缺氧诱导因子-1α小干扰RNA联合顺铂诱导人食管鳞癌细胞凋亡

目的 观察缺氧诱导因子(HIF)-1α小干扰RNA联合顺铂(DDP)对人食管鳞癌TE-1细胞凋亡的影响.方法 人工合成HIF-1α小干扰RNA,体外培养人食管鳞癌TE-1细胞分为4组:A组用生理盐水处理,B组用DDP处理,C组用小干扰RNA处理,D组用小干扰RNA和DDP协同处理;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测HIF-1α mRNA的表达,Western blot法检测HIF-1α蛋白的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 RT-PCR法检测A、B、C和D组细胞的HIF1α mRNA表达分别为(0.5325±0.0809)、(0.5003±0.0726)、(0.0986±0.0171)和(0.0849±0.0133),Western blot法检测HIF-1α蛋白表达分别为(0.7280±0.0268)、(0.7115±0.1293)、(0.2362±0.0266)和(0.1917±0.0234),其中D组与A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.01),与C组比较差异无统计学意义(P>0.05);A、B、C和D组的细胞凋亡率分别为(3.23±0.61)%、(29.88±3.48)%、(34.48±5.69)%、(56.37±7.99)%,其中D组与其他3组比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论 HIF-1α小干扰RNA能够提高DDP的细胞毒性作用,两者联合能有效促进人食管鳞癌TE-1细胞的凋亡,显著提高化疗效果.     

广西肝癌高发区氧化性DNA损伤与修复酶hOGG1的表达和多态性关系的研究

目的研究广西肝癌高发区未成年人的氧化性DNA损伤情况。方法采用流式细胞技术检测外周血白细胞DNA7，8-dihydro-8-oxoGuanine（8-oxoG）及其修复酶hOGG，的水平，采用PCR—SSCP技术检测hOGG1-Cys^326Ser多态性。结果8-oxoG与hOGG1表达水平高度相关（0．48〈r〈0．88，P〈0．001）。高发区肝癌户未成年人（n=21）与对照（n=63）相比，hOGG1表达水平较高（P〈0．01）但8-oxoG水平较低（P〈0．05）。城市对照被动吸烟者hOGG1表达水平较高（P〈0．05）。8-oxoG和hOGG1水平与体重指数负相关；hOGG1与年龄正相关。在12岁附近有-8-oxoG水平峰。hOGG1^324Ser携带者较hOGG1^326Cys携带者8-oxoG水平高。结论人群模型的氧化性DNA损伤研究，可从新的角度为了解环境一基因相互作用提供资料。     

食管癌细胞MUC1过表达对5-氟尿嘧啶及顺铂化疗效果的影响

目的探讨食管癌细胞MUC1过表达对5-氟尿嘧啶及顺铂化疗效果的影响。方法构建MUC1过表达及稳定沉默食管癌细胞株,建立食管癌细胞裸鼠移植瘤模型;顺铂（8mg／kg,d1,d7）及5-氟尿嘧啶（20mg／kg,d1～d6）腹腔注射,测量肿瘤体积及裸鼠体重,绘制生长曲线及体重曲线;计算肿瘤抑瘤率。结果顺铂与5-氟尿嘧啶均能抑制MUC1过表达食管癌移植瘤的生长,裸鼠体重及肿瘤体积与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,且顺铂的抑制效应更明显（P〈0．05）;在MUC1稳定沉默裸鼠无明显的抑制效应。结论顺铂与5-氟尿嘧啶都能抑制MUC1过表达食管癌移植瘤的生长,顺铂的抑制效应更明显,同时对体重的影响也更明显。     

腺病毒介导LRIG1过表达联合顺铂对膀胱癌细胞株EJ的抑制作用

目的 观察腺病毒介导的LRIG1过表达是否能增强顺铂对膀胱癌细胞株EJ的损伤作用.方法 构建重组腺病毒载体包装pLRIG1-GFP质粒,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法鉴定其是否能在膀胱癌细胞株EJ中上调LRIG1表达,并下调表皮生长因子(EGFR)的表达水平.通过采用单细胞凝胶电泳实验、流式细胞技术、免疫细胞化学染色及Matrigel侵袭实验,对比对照组、顺铂单药组、顺铂联合腺病毒载体组和顺铂联合腺病毒介导的LRIG1过表达组间细胞DNA损伤,细胞凋亡、增殖及侵袭能力.结果与对照组比较,顺铂在联合腺病毒介导的LRIG1过表达后,能下调细胞EGFR表达水平,同时显著增强肿瘤细胞DNA损伤程度(OTM值,对照组:2.54±0.54;CDDP组:4.57±0.79;CDDP/Ad-GFP组:5.38±1.16;CDDP/Ad-LRIG1组:9.45±2.64);引起细胞周期抑制[S期抑制,对照组:(40.82±2.11)%;CDDP组:(37.31±1.12)%,CDDP/Ad-GFP组:(37.57±2.52)%,CDDP/Ad-LRIG1组:(55.04±4.28)%];诱导细胞凋亡[细胞凋亡率,对照组:(2.63±2.49)%,CDDP组(3.49±1.94)%,CDDP/Ad-GFP组:(3.96±4.68)%,CDDP/Ad-LRIG1组:(12.56±0.77)%];抑制细胞增殖[细胞计数,对照组:(371.33±16.17)个;CDDP组:(224.67±88.06)个;CDDP/Ad-GFP组:(176.33±69.79)个;CDDP/Ad-LRIG1组:(138.33±8.39)个]并逆转细胞侵袭性[细胞侵袭数量,对照组:(259.40±9.21)个;CDDP组:(175.00±25.78)个;CDDP/Ad-GFP组:(157.20±22.79)个;CDDP/Ad-LRIG1组:(114.20±25.11)个].结论 腺病毒介导LRIG1过表达能增强顺铂对膀胱肿瘤细胞株EJ的损伤作用.     

CircNRIP1调节miR-193b-3p/STMN1轴对胃癌细胞顺铂耐药性的影响

目的：探究CircNRIP1调节miR-193b-3p/STMN1轴对胃癌细胞AGS顺铂（DDP）耐药的影响。方法：培养AGS与AGS/DDP细胞,比较两种细胞增殖抑制率以及CircNRIP1、mi R-193b-3p、STMN1表达情况;将AGS/DDP细胞分为AGS/DDP组、sh NC组、sh CircNRIP1组、sh CircNRIP1+inhibitor NC组、sh CircNRIP1+mi R-193b-3p inhibitor组,测定各组AGS/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率、侵袭能力以及STMN1蛋白水平;测定mi R-193b-3p与CircNRIP1、STMN1靶向关系。结果：与AGS细胞比较,AGS/DDP细胞CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白水平升高,细胞增殖抑制率、miR-193b-3p降低（P<0.05）;与AGS/DDP组相比,sh CircNRIP1组细胞增殖抑制率、凋亡率、mi R-193b-3p升高,侵袭细胞数、CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白减少（P<0.05）;与sh CircNRIP1组相比,sh C...     

顺铂对肝细胞癌Hep3B细胞程序性死亡配体1表达及药物敏感性的研究

目的 探讨顺铂对肝细胞癌Hep3B细胞程序性死亡配体1(PD-L1)表达以及PD-L1对顺铂敏感性的影响。方法 使用不同浓度的顺铂（0、5、10、20 mg/L）处理Hep3B细胞,利用q PCR、Western blotting法检测细胞中PD-L1的表达情况。设置对照组（加入PBS）、顺铂组（5 mg/L）、MK2206组（AKT抑制剂,5μmol/L）和顺铂+MK2206组（5 mg/L顺铂处理前1 h给予5μmol/L MK2206）,分别干预Hep3B细胞,Western blotting检测AKT、p-AKT和PD-L1的表达情况。si RNA-PD-L1转染Hep3B细胞,Western blotting检测PD-L1和上皮-间质转化标志物（E-cadherin和N-cadherin）表达变化,CCK-8、细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞功能变化。结果 顺铂可上调Hep3B细胞中PD-L1的蛋白表达水平（P<0.05）。与对照组相比,5 mg/L的顺铂显著促进Hep3B细胞中PD-L1的m RNA水平（P<0.05）。MK2206可抑制顺铂对p-A...     

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1表达对前列腺癌细胞顺铂耐药性的影响

探讨多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)表达对前列腺癌细胞顺铂（DDP）耐药性的影响。方法 采用转染PARP-1 siRNA抑制前列腺癌细胞中PARP-1的表达,RT-PCR和Western blot检测细胞中PARP-1以及凋亡信号通路相关蛋白的表达差异,CCK-8检测耐药指数,计算DDP IC50。结果 PARP-1蛋白在耐药细胞PC-3/DDP中的表达量明显高于亲本细胞PC-3,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。下调PARP-1表达可增强前列腺癌细胞的DDP敏感性,逆转耐药细胞的耐药性。信号通路相关蛋白Bcl-2和pERK显著下调。结论 PARP-1在前列腺癌细胞表达水平与细胞对DDP耐药性密切相关,PARP-1表达抑制可以增强DDP对前列腺癌细胞的敏感性,其分子机制可能是通过激活凋亡通路抑制ERK磷酸化。     

肝硬变肝组织H1和H2受体的实验与临床研究

目的：了解肝硬变大鼠和病人肝组织中H1和H2受体的变化。方法：光学放射自显影术。结果：大鼠肝组织受体密度（每1000μm^2银粒计）正常／肝硬化H1受体：肝细胞346±32／117±18（P＜0．01）；肝静脉277±18／27±5（P＜0．01）。肝动脉31±7／12±3（P＜0．05）；门静脉25±11／16±4（P＜0．05）；H2受体：肝细胞289±21／168±24（P＜0．01）；肝动脉235±29／154±25（P＜0．05）；门静脉230±28／148±18（P＜0．05）；肝静脉261±36／141±18（P＜0．01）。病人对照组／肝硬化H1受体：肝细胞69±19／63±15（P＞0．05）；肝动脉41±7／35±5（P＞0．05）；门静脉39±5／34±7（P＞0．05）；肝静脉36±8／35±5（P＞0．05）。H2受体：肝细胞512±38／168±23（P＜0．01）；肝动脉175±26／56±17（P＜0．01）；门静脉166±18／52±15（P＜0．01）；肝静脉313±2／239±41（P＜0．01）。结论：大鼠以H1受体占优势，人以H2受体为主；肝硬化大鼠及病人肝组织的H1、H2受体明显低于对照组。     

9-顺-维A酸对肺鳞癌细胞株A2细胞周期、凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨9-顺-维 A酸(9-cis RA)对肺鳞癌细胞株A2细胞周期影响和诱导凋亡作用并检测细胞周期相关基因 Cyclin D1、Rb的表达,探讨9-cis RA的抗癌作用机制。方法 体外培养 A2细胞,随机分为两组,实验组加入 9-cis RA使其终浓度为 5μmol/L,对照组加入二甲亚砜使其终浓度为 0.1％,两个组别均按 0、12、24、36、48、72 h共 6个时相培养,用流式细胞仪技术分别检测肿瘤细胞G0/G1期比率、S期比率及凋亡发生率,同时检测Cyclin D1、Rb基因表达率,作对比研究。结果 9-cis RA作用于肺癌细胞 A2后 G0/G1期细胞比率增高,S期细胞比率下降。9-cis RA作用于 A2细胞后凋亡发生率明显升高,Rb基因表达增强,Cyclin D1基因表达受抑制,在 48 h时药物作用达最高峰。凋亡发生率与Rb基因表达呈正相关(r=0.647,p<0.05),与Cyclin D1基因表达呈负相关(r=-0.723,P<0.05)。结论 9-cis RA可能通过激活 Rb基因表达和抑制 Cyclin D1基因表达途径使肺癌细胞明显阻滞在 G0/G1期,抑制肺癌细胞增殖。9-cis RA可明显诱导肺癌细胞调亡,Rb和Cycin D1基因同样在其中发挥着重要作用。     

顺铂联合胞嘧啶脱氨酶自杀基因对直肠癌细胞杀伤作用的研究

目的探讨顺铂联合胞嘧啶脱氨酶(CD)自杀基因对直肠腺癌细胞8348的杀伤作用。方法以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,观察在顺铂作用下GFP基因对8348细胞的转染效率;用克隆形成试验观察顺铂对CD基因转染效率的影响;同时用四甲基偶氮唑盐(MTT)试验检测顺铂联合CD/5-氟胞嘧啶(5-FC)对8348细胞的杀伤作用。结果顺铂提高质粒对8348细胞的转染效率26倍。对腺癌细胞的杀伤效率:单纯转染CD基因组为14.9%;IC50的氟尿嘧啶(5-FU)联合CD基因组为54.9%;IC50的顺铂联合CD基因组为88.5%,与其他两组相比,对癌细胞杀伤效率明显增强(P<0.01)。结论顺铂联合CD自杀基因能更有效地杀伤直肠腺癌细胞,可成为治疗直肠癌术后复发及转移的一种有效的方法。     

H2-B1基因转染小鼠内皮细胞对其免疫原性的影响

目的 转染pEGFP-N1-H2B1质粒载体至小鼠血管内皮细胞(VEC),观察导入H2-B1基因后VEC免疫原性的变化,探讨借鉴母胎免疫耐受模型诱导心脏移植术后免疫耐受的机制.方法 以未处理的VEC为对照,采用流式细胞仪和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别于转染H2-B1基因后24、48、72 h检测质粒转染效率以及H2-B1基因的mRNA相对表达量;将同源小鼠外周血单个核细胞(PBMC)和VEC按100:1和10:1两种不同效靶比混合,观察PBMC对靶细胞杀伤活性的变化.结果 H2-B1基因组H2-B1基因在VEC中的mRNA表达量明显高于对照组(0.5mg/L组,P<0.05;1.0 mg/L组,P<0.01).H2-B1基因转染48 h后,当效靶比为100:1时,与对照组细胞毒性14.29%比较,0.5 mg/L基因组细胞毒性为4.28%,提示转染H2-B1基因组PBMC对VEC的毒性作用明显降低(P<0.05).结论 H2-B1基因可能具有免疫调节功能,可降低VEC的免疫原性,抑制PBMC对VEC的杀伤活性,诱导免疫耐受.     

H2-B1基因转染小鼠内皮细胞对其免疫原性的影响

目的 转染pEGFP-N1-H2B1质粒载体至小鼠血管内皮细胞(VEC),观察导入H2-B1基因后VEC免疫原性的变化,探讨借鉴母胎免疫耐受模型诱导心脏移植术后免疫耐受的机制.方法 以未处理的VEC为对照,采用流式细胞仪和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别于转染H2-B1基因后24、48、72 h检测质粒转染效率以及H2-B1基因的mRNA相对表达量;将同源小鼠外周血单个核细胞(PBMC)和VEC按100:1和10:1两种不同效靶比混合,观察PBMC对靶细胞杀伤活性的变化.结果 H2-B1基因组H2-B1基因在VEC中的mRNA表达量明显高于对照组(0.5mg/L组,P<0.05;1.0 mg/L组,P<0.01).H2-B1基因转染48 h后,当效靶比为100:1时,与对照组细胞毒性14.29%比较,0.5 mg/L基因组细胞毒性为4.28%,提示转染H2-B1基因组PBMC对VEC的毒性作用明显降低(P<0.05).结论 H2-B1基因可能具有免疫调节功能,可降低VEC的免疫原性,抑制PBMC对VEC的杀伤活性,诱导免疫耐受.     

食管癌患者肿瘤组织及外周血中上皮细胞钙黏蛋白及Ras相关区域家族1A基因甲基化的研究

目的 探讨血浆上皮细胞钙黏蛋白( CDH1)基因及Ras相关区域家族1A基因( RASSF1A)甲基化对食管癌手术彻底程度的参考价值及其与食管癌临床病理特征的关系.方法 应用Real-time甲基化特异性聚合酶联反应技术(MSP)技术对76例食管鳞癌患者肿瘤组织、配对的癌旁正常组织、术前、术中及术后外周血游离DNA中CDH1及RASSF1A基因的甲基化状态进行检测.结果 CDH1及RASSF1A甲基化率在食管癌肿瘤组织中分别是72.37％、55.26％;在血浆中分别是63.16％、50.00％,且与病理分期、淋巴结转移及神经脉管浸润显著相关(P值均＜0.01);术前、术中、术后血浆中DNA甲基化发生率呈现先升后降的变化趋势.结论 食管鳞癌患者外周血游离DNA中CDH1及RASSF1A甲基化可反映机体的荷瘤状态,并可作为食管鳞癌手术彻底程度的标志物.     

白藜芦醇对自然衰老小鼠H2O2含量和ATP酶活力影响的实验研究

目的：研究白藜芦醇是否对自然衰老小鼠的老化具有延缓作用。方法：健康4月龄昆明种小鼠12只,作为青年组对照组（A）;健康18月龄昆明种小鼠60只,随机分为五组：老年空白对照组（B）,老年阳性对照组（C）,老年绞股蓝皂苷对照组（D）,老年白藜芦醇高剂量组（E）,老年白藜芦醇低剂量组（F）,以灌胃方式给药,用生化分析方法测定过氧化氢（H2O2）含量和三磷酸腺苷（adenosine—triphosphate,ATP）酶活力。结果：与青年对照纽比较,其余五个老年纽小鼠血清中H2O2含量均增高,皮肤组织中ATP酶的活力均明显减弱。结论：白藜芦醇对自然衰老小鼠的老化具有延缓作用。     

CyclinD1蛋白在T2-3N0M0期食管癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨CyclinDl蛋白在T2-3N0M0期食管鳞状细胞癌（食管鳞癌）组织中的表达及其与预后的关系。方法用免疫组织化学染色方法检测227例T2-3N0M0期食管癌组织中CyclinD1蛋白的表达,应用受试者工作（receiveroperatingcharacteristic,ROC）曲线确定CyclinD1免疫组织化学高表达和低表达的分界点,分析CyclinD1表达与食管癌临床病理因素和预后之间的关系。结果CyclinD1在食管癌组织中低表达90例（39．6％）,高表达137例（60．4％）。CyclinDl蛋白的表达与性别（P=-0．298）、年龄（P=O．525）、肿瘤位置（P=0．570）、肿瘤长度（P=-0．056）、分化程度（P=0．713）和浸润深度（P=0．557）无明显相关性,但CyclinD1低表达组与cyclinD1高表达组的预后差异有统计学意义（3年生存率：51．1％VS．43．8％;5年生存率：43．3％VS．30．7％;P=-0．047）。Cox风险比例模型分析显示CyclinD1不是T2-3N0M0期食管癌独立预后因素（艘值=1．378,95％CI：0．990—1．919,P=-0．057）。结论CyclinD1过表达可能是影响T2-3N0M0期食管癌不良预后的因素。     

乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1在食管鳞癌血清和组织中的表达及临床意义

目的 探讨乳腺癌抗雌激素药物耐药蛋白1( BCAR1)在食管鳞癌血清和组织中的表达及临床意义.方法 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测2010年2月至2011年1月间46例食管鳞癌患者和25例正常人血清BCAR1水平;应用组织芯片和免疫组织化学方法检测2004年2月至2006年7月间106例食管鳞癌和癌旁正常组织中BCAR1表达.结果 食管鳞癌组BCAR1血清水平显著高于正常对照组(P＜0.01);晚期食管鳞癌BCAR1血清水平显著高于早期食管鳞癌组和正常对照组(P＜0.01);切除肿瘤后,血清BCAR1水平有逐渐下降趋势.BCAR1蛋白在食管鳞癌组织中阳性率为97％( 103/106),癌旁正常食管组织中有16例弱阳性,阳性率为15％ (16/106),两者差异有统计学意义(P＜0.01);BCAR1阳性表达与食管鳞癌的分化明显相关(P＜0.05),与年龄、性别、淋巴结转移、浸润深度和TNM分期明显无关(P＞0.05).生存分析提示BCAR1高表达组生存时间少于低表达组(P＜0.01);经COX模型多因素生存分析,显示BCAR1表达和淋巴结转移为独立预后因素.结论 食管鳞癌血清和组织中BCAR1水平显著高于正常对照组,并与疾病进展、治疗效果、分化程度和预后相关,可作为食管鳞癌诊断和判断预后重要新的肿瘤分子标记.     

食管鳞癌遗传易感性与基质金属蛋白酶-1基因多态性的关系

目的 探讨基质金属蛋白酶-1(MMP-1)基因多态性与食管鳞癌发病风险的关系.方法 运用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析方法检测450对病例与对照中MMP-1的1G/2G基因多态性.结果 与1G等位基因携带者(包括1G/1G及1G/2G基因型)比较,2G/2G基因型携带者与食管鳞癌显著相关[OR=1.39;95%可信区间(CI):1.06～1.81].此外,食管鳞癌的发病风险在吸炳者及女性中更加显著,其OR及95%CI分别为1.59(1.09～2.31)及1.76(1.05～2.97).结论 MMP-1基因多态性可能在食管鳞癌的发生过程中起到一定作用.

Abstract：

Objective Our study aimed to test the association between the matrix metalloproteinase-1 ( MMP-1) polymorphism and risk of esophageal squamous cell carcinoma ( ESCC ) . Methods We determined the MMP-1 polymorphism in 450 ESCC cases and 450 frequency-matched controls by polymerase chain reaction-based restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP). Results We found evidence for a significant association between the 2G/2G genotype and ESCC risk compared with 1G allele,including 1G/1G genotype and 1G/2G genotype [OR = 1. 39;95% confidence interval (CI), 1. 06-1. 81].Furthermore,the increased risk was found to be in smokers (OR,1. 59;95% CI, 1. 09-2. 31) and in female (OR, 1.76;95% CI, 1.05-2. 97). Conclusion Our study suggests that the MMP-1 promoter polymorphism may play a role in the etiology of ESCC.     

H2-B1基因转染小鼠内皮细胞对其免疫原性的影响

目的 转染pEGFP-N1-H2B1质粒载体至小鼠血管内皮细胞(VEC),观察导入H2-B1基因后VEC免疫原性的变化,探讨借鉴母胎免疫耐受模型诱导心脏移植术后免疫耐受的机制.方法 以未处理的VEC为对照,采用流式细胞仪和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术分别于转染H2-B1基因后24、48、72 h检测质粒转染效率以及H2-B1基因的mRNA相对表达量;将同源小鼠外周血单个核细胞(PBMC)和VEC按100:1和10:1两种不同效靶比混合,观察PBMC对靶细胞杀伤活性的变化.结果 H2-B1基因组H2-B1基因在VEC中的mRNA表达量明显高于对照组(0.5mg/L组,P<0.05;1.0 mg/L组,P<0.01).H2-B1基因转染48 h后,当效靶比为100:1时,与对照组细胞毒性14.29%比较,0.5 mg/L基因组细胞毒性为4.28%,提示转染H2-B1基因组PBMC对VEC的毒性作用明显降低(P<0.05).结论 H2-B1基因可能具有免疫调节功能,可降低VEC的免疫原性,抑制PBMC对VEC的杀伤活性,诱导免疫耐受.