阿托伐他汀对EAE模型髓鞘再生调节的机制研究

目的观察阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠髓鞘再生的作用,并研究相关机制。方法建立C57BL/6小鼠EAE模型,免疫成功后给予阿托伐他汀干预。应用Knoz评分观察小鼠的临床评分,免疫组化法观察IL-17浸润情况。体外培养少突胶质祖细胞(OPCs),观察其IL-17受体的表达。分别应用IL-17、阿托伐他汀及阿托伐他汀+甲羟戊酸内酯干预OPCs的培养及分化。结果阿托伐他汀可以减少EAE模型中IL-17在中枢神经系统的浸润。体外研究表明,OPCs表达IL-17受体,IL-17可增强OPCs表达p38 MAPK,从而抑制其增殖和分化;阿托伐他汀可以降低OPCs细胞p38 MAPK的表达,促进细胞的增殖;而甲羟戊酸内酯又可以部分逆转阿托伐他汀的作用。结论 OPCs表达IL-17受体,IL-17可以抑制髓鞘再生。阿托伐他汀可能通过Rho-p38 MAPK通路调控IL-17的表达,进而减轻EAE的髓鞘损伤,有助于髓鞘再生。     

雷公藤内酯醇对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑和脊髓ICAM-1表达的影响

目的探讨雷公藤内酯醇(Triptolide,Tri)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脑和脊髓细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法模型组采用豚鼠髓鞘蛋白匀浆和福(氏)完全佐剂诱发大鼠急性EAE,治疗组在此基础上给予不同剂量Tri[0.2 mg/(kg.d),0.4 mg/(kg.d)],观察其临床表现并进行评分。采用Loyez(氏)髓鞘染色法观察髓鞘病理改变,免疫组化法检测脑和脊髓ICAM-1表达。结果高剂量Tri治疗组大鼠未出现临床症状,其髓鞘结构完整;低剂量Tri治疗组临床症状较模型组轻且发病时间延迟,其髓鞘部分脱失。高剂量Tri治疗组ICAM-1阳性血管数为2.31±1.23,与模型组和低剂量Tri治疗组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论Tri对EAE的治疗作用与其抑制ICAM-1表达有关。     

阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎脑组织IL-1β、IL-6影响的研究

目的探讨实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）豚鼠脑组织细胞因子的变化,探讨阿托伐他汀对EAE发病保护作用的免疫调节机制。方法粗制碱性髓鞘蛋白抗原（Wistar大鼠全脊髓匀浆）＋完全福氏完全佐剂（CFA）免疫豚鼠建立EAE模型。40只豚鼠分成正常对照组、EAE对照组、EAE低剂量组和EAE高剂量组,每组10只,雌雄各半;放射免疫法测定正常对照组、EAE各组高峰期脑组织IL-1β、IL-6含量。结果EAE对照组、EAE低剂量组和EAE高剂量组脑组织IL-1β、IL-6水平显著高于正常对照组,EAE高、低剂量组脑组织IL-1β、IL-6水平比EAE对照组低,EAE高剂量组脑组织IL-1β、IL-6水平比EAE低剂量组低（P〈0.05）。结论EAE豚鼠存在明显免疫功能紊乱,阿托伐他汀有降低EAE模型脑组织IL-1β、IL-6水平作用,其对EAE发病的免疫保护机制可能是通过抑制IL-1β、IL-6产生而发挥。     

阿托伐他汀对实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠TNF-α和iNOS表达的影响

目的应用阿托伐他汀干预实验性变态反应性脑脊髓炎(experiment allergic encephalom yelitis,EAE)大鼠,探讨药物对于疾病发病、炎性细胞浸润及TNF-α和iNOS表达的影响。方法采用豚鼠脊髓匀浆诱导Wistar大鼠建立EAE模型,口服给药干预,观察药物对大鼠发病、炎性细胞浸润情况及TNF-α和iNOS表达的影响。结果阿托伐他汀降低了大鼠发病率(P<0.05),改善了大鼠发病的严重程度(P<0.05),抑制了炎性细胞向脊髓组织的的浸润(P<0.05),降低了脊髓中iNOS的表达(P<0.05),但对于血清中TNF-α的水平没有影响(P>0.05)。结论阿托伐他汀降低了大鼠的发病率,减轻了实验性变态反应性脊髓炎大鼠发病的严重程度及炎性细胞的浸润、iNOS的表达。     

雷公藤多甙对EAE大鼠脊髓β-APP和IL-17表达的影响

目的观察雷公藤多甙对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓中β-APP和IL-17表达的影响。方法将30只大鼠随机分为空白对照组(CON组)、模型组(EAE组)、治疗组(TWP组),建模后分别行神经功能评分,大鼠脊髓组织行HE染色,免疫组化检测脊髓中β-APP和IL-17表达水平。结果与EAE组比较,TWP组大鼠发病率下降,平均神经功能评分降低,炎性细胞浸润减少,在神经功能评分和病理学改变方面差异明显(P<0.05);免疫组化示TWP组较EAE组β-APP和IL-17表达水平降低(P<0.05)。结论雷公藤多甙对EAE大鼠有一定保护作用,可能与抑制β-APP、IL-17表达有关。     

他汀类药物对EAE小鼠RhoA表达的影响

目的探讨他汀类药物能否抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型RhoA蛋白表达及其对小鼠发病情况的影响。方法随机将雌性C57BL/6小鼠分为EAE组、他汀治疗组和佐剂组3组。EAE组和他汀治疗组用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽(MOG_(35-55))免疫小鼠建立EAE模型,佐剂组以生理盐水替代MOG_(35-55)同样方法注射;他汀治疗组自免疫后第3天始按体质量10 nag/(kg·d)予阿托伐他汀灌胃。观察3组小鼠发病情况及病理变化并测定脑组织中RhoA蛋白表达。结果与佐剂组相比,EAE组小鼠脑组织中RhoA蛋白表达明显增多(P0.01)。他汀治疗组脑组织RhoA蛋白表达及临床神经功能评分均较EAE组下降(P0.01)。结论 EAE小鼠RhoA蛋白表达上调。他汀类药物可能通过抑制RhoA蛋白表达治疗EAE。     

干扰素β-1b对实验性自身免疫性脑脊髓炎脊髓中趋化因子MCP-1表达的影响

目的研究干扰素（IFN）β-1b对实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）小鼠中枢神经系统（CNS）中单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响，从趋化因子角度探讨IFNβ治疗多发性硬化（MS）的机制。方法用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35～55多肽加福氏完全佐剂皮下注射免疫C57BL／6小鼠建立EAE模型，干预组（n=12）在免疫当天至免疫后第16天隔日一次皮下注射10000单位IFNβ-1b，对照组（n=12）则同时予1mL PBS皮下注射。比较两组EAE小鼠的临床表现，并用免疫组织化学及原位杂交技术比较两组EAE脊髓中MCP-1表达及MCP-1mRNA水平的差异。结果与对照组相比，IFNβ-1b干预组小鼠发病明显延迟，症状明显减轻，同时脊髓中MCP-1的表达及MCP-1mRNA的水平显著下调。结论IFNβ-1b可抑制EAE小鼠CNS中趋化因子MCP-1的表达，这可能是其治疗MS的机制之一。     

细胞间黏附分子-1在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠中表达的动态变化及作用

目的探讨细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)大鼠中表达的动态变化及其作用。方法分别取免疫后第4、6、8、10、12、14、16、18、20天EAE大鼠脑和脊髓制成石蜡切片,行HE染色和ICAM-1半定量免疫组化分析。结果免疫后第8天ICAM-1表达即出现明显上调,早于临床症状的发生;随免疫后时间的延长,ICAM-1表达呈逐渐增高后缓慢下降的变化趋势,并且与EAE大鼠病情评分呈显著正相关(r=0.57,P=0.003)。结论ICAM-1的表达上调可能在EAE发病中具重要作用。     

阿托伐他汀对颈动脉粥样硬化患者血清转化生长因子β1和基质金属蛋白酶9的影响

目的探讨阿托伐他汀对颈动脉粥样硬化(carotidarterosclerosis,CAS)患者血清转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)和基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinases 9,MMP-9)的影响,分析阿托伐他汀影响颈动脉粥样硬化斑块(carotidartery sclerosis plaqu,CASP)斑块稳定性的机制。方法观察对象为无症状性CAS患者,应用彩色超声多普勒进行检查患者颈动脉内膜中层厚度(intima-media thickness,IMT)值,并且对于CASP数量和稳定性进行记录。所有患者抽取空腹静脉血进行MMP-9和TGF-β1检测。结果 (1)2组患者在进行治疗前各项观察指标无明显差别,A组在治疗6个月后MMP-9明显下降,TGF-β1明显升高,但此后无明显改变;B组在治疗6个月后MMP-9明显下降,TGF-β1明显升高,到12个月有进一步改善,此后无明显改善;(2)A组在治疗前和治疗18个月的CASP稳定性比例无明显改变,B组治疗18个月后CASP稳定性明显好转,优于A组。结论 (1)CAS患者TGF-β1水平降低,MMP-9水平升高,且与CASP的易损性有关;(2)阿托伐他汀治疗CAS的机制之一是提高TGF-β1水平和降低MMP-9水平。     

左旋咪唑对实验性自身免疫性脑脊髓炎脊髓IFN-γ、TGF-β1 mRNA表达的影响

目的:探讨左旋咪唑(LMS)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)脊髓IFN--γ、TGF-β1mRNA表达的影响。方法:用GPSCH免疫Wistar大鼠制作EAE模型,分别在免疫前(LMS1组)、免疫同时(LMS2组)、免疫后(LMS3组)给LMS10mg·kg-1。比较各组行为学和组织学的变化,用RT-PCR测脊髓IFN-和TGF-β1mRNA的表达。结果:LMS1组和LMS2组的行为学表现和炎细胞浸润加重(P<0.01,P<0.05)。LMS3组出现EAE复发。与EAE组比,LMS1组和LMS2组脊髓IFN-mRNA表达升高,TGF-β1mRNA表达降低,但仅LMS2组有统计学意义(P<0.05)。结论:LMS可升高脊髓IFN-mRNA表达,降低TGF-β1mRNA表达,提示LMS对EAE的促发作用可能与Th1/Th2失衡有关。     

他汀类药物治疗实验性变态反应性脑脊髓炎和多发性硬化研究进展

多发性硬化（multiple sclerosis，MS）是常见的中枢神经系统（central nervous system，CNS）炎性脱髓鞘疾病。根据已证实的体液和细胞免疫反应、与白细胞抗原（HLA）单倍型的遗传联合，以及对免疫调节治疗的临床反应，认为MS是一种自身免疫性疾病。MS的治疗选择很有限，治疗方法包括促皮质激素、皮质激素、细胞毒性药物、抗淋巴细胞球蛋白、血浆交换等，     

阿托伐他汀对家兔动脉粥样硬化血管细胞粘附分子-1基因表达的影响

目的 探讨家兔动脉粥样硬化病变中血管细胞粘附分子-l（VCAM-1）的表达和阿托伐他汀的抗动脉粥样硬化作用。方法 24只大耳白兔随机分为常规饲料组、胆固醇饲料组和阿托伐他汀组，饲养l6周。实验前后检测（血清胆固醇TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL），采用免疫组化和逆转录多聚酶链式反应（PCR）方法测定主动脉壁VCAM-1阳性表达百分比和mRNA的表达。结果 阿托伐他汀显著降低TC和LDL水平（P〈0．01）。胆固醇饲料组和阿托伐他汀组病变局部VCAM-1的阳性染色百分比和mRNA的表达量明显高于对照组（P〈0．01）,但阿托伐他汀组动脉粥样硬化病理改变较胆固醇饲料组明显减轻。VCAM-1阳性染色百分比及mRNA的表达量较胆固醇饲料组明显降低（P〈0．01）。结论 动脉粥样硬化的发生伴有血管细胞粘附分子的高度表达。阿托伐他汀不但有调脂作用，而且具有抑制粘附分子和抗动脉粥样硬化的作用。     

VCAM—1核心表位的噬菌体短肽用于EAE的实验性治疗

目的 获得VCAM－1的拮抗物,用其对EAE进行实验性治疗。方法 用鼠抗人VCAM－1单抗筛选噬菌体15肽库,经4轮亲和筛选后进行ELISA鉴定,对得到的两株强阳性克隆进行测序,用其免疫豚鼠制备抗血清,观察对EAE发病临床级别的影响。结果 强阳性克隆小肽顺序为IRRNPIPKTIKTI（M）LI,并获得了VCAM－1的抗血清,该克隆可延缓EAE发病,且可降低临床分类级别。结论 此噬菌体短肽可作为VCAM－1的拮抗物延缓EAE模型鼠的发病。     

趋化因子MCP-1、MIP-1α在EAE小鼠脊髓中的表达

目的:研究单核细胞趋化蛋白(MCP)-1和巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α与实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病的关系。方法:用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白_(35-55)多肽加福氏完全佐剂皮下注射免疫C57BL/6小鼠建立EAE模型,用免疫组织化学方法观察EAE小鼠发病后第0天(初期)、第7天(高峰期)及第30天(恢复期)脊髓中MCP-1、MIP-1α的表达的变化,并通过免疫组化染色标记星形胶质细胞及小胶质细胞,判断MCP-1、MIP-1α的细胞来源。结果: MCP-1、MIP-1α在EAE小鼠发病初期脊髓中有少量表达,发病高峰期表达增高,而恢复期无表达,MCP-1主要由星形胶质细胞产生,MIP-1α主要由小胶质细胞产生;对照组小鼠脊髓中则没有MCP-1、MIP-1α表达。结论:趋化因子MCP-1、MIP-1α在EAE小鼠CNS不同胶质细胞中表达,是EAE发病早期募集免疫反应细胞向CNS浸润的重要致炎性因子。     

不同剂量阿托伐他汀抗动脉粥样硬化机制的研究

目的探讨阿托伐他汀抗动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）的机制及其最小有效剂量。方法利用Wistar大鼠建立动脉粥样硬化动物模型,并分组予2．5mg/（kg·d）、5mg/（kg·d）、10mg/（kg·d）阿托伐他汀干预治疗各6周后,测定各组大鼠血脂水平,HE染色观察大鼠动脉组织形态学改变,RT-PCR方法检测大鼠动脉组织中炎性因子ICAM-1、MMP-2、TIMP-1 mRNA表达。结果（1）血脂：与AS造模组大鼠相比,阿托伐他汀5mg/ （kg·d）和10mg/（kg·d）干预组大鼠各项血脂水平差异有统计学意义（P均＜0．05）,2．5mg/（kg·d）干预组大鼠血脂水平差异无统计学意义（P均＞0．05）；（2）动脉组织形态学：正常组大鼠动脉内膜无明显病变；AS造模组大鼠动脉可见隆起于内膜表面的动脉粥样硬化斑块；药物干预各组大鼠的动脉管壁只可见内膜增厚、血管平滑肌细胞增生,但均无斑块形成。（3）动脉组织炎性因子表达：与正常组大鼠比较,AS造模组大鼠ICAM-1、MMP-2、TIMP-1 mRNA表达差异有统计学意义（P均＜0．01）；药物干预各组大鼠上述指标表达与AS造模组大鼠比较差异有统计学意义（P均＜0．01）。结论阿托伐他汀抗动脉粥样硬化的机制有独立降脂作用之外的抗炎效应；其有效的最小降脂剂量5mg/（kg·d）,本实验抗炎的最小有效量为2．5mg/（kg·d）。     

P53蛋白与TNF-α、TGF-β在实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠表达的相关性分析

目的探讨p53蛋白在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)中的作用。方法雌性Wistar大鼠25只随机分为:EAE组(n=15)、对照组(n=10)。制作EAE模型,免疫组化染色观察p53蛋白、TNF-α、TGF-β的表达,进行相关性分析。结果P53蛋白灰度值与症状评分呈正相关(r=0.836,P<0.05),p53蛋白灰度值与TNF-α灰度值呈负相关(r=-0.810,P<0.05),p53蛋白灰度值与TGF-β灰度值呈正相关(r=0.676,P<0.05)。TNF-α灰度值与症状评分呈负相关(r=-0.978,P<0.05),TNF-α灰度值与TGF-β灰度值的相关性分析无统计学意义(r=-0.502,P>0.05)。TGF-β灰度值与症状评分的相关性分析无统计学意义(r=0.470,P>0.05)。结论P53蛋白参与EAE的过程,可能是一种抗炎因子。     

小檗碱对EAE小鼠星形胶质细胞S1PR1、3受体表达影响的研究

目的探讨小檗碱对EAE小鼠星形胶质细胞(astrocyte,AST) S1PR1、3受体表达的影响。方法构建EAE小鼠模型,用不同剂量小檗碱(berberine,BBR)干预EAE小鼠,并设置正常对照组,观察其对小鼠中枢神经系统炎细胞浸润、脱髓鞘和AST上S1PR1、3受体表达情况。结果 BBR干预EAE小鼠后,症状缓解,中枢神经系统炎性浸润、脱髓鞘和胶质增生好转,AST表面S1PR1、S1PR3表达受抑制。结论小檗碱可能通过抑制AST上S1PR1、3受体表达,抑制AST活化,从而减轻炎性反应、脱髓鞘和胶质增生,缓解EAE小鼠临床症状。     

雌激素抑制实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠的NF-κB和Rho激酶表达

目的 探讨雌激素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠中枢神经系统NF-κB和Rho激酶表达的影响及相关作用机制.方法 60只雌性Wistar大鼠行卵巢摘除术后建立EAE模型,随机分为模型组、对照组、雌激素组和NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrro-lidine dithocarbamate,PDTC)组,每组15 只.自免疫日起,雌激素组给予17β-雌二醇20 μg/(kg·d),连续10 d;PDTC组注射PDTC 50 mg/(kg·d),连续10 d.免疫后16天统一处死取脑组织,HE染色观察炎性细胞浸润情况,免疫组化和Western blot 观察NF-κB p65和Rho激酶表达的变化.结果 与模型组比较,雌激素组发病率无统计学差异(P>0.05),但发病潜伏期延长(P<0.05),神经功能评分较低(P<0.05);HE染色示雌激素组和PDTC组脑组织炎性细胞浸润程度较模型组轻;免疫组化和Western blot 结果示,与模型组相比,雌激素组和PDTC 组NF-κB和Rho激酶表达均较低(P<0.01).结论 雌激素能抑制EAE大鼠NF-κB和Rho激酶的表达,其对Rho激酶的抑制作用可能部分通过下调NF-κB的水平实现的.     

FTY720对EAE小鼠脑组织NO含量和iNOS表达影响的研究

目的探讨芬戈莫德(fingolimod,FTY720)对试验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠脑组织中一氧化氮(NO)含量和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)表达的影响。方法 48只雌性C57BL/6小鼠随机平均分为3组,EAE组运用MOG35-55构建EAE小鼠模型;CFA组由生理盐水代替MOG35-55构建模型;FTY720干预组在EAE基础上给予FTY720腹腔注射,CFA组、EAE组给予生理盐水腹腔注射。HE染色和LBF染色观察炎症情况和脱髓鞘情况,ELLISA检测小鼠脑组织中的NO含量,RT-PCR检测的诱导型一氧化氮合酶(i NOS)mRNA表达。结果 FTY720组EAE小鼠较EAE组临床症状减轻,炎症程度和脱髓鞘程度减轻(P<0.05)。FTY720组小鼠脑组织NO含量较EAE组降低(P<0.05),i NOS mRNA表达量降低(P<0.05)。结论 FTY720能抑制EAE小鼠脑组织中i NOS mRNA表达,从而减少NO含量。     

阿托伐他汀通过免疫调节作用治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎

目的观察阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗作用,并研究相关机制。方法建立C57BL/6小鼠EAE模型,免疫成功后给予阿托伐他汀干预。应用Knoz评分观察小鼠的临床评分,免疫组化法观察IL-17浸润情况,流式细胞仪观察外周Treg细胞的分化情况,Western blot观察细胞外调节蛋白激酶/丝裂原活化蛋白激酶通路表达情况。结果阿托伐他汀可以改善EAE小鼠的神经功能缺损评分。免疫组化法显示阿托伐他汀可以减少IL-17在中枢神经系统的浸润,而流式细胞仪则发现阿托伐他汀可以促进外周Treg细胞的分化、降低外周脾细胞pERK的表达。结论阿托伐他汀可能通过ERK/MAPK通路调控TH17/Treg平衡进而改善EAE的神经功能缺损。