凋亡蛋白酶活化因子-1基因甲基化在骨肉瘤细胞株中的作用

目的 检测骨肉瘤细胞株中凋亡蛋白酶活化因子(APAF)-1基因启动子区域甲基化状态及该基因mRNA表达,观察APAF-1基因对骨肉瘤形成的影响.方法 以骨肉瘤细胞株MG63和Hs888T为研究对象,提取DNA,经重亚硫酸钠处理后,采用限制性酶切图谱分析(COBRA)检测APAF-1基因CpG岛的甲基化情况,使用不同浓度(0、1×10~(-7)、3×10~(-7)mol/L)的DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理骨肉瘤细胞株4、10、20d,采用实时定量聚合酶链反应(QT-PCR)检测Apaf-1 mRNA表达水平的变化.结果 在Hs888T细胞株中APAF-1基因存在CpG岛甲基化并且随着5-Aza-CdR浓度的增加Apaf-1 mRNA表达水平也在增加.3×10~(-7)mol/L的5-Aza-CdR处理Hs888T细胞株20 d与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 Hs888T细胞株中APAF-1基因异常表达与APAF-1基因启动子区域CpG岛甲基化有关,提示APAF-1基因甲基化可能参与某些骨肉瘤的发生.     

结肠癌细胞CDH1基因启动子甲基化对E-上皮钙黏素和β-连接素表达的调控作用

目的 观察结肠癌细胞中上皮钙黏素基因( CDH1)启动子甲基化对上皮钙黏素(E-cadherin)和β－连接素(β-catenin)表达的影响.方法 通过甲基化特异性PCR(MSP)、逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)检测DNA甲基化抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)干预前后人结肠癌HT-29细胞株CDH1基因启动子甲基化状态及E-cadherin mRNA的改变,并运用免疫荧光标记及激光共聚焦观察E -cadherin和β-catenin在细胞内的表达及分布.结果 (1)HT-29细胞在用药前CDH1基因启动子甲基化扩增阳性,非甲基化扩增阴性,用5-Aza-CdR处理后CDH1基因启动子甲基化扩增阴性,非甲基化扩增阳性;(2)5-Aza-CdR处理前细胞RT-PCR不能扩增出E-cadherin mRNA特异性条带,5-Aza-CdR处理后则可检测到E-cadherin mRNA转录,且mRNA水平与药物的浓度呈正相关,平均灰度比值1 μmol/L时为0.491±0.011,2μmol/L时为0.568±0.013(P＜0.05;(3)5-Aza-CdR 处理前细胞未见E-cadherin表达,β-catenin主要表达于细胞质及细胞核中,5-Aza-CdR处理后在细胞膜可见E-cadherin及β-catenin表达.且随着5-Aza-CdR诱导E-cadherin的表达,β-catenin在细胞膜的分布增加,而在细胞质及细胞核的分布明显减少.免疫荧光双重染色显示β-catenin胞膜分布与E-cadherin一致.结论 CDH1基因启动子甲基化可能是导致结肠癌细胞E-cadherin表达缺失及β-catenin异位分布的重要因素.     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷对实验性乳腺癌肺转移的影响

目的探讨5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对乳腺癌MDA-MB-231细胞实验性肺转移的影响及可能的机制。方法将MDA-MB-231细胞分为对照组与5-Aza-CdR处理组,通过半定量RT-PCR(SqRT-PCR)与甲基化特异性PCR(MSP)方法检测两组细胞的乳腺癌转移抑制基因-1(BRMS1),CXC趋化因子受体-4(CXCR4)基因的mRNA表达及启动子区甲基化的状况。分别将两组细胞通过边缘尾静脉注射至BALB/c nu/nu裸鼠体内(每组5只)。5周后,用荧光定量RT-PCR(FqRT-PCR)检测裸鼠肺组织内的目的基因HPRT及内参GAPDH的mRNA丰度。结果对照组和处理组细胞的BRMS1相对灰度值(IDV)分别为0与0.39±0.001,处理组BRMS1 mRNA表达较对照组明显上调(P0.05),5-Aza-CdR使BRMS1启动子区甲基化的CpG岛B完全去甲基化;CXCR4相对IDV分别为0.58±0.003与0.58±0.01,两组间差异无统计学意义(P0.05),CXCR4启动子区CpG岛1的非甲基化状态亦无明显改变。对照组与处理组细胞的裸鼠肺脏HPRT和GAPDH的Ct值分别为:24.75±1.55,16.19±0.69与27.61±1.67,17.48±0.96,2-ΔΔCt=0.34,处理组裸鼠肺脏HPRTmRNA丰度明显低于对照组,肺组织内转移癌较少。结论 5-Aza-CdR通过去甲基化机制重新激活肿瘤转移抑制基因BRMS1的表达,从而降低了MDA-MB-231细胞实验性肺转移能力。     

5-氮-2′-脱氧胞苷对RKO结肠癌细胞株maspin基因去甲基化的转录调节作用

目的探讨 DNA5′ CpG岛去甲基化对 RKO结肠癌细胞株 maspin基因的转录调控作用及对细胞株生长增殖的生物学影响 ,寻找抗癌治疗的新靶点.方法应用甲基化特异性 PCR(methylation specific PCR, MSP)检测 RKO结肠癌细胞株 maspin基因核心启动子区 CpG岛甲基化情况;用特异性 DNA甲基转移酶抑制剂 5-氮- 2′-脱氧胞苷 (5- aza- 2′- deoxycytidine, 5- aza- CdR)作用结肠癌细胞株 72 h后 ,逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)检测 maspin mRNA表达,四唑盐 (MTT)比色、流式细胞仪检测用药前后 RKO细胞株生长存活率和细胞周期的变化.结果 RKO结肠癌细胞株 maspin基因核心启动子区存在 CpG岛甲基化.与对照组相比, 3组不同浓度 5- aza- CdR作用后, maspin基因 mRNA表达分别增加了 10.89、 16.91和 23.97倍,明显抑制肿瘤细胞生长,阻滞细胞周期于 G0/G1期, 诱导细胞凋亡, 凋亡率分别为 5.17%、 8.71%和 11.23%.结论 RKO结肠癌细胞株 maspin基因 5′端核心启动子甲基化可能是导致该基因表达沉默的主要原因;特异性甲基转移酶抑制剂 5- aza- CdR能较好地逆转 RKO细胞 DNA异常甲基化,并有效地激活因高甲基化所致 maspin基因沉默的再转录,诱导该基因表达,从而抑制肿瘤细胞生长,诱导细胞凋亡.     

结直肠癌环氧化酶-2、错配修复酶-1微卫星不稳定与基因调控的关系

目的 检测临床手术切除42例结直肠癌及相应正常组织环氧化酶-2(COX-2)、错配修复酶-1(hMLH1)微卫星不稳定状态(MSI)及二种基因启动子甲基化,探讨它们与结直肠癌发生的关系.方法 采用聚合酶链反应(PCR)技术检测5个位点的MSI状态;甲基化特异性PCR(MSP)方法检测结直肠癌及正常组织COX-2、hMLH1二种基因启动子CpG岛甲基化状态.结果 42例结直肠癌中MSI总检出率为42.86%(18/42),5个位点的MSI检出率差异无统计学意义(P＞0.05).COX-2和hMLH1基因启动子CpG岛甲基化在42例结直肠癌中分别有13例和15例.MSI-H组中COX-2基因启动子CpG岛甲基化8例,且有6例结直肠癌同时出现hMLH1和COX-2基因启动子CpG岛甲基化.结论 MSI结直肠癌hMLH1基因启动子CpG岛甲基化率高于MSS结直肠癌,hMLH1基因启动子CpG岛甲基化有助于判断肿瘤类型.     

原发性肝癌RUNX3基因启动子区甲基化及mRNA表达及其意义

目的 观察原发性肝癌中人RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因启动子甲基化及mRNA表达,探讨其甲基化与临床特征的关系.方法 收集75例原发性肝癌患者的肿瘤标本及其癌旁组织、10例正常肝组织,应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)测定RUNX3基因CpG岛甲基化状态,并采用实时定量聚合酶链反应(PCR)分析RUNX3基因在75例原发性肝癌中的表达水平及甲基化与肝癌临床特征的关系.结果 75例肝癌组织中有34例(45.3％)存在RUNX3基因CpG 岛的异常甲基化,癌旁组织中有7例(9.3％),而正常肝组织中未检测到RUNX3基因CpG岛的异常甲基化,RUNX3基因异常甲基化在肝癌组织、癌旁组织及正常组织中的发生率差异有统计学意义(x2=29.18,P＜0.01);75例原发性肝癌实时定量PCR分析有45例肝癌组织中存在RUNX3 mRNA 表达缺失或下调,其中60％ (27/45)伴随启动子甲基化,即RUNX3 mRNA表达下调与RUNX3基因甲基化密切相关(x2=9.77,P＜0.01);而肝癌组织非甲基化组RUNX3基因表达量高于甲基化组4倍以上;RUNX3基因CpG岛甲基化与患者肝硬化关系密切(x2=5.07,P＜0.05).结论 原发性肝癌存在RUNX3基因CpG岛异常甲基化,CpG岛的甲基化可能是导致其基因表达降低的主要原因之一,并与患者肝硬化密切相关.     

人胃癌组织中肝素酶基因启动子甲基化状态与肿瘤侵袭转移的关系

目的 探讨人胃癌组织中肝素酶(HPA)基因启动子的甲基化状态及其与HPA表达、肿瘤侵袭转移的关系.方法 应用免疫组织化学、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测48例胃癌组织标本及相应癌旁组织中HPA蛋白和mRNA表达;采用亚硫酸氢钠修饰、甲基化PCR(MSP)、甲基化克降测序(BSP)法检测胃癌组织和癌旁组织中HPA基因启动子区域CpG岛甲基化状态,并探讨与胃癌临床病理特征的关系.结果 胃癌组织中HPA mRNA和蛋白的阳性表达率分别为79.20%(38/48)、93.75%(45/48),显著高于癌旁组织(P<0.05).MSP、BSP检测发现13例胃癌组织HPA启动子CpG岛呈低甲基化状态,且其甲基化程度与HPA的表达及胃癌的分化程度、TNM分期、淋巴结转移、远处转移明显相关(P<0.05).结论 HPA基因启动子区域CpG岛甲基化程度与HPA的表达及胃癌的发生、发展有关,在肿瘤侵袭、转移过程中起重要调节作用.     

人膀胱尿路上皮癌细胞DAPK基因启动子甲基化状态与生物学功能之间的关系分析

目的:分析人膀胱尿路上皮癌(BUCC)细胞DAPK基因启动子甲基化状态与生物学功能之间的关系。方法:以中国科学院细胞库提供的BUCC 5637细胞株作为对照组,以经10μmol/L 5-Aza-CdR处理过的BUCC 5637细胞株作为观察组。应用Western blot、RT-PCR分别检测对照组细胞及观察组细胞中DAPK、DAPKmRNA的表达;应用MS-PCR检测对照组和观察组中DAPK基因启动子CpG岛的甲基化状态;应用流式细胞术检测对照组及观察组的细胞凋亡率;应用肿瘤细胞侵袭实验检测对照组及观察组的细胞侵袭能力。结果:(1)对照组细胞中DAPK的表达为146.32±21.24,显著低于观察组的312.15±14.57,差异有统计学意义(t=3.582,P=0.024);(2)对照组细胞中的DAPKmRNA表达水平为0.38±0.07,显著低于观察组的0.82±0.04,差异有统计学意义(t=4.257,P=0.032);(3)对照组细胞中DAPK启动子基因CpG岛甲基化状态为阳性,而观察组细胞中DAPK启动子CpG岛甲基化状态为阴性;(4)对照组的细胞凋亡率为2.09%,显著低于观察组的凋亡率6.02%,差异有统计学意义(X2=0.368,P=0.036);(5)对照组细胞的侵袭能力为6.12±0.32,明显优于观察组的2.34±0.12,差异有统计学意义(t=3.245,P=0.022)。结论:5-Aza-CdR能显著增加5637细胞中DAPK的表达,而DAPK能明显促进BUCC细胞的凋亡,且显著抑制BUCC细胞的侵袭(迁移)能力,提示5-Aza-CdR可作为BUCC的基因靶向治疗药物。     

5-氮-2''''-脱氧胞苷对RKO结肠癌细胞株maspin基因去甲基化的转录调节作用

目的探讨DNA5'CpG岛去甲基化对RKO结肠癌细胞株maspin基因的转录调控作用及对细胞株生长增殖的生物学影响,寻找抗癌治疗的新靶点。方法应用甲基化特异性PCR(methylationspecificPCR,MSP)检测RKO结肠癌细胞株maspin基因核心启动子区CpG岛甲基化情况;用特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-CdR)作用结肠癌细胞株72h后,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测maspinmRNA表达,四唑盐(MTT)比色、流式细胞仪检测用药前后RKO细胞株生长存活率和细胞周期的变化。结果RKO结肠癌细胞株maspin基因核心启动子区存在CpG岛甲基化。与对照组相比,3组不同浓度5-aza-CdR作用后,maspin基因mRNA表达分别增加了10.89、16.91和23.97倍,明显抑制肿瘤细胞生长,阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导细胞凋亡,凋亡率分别为5.17%、8.71%和11.23%。结论RKO结肠癌细胞株maspin基因5'端核心启动子甲基化可能是导致该基因表达沉默的主要原因;特异性甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR能较好地逆转RKO细胞DNA异常甲基化,并有效地激活因高甲基化所致maspin基因沉默的再转录,诱导该基因表达,从而抑制肿瘤细胞生长,诱导细胞凋亡。     

食管鳞癌RASSF1A基因启动子区甲基化研究

目的 研究肿瘤抑制基因RASSF1A启动子区甲基化所致该基因表达抑制在我国食管鳞癌发生中的作用及可能机制. 方法 用甲基化特异PCR技术(MSP)检测43例原发性食管鳞癌标本及6例对照食管上皮组织标本、食管鳞癌细胞系TE11和TE12中RASSF1A启动子甲基化状态;逆转录(RT)-PCR法检测5-氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理前后食管鳞癌细胞系中RASSF1A mRNA表达水平;Western blot方法检测食管鳞癌细胞系中细胞微管蛋白的表达. 结果 20.9%(9/43)原发性食管鳞癌标本有RASSF1A启动子超甲基化,正常食管上皮组织未发现该基因超甲基化改变.RASSF1A基因甲基化与食管癌患者的性别和TNM分期无关(P＞0.05),但在不同年龄组间的差异有统计学意义(P＜0.05).TE12细胞RASSF1A启动子发生甲基化,RT-PCR检测不到RASSF1A mRNA.TE11细胞系启动子未发生甲基化,RT-PCR检测其有RASSF1A mRNA表达.5-Aza-CdR处理可使TE12重新表达RASSF1A mRNA.TE12细胞的β-微管蛋白水平比TE11细胞低87.8%. 结论 原发性食管鳞癌存在RASSF1A启动子超甲基化,该基因甲基化与年龄相关.RASSF1A在食管鳞癌细胞系表达抑制与其甲基化状态有关.RASSF1A表达缺失可能导致β-微管蛋白减少.     

5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷联合吉西他滨对胰腺癌细胞株原钙黏蛋白8基因表达的影响

目的 研究5-杂氮脱氧胞嘧啶核苷(5-Aza-CdR)对胰腺癌细胞株Capan-2原钙黏蛋白8(protocadherin 8,PCDH8)基因DNA启动子甲基化的转录调控,以及联合吉西他滨对癌细胞生长抑制与凋亡的影响.方法 采用MTT法、流式细胞术检测5-Aza-CdR及联合吉西他滨对Capan-2细胞的抑制率与凋亡率.应用甲基化特异性PCR(MSP)、RT-PCR和Western blot的方法检测不同浓度5-Aza-CdR处理细胞前后PCDH8基因的甲基化状态、mRNA表达水平和蛋白表达水平.结果 5-Aza-CdR能使胰腺癌细胞Capan-2增长速度减慢,呈浓度依赖性,联合吉西他滨显著抑制细胞生长;5-Aza-CdR联合吉西他滨与单药组、对照组相比,可显著诱导细胞凋亡.不同浓度的5-Aza-CdR可逆转PCDH8基因在胰腺癌细胞Capan-2的甲基化,恢复mRNA表达水平和蛋白表达水平,并呈一定的浓度正相关.结论 5-Aza-CdR可有效逆转PCDH8基因在胰腺癌细胞株Capan-2的高甲基化状态,解除DNA高甲基化导致的基因沉默,重新诱导基因mRNA转录和蛋白表达,同时可抑制胰腺癌细胞生长,与吉西他滨有协同抗肿瘤作用.     

5-氮-2’-脱氧胞苷对RKO结肠癌细胞株maspin基因去甲基化的转录调节作用

目的 探讨DNA5’CpG岛去甲基化对RKO结肠癌细胞株maspin基因的转录调控作用及对细胞株生长增殖的生物学影响，寻找抗癌治疗的新靶点。方法 应用甲基化特异性PCB（methylation specific PCR，MSP）检测RKO结肠癌细胞株maspin基因核心启动子区CpG岛甲基化情况；用特异性DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2’-脱氧胞苷（5-aza-2＇-deoxycytidine，5-aza-CdR）作用结肠癌细胞株72h后，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测nlaspin mRNA表达，四唑盐（MTT）比色、流式细胞仪检测用药前后RKO细胞株生长存活率和细胞周期的变化。结果 RKO结肠癌细胞株maspin基因核心启动子区存在CpG岛甲基化。与对照组相比，3组不同浓度5-aza-CdR作用后。maspin基因mRNA表达分别增加了10．89、16．91和23．97倍。明显抑制肿瘤细胞生长，阻滞细胞周期于G0／G1期，诱导细胞凋亡，凋亡率分别为5．17％、8．71％和11．23％。结论 RKO结肠癌细胞株maspin基因5’端核心启动子甲基化可能是导致该基因表达沉默的主要原因；特异性甲基转移酶抑制剂5-aza-CdR能较好地逆转RKO细胞DNA异常甲基化，并有效地激活因高甲基化所致maspin基因沉默的再转录，诱导该基因表达，从而抑制肿瘤细胞生长，诱导细胞凋亡。     

5-Aza-dC和TSA对胰腺癌Panc-1细胞TFPI-2基因甲基化水平及表达的影响

目的探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)及组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对胰腺癌Panc-1细胞系中TFPI-2基因甲基化水平及基因表达的影响。方法 Panc-1细胞经5-Aza-dC和TSA单独或联合处理后,应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP),逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),蛋白印迹法(Western Blot)检测细胞TFPI-2基因启动子区甲基化状态和mRNA及蛋白表达情况。结果 Panc-1细胞经5-Aza-dC单独处理或与TSA联合处理后,TFPI-2基因启动子区高甲基化状态产生逆转,表现为非甲基化,原本不表达TFPI-2 mRNA及蛋白的Panc-1细胞重新表达,TFPI-2mRNA相对表达量为0.821±0.050和0.887±0.042,蛋白表达量为0.613±0.092和0.712±0.059,两者作用效果相似。经TSA单独处理的Panc-1细胞TFPI-2基因启动子区仍为异常高甲基化状态,原本不表达的TFPI-2基因未见重新表达。结论 Panc-1细胞中TFPI-2基因启动子区高甲基化可能是导致该基因失活的主要原因;5-Aza-dC单独作用或与...     

人脑胶质瘤U251细胞中hMLH1、hMSH2基因启动子区的甲基化状态研究

目的观察人脑胶质瘤U251细胞系中hMLHl、hMSH2基因启动子区的甲基化状态及其在肿瘤发生中的作用。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）法对人脑胶质瘤U251细胞系的hMLHl、hMSH2基因启动子CpG岛甲基化进行检测；培养人脑胶质瘤U251细胞系，MSP法检测加入5-aza-2’-deoxycytidine前后hMSH2基因在人脑胶质瘤U251细胞中的甲基化状态改变；逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）法检测加入5-aga-2’-deoxycytidine前后hMSH2在人脑胶质瘤U251细胞中的mRNA表达改变。结果人脑胶质瘤U251细胞中未发生hMLHl启动子甲基化，而发生了hMSH2启动子甲基化；5-aza-2’-deoxycytidine处理细胞株后，可逆转hMSH2启动子甲基化，细胞株的mRNA表达增加，加药前后的平均灰度比值分别为（0．40±0．18；0．85±0．32，P〈0．01），差异有统计学意义。结论人脑胶质瘤U251细胞系中hMSH2基因启动子CpG岛高甲基化，5-aza．2’-deoxycytidine能完全逆转hMSH2基因高甲基化状态，可为临床诊断人脑胶质瘤提供新的检测指标和治疗靶点。     

肝癌细胞NFAT2基因启动子区甲基化与其mRNA表达的关系

目的:探讨肝癌细胞中NFAT2基因启动子CpG岛甲基化状态及与其mRNA表达的关系。方法:用重硫酸盐测序法检测肝癌组织与癌旁组织及不同肝细胞系与正常肝细胞中NFAT2启动子甲基化状态,用qRT-PCR检测肝癌组织与癌旁组织NFAT2 mRNA表达,并分析肝癌组织NFAT2启动子甲基化与mRNA水平的相关性。结果:肝癌组织中NFAT2基因CpG岛甲基化率明显高于癌旁组织(33.0%vs.21.6%,P=0.003);人肝癌细胞系HuH7、HepG2、Hep3B中NFAT2基因CpG岛甲基化率分别为34.8%、40.4%、37.0%,均明显高于人正常肝细胞系L02中NFAT2基因CpG岛甲基化率(16.2%)(均P0.05)。肝癌组织NFAT2 mRNA相对表达量明显低于与癌旁组织(0.000 602 4 vs.0.001 469,P0.05),肝癌组织中NFAT2 mRNA水平与其启动子甲基化程度呈明显负相关(r=-0.661,P=0.027)。结论:肝癌细胞中NFAT2基因表达下调可能与其启动子区CpG岛高甲基化状态有关     

人肠癌RKO细胞周期依赖性激抑制因子基因启动子区甲基化状态的研究

目的 探讨人结肠癌RKO细胞周期依赖性激酶抑制因子(CKIs)家族启动子区CpG岛甲基化状态及其甲基化可逆性特征.方法 应用特异性DNA甲基转移酶(DNMTs)抑制剂5-Aza-2]-deoxycytidine(5-Aza-CdR)处理肠癌细胞,甲基特异性聚合酶链反应(Methylation-Specific PCR,MSP)、T-A克隆及DNA测序法分析RKO细胞CKIs家族抑癌基因p15ink4b、p16ink4a/CDKN2、p21/cip、p27/kip启动子CpG岛甲基化状态.结果 未经5-Aza-CdR作用的肠癌RKO细胞,其p15ink4b、p16ink4a/CDKN2基因组DNA胞嘧啶(C)保持不变,这提示在其单链DNA中胞嘧啶呈甲基化状态;而经5-Aza-CdR作用的肠癌RKO细胞,其p15ink4b、p16ink4a/CDKN2、p21/cip和p27/kip基因组DNA胞嘧啶均已变为胸腺嘧啶,表明在DNA单链中胞嘧啶已呈去甲基化状态.结论 肠癌RKO细胞周期INK4家族(p15ink4b和p16ink4a/CDKN2)基因的启动子区处于异常的高甲基化状态,而KIP/CIP家族(p21/cip和p27/kip)基因未处于高甲基化状态;5-Aza-CdR能较好地逆转肿瘤细胞INK4家族基因DNA高甲基化状态.     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古菌素A对胰腺癌Panc-1细胞系TFPI-2基因甲基化水平及表达的影响

目的 探讨甲基化酶抑制剂5-氮杂2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)及组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)对胰腺癌Panc-1细胞系中TFPI-2基因甲基化水平及基因表达的影响.方法 单独或联合应用5-Aza-dC及TSA处理Panc-1细胞,应用甲基化特异性聚合酶链反应、逆转录聚合酶链反应及蛋白印迹实验检测药物处理前后Panc-1细胞TFPI-2基因启动子区甲基化状态、mRNA及蛋白表达情况.结果 经5-Aza-dC单独处理或5-Aza-dC及TSA联合处理Panc-1细胞后,TFPI-2基因启动子区高甲基化状态得到逆转,表现为非甲基化,原本不表达的TFPI-2基因mRNA及蛋白重新表达,两组作用效果相似.经TSA单独处理的Panc-1细胞TFPI-2基因启动子区仍为异常高甲基化状态,原本不表达的TFPI-2基因未见重新表达.结论 胰腺癌Panc-1细胞系中TFPI-2基因启动子区高甲基化可能是导致该基因失活的主要原因,5-Aza-dC单独作用或与TSA联合作用均能逆转TFPI-2基因的高甲基化状态,使该基因重新表达,TSA对受抑制的TFPI-2基因重新表达作用不明显.     

胃癌组织中白细胞介素-8基因启动子甲基化及其mRNA表达的研究

目的 观察胃癌患者癌组织及与其配对的正常胃黏膜组织中白细胞介素-8(IL-8)基因启动子甲基化及其mRNA表达,探讨IL-8基因甲基化与胃癌的关系.方法 收集经病理确诊并行外科手术切除的胃癌组织及配对的正常胃黏膜组织各52例,用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)分别检测癌组织及正常组织中IL-8基因mRNA表达;用甲基化特异性PCR(MSP)检测上述两种组织中IL-8基因甲基化状态.结果 胃癌组织中IL-8基因mRNA的表达量是正常组织中的1.94倍(P＜0.01).胃癌组织中IL-8基因甲基化率为32.7％,而正常组织中的甲基化率为73.1％(P＜0.01);胃癌组织中IL-8基因mRNA表达及启动子的去甲基化与性别、年龄、肿瘤大小无明显相关(P＞0.05),而与肿瘤的分化程度、Borrmann分型、浸润程度及有无淋巴结转移均具有明显相关(P＜0.05);去甲基化的胃癌组织中IL-8 mRNA表达是甲基化胃癌组织的2.13倍(P ＜0.001).结论 IL-8基因mRNA在胃癌组织中过表达;胃癌组织中IL-8基因启动子区呈低甲基化状态;IL-8基因启动子区去甲基化促进了其在胃癌组织中高表达.     

肝细胞癌中APC基因启动子甲基化和mRNA表达检测

目的探讨肝细胞癌中APC基因启动子甲基化状态及其对mRNA表达的影响。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测30例肝细胞癌及相应的癌旁组织和10例正常对照肝组织中APC基因启动子甲基化状态和mRNA表达水平,分析甲基化与临床资料以及与mRNA表达的关系。结果在肝细胞癌、癌旁及正常对照肝组织中检测到APC基因启动子甲基化率分别是46.6%、16.6%、0%。肝细胞癌组织中APC基因启动子甲基化率明显高于相应的癌旁和对照组(P<0.05),并且与年龄和癌肿有无假包膜有相关性(P<0.05)。各组织中APC基因mRNA表达无显著差异。结论APC基因启动子甲基化与肝细胞癌形成和侵袭有关,但不影响癌组织中mRNA表达。