雄黄纳米微粒在细胞水平上抑制腺病毒复制的初步研究

目的 建立腺病毒3型（ HAdV-3）感染Hep-2细胞模型,观察中药雄黄对腺病毒3型（ HAdV-3）感染Hep-2细胞病变的抑制作用.方法 用高能球磨机研磨双蒸水水飞处理制备雄黄纳米微粒,应用砷钼蓝染色法测定雄黄纳米微粒浓度并在Nano Series粒度测定仪上测定其粒度.以MTT法计算药物的半数中毒剂量（TC50）.通过三种不同给药方式即预防给药、治疗给药及直接灭活给药方式进行体外实验,以利巴韦林为阳性对照药,观察雄黄纳米微粒对HAdV-3感染Hep-2细胞病变所起的作用,并对药物的量效关系进行分析.结果 雄黄纳米微粒TC50值为0.649 μg/ml.预防、治疗及直接灭活给药方式均可减轻HAdV-3感染Hep-2细胞的CPE程度,其抗HAdV-3的半数有效浓度（ IC50）分别为0.255 μg/ml、0.142 μg/ml、0.117 μg/ml,治疗指数（TI）分别为2.55、4.57和5.55,雄黄纳米微粒对HAdV-3感染Hep-2细胞CPE的抑制作用存在着明显的量效关系.结论 雄黄纳米微粒在体外有抑制HAdV-3病毒复制和直接灭活病毒的作用,并有一定保护Hep-2细胞预防HAdV-3病毒感染的作用.     

六神丸在细胞水平上抗腺病毒的初步研究

目的 建立腺病毒3型（HAdV-3）感染HEp-2细胞模型,评价六神丸混悬液对腺病毒感染HEp-2细胞病变的抑制作用,并进一步探讨六神丸在体外抗腺病毒的量效关系.方法 用乙醇回流法处理制备六神丸液.以MTT法计算药物的半数中毒剂量（TC50）.通过三种不同给药方式即预防给药、治疗给药及直接灭活给药方式进行体外实验,观察六神丸液对HAdV-3感染HEp-2细胞病变所起的作用,并对药物的量效关系进行分析.结果 六神丸液TC50值为40.48 μg/ml.预防、治疗及直接灭活给药方式均可减轻HAdV-3感染HEp-2细胞的CPE程度,其抗HAdV-3的半数有效浓度（IC50）分别为28.91μg/m1、19.28 μg/m1、8.61 μg/ml,治疗指数（TI）分别为1.4、2.1和4.7,六神丸液对HAdV-3感染HEp-2细胞CPE的抑制作用存在着一定的量效关系.结论 在预防、治疗及直接灭活给药方式下,六神丸均有一定的抗HAdv-3的作用,但直接灭活效果更明显.     

雄黄纳米颗粒在基因水平上抑制腺病毒复制的实验研究CSCD

目的建立人腺病毒3型（HAdV-3）感染Hep-2细胞模型,采用荧光定量PCR（Real-timePCR）技术,观察雄黄纳米微粒在基因水平上对HAdV-3DNA表达的影响。方法将实验分为4组,即Hep-2细胞对照组、HAdV-3病毒对照组、雄黄纳米微粒组和利巴韦林组。在HAdV．3感染Hep．2细胞后,分别加入雄黄纳米微粒和利巴韦林作用24h,提取HAdV-3感染Hep-2细胞的总DNA,建立Real-timePCR反应体系,测定各实验组HAdV-3的病毒载量。结果Hep-2细胞对照组无扩增曲线,Ct〉35,腺病毒病原体检测阴性;雄黄纳米微粒组、利巴韦林组和HAdV-3病毒对照组扩增曲线ct分别为29．30±0．08、33．05±1．29、26．01±0．25,腺病毒病原体检测阳性。与HAdV-3病毒对照组病毒复制量（66699932±23．85）相比,利巴韦林组病毒复制量（459124．84±12．82）明显降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;雄黄纳米微粒组病毒复制量（912435．44±16．57）较HAdV-3病毒对照组病毒复制量有所降低（P〈0．05）。结论建立的HAdV-3感染Hep．2细胞模型可靠,荧光定量PCR方法灵敏性高、特异性强,雄黄纳米微粒对腺病毒的核酸复制有-定的抑制作用。     

蛭丹化瘀口服液体外抑制RSV作用机制的研究

目的 研究蛭丹化瘀口服液体外抗呼吸道合胞病毒作用环节.方法 观察该药在不同浓度和不同的作用环节下RSV对Hep-2细胞的致病作用.结果 蛭丹化瘀口服液对细胞无毒浓度为5.5 mg/ml,并在此浓度中未能阻断RSV对细胞的吸附,细胞产生了完全病变.蛭丹化瘀口服液在2.75～5.50 mg/ml浓度中,药物直接灭活病毒组和先感染细胞再加入药物的治疗组均未产生细胞病变.结论 蛭丹化瘀口服液体外实验无预防RSV感染作用,有直接灭活RSV作用,并对进入细胞内的RSV有抑制作用.     

蚯蚓体腔液体外抗呼吸道合胞病毒的实验研究

目的研究蚯蚓体腔液（Earthworm coelomic fluid,ECF）体外抗呼吸道合胞病毒（RSV）的作用。方法以Hep-2细胞为宿主细胞,利巴韦林作为阳性对照药物,通过观察细胞病变效应（CPE）和MTT染色法来研究蚯蚓体腔液体外抗RSV的作用。结果ECF和利巴韦林对Hep-2细胞的CC50分别为3．11mg／ml和1．35mg／ml。在直接杀灭作用实验中,IC50为184．1μg／ml,SI值为16．87;在抑制病毒复制实验中,IC50为1555．8μg／ml,SI值为1．99;在阻断病毒侵入实验中,没有观察到抗病毒的作用。结论蚯蚓体腔液具有直接杀灭和抑制RSV复制的作用,其中直接杀灭作用的抗病毒效果较明显,但不具有阻断RSV入侵的作用。     

白黎芦醇体外抑制水痘-带状疱疹病毒作用机制的研究

目的 应用构建的水痘-带状疱疹病毒(VZV)报告细胞系MV9G进一步研究白黎芦醇体外抑制VZV的作用机制.方法 将无细胞VZV直接感染MV9G细胞(CFVs直接感染)或将带细胞VZV与MV9G细胞共培养(CAVs共培养)以激发MV9G细胞表达报告基因萤火虫荧光素酶.在CFVs直接感染前或CAVs共培养不同时间点加入白黎芦醇,通过比较药物对CFVs或CAVs激发荧光素酶的抑制强度分析白黎芦醇直接灭活病毒、抑制病毒黏附和穿透、抑制病毒在细胞内复制及其时间点和可逆性:通过比较药物作用前后VZV即刻早期蛋白62(IE62)mRNA拷贝数和IE62表达强度变化分析白黎芦醇对IE62转录和表达的抑制作用.结果 白黎芦醇＞30.0 μg/ml时MV9G细胞三磷酸腺苷(ATPs)含量随药物浓度升高而逐渐降低,ATPs降低50％时白黎芦醇浓度(CD.)约60.3μg/ml.CFVs与白黎芦醇(25.0μg/ml)预混37℃水浴孵育2h后直接感染MV9G细胞,CFVs激发荧光素酶下降50％.MV9G细胞在含白黎芦醇培养基中37℃孵育2h后直接感染CFVs,CFVs激发荧光素酶随药物浓度升高而逐渐降低,但4℃孵育对无显著变化.在CAVs共培养中加入白黎芦醇后CAVs激发荧光素酶显著降低,药物抑制荧光素酶50％时浓度(IC.)约8.7 μg/ml.分别在CAVs共培养3、6、9、12、24、30和36 h时加入白黎芦醇,3～24h加药各组CAVs激发荧光素酶均显著高于对照组,但1h、3D h和36 h加药组与对照组间差异无统计学意义.CAVs共培养时撤除白黎芦醇后CAVs激发荧光素酶显著高于撤药前,尤以24h和72 h撤药组明显.VZV IE62 mRNA拷贝数和IE62抗体阳性细胞数随药物作用时间延长而逐渐降低.结论 白黎芦醇细胞毒性较强,MV9G细胞可耐受最高浓度为30.0μg/ml.白黎芦醇部分灭活CFVs、抑制CFVs穿透MV9G细胞但对CFVs黏附MV9G细胞无影响,以浓度依赖方式可逆性抑制CAVs细胞内复制.白黎芦醇可能通过抑制1E62基因的转录和表达而抑制VZV感染的早期阶段.     

雄黄对乳腺癌MCF-7/ADM细胞多药耐药的逆转及机制研究

目的　探讨中药雄黄对乳腺癌多药耐药细胞系 (MCF 7/ADM )的逆转作用及可能的逆转机制。方法　药物敏感试验采用四氮唑蓝 (MTT)比色法 ,细胞内药物浓度测定采用荧光分光光度法 ;基因表达水平检测采用RT -PCR法。结果　雄黄在 0～ 2 5 μg/ml浓度范围内对MCF 7/ADM细胞未见明显毒副作用 ;15 μg/ml、2 5 μg/ml雄黄逆转倍数分别为 2 0倍和 2 8倍 ,并能明显抑制mdr 1基因的转录水平。 结论　雄黄可以逆转MCF 7/ADM细胞的多药耐药性 ,并呈剂量依赖性 ;可能的逆转机制为下调mdr 1基因的表达     

药物抗CBV3及ECHO11的体外实验研究

目的 寻找抗肠道病毒（EV）感染的安全有效的药物。方法 采用细胞形态观察、MTT法经色检测利巴韦林、双黄连、大蒜素的细胞毒性,并以观察CPE、MTT法比色及蚀斑抑制实验判断其抗CBV3和ECHO11的活性和进行三者间及后二者病毒吸附前后的药效比较。结果 ①利巴韦林TC50为2mg/ml,在1mg/ml-1.5mg/ml时有抑制CBV3和ECHO11的活性。②双黄连TC50为5mg/ml,在0.5mg/ml时即有抑制CBV3和ECHO11的活性,且与药物浓度呈正相关。③大蒜素TC50为12.5μg/ml,在2.5μg/ml-7.5μg/ml时有抑制CBV3和ECHO11的活性。④1.5mg/ml利巴韦林对CBV3及ECHO11的蚀斑抑制率分别为43.2%和37.2%,2.5mg/ml双黄连为81.1%和88.0%,5μg/ml大蒜素为66.2%和77.4%。⑤双黄连在病毒吸附前用药蚀斑抑制率高于吸附手用药（P＜0.05）;大蒜素的差异则不显著（P＞0.05）。结论 三种药物均有体外抗CBV3、ECHO11的作用,但双黄连、大蒜素优于利巴韦林。三种药物中以双黄连毒性最小,抑制病毒活性最高。双黄连在病毒吸附前用药抗病毒活性优于病毒吸附后,有一定预防作用。     

腺病毒介导的HSV—tk体外抗喉癌作用

目的 观察HSV-tk/GCV系统对喉癌细胞的杀伤作用。方法 将带有报告基因LacZ的5型缺陷性腺病毒载体AdCMVLacZ感染喉癌细胞Hep-2,X-gal染色,测定腺病毒的转染率,利用同源重组技术构建含HSV-tk基因的重组腺病毒载体AdCMVtk.AdCMVtk感染Hep-2细胞后,加入10mg/LGCV。观察瘤细胞存活率及旁观者效应。结果 随着腺病毒感染复数量（ultiplicity of infection,MOI)增加,对Hep-2细胞转染率亦增加,100%转染需的MOI为200。AdCMVtk/GCV对Hep-2细胞的杀伤强度与AdCMVtk量呈正向关系。即有浓度依赖性,此杀伤作用存在旁观者效应,但较弱。结论 腺病毒介导的HSV-tk/GCV具有杀伤喉癌细胞作用。     

金银花体外抗呼吸道合胞病毒的作用研究

目的了解金银花体外抑制呼吸道合胞病毒的效果和强度。方法采用细胞病变抑制实验．噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性,观察金银花在人宫颈癌传代细胞（Hela）中对人呼吸道合胞病毒3型的抑制作用,以治疗指数（TT）为评价指标。结果金银花对Hela细胞半数中毒浓度（TC50）为5mg／ml,最大无毒浓度（TC50）为3．6mg／ml;对呼吸道合胞病毒有直接灭活作用,其半数抑制率（IC50）为0．16mg／ml,TI为31．2;在吸附阶段也有作用,其IC50为0．48mg／ml,TI为10．5;同时金银花有抑制呼吸道合胞病毒生物合成作用,其IC50为1．0mg／ml,TI为5;金银花不能阻止呼吸道合胞病毒侵入细胞。结论金银花在体外主要通过直接灭活、阻止病毒吸附和抑制生物合成3种方式发挥抗呼吸道合胞病毒作用。     

As_2O_3逆转K_(562/ADM)细胞多药耐药的研究

目的　阐述As2 O3 (三氧化二砷 )治疗人红白血病机制。方法　采用人红白血病多药耐药株K562 / ADM作为实验模型 ,研究As2 O3 对该细胞MDR逆转的可能性。结果　①K562 / ADM 细胞对ADM具有明显的抗性 ,与K562 细胞相比 ,抗性倍数约为 4 0倍 ,而两者对As2 O3 的IC50 接近 ,无显著差异 ;②低毒剂量的As2 O3 (1 0 μmol/L)与ADM(4 0 μg/ml)联合运用 ,可升高细胞内ADM的浓度 ,降低细胞对ADM的IC50 ,使该细胞对ADM的抗性有数倍逆转。结论　As2 O3 是一种有效的MDR逆转剂。     

Regulation of human interferon production stimulated with poly(I) · Poly(C): Correlation between shutoff and hyporesponsiveness to reinduction

The exposure of FS-4 cells to polyinosinate-polycytidylate [poly(I) · poly(C), 2 μg/ml] for 1 hr resulted in rapid interferon production which peaked in 3–4 hr and was rapidly shut off thereafter, declining to low or undetectable levels by 6 hr. Reexposure of cells to 50 μg/ml of poly(I) · poly(C) at 2, 3, 4, or 5 hr after the first induction did not prevent the s shut off of interferon production due to the first induction. However, the restimulated cultures underwent a second round of interferon production peaking at 8–10 hr. The appearance of the second peak could be inhibited with actinomycin D, if the drug was added 3 hr after reexposure to poly(I) · poly(C), i.e., before the actual onset of the second round of interferon production. The second interferon peak resembled the peak seen a after the first induction in that it also showed a rather steep rise and rapid shutoff. The shutoff of the second peak could be prevented by treatment with actinomycin D at 9 hr (5 hr after the second stimulation). A second interferon peak at 9 hr was also seen following a single 1-hr exposure to a high concentration (50 μg/ml) of poly(I) · poly(C). It is suggested that a rapidly turning over repressor system is induced coordinately with interferon. This repressor system causes irreversible inactivation of interferon mRNA and is likely to be responsible for the shutoff of interferon production as well as the phenomenon of hyporesponsiveness to repeated interferon induction.     

Effects of baicalein on Sendai virus in vivo are linked to serum baicalin and its inhibition of hemagglutinin-neuraminidase

Parainfluenza viruses are significant respiratory-tract pathogens that are notorious for infecting children. However, there are no clinical drugs to control the infection caused by these viruses. Sendai virus (SeV) belongs to the family Paramyxoviridae and causes fatal pneumonia in mice, its natural host. Baicalein is a flavonoid derived from the root of Scutellaria baicalensis, which is a traditional Chinese medicine that has been used for hundreds of years and has demonstrated a variety of biological activities. Our findings reveal that oral administration of baicalein to mice infected with Sendai virus results in a significant reduction in virus titers in the lungs and protection from death. The in vivo inhibitory effects of baicalein on Sendai virus are determined by baicalin in the serum. The mean IC(50) of baicalin was 0.71 μg/ml in an HA inhibition assay and 3.22 μg/ml in an NA inhibition assay. The mean IC(50) of baicalin in a CPE assay was measured to be 0.70 μg/ml, and significant inhibition was observed in a plaque assay at a concentration of 1.6 μg/ml baicalin in overlay medium, which suggests that baicalein is a potential anti-parainfluenzaviral agent in vivo.     

Curcumin loaded NIPAAM/VP/PEG-A nanoparticles: physicochemical and chemopreventive properties

This study aims at modifying the synthesis method of preparing N-isopropylacrylamide (NIPAAM)/N-vinyl-2-pyrrolidone (VP)/Polyethylene glycol monoacrylate (PEG-A) polymeric nanoparticles encapsulating curcumin as a model drug. The optimal concentration of nanoparticle reagents was determined using Fourier Transform Infrared Spectroscopy. Curcumin nanoparticles mean hydrodynamic size was found to be 104?nm with zeta potential of 3?±?13?mV. The release kinetic study of curcumin nanoparticles indicates that a maximum release of curcumin at 24?h positively correlates with increase in temperature; however, change in pH did not produce any substantial drug release. In vitro cell viability assay performed on cancer cells exposed to various concentrations of model compound displayed the IC50 ranging between 100 and 200?μg/mL for human prostate cancer cells (PC3 cells) and 50 and 200?μg/mL for epidermoid carcinoma (A431 cell line). The Hoechst staining and phase contrast micrographs for 48?h exposure of curcumin nanoparticles at a concentration of 400?μg/mL resulted in almost 92% of cells death in both cell lines. This study concludes that the physiochemical characteristics of NIPAAM/VP/PEG-A polymer with key features of water solubility, sustained drug release, small particle size make these nanoparticles a prominent drug delivery device.     

SU11248对白血病细胞HL-60增殖及凋亡作用的实验研究

目的:探讨新型抗肿瘤药物苹果酸舒尼替尼(SU11248)对白血病细胞HL-60的生物学效应的影响及其作用机制。方法:应用MTT法检测SU11248对HL-60细胞增殖能力的影响;用AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;用流式细胞技术分析细胞的DNA倍体及细胞周期变化;用凝胶电泳分析DNA片段化;以Western blot法检测2.0μg/ml SU11248作用HL-60后bcl-2、bax、caspase-3蛋白水平的变化。结果:SU11248可明显抑制HL-60细胞增殖(P<0.05),呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为2.00μg/ml。SU11248可促进细胞凋亡,并呈剂量依赖性;能将HL-60细胞阻滞于G0/G1期,并呈时间依赖性;诱导HL-60细胞呈典型的DNA梯带;SU11248作用后bcl-2蛋白表达随时间依赖性降低,caspase-3蛋白表达升高,bax蛋白表达无明显变化。结论:SU11248能抑制HL-60细胞增殖,诱导其凋亡,调节bcl-2家族蛋白的表达,并裂解caspase-3是其可能作用机制之一。     

基于改性复合多糖的载阿霉素纳米粒子的制备及其靶向肝癌细胞的研究

目的 制备一种具有氧化还原敏感性的载阿霉素(DOX)纳米粒子,并研究其体外释放及靶向肝癌细胞的性能.方法 以1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺为催化剂,使透明质酸(HA)侧链接枝胱胺,进一步通过Schiff碱反应偶联β-环糊精(β-CD)制备β-环糊精接枝透明质酸(HACD).然后以HACD为载体材料,采用透析法制备载DOX纳米粒子(HACD/DOX),并对其载药量、包封率、粒径及分布、zeta电位等理化性质及体外释放行为进行表征;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测HACD/DOX纳米粒子对肝癌细胞HepG2的毒性作用;通过流式细胞术及激光共聚焦显微镜(CLSM)研究HACD/DOX纳米粒子对HepG2细胞的靶向作用.结果 成功制备了HACD,其可携载DOX形成形态均匀的纳米粒子.DOX在纳米粒子中的载药量为(16.1±0.2)％,包封率为(64.2±0.9)％.透射电子显微镜结果显示其为球形结构;粒度分析结果表明,HACD/DOX纳米粒子的平均粒径为(203.1±2.5) nm,多分散系数为0.202,zeta电位为(-29.1±0.8)mV.该纳米粒子的体外释放行为具有明显的氧化还原敏感性.体外毒性结果显示,空白载体材料HACD对肝癌细胞无明显毒性,而HACD/DOX纳米粒子可有效杀伤肝癌细胞,48 h的半数抑制浓度(IC50)值为0.38 μg/ml.流式细胞术和CLSM结果均显示HACD/DOX纳米粒子是通过HA的介导而发挥肝癌靶向作用的.结论 制备的HACD/DOX纳米粒子具有适宜的粒径、高载药量和包封率,能在还原剂刺激下释放药物,且具有明显靶向肝癌细胞的作用,有望成为一种具有良好应用前景的靶向治疗肝癌的药物递送系统.