Δ*P＜0.05),NO的水平明显低于其他两组(* *P＜0.05,Δ*P＜0.05)且肝组织中织ET-1、eNOS、iNOS及HO-1 mRNA表达水平较其B组显著升高(* *P＜0.05),其中iNOS及HO-1 mRNA表达水平较D组显著升高(Δ*P＜0.05).结论 术前注射氯化钆能够显著改善肝叶切除术后微循环障碍,减轻肝脏损伤.     

瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏时脊髓iNOS mRNA和FOS蛋白表达的变化及曲马多对其的影响

目的 通过评价瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏时脊髓诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA及FOS蛋白表达的变化,探讨瑞芬太尼诱发痛觉过敏的机制及曲马多对其的影响.方法 健康雄性SD大鼠48只,体重200～250g,随机分为4组(n=12),对照组(C组)不行切口操作,腹部皮下输注生理盐水0.4 ml,同时单次皮下注射生理盐水0.1 ml;切口痛组(I组)切皮后腹部皮下输注生理盐水0.4 ml,同时单次皮下注射生理盐水0.1 ml;瑞芬太尼组(R组)切皮后腹部皮下输注瑞芬太尼40 μg/kg(0.4 ml),同时单次皮下注射生理盐水0.1 ml,瑞芬太尼+曲马多组(R+T组)切皮后腹部皮下输注瑞芬太尼40 μg/kg(0.4 ml),同时单次皮下注射曲马多30 mg/kg(0.1 ml).各组腹部皮下输注时间为30min(0.8ml/h).分别于术前24 h、术后24、48 h测定机械痛阈,随后测定脊髓iNOS mRNA和FOS蛋白的表达水平.结果 与术前24 h比较,术后I组、R组和R+T组机械痛阈降低(P＜0.05);与C组比较,I组、R组和R+T组机械痛阈降低(P＜0.05);与I组比较,R组机械痛阈降低;与R组比较,R+T组机械痛阈升高(P＜0.05).与C组和I组比较,R组和R+T组脊髓iNOS mRNA和FOS蛋白表达上调(P＜0.05);与R组比较,R+T组脊髓iNOS mRNA和FOS蛋白表达下调(P＜0.05).结论 瑞芬太尼诱发切口痛大鼠痛觉过敏的机制可能与上调脊髓iNOS mRNA和FOS蛋白表达有关,曲马多可通过下调脊髓iNOS mRNA和FOS蛋白表达预防瑞芬太尼诱发的痛觉过敏.     

L-精氨酸和氨基胍在大鼠肺移植缺血再灌注损伤中的作用

目的 观察L-精氨酸(L-Arg)和氨基胍对大鼠肺移植后缺血再灌注的保护作用.方法 建立大鼠左单肺移植模型,术后随机分为A组(对照组,腹腔注射生理盐水),B组(腹腔注射L-Arg)、C组(腹腔注射氨基胍)和D组(腹腔注射L-Arg和氨基胍),每组6只.移植肺再灌注2 h后,检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性并测定移植肺干湿重比(W/D)及静脉血中一氧化氮(NO)含量,观察移植肺的病理学形态.结果 再灌注2 h后,B组移植肺的W/D(5.10±0.21)、MPO(1.74±0.26)U/g和MDA(20.87±2.90)μmol/g均低于A组W/D(5.74 ±0.14)、MPO(2.36±0.32)U/g和MDA(31.33 ±3.46)μmol/g;SOD活性(424.29±27.86)U/mgprot、NO含量(175.12 ±17.40)μmol/L、iNOS活性(3.62 ±0.26)U/mgprot和eNOS活性(5.36±0.28)U/mgprot均较A组SOD活性(268.01±26.06)U/mgpro、NO含量(98.29±6.95)μmol/L、iNOS活性(2.53 ±0.22)U/mgprot和eNOS活性(3.57 ±0.40)U/mgprot高(P＜0.05).C组的NO含量(84.13±5.18)μmol/L、iNOS活性(1.81 ±0.09)U/mgprot均较A组低(P＜0.05).D组的W/D(4.79 ±0.19)、MPO(1.24±0.13)U/g、MDA(14.60±4.14)μmol/g、iNOS活性(1.99±0.17)U/mgprot低于A组,SOD活性(493.75±24.95)、NO含量(149.61±10.70)μmol/L、eNOS活性(5.50±0.27)U/mgprot高于A组(P＜0.05).与B组比较,D组的W/D、MPO、MDA、NO含量、iNOS活性降低,SOD升高(P＜0.05).病理形态学检查显示D组炎细胞浸润及渗出最轻,B组次之,A组和C组最差.结论 移植后再灌注早期应用L-Arg可减轻缺血再灌注损伤,应用氨基胍并不能减轻移植肺的损伤,但联合应用L-Arg和氨基胍优于单纯应用L-Arg.

Abstract：

Objective To investigate the effects of L-arginine (L-Arg) and aminoguanidine on ischemia-reperfusion injury following rat lung transplantation. Methods The models of rats lung transplantation were established and 4 groups ( n = 6 each) were randomly set up: group A ( normal control group)and treated groups B, C and D. In these groups, different medicines (NS, group A; L-Arg, group B;aminoguanidine, group C; L-Arg and aminoguanidine, group D) were intraperitoneally administered to the recipient rats before reperfusion. After reperfusion for 2 h, the lung graft was harvested for measurements of lung wet/dry ratio ( W/D ) , myeloperoxidase ( MPO ) , malondialdehyde ( MDA ) , superoxide dismutase (SOD) , endothelial nitric oxide synthase (eNOS) , inducible nitric oxide synthase (iNOS). The contents of plasma nitric oxide (NO) were determined. The pathological changes in the lung grafts were observed.Results After reperfusion for 2 h, W/D (5. 10 ±0.21), MPO (1.74 ±0.26) U/g, MDA (20.87 ±2. 90) μmol/g in group B were significantly lower [W/D (5. 74 ± 0. 14), MPO (2. 36 ± 0. 32) U/g,MDA (31. 33 ±3.46) μmol/g] (P ＜ 0. 05), and the levels of SOD (424. 29 ± 27. 86) U/mg protein,NO (175. 12 ± 17. 40) μmol/L, iNOS (3. 62 ±0. 26) U/mg protein and eNOS (5. 36 ±0. 28) U/mg protein were significantly higher than in group A [SOD (268.01 ±26.06) U/mg protein, NO (98.29 ±6.95) μmol/L, iNOS (2.53 ±0.22) U/mg protein and eNOS (3. 57 ±0.40) U/mg protein] (P＜0. 05). The contents of NO (84. 13 ±5. 18) μmol/L and iNOS (1. 81 ±0. 09) U/mg protein in group C were significantly lower than in group A (P ＜ 0. 05). W/D (4. 79 ± 0. 19) , MPO (1. 24 ± 0. 13 ) U/g,MDA (14. 60 ±4. 14) μmol/g, iNOS (1. 99 ±0. 17) U/mg protein were significantly lower than in group A (P ＜0. 05) , and SOD (493. 75 ±24. 95) , NO (149. 61 ± 10. 70) μmol/L and eNOS (5. 50 ±0. 27)U/mg protein in group D were significantly higher than in group A (P＜0. 05). W/D, MPO, MDA, NO and iNOS in group D were significantly reduced as compared with group B (P ＜ 0. 05 ) , and SOD was significantly increased in group B ( P ＜ 0. 05 ) . The pathological examination revealed that the inflammatory cell infiltration in group D was the mildest, followed by groups B, A and C. Conclusion The L-Arg could alleviate the lung ischemia-reperfusion injury after transplantation, the combined used of L-Arg and aminoguanidine could obtain better effects than L-Arg used alone. The aminoguanidine used alone could not alleviate ischemia-reperfusion injury after transplantation.     

氟尿嘧啶植入剂对H22肝癌移植瘤射频消融后残留癌的抑制作用及其机制

目的 探讨氟尿嘧啶植入剂对H22肝癌移植瘤射频消融(RFA)后残留癌的作用及其机制.方法 采用H22肝癌小鼠移植瘤模型,建立RFA后残留癌模型.随机分为5组:不作任何处理(A组);单纯RFA处理(B组);RFA后残留癌内分别植入氟尿嘧啶植入剂2 mg(C组)、4 mg(D组)和6 mg(E组).RFA两周后取残留癌组织,免疫组织化学方法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)的表达;Western blot法检测PCNA和VEGF的蛋白表达.结果 与A组(2.51±0.30)cm3比较,B组肿瘤体积明显增大(3.10±0.20)cm3,C、D和E组肿瘤体积逐渐减小,分别为(1.51±0.20)、(0.72±0.45)、(0.36±0.22)cm3(P＜0.05).与A组(1.40±0.25)g比较,B组取瘤时瘤重明显增加为(2.51±0.37)g,C、D和E组取瘤时瘤重逐渐减轻,分别为(1.33±0.22)、(0.80±0.21)、(0.01±0.01)g(P＜0.05).B、C、D和E组的抑瘤率分别为-79%、5%、43%和99%.免疫组织化学结果:与A组比较,B组残留癌中VEGF、PCNA和MVD的表达均明显增高,C、D和E组残留癌中VEGF、PCNA和MVD的表达逐渐减少(P＜0.05).Western blot结果,与A组比较,B组残留癌中VEGF和PCNA的蛋白表达均明显增高,C、D和E组残留癌中VEGF和PCNA的蛋白表达逐渐减少(P＜0.05).结论 氟尿嘧啶植入剂对H22肝癌移植瘤RFA后残留癌有明显的抑制作用,并可能通过抑制肿瘤细胞生长和血管生成而抑制残留癌的生长.

Abstract：

Objective To evaluate the effect and mechanism of fluorouracil implants on residual tumor of mouse H22 model following radiofrequency ablation (RFA). Methods The mouse H22 model was established. The tumors were subjected to RFA under the ablation condition of 55 ℃ for 5 min. Fifty-five mouse H22 models were divided into five groups randomly: control group ( group A); RFA group (group B); combined treatments group using RFA and 2 mg fluorouracil implants (group C), 4 mg flu orouracil implants ( group D) and 6 mg fluorouracil implants ( group E). The change of tumor volumes,and tumor weights were detected two weeks after RFA. The microvessel densities (MVD) of the residual tumor were measured by immunohistochemical staining. The expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) were examined by immunohistochemical staining and Western blotting. Results As compared with group A (2. 51 ± 0. 30) cm3, tumor volumes in group B were statistically increased (3. 10 ±0. 20) cm3, those in group C (1.51 ±0. 20) cm3, group D (0. 72 ± 0. 45) cm3 and group E (0. 36 ± 0. 22) cm3 were gradually decreased ( P ＜ 0. 05 ). As compared with group A ( 1.40 ±0. 25) g, the tumor weights in group B were statistically increased (2.51 ±0. 37) g, but those in group C ( 1.33 ±0. 22 g), group D (0. 80 ±0. 21 ) g and group E (0. 01 ±0. 01 ) g were gradually decreased (P ＜0. 05). The inhibiton rate of tumor growth in groups B, C, D and E was - 79%, 5%,43% and 99% respectively. Immunohistochemical staining indicated that the expression levels of VEGF,PCNA and MVD in group B were significantly higher than those in group A, but those in groups C, D and E were gradually lower than those in group A ( P ＜ 0. 05 ). Western blotting revealed that the protein expression levels of VEGF and PCNA in group B were significantly higher than those in group A, but those of VEGF and PCNA in groups C, D and E were gradually lower than those in group A (P＜0. 05). Conclusion Fluorouracil implants inhibits residual tumor of mouse H22 model following RFA significantly by inhibiting the growth and angiogenesis of residual tumor.     

槲皮素对缺血再灌注大鼠离体心脏的作用

目的 观察槲皮素(Quercetin)对缺血再灌注损伤(IRI)离体大鼠心脏的作用.方法 将32只SD大鼠随机分为4组:空白对照组(Control);给药对照组(Control+Que);缺血再灌注组(I/R);缺血再灌注给药组(I/R+Que),行Langendorff心脏灌注,给药组预防性给予槲皮素(5 μmol/L).监测各组心功能(±dp/dtmax),比较再灌注1 h心肌尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX2)、一氧化氮合酶(iNOS、eNOS)表达和超微结构的变化.结果 I/R组与Control组比较心功能显著降低(分别为18.91±3.38、-22.43±8.84和60.65±11.65、-56.62±8.49,P＜0.01),NOX2、iNOS、eNOS mRNA(分别为0.1590±0.0539、0.0897±0.0236、0.0154±0.0061和0.0247±0.0070、0.0377±0.0135、0.0091±0.0033,P＜0.05)和蛋白的表达均显著增加,心肌超微结构严重损伤;与I/R比较I/R+Que组(45.77±8.05,-42.10±8.71)显著增强心功能(P＜0.01),显著降低NOX2、iNOS、eNOS mRNA(分别为0.0864±0.0358、0.0445±0.0104、0.0085±0.0032,P＜0.05)和蛋白的表达,明显减轻心肌超微结构的损伤.结论 在离体水平预防性给予槲皮素能够显著减轻缺血再灌注对大鼠心肌造成的损伤,保护心脏.

Abstract：

Objective To observe the effect of quercetin (Que) on isolated rat hearts after ischemia-reperfusion injury (IRI). Methods Thirty-two SD rats were divided randomly into 4 groups with 8 in each group: ( 1 ) Control group, isolated hearts contiuosly peffused without ischemia; (2) Control + Que group: isolated hearts contiuosly perfused without ischemia but the adminstration of Que (5 μmol/L) 5 min after perfusion; (3) I/R group: isolated hearts perfused with 30 min global ischemia followed by reperfusion; (4) I/R + Que group: isolated hearts perfused with 30 min global ischemia followed by reperfusion and the adminstration of Que (5 μmol/L) 10 min before ischemia. Hemodynamic parameters ( ± dp/dtmax),myocardial ultrastructure, nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) oxidases 2 ( NOX2),inducible nitric oxide synthase (iNOS) and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) mRNA and protein expression after reperfusion were compared among the four groups. Results As compared with control group, hemodynamic parameters were greatly decreased after reperfusion ( 18.91 ± 3. 38, - 22. 43 ± 8. 84vs 60. 65 ± 11.65, - 56. 62 ± 8. 49 ,P ＜ 0. 01 ), myocardial ultrastructures were significantly destroyed and the expression levels of NOX2, iNOS, eNOS mRNA and protein were significantly increased after 60-min reperfusion (0. 1590 ±0.0539, 0.0897 ±0.0236, 0.0154 ±0.0061 vs 0.0247 ±0.0070, 0.0377 ±0. 0135, 0. 0091 ± 0. 0033, P ＜ 0. 05 ) in I/R group. As compared with I/R group, hemodynamic parameters were significantly recovered (45.77 ± 8.05, - 42. 10 ± 8. 71, P ＜ 0. 01 ), myocardial ultrastructures were well protected and the expression levels of NOX2, iNOS, eNOS were significantly decreased (0. 0864± 0. 0358, 0. 0445 ± 0. 0104, 0. 0085 ± 0. 0032, P ＜ 0. 05 ) in I/R + Que group, but there was no significant difference between control group and control + Que group ( P ＞ 0. 05 ). Conclusion Que can protect isolated perfused rat hearts from IRI by its antioxidative effect.     

肾移植患者血清中可溶性B7-H3水平的变化及其临床意义

目的 检测肾移植患者移植前后血清中可溶性B7-H3(sB7-H3)水平变化,并探讨其临床意义.方法 34例肾移植患者于移植前及移植后3、6、12个月采集外周血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中的sB7-H3,取11例健康志愿者为正常对照.用Luminex检测人白细胞抗原(HLA)和主要组织相容性Ⅰ类相关链A位点(MICA)抗体并分为术前抗体阳性组及阴性组.随访组根据术后1年内基本情况分为肾功能稳定组和不稳定组.结果 肾移植组术前血清sB7-H3水平[(27.10±13.61)μg/L,n=34]高于正常对照组[(11.61±3.77)μg/L,n=11],两组比较差异有统计学意义(P＜0.01),且术前抗体阳性组血清sB7-H3水平高于阴性组[(34.96±17.37)μg/L,n=11比(23.34±9.75)μg/L,n=23,P＜0.05].肾移植术后肾功能稳定组各时间点血清sB7-H3水平与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),肾功能不稳定组未排斥时血清sB7-H3和肌酐(Cr)水平与正常对照组比较差异亦无统计学意义(P＞0.05),而排斥时其血清sB7-H3水平[(20.63±4.28)μg/L,n=12;(18.95±2.98)μg/L,n=6;(28.36±19.83)μg/L,n=10]和Cr均明显升高,与肾功能稳定组及正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 慢性肾炎患者血清sB7-H3水平增高,且术前抗体阳性组增高更明显;肾移植术后血清sB7-H3水平与肾功能变化一致.术后监测sB7-H3动态变化,可间接了解患者机体免疫状态,对肾移植术后的疗效观察和预后判断有参考价值.

Abstract：

Objective To detect the serum soluble B7-H3 (sB7-H3) in patients before and after renal transplantation, and to investigate the clinical significance. Methods The serum level of sB7-H3 in 34 patients were determined before and 3, 6, 12 months after renal transplantation. Besides, 11 health adults were elected as controls. These 34 patients were divided into two groups according to HLA and/or MICA antibodies using Luminex before operation. After transplantation, all the patients were divided into two groups according to their conditions; group Ⅰ with rejection; group S with stable renal function and no rejection. Results The serum level of sB7-H3 in all 34 patients before operation was significantly higher than health controls [(27. 10 ± 13. 61) μg/L,n = 34 vs (11.61 ±3.77) μg/L,n = 11 ,P ＜0. 01], and significantly higher in patients with antibodies than in those without before operation [(34. 96 ± 17. 37) (μ/L, n = 11 vs (23. 34 ± 9. 75) (μg/L, n = 23, P ＜ 0. 05]. There was no significant difference in the serum level of sB7-H3 between control group and S group after operation (P ＞0. 05). In group Ⅰ, the serum level of sB7-H3 was increased obviously when rejection occurred [(20. 63 ±4. 28) μg/L,n = 12; (18. 95 ±2.98) μg/L,n=6; (28.36 ±19. 83) μg/L,n = 10] , as compared with group S and control group (P＜0. 01), while at the time without rejection, there was no difference among them (P ＞0. 05). Conclusion Monitoring serum sB7-H3 after renal transplantation would be clinically useful in indicating therapeutic effect and outcome of the patients.     

电穿孔介导的基因治疗对兔下颌骨牵引过程中细胞周期蛋白表达的影响

目的 探索电穿孔介导的基因治疗对兔下颌骨牵引成骨过程中细胞周期调节蛋白表达的影响。方法 45只新西兰大白兔,双侧下颌骨截骨后3d开始以0.8 mm/d速度行下颌骨牵引,连续牵引7d后,随机分为A、B、C、D、E5组,每组9只,分别在牵引区注射2μg（0.1 μg/μ1）重组质粒plRES-hVEGF165-hBMP2、pIRES-hBMP2、plRES-hVEGF165、空质粒pIRES和相同剂量的生理盐水后,均施加电穿孔刺激。各组分别于固定期第7、14、28天处死动物取材,行免疫组织化学检查细胞周期蛋白Cyclins A、D1、E的表达情况,并利用CMIAS-2001A病理图像分析系统分析,结果采用单因素方差分析和q检验。结果 Cyclin A、D1、E主要在肉芽组织中的炎性细胞如单核细胞、成纤维细胞及少量沿牵张方向排列的新生幼稚骨小梁表面的成骨细胞、骨细胞和骨周围结缔组织中表达;固定7d时表达最强烈,14 d下降,28 d时表达较弱。图像分析结果显示,固定7d时C组阳性表达蛋白的吸光度A值(0.59 +0.14)表达较强,与A(0.41±0.13)、B(0.38 +0.14)、D(0.34±0.12)、E(0.31 +0.10)组比较差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);A、B组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),但与D、E组比较差异有统计学意义(P＜0.05);固定14 d和28 d时,A(0.39±0.11)、B(0.34±0.10)、C(0.33 +0.09)组间比较差异无统计学意义(P＞0.05),但与D(0.19±0.12)、E(0.14 +0.04)组比较差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01)。各时相点基因治疗组明显强于对照组。结论 电穿孔介导的基因治疗能使细胞周期蛋白CyclinsA、D1、E在牵引区的表达增强、时限延长,可能促进细胞的分裂增殖与分化,促进牵引区细胞基质的形成和新骨生成。     

脂联素对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的探讨脂联素（adiponectin,ADPN）对高糖环境下大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）血管内皮生长因子（vascular endothelialgrowthfactor,VEGF）表达的影响。方法用含不同浓度葡萄糖的DMEM培养基体外培养NRK-52E细胞,随机分6组（每组5个样本,重复5次）：A组,含5．5mmol／L葡萄糖培养基对照组;B组,含5．5mmol／L葡萄糖＋甘露醇19．5mmol／L培养基组;C组,含25mmol／L葡萄糖培养基组;D组,含25mmol／L葡萄糖培养基＋脂联素1mg／L组：E组,含25mmol／L葡萄糖培养基＋脂联素2．5mg／L组;F组,含25mmol／L葡萄糖培养基＋脂联素5mc／L组,培养24h。以逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）检测VEGF的表达,免疫荧光检测不同浓度干预组VEGF蛋白的表达影响。结果A组细胞VEGFmRNA表达量为（0．367±0．028）;B组为（0．346±0．045）,与A组比较无统计学差异（P〉0．05）;C组为（0．692±0．053）,显著高于A组（P〈0．01）;D组为（0．562±0．049）,低于C组（P〈0．05）。E组为（0．381±0．035）,与A组相近,但无统计学差异（P〉0．05）;F组为（0．295±0．031）,低于A组（P〈0．01）。不同浓度脂联素各组间比较,有统计学差异（P〈0．05）。免疫荧光检测VEGF表达情况;B组与A组无差异;C组显著高于A组（P〈0．01）;D组低于C组（P〈0．05）。E组与A组相近,但无统计学差异（P〉0．05）;F组低于A组（P〈0．05）。不同浓度脂联素各组间比较有统计学差异（P〈0．05）。结论ADPN能通过减少肾小管上皮细胞VEGF的表达对肾小管间质起保护作用。     

雌激素诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞表型转分化的机制

目的探讨雌激素诱导皮肤成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的可能途径和调控机制。方法将人皮肤成纤维细胞分为6组：对照组（A组）、雌激素组（B组）、雌激素＋ICI-182780组（C组）、雌激素＋SB203580组（D组）、雌激素＋PD98059组（E组）和雌激素＋SP600125组（F组）。各组细胞经同步化处理后,直接以雌激素刺激或经上述各激酶抑制剂预处理后再以雌激素刺激。收集细胞,一部分以单细胞逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测α平滑肌肌动蛋白（alpha smooth muscleactin,（2-SMA）阳性表达百分比,另一部分细胞抽提总RNA后采用实时荧光定量RT—PCR检测α—SMA的表达水平变化。结果B组的α—SMA表达水平和阳性百分比与A组比较显著升高（P〈0．01）,而C组和F组与B组比较α—SMA表达水平和阳性百分比升高的作用则被显著抑制（P〈0．05）。结论在雌激素诱导成纤维细胞向肌成纤维细胞的转分化过程中,雌激素G受体及JNK—MAPK信号转导途径起到重要作用。     

慢性肾脏病患者骨代谢与尿蛋白量的关系

目的 研究慢性肾脏病（CKD）患者骨代谢状况与尿蛋白量的关系。 方法 随机挑选2008年1月至2009年5月在本院肾活检证实为原发性肾小球疾病的CKD患者71例为对象。按尿蛋白量分为3组：A组25例,尿蛋白量<1.0 g/24 h;B组16例,尿蛋白量 （1.0~<3.5） g/24 h;C组30例,尿蛋白量≥3.5 g/24 h。健康体检者58例为健康对照组。常规测定血清白蛋白、24 h尿蛋白量及血清钙、磷、PTH、25羟基维生素D3[25-(OH)D3]、骨钙素（BGP）、I型胶原吡啶交联C终端肽（CTx）及尿钙/肌酐（UCa/Cr）等骨代谢指标。双能X线骨密度仪检测患者骨密度（BMD）。对各因素间进行Pearson相关分析。 结果 与健康对照组比较,A、B、C组CKD患者血钙分别为（2.23±0.08）、（2.13±0.09）、（2.04±0.06）比 （2.37±0.12） mmol/L;血25-（OH）D3分别为（50.19±6.58）、（47.78±6.69）、（42.42±10.85）比（56.34±8.34） nmol/L（均P < 0.05）;而UCa/Cr显著升高,分别为0.25±0.11、0.34±0.13、0.41±0.05比0.14±0.06（均P < 0.05）。B、C组血BGP分别为（18.69±7.35）、（16.13±5.76） μg/L,显著低于健康对照组的（22.88±6.21） μg/L;血CTx分别为（413.59±114.93）、（516.21±314.25） ng/L,显著高于健康对照组的（304.53±234.15） ng/L（均P < 0.05）。A、B两组BMD与健康对照组差异无统计学意义;C组BMD显著低于健康对照组[（1.028±0.090）比（1.090±0.062） g/cm2,P < 0.05]。Pearson相关分析显示,24 h尿蛋白量与血钙、血 25-(OH)D3呈负相关,与UCa/Cr 呈正相关;UCa/Cr与血CTx 呈正相关,与血BGP呈负相关;25-(OH)D3与BGP呈正相关,与CTx呈负相关。 结论 原发性肾小球疾病CKD患者的骨代谢异常主要表现为骨形成降低,骨吸收增加,其变化与蛋白尿程度相关,而大量尿蛋白患者骨代谢显著异常。     

饱和氢盐水对大鼠下肢缺血再灌注及远隔肺组织损伤的保护作用

目的 观察饱和氢盐水对大鼠下肢组织缺血再灌注及远隔肺组织损伤的保护作用.方法 将30只健康SD雄性大鼠随机分为3组:假手术组(S组)、生理盐水组(C组)、氢水治疗组(H组).建立大鼠下肢缺血再灌注损伤模型(阻断腹主动脉4 h,再灌注4 h),在再灌注前10min分别注入饱和氢盐水1 ml/100 g(H组),生理盐水1 ml/100 g(C组).再灌注4 h后比较肺及腓肠肌湿/干重(W/D)比值、观察病理切片的改变,测定血清、肺及腓肠肌组织中丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6含量变化.结果 H组肌(4.04±0.22)、肺(4.47±0.23)组织湿/干重比低于C组肌(4.67±0.27),肺(4.67±0.27)、组织(P＜0.05),MDA、TNF-α及IL-6血浆[分别为(2.08±1.27)μmol/L、(528.22±221.17)、(41.14±13.01)ng/L]及组织[肺组织分别为(3.58±1.62)μmol/L、(1.17±0.15)、(0.79±0.29)ng/L;肌组织分别为(8.91±3.13)μmol/L、(3.13±0.41)、(3.07±1.69)ng/L)含量均低于C组(P＜0.05),腓肠肌及肺病理学损害明显减轻,与S组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 缺血再灌注前输注饱和氢盐水可有效保护大鼠下肢缺血再灌注及远隔肺组织的损伤.

Abstract：

Objective To explore the protective effects of hydrogen-rich saline against hind limb ischemia reperfusion injury and associated remote lung injury in rats. Methods Thirty Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups: sham group ( group S) ; saline control group (group C) , undergoing intravenous infusion of saline (1 ml/100 g) at 10 min before reperfusion; hydrogen-treated group ( group H) , undergoing intravenous infusion of hydrogen-rich saline (1 ml/100 g) at 10 min before reperfusion. Hind limb ischemia reperfusion model was established by 4 h of the abdominal aorta ligation followed by a 4 h of reperfusion. Rats were killed at the end of reperfusion, and blood samples were collected for determination of serum levels of tumor necrosis factor-α ( TNF-α) , interleukin-6 (IL-6) and malonyldialdehyde ( MDA). Specimens of lung and gastrocnemius muscle were collected for measurement of wet-todry weight (W/D) ratio, light microscopic examination and detection of plasma TNF-α, IL-6 and MDA.Results The pathological changes were milder in group H than in group C. The lung (4. 47 ±0. 23) and gastrocnemius muscle (4. 04 ±0. 22) W/D ratio in group H was significantly lower than in group C (4. 67 ±0.27 vs4. 67 ±0.27, P＜0.05). The serum [(2.08 ± 1. 27) μmol/L, (528. 22 ±221. 17) , (41.14± 13. 01) ng/L, respectively] and homogenate levels [(3. 58 ± 1. 62) μmol/L, ( 1. 17 ±0. 15) , (0. 79±0.29) ng/L in the lung; (8.91 ±3. 13) μmol/L, (3. 13 ±0. 41) ,(3. 07 ± 1. 69) ng/L in the gastrocnemius muscle, respectively] of MDA, IL-6 and TNF-a were also significantly lower in group H than in group C (P ＜0. 05) , but there was no significant difference from group S. Conclusion Infusion of hydrogen-rich saline before reperfsion significantly alleviates the hind limb ischemia reperfusion injury and associated remote lung injury.     

右美托咪啶对腹腔镜胆囊切除术全麻效果的影响

目的 探讨预先注射小剂量右美托咪啶( dexmedetomidine,Dex)对腹腔镜胆囊切除术(laparoscopic cholecystectomy,LC)患者全麻效果的影响.方法 择期行LC患者50例,ASA Ⅰ ～Ⅱ级,年龄21岁～57岁,体重42.5 kg～80 kg,按随机数字表法分为生理盐水组(C组)和...