17AAG对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及其作用机制研究

目的：探讨苯醌类安沙霉素药物17AAG对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其作用机制。方法17AAG作用于胃癌细胞SGC7901后,应用MTT法检测细胞增殖能力的变化;应用流式细胞术检测细胞周期的改变;应用流式细胞术和PI/Annexin Ⅴ双染色法检测细胞凋亡情况;应用Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化;应用Western blot法检测热休克蛋白（HSP90和HSP70）及其客户蛋白（c-met和AKT）表达的改变。结果17AAG作用后,胃癌细胞SGC7901生长明显受抑,且该抑制作用呈剂量和时间依赖性;细胞周期被阻滞于G0/G1期;与空白对照组和DMSO对照组比较,17AAG处理组细胞凋亡率显著升高（P＜0．01）;侵袭能力显著下降（P＜0．01）。17AAG可上调HSP70的表达,下调HSP90客户蛋白c-met和AKT的表达,但HSP90表达无明显变化。结论17AAG对胃癌细胞SGC7901具有抑制增殖、诱导凋亡和降低侵袭能力的作用,该作用并不是通过其靶点HSP90,而是通过下调HSP90客户蛋白的表达而实现的。     

17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素对胆管癌细胞株QBC939生长周期及凋亡的影响

目的 观察热休克蛋白90(HSP 90)抑制剂17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)对胆管癌细胞生长的影响.方法 应用噻唑蓝(MTT)比色法观察17-AAG对胆管癌细胞系QBC939细胞的生长抑制作用;用流式细胞术分析细胞凋亡及细胞周期变化;瑞特吉姆染色法观察细胞形态学;细胞免疫组织化学检测药物处理前后QBC939细胞CDK1和C-e-rbB2的表达变化.结果 17-AAG呈时间、剂量依赖性抑制QBC939细胞,48 h半数抑制浓度(IC50)为1.0umol/L;经17-AAG作用36 h后细胞阻滞于G2期从(11.90±0.78)%上升到(40.33±0.91)%,伴有S期细胞减少;17-AAG处理48 h后早期凋亡明显增加;同时17-AAG处理后的CDK1和C-erbB-2的表达明显减少.结论 HSP90抑制剂17-AAG通过抑制HSP90的分子伴侣功能,下调CDK1和C-erbB2表达,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡和周期阻滞.     

槲皮素通过抑制己糖激酶抑制肝癌HepG2细胞的增殖及促进其凋亡

目的 观察槲皮素对HepG2细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制.方法 选用槲皮素12.5、25.0、50.0、100.0、200.0 μmol/L为实验浓度梯度,采用噻唑蓝(MTT)比色法及流式细胞检测技术检测人肝癌HepG2细胞对槲皮素的敏感性;应用免疫细胞化学及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测细胞中已糖激酶蛋白及mRNA的表达.结果 槲皮素对肝癌HepG2细胞的增殖呈浓度依赖性的抑制作用,以上各浓度抑制率分别为10.1％、20.4％、35.6％、59.8％、70.2％;诱导细胞凋亡率分别为9.7％、15.2％、22.6％、31.7％、42.3％:100 μmol/L槲皮素作用HepG2细胞48 h前后已糖激酶蛋白表达的灰度值分别为128.33±13.27、193.18±12.36;与β-肌动蛋白(β-actin)mRNA表达的吸光度(A)值分别为0.3747±0.1356、0.2058±0.1172.结论 槲皮素对肝癌HepG2细胞具有生长抑制作用,并通过抑制己精激酶的表达来促进细胞凋亡.     

17β-雌二醇联合5-氮胞苷上调前列腺癌22RV1细胞p75NTR表达并促进凋亡的研究

目的 探讨17β-雌二醇(E2)联合DNA去甲基化试剂5-氮胞苷(5-AzaC)对雄激素非依赖性前列腺癌22RV1细胞生长抑制和凋亡的影响及作用机制. 方法 应用17β-E2和/或5-AzaC 处理前列腺癌22RV1细胞,并检测细胞生长抑制率、凋亡率以及雌激素受体2(ESR2)和p75神经生长因子受体(p75NTR)的表达情况. 结果 17β-E2或5-AzaC呈时间及浓度依赖性抑制22RV1细胞增殖,17β-E2和5-AzaC 48 h IC50分别是0.2 μmol/L和4.0 μmol/L.17β-E2(0.2 μmol/L)+5-AzaC(4.0 μmol/L)对22RV1细胞的增殖抑制及凋亡表现出协同作用,17β-E2或5-AzaC均能上调ESR2和p75NTR的mRNA及蛋白的表达,且联合应用时效果更明显. 结论 联合应用 17β-E2和5-AzaC上调ESR2和p75NTR的表达可能是雄激素非依赖性前列腺癌治疗的一个潜在的治疗策略.     

蛋白激酶C-α反义核酸对人肝癌细胞HepG2体外增殖及凋亡的影响

目的　探讨蛋白激酶 (PK )C α反义寡核苷酸 (asODN)对人肝癌细胞HepG2体外增殖及凋亡的影响。方法　用RPMI 164 0体外培养和传代HepG2细胞 ,以脂质体 (LP)介导不同浓度PKC αasODN转染人肝癌细胞HepG2 ,四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法检测其生长指数 (GI) ,软琼脂克隆形成法检测其克隆形成率 ,流式细胞术 (FCM )检测其凋亡率。结果　 0 .10～ 1.0 0 μmol/L的PKC αasODN能显著降低HepG2细胞GI(P <0 .0 5 ) ;0 .0 5～ 1.0 0 μmol/L的PKC αasODN能显著降低其软琼脂克隆形成率 (P <0 .0 1) ,两者均具有量效依赖关系。 0 .5 0～ 1.0 0 μmol/L的PKC αa sODN可使HepG2细胞发生显著凋亡 (P <0 .0 1)。结论　通过PKC αasODN阻断人肝癌细胞HepG2信号转导分子PKC α ,可有效抑制HepG2体外生长增殖 ,并可诱导其凋亡     

氯化钴诱导低氧环境对人肝癌HepG2细胞株的生长影响

目的 建立人肝癌HepG2细胞在氯化钴诱导的低氧环境下的生长模型,观察不同浓度氯化钴(CoCl2)诱导的低氧环境对人肝癌HepG2细胞的增殖、细胞的周期与凋亡即细胞的生长状况影响,探讨氯化钴诱导的低氧对人肝癌HepG2细胞生长的作用机制.方法 将对数期人肝癌细胞株HepG2细胞,分为加入不同浓度(50 μm/L、100 μm/L、150 μm/L、200 μm/L)氯化钴的实验组和加入等体积培养基的对照组,(1)通过MTT法检测HepG2细胞增殖情况计算细胞的抑制率并绘制HepG2细胞生长抑制曲线;(2)划痕实验观察HepG2细胞的迁移能力;(3)通过流式细胞仪的Annexin-VFITC/PI双染法和PI单染法检测细胞的凋亡和周期变化;(4)通过Western Blot法检测HepG2细胞的Bcl-2蛋白的表达.结果 (1)通过MTT法检测结果示在一定的时间和浓度范围内氯化钴抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,并呈时间-剂量依赖性关系.(2)划痕损伤实验说明:氯化钴抑制HepG2细胞的迁移及损伤修复能力,呈浓度依赖性关系.(3)流式细胞仪的检测结果显示:对照组、不同浓度(50 μm/L、100 μm/L、200 μm/L、300 μm/L、500 μm/L)的实验组的细胞凋亡率(％)分别是:3.42、7.74、13.07、20.56、28.53、44.45(P ＜0.05),与对照组相比实验组的凋亡率明显增加,并呈浓度依赖性.细胞的周期结果显示:随着浓度增加,氯化钴能明显抑制HepG2细胞周期的变化,阻滞细胞周期于G1期,从而抑制细胞的增殖.(4) Western Blot法检测:与对照组相比,经过不同浓度氯化钴处理后的实验组Bcl-2蛋白的表达明显减少.结论 在一定范围内,氯化钻诱导的低氧环境可以抑制人肝癌HepG2细胞的增殖以及愈合迁移的能力,诱导细胞凋亡并呈时间-剂量的依赖性关系,其作用机制可能与Bcl-2蛋白的表达减少有关.     

Aurora激酶抑制剂与BH3模拟剂协同诱导乳腺癌细胞凋亡

目的 观察VX-680联合ABT-737对乳腺癌细胞T47D凋亡的影响.方法 常规培养T47D细胞,用噻唑蓝(MTT)法检测VX-680联合ABT-737对乳腺癌细胞增殖的影响;Westen blot法检测凋亡指标;免疫荧光染色及流式细胞术观察多核现象;荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 MTT法检测结果显示,VX-680单独用药对细胞抑制作用不明显,半数抑制浓度(IC50)为( 25.457±1.406)mol/L,ABT-737明显降低了VX-680在T47D中的IC50 (0.277±0.057) μmol/L,AB-737增加VX-680的细胞抑制作用呈剂量关系;ABT737 单药对细胞抑制作用不明显,IC50为(0.959±0.018) μmol/L,VX.-680与ABT737联合对细胞的抑制作用明显增加,IC50(0.268±0.072) μmol/L;免疫荧光染色结果显示1μmol/L VX-680作用48 h出现多核现象;Western blot 检测聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)结果显示,与单独用药比较,VX-680与ABT737联合用药时PARP、Caspase-3剪切明显增加,B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(bcl-2)、bcl-xL表达减少、bax 表达增加,呈剂量和时间依赖性.流式细胞术显示VX-680联合ABT-737时T47D细胞凋亡率可达(46.40 ±0.41)％.结论 ABT-737可显著提高VX-680对乳腺癌T47D细胞的诱导凋亡作用.     

10-羟基喜树碱抗人肺癌细胞增殖、侵袭和诱导凋亡的研究

目的　研究 10 羟基喜树碱 (HCAM )抗人肺癌细胞增殖、侵袭和诱导凋亡的作用。方法　 0 .2 5 μmol/L和 0 .5 0 μmol/L 10 羟基喜树碱处理克隆化高转移人肺癌细胞 (PGCL3 ) 4d ,用细胞增殖抑制试验、软琼脂集落形成试验、对重建基底膜的侵袭试验、趋化运动试验、对层黏连蛋白的黏附试验和组织蛋白酶B活性测定观察细胞增殖和侵袭能力的变化 ;上述药物浓度处理 2d ,用吖啶橙 /溴乙啶荧光双染法和末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP 地高辛缺口末端标记法检测细胞凋亡。结果　 0 .2 5 μmol/L和 0 .5 0 μmol/L 10 羟基喜树碱分别使PGCL3细胞增殖下降 65 .9%和73 .2 %。对细胞侵袭、运动、黏附及组织蛋白酶B分泌均有明显的抑制作用 (P <0 .0 1)。并使PG CL3细胞凋亡率显著升高 (P <0 .0 5和P <0 .0 1)。结论　 10 羟基喜树碱有抗PGCL3人肺癌细胞增殖和侵袭作用 ,并有诱导凋亡的作用。其抗侵袭机制是对侵袭的多个基本环节起抑制作用。     

5-氮-2'-脱氧胞苷对膀胱移行细胞癌的生长抑制作用

目的 探讨去甲基化药物5-氮-2'-脱氧胞苷(DAC)对膀胱肿瘤细胞生长的抑制作用.方法 利用细胞增殖试剂WST-1法测定不同浓度DAC对RT112、253J、T24和TCCsup膀胱癌细胞株生长的影响,流式细胞仪检测其在诱导细胞凋亡与细胞周期捕获中的效果,APOPCYTO半胱天冬酶(caspase)色度法分析DAC处理后Caspase 3及Caspase 9的活性,蛋白质印迹法检测DAC处理后增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况.结果 DAC对4种膀胱肿瘤细胞的生长均具有抑制作用,药物作用呈剂量依存性.DAC不能诱导膀胱肿瘤细胞凋亡,细胞中Caspase 3、9活性未见激活,但DAC可以抑制膀胱癌细胞的增殖能力,PCNA蛋白表达量降低,发生G2/M期捕获.用0、1和8 μmol/L DAC处理膀胱癌细胞株RT112后G2/M期细胞分别为(36.3±3.4)%、(46.2±4.6)%和(56.5±6.2)%;处理TCCsup膀胱癌细胞株后为(37.5士3.8)%、(48.4±4.9)%和(60.1±6.7)%.结论 DAC对膀胱肿瘤细胞生长具有抑制作用,可能成为膀胱恶性肿瘤的一种新型治疗药物.     

体外化疗后残余肝癌细胞侵袭转移潜能变化及其机制

目的 探讨体外化疗后残余肝癌细胞侵袭转移潜能变化及其机制.方法 以2 mol/L奥沙利铂对人肝癌细胞株MHCC97L和HepG2进行体外冲击化疗,获得残癌细胞株MHCC97L-oxa和HepG2-oxa.对比研究残癌细胞株和母细胞株的侵袭、运动、增殖能力以及分子表型的差异.结果 与母细胞株比较,MHCC97L-oxa和HepG2-oxa细胞显示出显著增强的运动能力(19.17 ±2.64比29.50±5.28,P＜0.01和12.33±2.73比21.17±3.13,P＜0.01)和侵袭能力(增强0.89倍,P＜0.01和增强1.58倍,P＜0.01),而增殖能力则显著下降.MHCC97L-oxa和HepG2-oxa细胞在形态和分子表型上明显区别于MHCC97L和HepG2,呈现出间质细胞形态,伴E-钙粘蛋白(E-cadherin)表达显著下调,N-cadherin、波形蛋白(vimentin)以及转录因子Snail表达显著增强,细胞呈现上皮-间质转化.结论体外化疗后残余肝癌细胞发生上皮-间质转化,侵袭转移潜能增强.     

应激激素肾上腺素激活ERK1/2促进人肝癌细胞生长

目的 探讨应激激素肾上腺素(EPI)对人肝癌细胞生长的影响及其作用机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot等方法,分析EPI对人肝癌HepG2和MHCC97H细胞生长的影响,与α1-/β2-肾上腺素受体(α1-/β2-ARs)、腺苷环化酶/蛋白激酶A(AC/PKA)、促分裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶1/2(MAPK/ERK1/2)和磷脂酸激醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT/PKB)的关系.结果癌细胞增殖与EPI的作用呈剂量和时间依赖关系(P<0.05),10μmol/L EPI作用24～48 h时其增殖能力最强[HepG2/(215±4)%和MHCC97H/(207±10)%],而正常肝细胞L-02的变化不明显(P>0.05).在HepG2和MHCC97H细胞中,α1-AR蛋白表达仅为L-02的30%和34%,而β2-AR蛋白表达上升至331%和309%.β2-AR阻滞剂ICI 118551可抑制EPI的促增殖作用.β-AR激动剂异丙肾上腺素(ISO,10μmol/L)具有类似EPI的促进增殖作用,其作用可分别被ICI118551和MEK抑制剂U0126显著抑制,被PKA抑制剂H-89和PI3K抑制剂LY294002部分抑制.ISO孵育15 min～8 h,在HepG2中p-ERK1/2蛋白水平上升3.49/3.02倍,在MHCC97H中上升3.15/2.73倍,该作用可被ICI 118551和U0126所阻断.结论 人肝癌HepG2和MHCC97H细胞过表达β2-AR,EPI通过β2-AR激活ERK1/2依赖性和非依赖性信号通路促进癌细胞的生长,其中MAPK/ERK1/2信号通路可能起主要作用.     

内源性大麻素诱导人肝癌细胞MHCC97H凋亡中Caspase-3的作用

目的 检测内源性大麻素(AEA)是否诱导人肝癌高转移细胞株MHCC97H细胞凋亡、以及Caspase-3在细胞凋亡过程中的作用.方法 分别于AEA(100 μmol/L)作用细胞前后,应用Annexin V Binding方法 、流式细胞仪检测细胞凋亡率;荧光活性检测试剂盒检测细胞Caspase-3活性;半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 ,检测Caspase-3、bcl-2及bax的mRNA表达.结果 AEA作用细胞3、6、12、24 h,细胞凋亡率分别为(14.13±2.17)%、(27.04±3.21)%、(34.98±7.74)%及(81.35±9.71)%,其中24 h的细胞凋亡率与对照组(12.72±0.44)%比较,差异有统计学意义(P<0.01).AEA作用细胞24 h,细胞的Caspase-3活性由142.0±5.8增加至226.0±6.4(P<0.01);Caspase-3 mRNA的表达由0.24±0.13升高至0.54±0.32(P<0.05);如预先加入Caspase-3抑制剂(Z-VAD-FMK)后再加入AEA,则细胞的Caspase-3活性不再升高90.0±4.3.RT-PCR方法 未检测到bcl-2 mRNA及bax mRNA的表达.结论 AEA对人肝癌高转移细胞MHCC97H具有凋亡诱导作用,Caspase-3参与了凋亡的调控.     

EphA3通过调控VEGF参与肝癌细胞侵袭的机制

目的探讨促红细胞生成素肝细胞受体A3（EphA3）参与肝癌细胞侵袭的作用机制。方法培养人肝细胞HL-7702和肝癌细胞株HepG2和NHCC97H。采用siRNA干扰的方法抑制肝癌细胞中EphA3的表达。设立未处理组（未处理肝癌细胞）,对照组（加入对照siRNA）和siRNA干扰组（加入siRNA干扰EphA3）。用RT-PCR和Westernblot法检测EphA3的表达;用Transwell小室检测不同处理后的HepG2和MHCC97H细胞的侵袭能力;采用Westernblot和ELISA法检测VEGF蛋白表达和活力的变化情况。多组比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD—f检验。结果HL-7702、HepG2和MHCC97H中EphA3mRNA的相对表达量分别为0．94±0．13、1．76±0．16和3．62±0．14;EphA3蛋白的相对表达量分别为0．96±0．12、1．59±0．11和3．82±0．11,非肿瘤细胞与肝癌细胞中EphA3表达比较,差异有统计学意义（t=2．511,6．437;2．321,6．895,P〈0．05）。RT—PCR法检测HepG2细胞系中未处理组、对照组、siRNA干扰组EphA3mRNA的相对表达量分别为0．95±0．11、0．96±0．12和0．31±0．15,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=4．051,P〈0．05）;MHCC97H细胞中EphA3mRNA的相对表达量分别为0．97±0．16、0．95±0．14和0．40±0．11,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=5．237,P〈0．05）;Westernblot法检测3组HepG2细胞中EphA3蛋白的相对表达量分别为0．97±0．16、0．95±0．15和0．32±0．17,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=4．145,P〈0．05）;MHCC97I-I细胞中EphA3蛋白的相对表达量分别为0．95±0．11、0．96±0．12和0．38±0．17,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=4．327,P〈0．05）。采用体外侵袭实验,检测3组穿透的细胞数量,HepG2细胞系细胞数量分别为（111±4）个／10HPF、（109±5）个／10HPF和（51±3）个／IOHPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=7．582,P〈0．05）;MHCC97H细胞系细胞数量分别为（402±6）个／10HPF、（397±7）个／10HPF和（152±7）个／10HPF,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=9．479,P〈0．05）。Westernblot法检测HepG2细胞系中3组VEGF蛋白的相对表达量分别为0．98±0．11、0．96±0．13和0．57±0．11,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=3．167,P〈0．05）;Westernblot法检测MHCC97H细胞系中3组VEGF蛋白的相对表达量分别为0．97±0．14、0．98±0．12和0．34±0．15,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=4．278,P〈0．05）。ELISA法检测HepG2细胞系中3组VEGF蛋白的相对活力OD值分别为0．96±0．15、0．94±0．11和0．47±0．13,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=3．981,P〈0．05）;NHCC97H细胞中VEGF蛋白的相对活力OD值分别为n98±0．12、0．97±0．12和0．38±0．14,siRNA干扰组与对照组比较,差异有统计学意义（t=4．059,P〈0．05）。结论EphA3可能是通过调控VEGF蛋白表达和活性来实现肝癌细胞的侵袭,提示EphA3可作为肝癌治疗的新靶点。     

七叶皂苷钠对胆管癌细胞株Hccc9810增殖和凋亡的影响

目的 观察七叶皂苷钠对人胆管癌细胞株Hccc9810增殖和凋亡的影响.方法 运用细胞染色、噻唑蓝(MTT)比色法、流式细胞术和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)等技术观察不同浓度(0、10、20、40 μmol/L)七叶皂苷钠对胆管癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响.结果 七叶皂苷钠呈时间剂量依赖性抑制胆管癌细胞Hccc9810的增殖,其24、48、72 h的50％抑制浓度(IC50)分别为:(45.34±2.12)、(33.00±1.92)、(25.00±1.65) μmol/L;G1期比例从(49.49±1.22)％上升到(70.20±1.52)％;胆管癌细胞形态发生典型凋亡特征性改变,凋亡率随浓度的升高从20.54％上升到62.56％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 七叶皂苷钠通过阻滞细胞周期和诱导细胞凋亡而抑制胆管癌细胞Hccc9810增殖.     

miR-542-3p对肝癌细胞恶性生物学行为的影响及机制探讨

目的 探讨microRNA-542-3p(miR-542-3p)在人肝癌细胞系及组织中的表达水平及其对肝癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响.方法 采用RT-PCR检测miR-542-3p在肝癌细胞系(HCCLM3、Hep3B、Huh7、SMMC-7721、MHCC-97H、MHCC-97L)以及人正常肝细胞LO2中的表达;...     

维纳托克在肝癌细胞中的抗肿瘤活性及其机制

目的探讨维纳托克(Venetoclax)在HepG2、Hep3B 2个肝癌细胞株的抗癌活性。方法对人肝癌细胞株HepG2、Hep3B细胞株进行体外培养,采用不同浓度的Venetoclax(0、3、10、30μmol/L)处理肝癌细胞,以细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性,0,3,10和30μmol/L Venetoclax作用细胞48 h,锥虫蓝拒染法检测细胞的死亡,0,5μmol/L Venetoclax,作用24 h,流式细胞学检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western blot)检测Venetoclax诱导半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3活化,聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)裂解。组间比较采用t检验。结果Venetoclax对HepG2、Hep3B细胞株均有较强活性抑制作用。不同浓度的Venetoclax处理肝癌细胞48、72 h,Venetoclax在HepG2细胞株中取得的半数细胞活性抑制率(IC50)值分别为46.5μmol/L和14.2μmol/L;在Hep3B细胞的IC50值分别为24.6μmol/L和11.2μmol/L。处理24 h,30.0μmol/L的Venetoclax在HepG2和Hep3B细胞株中诱导57%[对照组、实验组凋亡率分别为(4.00±1.00)%、(56.67±8.51)%,t=-10.650,P<0.01]和54%[对照组、实验组凋亡率分别为(5.67±1.53)%、(54.33±9.87)%,t=-8.440,P<0.01]的肝癌细胞发生凋亡,并能诱导肝癌细胞的Caspase-3活化,PARP裂解,差异均有统计学意义。用0、3、10和30μmol/L的Venetoclax处理48 h,在HepG2细胞株中可诱导3%(3.26±1.71)%,12%[(12.36±1.99)%,(t=-12.36,P<0.05)],32%[(32.38±4.57)%,(t=-10.350,P<0.01)]和67%[(66.71±6.29)%,(t=-16.86,P<0.01)]的细胞死亡,差异均有统计学意义;在Hep3B细胞株诱导2%(1.91±0.68)%,16%[(15.72±3.40)%,(t=-6.890,P<0.05)],42%[(42.39±6.86)%,(t=-10.180,P<0.01)]和73%[(73.32±2.69)%,t=-44.490,P<0.01]的细胞死亡,差异均有统计学意义。应用半胱氨酸蛋白酶(Caspase)抑制剂预处理,Venetoclax对HepG2和Hep3B细胞的死亡率分别从56%(56.71±6.29)%降低至11%(10.70±1.43)%,(t=12.350,P<0.01)和68%(68.05±10.16)%至12%(12.7±6.12)%,(t=8.080,P<0.01),差异有统计学意义。结论Venetoclax能够通过诱导Caspase的活化,诱导肝癌细胞发生凋亡,并对肝癌细胞进行杀伤。     

过氧化物酶体增殖活化受体γ激动剂罗格列酮对MG63细胞抑制生长及促进凋亡的作用

目的 观察过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对骨肉瘤细胞株MG63的生长抑制及诱导凋亡作用.方法 取人骨肉瘤MG63细胞,用终质量浓度为0.5、5.0、50.0、100.0 μmol/L罗格列酮分别处理细胞,对照组不给予药物,噻唑蓝(MTT)比色法测定药物作用24、48、72 h对细胞生长的抑制率;流式细胞术(FCM)检测终质量浓度0、0.5、5.0、50.0 μmol/L罗格列酮处理24、48 h细胞周期分布;TUNEL法检测终质量浓度0.5μmol/L罗格列酮处理48 h的细胞凋亡,并计算凋亡指数(AJ).结果 细胞生长抑制率:(1)罗格列酮各浓度作用24、48、72 h,2个时间点抑制率两两比较的差异均有统计学意义(P＜0.01),有随时间增长而增加的趋势,其中0.5μmol/L对细胞的抑制率(％)分别为30.10±0.01、46.70±0.01和48.80±0.02;(2)在各时间点,各浓度组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01),在0.5～50.0 μmol/L浓度组区间,相同时间点的抑制率有随浓度升高而降低的趋势.细胞周期:(1)不同浓度的各细胞周期分布差异有统计学意义(P＜0.01).在24、48h时间点均表现为用药组G0/G1期细胞比例高于对照组,0.5mol/L组细胞比例最高,但随用药浓度增加,G0/G1期比例有下降趋势;用药组S期细胞比例均低于对照组,随用药浓度增加,S期比例有增高趋势;即用药可将细胞周期阻滞在G0/G1期的作用;(2)不同时间点间细胞周期分布变化的差异无统计学意义(F=0.36,P＞0.05).细胞凋亡:0.5 μmol/L组凋亡率(14.33±3.35)％明显高于对照组(2.82±0.63)％(P＜0.01),光镜下可见药物组细胞核固缩及散在的凋亡小体.结论 PPARγ激动剂罗格列酮能明显抑制人骨肉瘤MG63细胞的增殖,诱导该细胞G1期阻滞和细胞凋亡.     

miR-124靶向调控Notch 1通路影响肝癌细胞的增殖和迁移

[摘 要] 目的 探索微小RNA-124（miR-124）通过Notch1信号通路对肝细胞性肝癌（HCC）细胞增殖和迁移的影响。方法 将肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞HL7702作为受试对象。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测细胞中miR-124的表达。HepG2细胞转染miR-124模拟物（miR-124 mimic）后,CKK-8法检测细胞增殖活性,Transwell法检测细胞迁移能力。Western blotting检测Notch1信号通路表达。结果 在HepG2细胞中,miR-124表达低于人正常肝细胞HL7702[（1.00±0.00） vs （21.32±1.02）;P < 0.05];与对照组（无处理的HepG2细胞）相比,miR-124 mimic转染组中Hep G2细胞增殖明显降低[（0.44±0.01） vs（0.21±0.01）;P < 0.05],细胞迁移能力也降低[（12.00%±2.00%） vs （5.67%±1.52%）;P < 0.05];miR-124过表达可以明显抑制Hep G2细胞内Notch1信号通路蛋白表达[（100.00%±0.00%） vs （36.46%±2.36%）;P <0.05]。结论 本研究显示,miR-124可靶向抑制Notch1表达,进而抑制HCC的增殖和迁移。     

小檗碱对结肠癌细胞HT-29增殖、凋亡及细胞膜钾通道的作用

目的 观察小檗碱(Berberine,以下简称"Ber")对结肠癌细胞株HT-29增殖、凋亡的作用并探讨其离子通道机制.方法 Ber 0.1～30.0μmol/L处理HT-29细胞.氮蓝四唑盐法检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡率,膜片钳检测延迟整流钾通道[IK(V)].结果 0.1～30.0μmoL/L Ber均可抑制HT-29细胞增殖(P<0.05),其抑癌率与作用时间及浓度相关;HT-29细胞经Ber处理24 h后,凋亡率明显增高(P<0.05),0.1、0.3、3.0、30.0μmoL/L Ber组凋亡率分别为(7.6±1.8)%、(9.8±2.1)%、(22.3±4.2)%、(40.6±4.5)%,对照组凋亡率为(2.4±1.1)%;0.3、3.0、30.0μmoL/L的Ber能浓度依赖性抑制结肠癌细胞IK(V)(P<0.01),阶跃刺激为+80 mV时,对照组、0.3、3.0、30.0μmol/L Bet组IK(V)分别为(488±42)、(376±22)、(296±25)、(225±34)pA,0.3、3.0、30.0μmol/L Ber处理组IK(V)分别为对照组的(77.16±5.41)%、(61.35±6.09)%、(45.87±7.62)%.结论 Ber具有抑制结肠癌细胞HT-29增殖并诱导其凋亡的作用,此作用可能与Ber抑制肿瘤细胞细胞膜钾离子通道开放有关.