香烟烟雾提取物对CD4^＋T细胞向Th17细胞和调节性T细胞分化的影响

目的观察香烟烟雾提取物（CSE）对CD4^＋T细胞向Th17细胞和调节性T细胞分化的影响,为探索香烟烟雾暴露导致气道慢性炎症的机制提供实验依据。方法采用免疫磁珠法分离纯化健康志愿者外周血CD4^＋T细胞,以1×10^6／ml细胞密度接种于96孔培养板,分为以下8个组①空白对照组;②T细胞刺激剂组：加入T细胞刺激剂抗人CD3／28抗体微磁珠;③T细胞刺激剂CSE干预组：CD3／28＋2%CSE;④细胞因子组：CD3／28＋细胞因子;⑤细胞因子CSE干预组：CD3／28＋细胞因子＋2％CSE;⑥芳香烃受体（AHR）激动剂6-甲酰基吲哚[3,2-b]咔唑（FICZ）组CD3／28＋细胞因子＋FICZ;⑦AHR拮抗剂白藜芦醇组：CD3／28＋细胞因子＋2％CSE＋白藜芦醇;⑧溶剂对照组：CD3／28＋细胞因子＋DMSO。细胞因子为含TGF-β/IL-1β／IL-6／IL～23的混合细胞因子,以诱导Th17细胞和调节性T细胞分化。培养5d后,收集细胞,采用流式细胞术检测细胞表面分子CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋细胞（Treg细胞）,以及胞内细胞因子IL-17＋的CD4^＋T细胞（Th17细胞）,计算各种刺激培养条件下,诱导生成的Th17及Treg细胞占CD4^＋T细胞的百分比。结果①CSE对Th17细胞分化的影响：空白对照组Th17细胞比例为（0．69±0．12）％,加入T细胞刺激剂后为（1．32±0．12）％,在此基础上加入CSE的干预组IL-17＋细胞比例升高为（2．17±0．24）％,（t=3．21,P〈0．01）;细胞因子组IL-17＋细胞比例为（1．35±0．08）％,而在此基础上加入CSE的干预组Th17细胞升高为（2．58±0．39）%（t=3．13,P〈0．01）。②CSE对Treg细胞分化的影响：在空白对照组中,Treg细胞占CD4^＋T细胞中的比例为（0．21±0．19）％,在加入T细胞刺激剂后,Treg细胞比例升高（3．59±0．37）％,加入细胞因子后,Treg细胞比例明显增加（5．85±0．76）％;在继续加入CSE干预后,Treg细胞比例明显减少（3．07±0．33）％（t=3．74,P〈0．01）;同样,T细胞刺激剂CSE干预组也出现Treg细胞比例减少（2．19±0．19）％,（t=2．71,P〈0．05）。③AHR活化对Treg细胞和Th17细胞分化的影响：AHR激动剂FICZ组的Treg细胞比例明显低于细胞因子组[（2．60±0．40）％,（5．85±0．76）％]（t=4．18,P〈0．01）,但Th17细胞比例升高[（2．86±0．43）％,（1．35±0．08）％]（t=3．65,P〈0．01）。AHR阻断剂白藜芦醇组中的Treg细胞比例和Th17细胞比例均低于细胞因子组,分别为[（0．33±0．14）％,（5．85±0．76）％],（t=7．71,P〈0．01）和[（0．42±0．07）％,（1．35±0．08）％],（t=8．87,P〈0．001）,并且和空白对照组接近,在细胞培养第5天通过7-AAD-AnnexinV对该组细胞检测并未发现细胞异常凋亡或死亡情况,结合该组细胞培养过程中的镜下形态推测该实验组CD4^＋T细胞的分化增殖受到白藜芦醇抑制。结论CSE可促进CD4^＋T细胞向Th17细胞分化,并抑制Treg细胞分化,这一过程可能通过AHR诱导。     

精蛋白锌胰岛素30R与精蛋白生物合成人胰岛素30R对口服降糖药控制不佳2型糖尿病的有效性及安全性

目的比较精蛋白锌胰岛素30R（万苏林30R）和精蛋白生物合成人胰岛素30R（诺和灵30R）对口服降糖药血糖控制不佳的2型糖尿病的有效性和安全性。方法于2009年6月至2010年6月期间将140例口服降糖药血糖控制不佳的2型糖尿病患者以1：1的比例随机分配到治疗组A和治疗组B。两组受试者分别接受精蛋白锌胰岛素30R和精蛋白生物合成人胰岛素30R治疗,根据受试者血糖初步拟定治疗剂量并随时调整,每日早、晚餐前皮下注射胰岛素并继续使用既往口服药物,治疗为期12周,12周后2组交换胰岛素继续治疗12周。观察比较2组交换胰岛素前后糖化血红蛋白（HbAlc）、空腹血糖（FBG）、餐后2h血糖（PBG）、胰岛素抗体（IAA）水平。采用配对t检验或Wilcoxon检验比较两组数据。结果治疗12周后治疗组A和B的HbAlc[（7．7±1．3）％VS（7．5±0．9）％,t=1．24,P〉0．05]、FBG[（8．0±2．0）VS（7．4±1．6）mmol／L,t=1．05,P〉0．05]、PBG[（13±4）vs（12±4）mmol／L,t=0．90,P〉0．05及IAA[（19±12）VS（19±13）mU／L,t=0．11,P〉0．05I差异无统计学意义;治疗24周后两组HbAlc[（8．3±1．5）％VS（7．5±1．0）％,x。=0．01,P〉0．05]、FBG[（7．8±2．0）VS（7．9±2．1）mmol／L,x^2=0．04,P〉0．05]、PBG[（12±4）VS（12±4）mmol／L,x^2=0．82,P〉0．05]、IAA[（19±11）VS（18±12）mU／L,X^2=1．26,P〉0．05]间差异无统计学意义。治疗组A在交叉前后低血糖发生率分别为16．4％和6．4％,治疗组B则分别为15．O％和2．9％。2组受试者未发现有局部过敏、脂肪萎缩和硬结等不良事件。结论用万苏林30R治疗口服降糖药血糖控制不佳的2型糖尿病与诺和灵30R具有相同的疗效且不会引起更多的不良反应。     

外源性转化生长因子-β对病毒性心肌炎小鼠脾Th17细胞增殖的影响△

目的观察外源性转化生长因子（transforming growth factor,TGF-β）对病毒性心肌炎小鼠脾辅助性T淋巴细胞亚群（Th17）细胞增殖的影响。方法BALB／c小鼠腹腔注射柯萨奇病毒B3建立病毒性心肌炎小鼠模型,1周后磁珠分离脾CD4’T淋巴细胞进行体外培养,分别用植物血凝素加TGF．B或单独用植物血凝素进行培养,5d后流式细胞术测定培养后卟17细胞比例、逆转录一聚合酶链反应（PT-PCR）测定培养细胞白细胞介素-17（interleukin-17,IL．17）mRNA的表达、酶联免疫吸附测定（ELISA）法测定培养上清液中白介素-17的水平。结果与单独用植物血凝素培养组比较,植物血凝素加TGF-β组的Th17细胞比例稍有增加,但差异无统计学意义（2．32％±1．48％孤1．82％±0．17％,P〉0．05）。两组培养细胞白介素-17mRNA及上清液中自介素-17浓度比较,差异也无统计学意义（P均〉0．05）。结论外源性TGF—β对病毒性心肌炎小鼠脾中已分化的Th17细胞无增殖作用。     

老年慢性心力衰竭患者辅助性T细胞17及白介素-17的检测及临床意义

目的研究老年慢性心力衰竭（chronic heart failure,CHF）患者外周血中辅助性T细胞17（Thl7）的比例及白介素-17（IL-17）的变化及临床意义。方法选择老年CHF住院患者作为CHF组（n=30）,同时设置对照组（n=30）,利用流式细胞技术和ELISA法分别检测2组患者外周血中Thl7细胞比例和IL-17的水平。结果CHF组外周血中Thl7／CD4＋T细胞比例显著高于对照组[（3．83±1．04）％比（2．25±0．78）％,P〈0．05];CHF组患者外周血中IL-17水平显著高于对照组[（8．97±3．06）ng／L比（6．12±2．34）ng／L,P〈0．05]。结论老年C／IF患者外周血中Thl7细胞比例及IL-17水平升高,调节Th17细胞的治疗可能为CHF治疗提供新思路。     

Th17细胞和自然杀伤性T细胞在胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血中的变化

目的 研究胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血辅助性T(Th) 17淋巴细胞和自然杀伤性T(NKT)细胞数量和功能的变化.方法 筛选52例慢性丙型肝炎患者(其中合并胰岛素抵抗26例),采用流式细胞仪检测患者外周血Th 17和NKT细胞频率,细胞内染色技术检测细胞内白细胞介素4(IL-4)和IFN-γ染色阳性的NKT细胞的比例,ELISA法检测患者白细胞介素17(IL-17)的水平.数据行t检验.结果 胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血Th17细胞频率、IL-17水平和细胞内IFN-γ阳性的NKT细胞的比例明显高于慢性丙型肝炎患者[分别为(6.60±1.70)％与(4.52±1.05) ％,t=5.205,P＜0.01; (180.0±35.6)与(82.0±17.0)pg/mL,t=12.674,P＜0.01;(39.5±9.1)％与(32.0±6.5)％,t=3.420,P＜0.01];而NKT细胞频率明显降低[(0.42±0.09)％与(0.62±0.14)％,t=9.325,P＜0.01].胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)≥4患者组Th17细胞频率、IL-17水平和细胞内IFN-γ阳性的NKT细胞比例明显高于HOMA-IR＜4患者[分别为(7.35±1.80)％与(5.82土1.47)％,t=3.292,P＜0.01;(243.3±61.2)与(144.7±37.5)pg/mL,t=6.938,P＜0.01;(44.3±10.2)％与(34.7±7.5)％,t=3.866,P＜0.01];NKT细胞频率明显下降[(0.33±0.08)％与(0.52±0.12)％,t=6.718,P＜0.01].结论 随着胰岛素抵抗程度加重,慢性丙型肝炎患者外周血Th-17细胞频率升高,分泌IL-17增加;NKT细胞频率减少,分泌IFN-γ增加,导致炎症反应向Th1漂移.     

肺结核合并糖尿病患者外周血辅助性T 细胞17和白细胞介素-17A 检测及临床意义

目的研究肺结核合并糖尿病（PPTDM）患者外周血辅助性 T 细胞17（TH17）亚群及血清白细胞介素（IL）-17A 含量并分析其临床意义。方法收集肺结核合并糖尿病患者（PPTDM）、肺结核患者（PTB）及糖尿病（DM）患者、健康志愿者（HV）各30例,其中 PPTDM患者又分为先患肺结核后患糖尿病（PTB －DM）和先患糖尿病后患肺结核（DM－PTB）患者两组,各15例。流式细胞术检测 Th17细胞亚群,酶联免疫吸附试验法（ELISA）检测血清 IL-17A 含量,并分析其相关性。结果PPTDM组 Th17细胞亚群和血清 IL-17A 含量均显著高于 PTB 组、DM组和 HV 组（P ＜0．05）。DM-PTB 组 Th17细胞亚群和血清 IL-17A 含量均显著高于 PTB-DM组（P ＜0．05）。PTB 组、DM组和 HV 组之间 Th17细胞亚群含量差异无统计学意义（P ＞0．05）。PTB 组血清 IL-17A 含量显著高于 DM组和 HV 组（P ＜0．01）。DM组和 HV 组之间血清 IL-17A 含量差异无统计学意义（P ＞0．05）。PPTDM患者 Th17细胞亚群与血清中 IL-17A 呈正相关（P ＜0．05）。结论Th17细胞亚群和IL-17A在 PPTDM疾病进展中可能具有重要的作用。     

供者肝内单个核细胞与肝移植后急性排斥反应的相关性研究

目的研究供者肝移植物内的单个核细胞（intrahepatic mononuclear cell,HMC）的表型分析和产生的细胞因子,及其对移植物急性细胞排斥反应（acute cellular reiection．ACR）的影响。方法采集2006年4月-2010年8月伦敦国王学院医院行原位肝移植的60例供者的HMC,采用流式细胞分析技术检测其表面免疫分子标志物和细胞因子,将其与上述移植物受者ACR的发生率进行相关性分析。结果HMC内CD4^＋／CD8^＋比值（均值0．5）明显低于健康者外周血比例（均值1．4）,证实细胞标本的肝源性。23．33％的患者在随访期发生了ACR。发生反应患者HMC内的自然杀伤（naturekiller,NK）细胞频率[（24．65±4．83）％]明显低于无排斥反应患者[（39．46_＋2．93）％],P=0．020,呈负相关（r=-0．321）。发生ACR患者HMC内产白细胞介素（interleukin,IL）-2的CD4^＋T淋巴细胞水平[（20．55±2．29）％]明显高于无排斥反应患者[（14．95±1．29）％],P=0．048;产IL-4的CD4＋T淋巴细胞水平[（6．5±0．84）％]高于无排斥反应患者[（3．85±0．41）％],P=0．006;产IL-17的CD8＋T淋巴细胞水平[（5．39±1．17）％]高于无排斥反应患者[（2．25±0．31）％],P=-0．025;产IL-4的CD8^＋T淋巴细胞[（7．05±0．73）％]高于无排斥反应患者[（4．51±0．56）％],P=0．041;产IL-23的CD8^＋T淋巴细胞[（3．0±0．64）％]高于无排斥反应患者[（1．74±0．24）％],P=0．031。结论供肝内的NK细胞、产IL-2、IL-4的CD4^＋T淋巴细胞、产IL-17、IL-4和IL-23的CD8^＋T淋巴细胞与肝移植患者发生ACR相关,上述细胞可能参与ACR的发生。     

外周血Th17细胞及IL-17^＋FoxP3^＋T细胞在非小细胞肺癌患者的表达变化

目的：探讨辅助性T17（Th17）细胞及白细胞介素17（IL-17）＋叉头蛋白3（FoxP3）＋T细胞在非小细胞肺癌患者外周血中的表达及意义。方法：57例非小细胞肺癌患者作为研究对象．25名正常人作为对照。采用流式细胞术检测外周血Th17细胞、调节性T细胞（Treg细胞）的百分率以及IL-17＋FoxP3＋T细胞占Treg细胞的百分率。结果：Ⅳ期非小细胞肺癌患者外周血单核细胞（PBMC）中Th17细胞百分率高于Ⅰ-Ⅲ期患者及正常对照（均P〈0．01）。非小细胞肺癌患者PBMC中的Treg细胞百分率高于正常对照,并且IL-17＋FoxP3＋T细胞占Treg细胞的百分率高于正常对照（P〈0．05）。结论：Ⅳ期非小细胞肺癌患者中Th17细胞以及II-17＋FoxP3＋T细胞数量增加,Th17以及IL．17＋FoxP3＋T细胞可能参与了非小细胞肺癌的肿瘤远处转移过程．从而影响肿瘤进程。     

免疫炎症反应在颅内动脉瘤形成中的作用

目的：探讨免疫炎症反应在颅内动脉瘤形成中的作用。方法收集40例开颅手术患者颅内动脉瘤（颅内动脉瘤组）和20例开颅手术颅脑外伤患者（对照组）血管标本。应用荧光定量聚合酶链反应检测动脉壁白细胞介素（interleukin, IL）-17受体表达水平，流式细胞仪检测外周血Th17细胞，酶联免疫吸附法测定外周血IL-17以及动脉壁IL-6和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α, TNF-α）水平。结果颅内动脉瘤组年龄[（62.6±8.7）岁对（61.4±7.9）岁；t=0.342，P=0.681]、男性（60.0％对65.0％；χ2＝0.246， P=0.434）以及高血压（12.5％对10.0％；χ2＝0.315， P=0.492）、糖尿病（7.5％对10.0％；χ2＝0.284， P=0.482）和吸烟（35.5％对30.0％；χ2＝0.224， P=0.413）患者构成比均与对照组差异无统计学意义。对照组动脉壁IL-17受体表达（0.106±0.032对0.264±0.071；t=5.115，P=0.001）以及外周血T h17细胞比例[（2.75±0.53）％对（7.18±1.54）％；t=8.436， P<0.001]和IL-17水平[（7.32±1.82）μg/L对（22.64±4.51）μg/L；t=8.357，P<0.001]均显著低于颅内动脉瘤组。此外，对照组动脉壁 IL-6[（1.15±0.24）μg/L对（19.64±4.16）μg/L；t=9.527，P<0.001]和TNF-α[（1.43±0.31）μg/L对（26.17±4.32）μg/L；t=9.816，P<0.001]水平均显著低于颅内动脉瘤组。结论颅内动脉瘤患者动脉壁IL-17受体表达以及外周血T h17细胞比例和IL-17水平增高。免疫炎症反应可能与颅内动脉瘤的形成有关。     

抗结核药物相关性肝损伤患者外周血辅助性T淋巴细胞17／调节性T淋巴细胞比率的变化及其意义北大核心CSCD

目的观察肺结核抗结核化学治疗后药物性肝损伤患者外周血Th17／Treg比率的变化,并探讨其与肝功能的关系。方法选取2013年2月至2015年3月遵义医学院附属医院诊断为继发性肺结核的肝功能正常的住院患者90例,抗结核化学治疗2周后,21例患者ALT和（或）AST≥2×正常值上限（ULN）,作为伴有肝损伤的肺结核组;其余69例ALT和（或）AST〈2×ULN,作为不伴肝损伤的肺结核组。抗结核化学治疗前抽取外周血检测Th17／Treg比率和肝脏生物化学指标,2周后复查,比较两组抗结核化学治疗前后Th17／Treg比率的变化及其与ALT、AST的相关性。数据采用t检验,相关性检验采用Pearson相关性分析。结果抗结核化学治疗前,两组间Th17、Treg及Th17／Treg比率的差异均无统计学意义（均P〉0．05）。抗结核化学治疗2周后,伴肝损伤的肺结核组和不伴肝损伤的肺结核组Th17[（2．522±0．388）／mL比（2．075±0．369）／mL,t=3．633,P〈0．01;（2．326±0．348）／mL比（1．929±0．402）／mL,t=6．468,P〈0．01）]和Th17／Treg比率（0．618±0．104比0．489±0．107,t=3．553,P〈0．01;0．554±0．108比0．450±0．098,t=6．353,P〈0．01）均较治疗前升高,差异有统计学意义,而Treg治疗前后变化不明显（均P〉0．05）;伴肝损伤的肺结核组Th17（t=2．203,P〈0．05）及Th17／Treg比率（t=2．345,P〈0．05）均较不伴肝损伤的肺结核组显著升高,差异有统计学意义。Th17／Treg比率与AI．T呈正相关（r=0．849,P=0．044）,与AST无明显相关性（P〉0．05）。结论Th17／Treg比率的变化与肺结核抗结核化学治疗后药物性肝损伤有关。     

从Th1/Th2、Treg/Th17之间的平衡研究轻、中度慢性乙型肝炎患者CD4~+T淋巴细胞的免疫失衡状态

目的从Th17及其相关细胞因子与Th1、Th2、Treg的相互关系,探讨轻、中度CHB患者CD4~+T淋巴细胞的整体免疫失衡状态。方法选择轻、中度CHB患者,与健康志愿者进行比较,观察其外周血各免疫细胞(Th17、Th1、Th2、Treg、Th1/Th2、Treg/Th17)、相关细胞因子(IL-17、IL-6、TGF-β、IFN-γ、IL-4)、主要效应分子(穿孔素、颗粒酶B)和核转录因子(孤独核受体RORγt、Foxp3等)的变化及其相互关系。结果与健康志愿者相比,CHB患者CD8~+T淋巴细胞比例更高,CD4~+/CD8~+比例显著下降,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者Th1细胞比例更高,Th1/Th2显著升高,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者Th17细胞比例更高,Treg/Th17比例显著下降,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者穿孔素和颗粒酶B的表达更高,差异有统计学意义(P0.01);与健康志愿者相比,CHB患者FOXP3、IL17mRNA和RORγt的表达差异无统计学意义(P0.05);与健康志愿者相比,CHB患者TGF-B1、IL-6、IL-17显著增高,差异有统计学意义(P0.01);IFN-γ和IL-4的表达差异无统计学意义(P0.05)。结论轻、中度CHB患者在免疫细胞及其相关细胞因子、效应分子等各环节,尤其是Treg/Th17比例,均处于严重的免疫失衡状态。     

CHB患者Th17-Treg失衡中IL-21的作用及机制

目的研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周Th17/调节性T细胞(Treg)失衡中IL-21的作用及其初步机制。方法流式细胞仪分别检测59例CHB患者和20例健康人外周血细胞中Th17细胞和Treg细胞频数,同时以ELISA法检测血清细胞因子IL-21、IL-17、IL-10、TGF-β水平。体外分别以IL21、IL-2刺激CHB患者外周血单核细胞(PBMC),以实时PCR检测培养细胞转录因子RORγt mRNA及Foxp3 mRNA表达水平,以ELISA法检测培养上清细胞因子IL-17、IL-10和TGF-β水平。结果与正常人群相比,IL-21、IL1 7、TGF-β水平显著升高(P均0.05),CHB患者外周Th17/Treg比例显著升高(P0.05),IL-21水平与Th1 7/Treg比例呈正相关(P=01.008)。与IL-2相比.IL-21刺激CHB患者PBMC的RORγt mRNA表达水平明显升高(P=0.016)而Foxp3 mRNA表达水平明显降低(P=0.018),相对应的培养上清中,IL-1 7水平显著上升(P=0.049)而IL-10、TGF-β水平明显降低(P=0.017,P=0.004)。结论 C、HB患者中IL-21能通过提高RORγt mRNA表达,同时抑制Foxp3 mRNA表达进而促进Th1 7/Treg失衡。     

结核性胸膜炎中的IL-27对Th22细胞分化的影响

目的 探讨结核性胸腔积液IL-27对辅助性(Th) 22细胞定向分化过程的影响.方法 2014年6月至2015年6月在佛山市第一人民医院呼吸内科住院并且经胸腔镜取胸膜活检由病理学确诊的结核性胸膜炎患者20例,其中男11例,女9例,年龄25～60岁,平均35 5岁.从患者胸腔积液中的分离纯化出初始Th细胞,以含有抗-CD3+抗CD28单克隆抗体的基础培养条件为对照组,实验组则加入重组人IL-27、肿瘤坏死因子α(TNF-α) +IL-6或IL-27+ TNF-α+IL-6进行培养;在部分实验中,实验组为胸腔积液上清作为分化培养条件,加或不加入IL-27受体/Fc段嵌合体.培养7d后,使用流式细胞仪检测分化后的Th细胞表达IL-22以及特异性核转录因子芳香烃受体(AHR)的百分比.结果 对照组的Th22细胞比例为(2 2±0.9)％,AHR的比例为(4.2±0.8)％.与对照组相比,TNF-α+IL-6组的Th22细胞比例为(13.2±3.5)％、AHR的比例为(19.5±5.0)％,两者的比例显著上调(t=13.7、11.6,均P＜o.05).IL-27组的Th22细胞比例为(2.0±0.6)％、AHR的比例为(3.3±0.8)％,与对照组相比,两者的比例差异均无统计学意义(t =0.2、0.7,均P＞0.05).与TNF-α+ IL 6组相比,IL-27+TNF-α+IL 6组的Th22细胞比例为(6.0±2.0)％、AHR的比例为(8.4±2.6)％,两者的比例均显著下调(t =8.9、8.4,均P＜0.05);后续实验中,与对照组的Th22细胞比例(2.4±1 0)％以及AHR比例(4.2±1.1)％相比,胸腔积液上清组的Th22细胞比例(5.2±1.3)％以及AHR比例(6.5±1.6)％均显著上调(t=4.3、3.3,均P＜0.05).与胸腔积液上清组相比,胸腔积液上清+ IL-27受体/Fc段嵌合体组的Th22细胞比例(8.2±2.6)％以及AHR比例(13.8±2.0)％均进一步地显著上调(t=4.4、10.7,均P＜0.05).结论 IL-27本身不引起Th22细胞的分化,但对由TNF α+IL-6诱导的Th22细胞分化过程具有负向调节作用,在结核性胸膜炎微环境中能够抑制过强的Th22反应.     

Th17细胞及其细胞因子与乙型肝炎后肝硬化肝组织炎症活动度相关性的研究

最新研究显示Th17细胞可能参与了非病毒特异性肝损伤的调控,然而至今尚无研究报道其是否参与了乙型肝炎后肝硬化的肝损伤。目的:探讨Th17细胞及其细胞因子与乙型肝炎后肝硬化肝组织炎症活动度的关系。方法:收集12例肝组织发生亚大块及以上坏死、12例肝组织炎症活动度为G2～G4的乙型肝炎后肝硬化患者以及11例健康人的肝组织和外周血标本,以免疫组化方法检测肝组织IL-17的表达和分布,实时荧光定量PCR检测肝组织Th17型细胞因子IL-17 mRNA和Th17细胞特异性转录因子RORγt mRNA的表达,ELISA方法检测血清IL-17水平。结果:亚大块坏死组肝组织IL-17阳性细胞浸润区域较G2～G4炎症组广泛,健康对照组仅有少量IL-17阳性细胞浸润。亚大块坏死组肝组织IL-17、RORγt mRNA表达和血清IL-17水平均明显高于G2～G4炎症组(P=0.0226,P=0.0531,P=0.0171).G2～G4炎症组又高于健康对照组(P=0.0289,P=0.0005,P=0.0160)。肝内IL-17 mRNA表达和血清IL-7水平与肝组织炎症活动度呈正相关(r_s=0.686,P0.0001;r_s=0.767,P0.0001)。结论:肝内和血清Th17型细胞因子IL-17水平与乙型肝炎后肝硬化肝组织炎症的严重程度呈正相关,Th17细胞及其细胞因子参与了乙型肝炎后肝硬化的肝损伤。     

CD4+白细胞介素-17+辅助性T细胞对香烟暴露小鼠肺部炎症及肺气肿的作用

目的 观察香烟烟雾暴露小鼠肺实质中CD4+白细胞介素(IL)-17+辅助性T细胞(Th17)数量及活性的表达,探讨其在香烟暴露小鼠肺部CD4+ γ-干扰素+(Th1)炎症及肺气肿中的作用及相关机制.方法 将40只雄性Balb/c小鼠按随机数字表法分为4组:对照12周(C12)组、对照24周(C24)组、烟雾暴露12周(S12)组、烟雾暴露24周(S24)组,每组10只.香烟烟雾暴露法建立小鼠肺气肿模型.HE染色观察小鼠肺气肿的改变,计算平均内衬间隔和肺泡破坏指数(DI);流式细胞术检测小鼠肺实质中CD4+IL-17+T(Th17)细胞、CD4+γ-干扰素+T(Th1)细胞、CD4+IL-17+γ-干扰素+T(Th17/Th1)细胞、CD8+γ-干扰素+T(Tc1)细胞、CD8+IL-21R+细胞及CD4+IL-17+IL-21+细胞比例;荧光定量PCR法检测小鼠肺实质中维甲酸相关孤独受体(RORγt)和IL-17的mRNA表达,并分析这些指标的相互关系.结果 S12组和S24组的平均内衬间隔[(39±4)μm和(47±7)μm]和DI(39.1±1.6和45.2±3.1)明显高于C12组[(32±4)μm和28.2±1.6]和C24组[(33±3)μm和28.9±2.1],且以S24组的增高更为明显,差异均有统计学意义(t值为4.378～15.188,均P＜0.05);S12组和S24组Th17细胞比例[(3.3±1.1)%和(7.2±2.2)%]均明显高于C12组和C24组[(1.8±0.8)%和(2.0±0.6)%];S12组和S24组RORγtmRNA表达量[(25±4)和(35±3)]及IL-17的mRNA表达量[(26±3)和(36±3)]亦明显高于C12组[(10±5)和(13±5)]和C24组[(11±7)和(8±6)],以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(P＜0.05);S12组和S24组Th1细胞比例[(10.0±3.7)%和(26.2 ±6.0)%]、Th17/Th1细胞比例[(0.61±0.30)%和(1.82±0.52)%]及Tc1细胞比例[(17.0±4.5)%和(26.8±8.5)%]均明显高于C12组[(3.8±1.7)%、(0.27±0.17)%和(4.8±1.9)%]和C24组[(4.2±1.3)%、(0.28±0.11)%和(5.2±1.0)%],以S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(P＜0.05);S12组和S24组小鼠Th17细胞与Th1、Tc1细胞比例、平均内衬间隔、DI值均呈显著正相关(r值为0.519～0.797,均P＜0.01);Th17/Th1细胞比例与平均内衬间隔、DI值呈显著正相关(r值分别为0.742和0.802,均P＜0.01);S12组和S24组CD4+IL-17+IL-21+细胞比例[(0.19±0.04)和(0.55±0.24)]明显高于C12组和C24组[(0.07±0.03)和(0.08±0.03)],S24组增高更为明显,差异均有统计学意义(P＜0.05).S12组和S24组的CD8+IL-21R+细胞比例[(2.94±1.26)和(4.12±2.26)]高于C12组和C24组[(1.22±0.31)和(1.34±0.18)](P＞0.05);S12组及S24组小鼠CD4+IL-17+IL-21+细胞比例与Th1、Tc1细胞比例、平均内衬间隔和DI值均呈显著正相关(r值为0.694～0.754,均P＜0.05);S12及S24组小鼠CD8+IL-21R+细胞比例与平均内衬间隔和DI呈显著正相关(r值分别为0.516和0.725均P＜0.05).结论 香烟暴露导致肺气肿小鼠肺内Th17细胞数量及活性上调,并随烟雾暴露时间延长而增强;Th17细胞通过IL-21及IL-21R在肺部Th1/Tc1炎症中起重要促进作用;这对探讨COPD肺部炎症和肺气肿发生机制以及新的治疗靶点具有重要意义.

Abstract：

Objective To evaluate the expression and the role of Th 17 in cigarette smoke-induced lung inflammation and emphysema in mice.Methods Forty male BALB/c mice were randomly divided into 4 groups, including a control group C12, a control group C24, a smoke-exposure 12 week group (S12) and a smoke-exposure 24 week group S24 (n = 10 each).Morphological changes were evaluated by mean linear intercepts and destructive index (DI).The proportion of CD4+ IL-17 + Th17, CD4+ IFN-γ+ Th1, CD4+ IL-17 +IFN-γ+ T( Th17/ Th1 ), CD8+ IFN-γ+ Tc1, CD8+ IL-21R + and CD4+ IL-17 + IL-21 + T cells in lungs of mice was determined by flow cytometry.The mRNA expressions of RORγt and IL-17 were evaluated by real-time PCR.Results Mean linear intercepts and DI were significantly higher in S12 and S24 groups [(39 ± 4)μm, (47 ±7) μm], (39.1 ± 1.6, 45.2 ±3.1 ) as compared to C12[(32 ±4) μm,28.2 ± 1.6] and C24groups [(33 ± 3 ) μm ,28.9 ± 2.1], all P ＜ O.05.The percentage of Th17 of S12 and S24 groups [(3.3 ±1.1 )%, (7.2 ±2.2)%] was significantly increased as compared with that of C12 and C24 groups [( 1.8± 0.8) %, (2.0 ± 0.6) %], all P ＜ 0.05.The mRNA levels of RORγt [( 25 ± 4), ( 35 ± 3 )] and IL-17 [(26 ± 3), (36 ± 3 )] in S12 and S24 groups were higher than in C12 [(10 ± 5 ), (13 ± 5 )] and C24 groups [( 11 ± 7 ), (8 ± 6)], all P ＜ 0.05.The percentage of Th 1, Th17/Th1 and Tc1 cells of S12 and S24 groups [(10.0 ±3.7)%, (26.2 ±6.0)%], [(0.61 ±0.30)%, (1.82 ±0.52)%], [(17.0±4.5 ) %, ( 26.8 ± 8.5 ) %] was significantly increased as compared with that of C12 [( 3.8 ± 1.7 ) %,(0.27±0.17)%, (4.8 ±1.9)%] and C24 groups [(4.2±1.3)%, (0.28±0.11)%, (5.2±1.0)%], all P＜0.05.Moreover, the frequency of Th17 cells had a positive correlation with Th1, Tc1 cells and emphysematous lesions ( r =0.519 - 0.797, all P ＜ 0.01 ).In addition, a positive correlation between Th17/Th1 cells and emphysematous lesions was also found (r =0.742, 0.802, all P ＜0.01 ).The percentage of CD4+ IL-17+ IL-21 +T cells was significantly increased in S12 and S24 groups [(0.19 ±0.04) %, (0.55 ± 0.24) %] compared to controls [(0.07 ± 0.03 ) %, (0.08 ± 0.03 ) %], all P ＜ 0.05.Meanwhile, as compared with that of the controls [( 1.22 ± 0.31 ), ( 1.34 ± 0.18 )], the percentage of CD8+ IL-21 R + T cells was also increased in SI 2 and S24 groups [( 2.94 ± 1.26 ), (4.12 ± 2.26 )], but there were no differences among smoke-exposure groups ( P ＞0.05 ).The frequency of CD4+ IL-17 + IL-21 + T cells had a positive correlation with Th 1, Tc1 cells and emphysematous lesions (r = 0.694 -0.754, all P ＜0.05).And the frequency of CD8+ IL-21R+ T cells also had a positive correlation with emphysematous lesions ( r = 0.516, 0.725, all P ＜ 0.05).Conclusions Cigarette smoke increased the expression and the activity of Th17 in mice.Th17 may play a potential (active) role in the development of lung inflammation through IL-21/IL-21R pathway.     

辅助性T淋巴细胞17在肝囊型包虫病患者外周血中的变化

目的 探讨肝囊型包虫病患者外周血中辅助性T淋巴细胞(Th)17的变化.方法 将56例受试者分为:健康志愿者(HD)组20例,肝囊型包虫病(CE)组18例,肝囊型包虫病合并胆瘘(BF)组18例.流式细胞仪胞内染色分析法检测各组受试者外周血中Th17细胞占CD4+T淋巴细胞比例,ELlSA检测血清Th17细胞相关细胞因子IL-17、IL-23水平.数据行t检验和Pearson相关分析.结果 CE组患者外周血Th17/CD4+T淋巴细胞比例为(0.23±0.11)%,明显低于BF组的(0.76±0.43)%和HD组的(0.52±0.50)%(t=2.225,t=4.077,均P＜0.05),而BF组和HD组间差异无统计学意义(t=1.931,P＞0.05).血清IL-17和IL-23在CE组分别为(12.1±3.7)ng/L和(84.4±46.0)ng/L,明显低于BF组的(15.5±4.1)ng/L和(138.6±37.9)ng/L(t=2.515,t=3.649,均P＜0.05),也低于HD组的(14.8±4.4)ng/L和(138.1±48.7)ng/L(t=2.401,t=3.706,均P＜0.05),而BF组和HD组间差异无统计学意义(t=0.534,P＞0.05).各组血清IL-17水平与IL-23水平呈正相关(r=0.657,P＜0.05).结论 肝囊型包虫病患者外周血中Th17细胞比例明显减少,血清IL-17、IL-23水平显著降低.     

辅助性T细胞17在人类免疫缺陷病毒合并结核感染致病中的作用

目的 观察HIV合并结核感染患者IL-17的表达情况,探讨Thl7细胞在HIV合并结核感染致病中的作用.方法 将54例确诊的HIV感染患者,分为单纯HIV感染组、HIV合并潜伏结核感染组和HIV合并结核感染组,采用全血胞内细胞因子染色方法,使用BD FACSCanto流式细胞仪检测各项指标,FACSDiva软件分析CD4+ IL-17+T淋巴细胞及CD4+ IFNΥ+T淋巴细胞表达情况,组间比较采用独立样本配对t检验.结果 3组患者CD4+T淋巴细胞计数及病毒载量无明显区别;CD4+ IL-17+T淋巴细胞表达百分比单纯HIV感染组为(1.40±1.01)％,HIV合并结核潜伏感染组为(1.29±0.86)％,两组比较差异无统计学意义(t=0.336,P＞0.05),但均显著高于合并结核感染组的(0.58±0.43)％(t=3.680,t=2.516,P＜0.05);3组患者之间CD4+IFNγ+T淋巴细胞表达百分比分别为(32.8±24.0)％、(40.3±21.9)％和(46.1±31.2)％,3组比较,差异无统计学意义(t=-0.939,t=-1.602,t=-0.646,均P＞0.05).结论 HIV合并结核感染患者出现明显的Th17应答下调,Th17细胞可能在HIV合并结核感染中起着重要的抗结核免疫保护作用.     

Th17细胞相关因子在慢性乙型肝炎肝组织中的表达

背景:Th17细胞是一类不同于Th1和Th2细胞的辅助性T细胞亚群,在慢性炎症和免疫相关疾病中发挥重要作用。目的:研究Th17细胞及其相关因子在慢性乙型肝炎(CHB)发病机制中的作用。方法:以实时PCR检测CHB患者和对照组肝组织中诱导Th17细胞分化的核转录因子RORγt以及细胞因子白细胞介素-17(IL-17)、IL-21、IL-23、IL-1β、IL-6的mRNA表达情况,以免疫组化染色检测CHB患者肝组织中IL-17蛋白表达并分析其与肝脏炎症和纤维化程度的相关性。结果:CHB患者肝组织中 RORγt、IL-17、IL-21、IL-23、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平均明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);IL-17蛋白表达阳性细胞数与肝脏炎症分级(r_s=0.801,P0.05)和纤维化分期(r_s=0.797,P0.05)呈正相关。结论:CHB患者肝组织中存在Th17细胞相关因子过表达,IL-17蛋白表达阳性细胞数与肝脏炎症和纤维化程度相关,提示Th17细胞在CHB的免疫发病机制中可能起重要作用。     

1型糖尿病起病过程的临床异质性分析

目的 了解1型糖尿病起病过程的临床异质性.方法 回顾性分析自1999年1月至2009年12月广州中山大学附属第一医院内分泌科205例新诊断1型糖尿病患者的临床资料.根据症状出现至就诊时间,将患者分为暴发性1型糖尿病（FT1DM）、急性起病及缓慢起病的1型糖尿病（出现症状至就诊时间分别≤或＞3个月）,比较3组患者临床特点及实验室检查资料.血清谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）、胰岛细胞自身抗体（ICA）、胰岛素自身抗体（IAA）均为定性检测,GADA采用酶联免疫吸附法（ELISA）,ICA、IAA及血清C肽检测采用放射免疫法.计量资料采用单因素方差分析或两个独立样本的t检验,计数资料采用多变量卡方检验及Fisher精确概率法进行统计分析.结果 FT1DM、急性起病及缓慢起病的1型糖尿病分别占8.8%、66.8%及24.4%.3组中FT1DM患者血糖升高更明显[分别为（31±12）、（25±10）、（24±8）mmol/L,F=4.462,P＜0.05],而糖化血红蛋白略高于正常[分别为（6.8±1.1）%、（12.3±2.4）%、（13.9±2.7）%,F=54.661,P＜0.05],酮症酸中毒更常见（分别为93.8%、45.3%、8.0%,F=44.943,P=0.000）,合并低钠血症、高钾血症、酸中毒、肝肾功能受损更严重,合并妊娠的比例更高（分别为22.2%、0、0,X2=20.982,P=0.000）.缓慢起病的1型糖尿病患者起病年龄及体质指数较另两组大,而体质量下降更明显,负荷后C肽水平明显高于另外两组[分别为（0.40±0.36）、（0.10±0.13）、（0.34±0.26）nmol/L,F=8.752,P＜0.05].儿童及青少年在急性起病的1型糖尿病中所占比例更高,其临床表型与成人相似.结论3组患者起病过程的临床异质性十分明显,提示1型糖尿病可能存在不同的疾病触发机制.