免疫复合物型乙型肝炎疫苗的免疫原性分析北大核心CSCD

目的：分析免疫复合物型乙型肝炎疫苗在小鼠体内和食蟹猴体内的免疫原性。方法免疫复合物型乙型肝炎疫苗单次免疫小鼠,不同时间点采血进行anti-HBs滴度动态检测;不同免疫程序免疫小鼠,进行anti-HBs滴度检测;肌肉注射5μg/只免疫小鼠,ELISPOT方法检测IFN-γ形成斑点数并进行阳转率统计;测定稳定性试验样品的ED50;分别以20μg/只和100μg/只剂量免疫食蟹猴,不同时间点采血检测anti-HBs滴度。结果免疫复合物型乙型肝炎疫苗动态检测anti-HBs滴度均高于重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）;免疫复合物型乙型肝炎免疫2针次anti-HBs滴度可达到重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）免疫3针次水平;免疫复合物型乙型肝炎疫苗细胞免疫检测IFN-γ斑点形成细胞（ SFC）及阳转率高于重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）及酿酒乙型肝炎疫苗国家参考品;免疫复合物型乙型肝炎疫苗长期稳定性优于酿酒酵母乙肝疫苗,ED50值低于后者,高低两种剂量免疫食蟹猴,均可诱导高滴度anti-HBs,且持续性良好。结论免疫复合物型乙型肝炎疫苗有较好的免疫原性,其体液免疫和细胞免疫水平均优于重组乙型肝炎疫苗（酿酒酵母）。     

一种IFN-γ ELISPOT检测方法的建立

目的:建立检测一种融合蛋白疫苗诱导特异性细胞免疫的ELISPOT实验方法,通过分析免疫小鼠分泌IFN-γ的水平,评价疫苗诱导的细胞免疫应答效应.方法:以融合蛋白疫苗免疫C57BL/6小鼠,14天后加强免疫一次,于第28天无菌取脾,分离脾淋巴细胞,计数并调整细胞浓度,在已包被好的ELISPOT板中分别加入细胞悬液和刺激肽进行刺激培养.裂解细胞,依次加入酶标二抗、底物、显色液,在ELISPOT读板仪进行斑点计数和分析.结果:ELISPOT检测结果与动物免疫途径、细胞培养时间、细胞密度、肽浓度等条件密切相关.实验结果证明:采用皮下注射的免疫途径,免疫效果最佳;小鼠脾淋巴细胞浓度为4×105个/孔,加入1 μg/孔的刺激肽刺激培养24～48小时的条件下,产生的特异性斑点数最多,本底干扰小,有利于结果判断.结论:实验建立了IFN-γ ELISPOT检测方法,可用于该融合蛋白疫苗细胞免疫研究.     

HIV gag DNA疫苗诱导小鼠特异性细胞免疫应答的研究

目的 研究小鼠注射HIV gag DNA疫苗后的抗原特异性细胞免疫应答.方法 C57BL/6小鼠以初免/加强的策略经肌肉注射HIV gag DNA疫苗,一周后获取其脾与肺的单个细胞,体外经Gag抗原多肽刺激后,采用ELISA法检测细胞培养上清中IFN-γ的水平,ELISPOT法检测IFN-γ分泌细胞的频率,流式细胞仪分析特异性T细胞的亚群.结果 经Gag多肽刺激后,加强免疫组IFN-γ产生的总体水平和分泌细胞频率均高于对照组及初次免疫组.HIV gag DNA疫苗可同时诱导产生Gag-特异性CD4 和CD8 T细胞.结论 HIV gagDNA疫苗免疫小鼠后可诱导抗原特异性效应性T细胞应答.     

人博卡病毒VP2病毒样颗粒诱导特异性细胞免疫反应的研究

目的 探讨酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测人博卡病毒(HBoV) VP2病毒样颗粒(VLPs)诱导特异性细胞免疫反应的最佳条件.方法 HBoV VP2 VLPs免疫小鼠后,用ELISPOT方法检测小鼠的特异性细胞免疫反应,观察不同多肽刺激、不同细胞培养时间、不同细胞浓度以及不同浓度特异性刺激多肽条件下ELISPOT结果.结果 多肽P3(GYIPIENEL)及P5(LYQMPFFLL)刺激HBoV1 VLPs免疫小鼠脾脏淋巴细胞产生斑点数分别为233个/10(6)和157个/10(6)细胞,P8(GYIPVIHEL)刺激HBoV2 VLPs免疫小鼠脾脏淋巴细胞产生斑点数为113个/10(6)细胞;培养时间以24 h为最佳,此时HBoV1与HBoV2实验组特异性分泌IFN-(ｒ)的比率分别为232个/10(6)和119个/10(6)细胞;小鼠脾脏淋巴细胞浓度以5×10(5)为最佳,此时HBoV1与HBoV2实验组特异性分泌IFN-(γ)的比率分别为232个/10(6)和108个/10(6)细胞;刺激物浓度10μg/ml为最佳,HBoV1与HBoV2实验组特异性分泌IFN-(γ)的比率分别为233个/10(6)和96个/10(6)细胞.结论 HBoV1与HBoV2特异性BABL/c小鼠T细胞表位多肽分别为HBoV1:P3;HBoV2:P8.检测人博卡病毒VP2病毒样颗粒诱导特异性细胞免疫反应ELISPOT方法最佳实验条件为:培养时间24 h,细胞浓度5×10(5)细胞/孔,刺激多肽终浓度10 μg/ml,可用于HBoV在小鼠上的细胞免疫研究.     

共刺激分子4-1BBL基因免疫对HBsAg核酸疫苗诱导小鼠特异性免疫应答的影响

目的 研究共刺激分子4-1BBL基因免疫对HBsAg核酸疫苗诱导小鼠特异性体液和细胞免疫应答的影响.方法 将HBV表面抗原核酸疫苗pcDS2单独或联合共刺激分子4-1BBL质粒肌肉注射免疫C57BL/6小鼠;ELISA法检测小鼠血清抗-HBs IgG及亚型IgG1和IgG2a;迟发型超敏反应(DTH)反应检测体内细胞反应;流式细胞仪检测CD4+ T淋巴细胞分泌IL-4和IFN-γ及CD8+T淋巴细胞分泌IFN-γ水平;流式细胞仪检测小鼠脾细胞HBsAg特异性体外细胞毒性T淋巴细胞杀伤作用(CTL).结果 与单纯免疫核酸疫苗pcDS2组比较,pcDS2和4-1BBL联合免疫组小鼠的抗-HBs水平显著提高,抗-HBs IgG亚类以IgG2a占优;免疫小鼠经HBsAg脚掌皮下刺激后,联合免疫组小鼠脚掌的厚度显著高于pcDS2组;联合免疫组CD4+T淋巴细胞的IL-4和IFN-γ表达水平及CD8+T淋巴细胞的IFN-γ表达水平显著升高;DNA疫苗免疫的各组小鼠,HBsAg特异性体外CIL杀伤作用高于对照组,其中联合免疫组小鼠的体外CTL杀伤作用最强.结论共刺激分子4-1BBL不仅能增强HBV DNA疫苗诱导特异性体液免疫应答,还能增强特异性型细胞免疫反应,尤其增强体内CIL的杀伤活性.     

我国不同艾滋病候选疫苗小鼠细胞免疫应答评价

目的 比较我国不同艾滋病(AIDS)候选疫苗小鼠细胞免疫应答水平.方法 将我国6种艾滋病候选疫苗按其各自免疫程序,免疫BALB/c小鼠,分离脾细胞,利用酶联免疫斑点法(ELISPOT)与胞内因子染色法(ICS)检测其对HIV特异多肽的细胞免疫应答水平.结果 6种艾滋病候选疫苗利用潜在T细胞表位(PTE)Gag、Env和Pol肽库和ELISPOT法检测IFN-γ的分泌情况,结果各疫苗的小鼠细胞免疫阳转率为70%～100%,各疫苗引起特异细胞免疫应答的反应肽库不同,强度亦不相同.1#和2#疫苗利用ELISPOT检测分泌Th1类细胞因子IFN-γ和IL-2的小鼠脾细胞数量,两疫苗的IFN-γ和IL-2检测结果均呈中度相关性(r1=0.62,P1＜0.01;r2=0.79,P2＜0.01).ELISPOT和ICS检测1#疫苗免疫后分泌IFN-γ的小鼠脾细胞数,结果两种方法的小鼠阳转率均为66.7%(10/15),ELISPOT阳性细胞数与ICS阳性细胞比例呈中度相关(r=0.55,P＜0.05).结论 我国不同AIDS候选疫苗引起的小鼠细胞免疫应答在广度和强度上存在差别.ELISPOT或ICS检测IFN-γ等Th1类细胞因子可作为疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的评价指标.     

SARS-CoV S DNA疫苗诱导特异性T细胞及相关细胞因子的特性研究

目的 小鼠经皮下SARS-CoV S DNA疫苗免疫后，研究其特异性T细胞及相关细胞因子的特性。方法SARS-CoV S DNA疫苗免疫BALB／c小鼠后，获取淋巴细胞悬液。经S抗原多肽刺激后，采用ELISA检测细胞培养上清液中IFN-γ／的水平，利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测IFN-γ和IL-2的表达及其关系。结果 当S混合多肽刺激后，DNA疫苗免疫小鼠的淋巴细胞产生大量的IFN-γ，与对照鼠相比差异有统计学意义（P〈0．01）。细胞亚群分析的结果表明，IFN-γ^＋和IL-2^＋的CD4^＋T细胞百分率明显高于CD8^＋T细胞。单独产生IL-2的细胞占大多数，其次为IFN-γ和IL-2双阳性细胞，只产生IFN-γ的细胞很少。结论 SARS-CoV S DNA疫苗免疫小鼠后可以诱导抗原特异性CD4^＋和CD8^＋T细胞的产生。     

体内电穿孔在质粒介导的基因转移及DNA免疫中的应用

目的 研究体内电穿孔技术对于质粒DNA介导的体内基因表达以及HIV-1 Env DNA疫苗免疫效果的影响.方法 将携带荧光素酶Luciferase基因的表达质粒p1.0-Luc和携带HIV-1 CN54 env基因的DNA疫苗质粒p1.0-gp1455m通过单独肌肉注射或肌肉注射后加电穿孔两种不同方法 注射小鼠.用IVIS(R)活体成像系统实时检测Luciferase报告基因在体内的表达情况.用ELISA检测HIV-1 Env特异的抗体反应,用IFN-γ ELISPOT检测HIV-1 Env特异的T细胞免疫反应.结果 体内电穿孔技术可以显著提高Luciferase在小鼠体内的表达水平,幅度达35倍.HIV-1 Env DNA疫苗免疫结果 显示,8μg质粒剂量电穿孔途径诱导的体液和细胞免疫应答强于40μg质粒剂量单纯肌肉注射组;体内电穿孔途径免疫2次与单纯肌肉注射途径免疫3次诱导的体液和细胞免疫应答水平相当.结论 体内电穿孔技术可以大幅度提高报告基因在体内的表达水平和DNA疫苗的免疫应答.     

HIVpol基因修饰在不同载体系统中对免疫效果的影响

目的 了解pol基因修饰前后在不同载体系统中表达水平差异对免疫效果的影响,为确定HIV疫苗中能诱发较高水平细胞免疫的Pol靶抗原奠定实验基础.方法 将含有优化前后pol基因的HIV-1DNA( pVRC)疫苗和痘苗病毒载体(rVV)疫苗单独或联合免疫BALB/c小鼠,利用IFN -γ ELISPOT和ICS检测各组的细胞免疫效果,ELISA检测体液免疫水平,分别比较基因优化前后及在不同载体内的Pol诱发的免疫效果.结果 DNA疫苗中pol基因修饰后细胞免疫反应由112提高至258 (SFC/106SMNC),抗体滴度随免疫次数增加而提高,基因修饰后第二针的抗体水平由101.7提高至102.3,三针后则没有差别;而以痘苗病毒为载体的疫苗基因修饰前后细胞免疫反应( ～600SFC/106SMNC)和抗体水平(～102.2)均没有差异.两种疫苗联合免疫均可显著提高Pol在小鼠体内的免疫效果,基因修饰后细胞免疫反应由788提高至2500( SFC/106 SMNC),抗体水平则没有差别.结论 Pol基因修饰明显提高常规DNA疫苗免疫效果,并可进一步提高联合免疫效果,但对重组痘苗病毒疫苗单独免疫效果无明显影响.     

犬腺病毒DNA疫苗的免疫实验研究

目的研究犬腺病毒DNA疫苗pVAX1-CpG-Loop刺激机体产生免疫应答的效果。方法采用2种不同的免疫途径和免疫方案免疫Balb/c小鼠;免疫后每周断尾采血,分离血清测定血清IgG抗体效价;采用MTT和CCK-8方法检测免疫小鼠的T淋巴细胞增殖活性,EIA试剂盒测定IFN-γ的浓度。结果所有接种DNA疫苗的小鼠均产生了针对抗原病毒的特异性IgG抗体。细胞学试验提示构建的犬腺病毒DNA疫苗也可诱导小鼠产生细胞性免疫应答,重组质粒-蛋白联合的免疫方案在刺激机体细胞免疫应答方面优于单一重组质粒。结论以上结果提示犬腺病毒DNA疫苗pVAX1-CpG-Loop既能诱导小鼠产生特异性的体液免疫应答,也诱导小鼠产生了细胞免疫应答,对于机体具有一定的免疫保护效果。     

乙型肝炎疫苗联合B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠抗HBsAg免疫应答的影响

目的:研究B7-H1蛋白疫苗对HBV转基因小鼠免疫应答的影响,探索治疗慢性乙型肝炎的新方法。方法:用不同剂量的乙型肝炎疫苗和B7-H1蛋白疫苗联合免疫HBV转基因小鼠,应用ELISA法检测转基因小鼠在不同时间点血清抗B7-H1抗体滴度,同时在免疫后第14周末处死小鼠取脾细胞,检测不同的免疫方法对小鼠脾细胞产生HBsAg特异性Th1类细胞因子(IFN-γ及IL-2)、对HBsAg特异性分泌IFN-γT细胞数量及对小鼠淋巴细胞增殖的影响。结果:成功完成小鼠的免疫计划,5周起血清中即能测到B7-H1抗体,同一时间点各组之间的抗体滴度值并无明显差异。加B7-H1蛋白免疫各组与相同剂量单用HBsAg蛋白免疫各组相比:IL-2均明显减低(P<0.05),分泌IFN-γT的T细胞数量下降,但脾淋巴细胞分泌IFN-γ的水平各组间无明显差异;MTT法测定的淋巴细胞增殖能力各组间也无明显变化。结论:B7-H1蛋白疫苗可诱导HBV转基因小鼠产生明显的抗B7-H1抗体应答,但不能增强抗HBsAg的免疫应答。较小剂量的HBsAg即可引起HBV转基因小鼠Th1类细胞因子(IFN-γ及IL-2)的分泌以及淋巴细胞增殖。     

沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答

目的构建沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗,并观察其诱导小鼠产生的体液免疫和细胞免疫。方法将核酸疫苗(pcDNA3.1MOMP)或对照空质粒(pcDNA3.1)注射于4～6周龄小鼠后腿股四头肌,每次剂量为100mg。间隔2周加强免疫2次。末次免疫后,ELISA法测定脾淋巴细胞培养上清液中IFNγ及小鼠血清中抗MOMP水平;MTT法测定脾淋巴细胞特异性增殖反应。结果小鼠接种核酸疫苗后,能产生特异性抗体,第3次免疫后抗体最高滴度达1∶1024,培养上清液中IFNγ达(532.0±45.4)pg/mL;实验组小鼠脾淋巴细胞刺激指数为3.94±0.25,其抗原特异性反应明显高于对照组。结论沙眼衣原体主要外膜蛋白核酸疫苗能刺激机体产生特异的细胞免疫和体液免疫。     

不同种类乙型肝炎表面抗原诱导小鼠早期细胞免疫应答的比较

目的 比较不同表达系统来源的乙型肝炎(乙肝)表面抗原(HBsAg)免疫小鼠诱导早期脾淋巴细胞抗原特异性细胞免疫应答的特点,探讨影响乙肝疫苗保护效果的因素.方法 3种HBsAg(汉逊酵母、CHO细胞和血源)分别皮下接种不同组小鼠(BALB/c,H-2d),每只3μg,于免疫后4d分离脾单个核细胞(MNC),经细胞分选仪(MACs)分选后,获得纯度高于90％的CD4+和CD8+T细胞,应用ELISPOT测定MNC、CD4+和CD8+T细胞体外刺激后所产生的细胞因子IFN-γ、IL-2斑点数( SFC).结果 细胞分选后,汉逊抗原诱导CD8+T细胞分泌IFN-γ的水平和CD4+T细胞分泌IL-2水平均显著高于CHO抗原组(8/10、2/10,P=0.035;6/10、0/10,P=0.005).汉逊抗原组与血源抗原组CD8+T细胞经体外刺激诱导IFN-y全部阳转(10/10),但分泌水平上汉逊抗原组显著高于血源抗原组(t=2.479,P=0.035);汉逊抗原组诱导CD4+T细胞IFN-γ阳转率及分泌水平均显著高于血源抗原组(10/10、4/10,P=0.005;t=3.967,P=0.003).结论 乙肝抗原免疫小鼠4d即可诱导细胞免疫应答,且汉逊酵母抗原早期诱导抗原特异性IFN-γ、IL-2的能力显著高于CHO和血源抗原,与其临床考核母婴传播阻断HBV保护率显著优于CHO和血源乙肝疫苗相一致,为及时接种乙肝疫苗的必要性和高危新生儿选择接种乙肝疫苗的类型提供依据.     

灭活与减毒两种甲肝疫苗免疫后诱导细胞免疫应答初探

目的 对国内普遍应用的减毒和灭活甲肝疫苗诱导的细胞免疫水平(产生时间、应答水平)进行检测和比较.方法 筛选健康志愿者18人,随机分组后分别接种甲肝减毒活疫苗和甲肝灭活疫苗.按实验程序以周次为时间点采血,用化学发光法对特异性甲肝抗体(HAY-IgG)进行检测;同时收集外周血单个核细胞(PBMC),用特异性甲肝抗原刺激后,以酶联免疫斑点试验(ELISPOT)法检测效应T细胞分泌TH1型细胞因子IFN-γ的情况;用胞内细胞因子染色法测定CD+ T和CD8+T淋巴细胞中分泌IFN-γ的阳性细胞百分比,Lumlnex法检测细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-4等多种细胞因子水平.结果 两种疫苗均可诱导产生特异性抗HAV抗体,且观测期间抗体水平差异无统计学意义.两种疫苗接种初期即可诱导产生病毒特异性T细胞免疫应答反应,同时伴随高水平的效应细胞因子IFN-γ产生.在免疫接种后1-3周,灭活疫苗诱导的细胞免疫应答水平高于减毒疫苗;而在4-6周,减毒疫苗诱导的细胞免疫应答水平明显增高,超过灭活疫苗.灭活疫苗所诱导的细胞免疫应答在加强免疫后明显增强.结论 两种疫苗接种初期均可诱导体液和细胞免疫应答;灭活疫苗加强免疫后可激发记忆性免疫应答.     

高复制HBV转基因小鼠模型对抗乙型肝炎病毒药物的效应研究

 目的：研究高复制HBV转基因小鼠模型对抗乙肝病毒药物的效应评价。 方法： 选用抗乙肝药物拉咪呋啶、大剂量重组乙肝蛋白疫苗、α-1b型干扰素和RNA干扰在转基因小鼠进行药效及作用机制评价。 结果：拉咪呋啶、重组乙肝疫苗、α-1b型干扰素均可使HBV转基因小鼠血清中HBV DNA滴度显著降低。其中后两者还可提高机体脾细胞IL-2和IFN-γ的水平及使分泌IFN-γ脾细胞Elispot斑点数明显增加。将RNA干扰表达载体pU6-siHBV质粒尾静脉注入小鼠体内。注射后5 d血清HBsAg下降56.7%,抑制作用持续14 d。肝脏免疫组化显示HBcAg阳性细胞明显减少，但血清HBV DNA定量无明显降低。 结论： 本近交系高复制HBV转基因小鼠模型对抗乙肝药物药效学评估是可靠、可行的。     

Associations between polymorphisms in the antiviral TRIM genes and measles vaccine immunity

The role of polymorphisms within the antiviral tripartite motif (TRIM) genes in measles vaccine adaptive immune responses was examined. A limited association was found between TRIM5 (rs7122620) and TRIM25 (rs205499) gene polymorphisms and measles-specific antibody levels. However, many associations were found between TRIM gene SNPs and variations in cellular responses (IFN-γ Elispot and secreted cytokines IL-2, IL-6, IL-10, IFN-γ, and TNF-α). TRIM22 rs2291841 was significantly associated with an increased IFN-γ Elispot response (35 vs. 102 SFC per 2 × 10⁵ PBMC, p = 0.009, q = 0.71) in Caucasians. A non-synonymous TRIM25 rs205498 (in LD with other SNPs, r² ? 0.56), as well as the TRIM25 AAAGGAAAGGAGT haplotype, was associated with a decreased IFN-γ Elispot response (t-statistic −2.32, p = 0.02) in African-Americans. We also identified polymorphisms in the TRIM5, TRIM22, and TRIM25 genes that were associated with significant differences in cytokine responses. Additional studies are necessary to replicate our findings and to examine the functional consequences of these associations.     

Antigen-Antibody Complex as Therapeutic Vaccine for Viral Hepatitis B

In a previous study, hepatitis B surface antigen (HBsAg) complexed to human anti-HBs immunoglobulins (HBIG) in excess of HBsAg was used as therapeutic vaccine to treat chronic hepatitis B patients and promising results were obtained. To study the mechanisms of this approach, mice were immunized with HBsAg or IC (immunogenic complex, i.e. HBsAg complexed with mouse polyclonal anti-HBs). Studies indicate that IC induced enhanced immune responses by increasing uptake of HBsAg through Fc receptors on antigen presenting cells and modulated HBsAg processing and presentation. This modulation led to stimulation of T cell responses, and increased production of IL-2 and IFN-γ. Assay for antibody subclasses showed that higher ratio of IgG 2a was observed in the IC immunized group, which correlated with the production of lymphokine pattern. When alum was used as the adjuvant, though antibody response was enhanced, production of cytokines decreased. When DNA from a recombinant plasmid was added to IC as an adjuvant, the liter of anti-HBs was significantly higher than those in mice immunized only with the DNA or the IC. Since DNA immunization can induce both cellular and humoral immune responses, combined immunization using IC and DNA might serve as another type of therapeutic vaccine for viral hepatitis B.     

人禽流感病毒H5N1多价重组痘苗病毒(天坛株)疫苗在小鼠中的免疫原性研究

目的 研发高效广谱的人高致病性禽流感病毒H5N1实验疫苗.方法 首先构建了含H5N1(安徽株)结构基因[血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、基质蛋白M1与M2]的两个双顺反子(HAop/M2,NAop/M1)重组痘苗病毒(rTTV天坛株)疫苗,采用不同剂量(104 PFU或107PFU)或组合(疫苗单独或联合)方式于0、4周二次免疫BALB/c小鼠,初步比较分析抗原特异的体液(HA血凝抑制抗体、NA特异性抗体、中和抗体)与细胞免疫应答(IFN-γ ELISPOT)特点.结果 重组痘苗病毒疫苗可有效表达H5N1靶抗原;高剂量组的重组痘苗病毒疫苗可快速激发较强的针对各个抗原的抗体与针对血凝素与神经氨酸酶蛋白的细胞免疫应答,含血凝素蛋白的重组痘苗病毒疫苗亦可诱导明显的中和抗体;但各组重组痘苗病毒疫苗所激发的针对基质蛋白(M1,M2)的细胞免疫应答均较弱;两个双顺反子(HAop/M2,NAop/M1)重组痘苗病毒疫苗联合应用所激发的针对基质蛋白2(M2)的体液免疫应答明显强于单双顺反子(HAop/M2)疫苗单独应用.结论 本研究中制备的各组重组痘苗病毒疫苗可诱导多个抗原特异的体液与细胞免疫应答,该研究为新型H5N1疫苗的研发及免疫方案的优化奠定了基础.     

乙型肝炎表面抗原-破伤风类毒素结合疫苗的制备及免疫学特性

目的 制备乙型肝炎(乙肝)表面抗原(HBsAg)与破伤风类毒素(TT)结合疫苗,并研究其免疫学特性.方法 TT经溴化氢活化后与己二酰肼形成TT-酰肼基衍生物,在碳二亚胺作用下与HBsAg共价结合.将结合物、HBsAg及乙肝疫苗免疫小鼠,并设生理盐水对照组,分别于7、14、21、28 d取血,应用化学发光法检测小鼠血清抗-HBs,于第7、28天应用酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测脾单个核细胞(mouomlclear cells,MNC)分泌HBsAg特异性IFN-γ和IL-2能力.结果 成功制备了HBsAg-TT结合物,该结合物诱导抗-HBs阳转率及抗体滴度均较单独免疫HBsAg及乙肝疫苗组高,主要以IgG2a抗体为主,且分泌IFN-γ和IL-2的淋巴细胞数也显著增加.结论 用该方法 制备的HBsAg-TY结合疫苗,不仅可诱导较强的体液免疫,还可诱导以TH1应答为主的细胞免疫.