反义微RNA25抑制人脑胶质瘤细胞生长的研究

目的 观察抑制微RNA( miRNA,miR)-25表达对人胶质瘤细胞生长与凋亡的影响.方法 脂质体转染miRNA抑制物,逆转录-聚合酶链反应(RT- PCR)检测抑制效果;流式细胞术检测分析细胞周期分布及凋亡变化、噻唑蓝(MTT)试验和软琼脂克隆形成实验评价细胞生长能力,Transwell实验检测细胞侵袭力.结果 miR-25抑制物可抑制miR-25的表达,使得S期细胞比例减少(下降6％ ～ 10％),生长速度减慢(P＜0.05),凋亡增加10％(P＜0.05),非锚定依赖性生长的克隆形成能力减弱(P＜0.05),穿过Matrigel的细胞数无明显变化.结论 抑制miR-25可以抑制胶质瘤细胞的生长,促进凋亡,但对细胞侵袭能力无明显影响.     

一种新型嘧啶基取代芳基苯酸衍生物对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖抑制的实验研究

目的:观察新型PPARγ激动剂DH9对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞(WT9-12)增殖的影响。方法:予以不同浓度的DH9及罗格列酮作用WT9-12细胞24、48、72、96 h,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术观察细胞周期的改变;AnnexinV+PI双染色流式细胞术测定细胞凋亡率;Western blotting分析cyclinA、P21CIP/WAF1、Bax和Bcl-2的表达。结果:DH9抑制细胞增殖作用明显优于罗格列酮(P<0.05),并呈量-效和时-效关系。比较加入PPAR-γ抑制剂GW9662前后细胞增殖抑制作用差异无统计学意义(P>0.05)。DH9可增加P21CIP/WAF1蛋白合成,减少CyclinA蛋白合成,使细胞阻滞在S期。DH9作用72 h后Bcl-2/Bax的比值分别为较对照组(2.19±0.08)显著减少(P<0.05),具有促进细胞凋亡的作用。结论:DH9抑制WT9-12细胞增殖活性明显优于罗格列酮,且这种增殖抑制作用与DH9作用在细胞周期的不同调节点,促进WT9-12细胞凋亡有关。     

周期性流体剪切力对成骨细胞增殖影响机制的实验研究

[目的]体外观察周期性流体剪切力(cFSS)作用下成骨细胞增殖情况的变化及细胞外信号调节激酶5( ERK5)在这一过程中的作用,探讨周期性流体剪切力对成骨细胞增殖的影响及其机制.[方法]体外运用5-溴-2'-脱氧尿苷( BrdU)标记成骨细胞(MC3T3 - E1)核,随机分为A、B、C、D共4组,A组为空白对照组,B和C组MC3T3- E1细胞通过流体剪切力加载装置施加周期性剪切力,C、D组MC3T3- E1细胞加入ERK5特异性阻断剂BIX02189,运用免疫荧光化学技术及IPP图像分析软件对各组成骨细胞增殖情况进行分析.[结果]A组细胞处于正常增殖状态,B组细胞增殖的阳性率与A组比较提高了200％ (P ＜0.05),ERK5活化量(累积光密度值)增加了30％ (P ＜0.05);C组细胞增殖情况比A组提高了40％ (P ＜0.05),而ERK5的活化量却无显著差异(P＞0.05);D组阳性率与A组比较降低了70％ (P ＜0.05),而ERK5的活化量降低了30％ (P ＜0.05).[结论]周期性流体剪切力促进成骨细胞增殖;ERK5在介导周期性流体剪切力促进成骨细胞增殖方面起着重要的作用.     

萝卜硫素通过lncRNA MALAT1/TFEB信号通路诱导人皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡机制探讨

目的:观察萝卜硫素对人皮肤鳞状细胞癌A431细胞凋亡和lncRNA MALAT1/TFEB信号通路的影响。方法:CCK-8法和流式细胞术分析萝卜硫素对A431细胞活力、增殖及凋亡相关指标的影响;倒置显微镜观察A431细胞的克隆数;RT-PCR法分析lncRNA MALAT1 mRNA表达水平的影响;Western blot方法分析萝卜硫素对A431细胞中凋亡相关蛋白、TFEB及TFEB(Ser142)磷酸化水平的影响。结果:与0μg/ml萝卜硫素组比较,浓度大于10μg/ml萝卜硫素组细胞活力、克隆细胞数、BrdU偶联细胞数、S和G2期细胞数、lncRNA MALAT1 mRNA表达水平均明显降低(P0.05);而G1期细胞数、Caspase-3/9活性、组蛋白DNA水平、细胞凋亡率及TFEB表达水平显著增高(P0.05);A431细胞中过表达MALAT1,能明显降低萝卜硫素对TFEB(Ser142)磷酸化水平和细胞活力的抑制作用(P0.05)。结论:萝卜硫素可通过诱导A431细胞凋亡和抑制细胞增殖发挥抗肿瘤作用,其机制可能与抑制lncRNA MALAT1/TFEB信号通路活化有关。     

半胱天冬蛋白酶-3在高迁移率族蛋白B1诱导小鼠巨噬细胞凋亡中的作用

目的 观察半胱天冬蛋白酶(Caspase)-3与核转录因子(NF)-KB在高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡中的作用.方法 分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为对照组、HMCB1组与抑制剂组(HMGB1作用前1 h加入Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK).采用Hoeehst33342染色观察凋亡的形态学变化、流式细胞术检测巨噬细胞凋亡百分率的变化;应用原位荧光染色及流式细胞术检测Caspase-3活性的变化;同时应用酶联免疫吸附试验检测NF-KB p65蛋白的变化.结果 HMGB1组巨噬细胞凋亡率为(38.21±4.85)%、抑制剂组为(16.47±3.91)%,均显著高于对照组(4.21±1.64)%(P＜0.01).经Hoechst33342染色,荧光显微镜观察HMGB1组凋亡细胞明显增多;原位荧光染色观察到HMGB1组Caspase-3荧光强度明显增强,Caspase-3阳性细胞百分率(29.74±4.55)%显著高于抑制剂组(3.02±1.91)%与对照组(7.19±2.46)%(P＜0.01).同时,HMGB1组、抑制剂组细胞核NF-KB活性较对照组显著降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 Caspase-3和NF-KB是HMGB1诱导巨噬细胞凋亡的重要途径,Caspase-3抑制剂可部分阻断HMGB1诱导的巨噬细胞凋亡.     

慢病毒介导PPAR-γ基因对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、迁移和侵袭性的影响

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)基因对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts,KF)增殖、迁移、侵袭性的影响。方法:将携带PPAR-γ及绿色荧光蛋白的慢病毒载体(LV-PPAR-γ-GFP,KF-PPAR-γ组)及空载体(LV-GFP,KF-NC组)感染KF细胞,并设空白对照组(KF组),应用实时定量PCR和Western blot分别检测PPAR-γm RNA及蛋白的表达;MTT法检测KF细胞增殖情况;划痕实验和Trans-well小室实验检测KF细胞的体外迁移和侵袭能力。结果:PPAR-γ慢病毒载体感染KF细胞96 h后,KF-PPAR-γ组PPAR-γm RNA和蛋白的表达量明显高于KF-NC组和KF组,差异有统计学意义(P0.05);MTT结果显示,KF-PPAR-γ组吸光度A值明显降低,与KF-NC组和KF组比较,差异有统计学意义(P0.05);划痕实验结果显示划痕后24 h和48 h,KF-PPAR-γ组划痕愈合速度明显慢于KF-NC组(P0.05);Trans-well侵袭结果显示KF-PPAR-γ组侵袭到下室的细胞数目较KF-NC组明显减少(P0.05)。结论:慢病毒介导PPAR-γ基因能够抑制KF细胞的增殖、迁移及侵袭能力,提示靶向提高瘢痕疙瘩中PPAR-γ的含量与活性,可能为瘢痕疙瘩的防治提供有效途径。     

AG1478对U87细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响

目的 观察表皮生长因子受体抑制剂Tyrphostin AG1478对人脑胶质瘤U87细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡的影响.方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度Tyrphostin AG1478作用于体外培养的人脑胶质瘤U87细胞24 h后的细胞生存率,流式细胞仪检测不同浓度Tyrphostin AG1478作用于体外培养的人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞周期分布和细胞凋亡.结果 5、10、15、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞生存率分别为(7 8.93±11.95)%、(46.42±4.12)%、(42.13±7.54)%和(37.48±4.69)%;0、10、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞凋亡率分别为(10.19±3.15)%、(32.02±1.60)%和(54.35±2.80)%;0、10、20 μmol/L的Tyrphostin AG1478作用人脑胶质瘤U87细胞24 h后细胞主要分布在G0～G1期,分别为(51.20±1.21)%、(78.61±1.57)%和(82.73±0.77)%,实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Tyrphostin AG1478抑制体外人脑胶质瘤细胞增殖,阻滞细胞周期在G0～G1期,诱导细胞凋亡,均呈浓度依赖性.

Abstract：

Objective To investigate the effects of Tyrphostin AG1478 on glioma U87 cells proliferation, cells cycle and apoptosis. Methods U87 cells were cultured for 24 h in the medium which contained AG1478 with different concentrations (0, 5, 10, 15, 20 μmol/L). The methyl thiazolyl tetrazolium(MTT) assay was used to detect the survival rate, and the cells cycle and apoptosis of the cells were examined by using flow cytometry. Results The cells proliferation was obviously inhibited by AG1478 in a dose-dependent manner. The survival rate of the cells in 5, 10, 15, 20 μmol/L AG1478 groups was (78.93 ±11.95)%, (46.42 ±4. 12)%, (42. 13 ±7.54)% and (37.48 ±4.69)% respectively, which was all significantly higher than that in 0 μ mol/L AG1478 group (P ＜0. 05 ). The apoptotic rate in 10, 25μmol/L AG1478 groups was (32.02 ± 1.60)% and (54. 35 ± 2. 80)% respectively, significantly higher than that in 0 μmol/L AG1478 group ( P ＜ 0. 05 ). The cells cycle was obviously inhibited by AG1478 in a dose-dependent manner. The percentage of cells treated with 10 and 20 μmol/L AG1478 in Go-G1 phase was ( 78. 61 ± 1.57 ) % and ( 82. 73 ± 0. 77 ) % respectively, significantly higher than that in 0 μmol/L AG1478 group (P ＜ 0. 05 ). Conclusion The growth inhibition of glioma U87 cells caused by AG1478 may be associated with apoptotsis induction and the G0-G1 arrest. AG1478 was expected to become a new anti-tumor drug in human glioma.     

microRNA-451对人脑胶质瘤细胞株A172增殖和凋亡的影响

目的 观察microRNA-451(miR-451)对胶质瘤细胞株A172增殖和凋亡的影响.方法 合成寡核苷酸miR-451拟似物(miR-451 mimics)转染A172细胞,实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染后miR-451的表达,Western blot法检测蛋白表达,应用流式细胞术、噻唑蓝(MTT)比色法和Annexin Ⅴ法评价miR-451对A172细胞生长、增殖和凋亡的影响.结果 与对照组比较,miR-451 mimics转染组细胞miR-451表达升高＞6倍;Western blot法显示癌基因AKT1表达下降到(43.81±5.20)%、Cyclin D1(56.09±3.40)%和bcl-2(63.49±3.70)%,抑癌基因p27表达升高到(145.51±6.70)%;细胞周期G0/G1期细胞增多达17.4%,出现G0/G1期阻滞;MTT法分析显示细胞生长受抑＞35%;Annexin Ⅴ法检测显示细胞凋亡明显升高＞15%.结论 miR-451可抑制人脑胶质瘤细胞生长和增殖,诱导细胞凋亡,具有抑瘤作用.     

过氧化物酶体增殖激活物受体与15-脂氧合酶-2在前列腺癌组织中的表达及其意义

目的 观察过氧化物酶体增殖激活物受体(PPAR-γ)及15-脂氧合酶-2(15-LOX-2)在前列腺癌中的表达,探讨其意义.方法 采用免疫组织化学方法检测28例前列腺癌组织中PPAR-γ及15-LOX-2蛋白的表达,取26例前列腺增生组织作为对照.结果 PPAR-γ在前列腺癌组表达阳性程度高于前列腺增生组(x2=4.84,P＜0.05);15-LOX-2在前列腺癌组表达阳性程度低于前列腺增生组(x2 =9.00,P＜0.05).T3期前列腺癌PPAR-γ的表达阳性程度明显高于T2期(H=4.103,P＜0.05);T2期与T3期前列腺癌细胞15-LOX-2的表达阳性程度差异无统计学意义(H =0.076,P＞0.05).Gleason评分≥7分前列腺癌PPAR-γ的表达阳性程度明显高于Gleason评分＜7分(H=5.306,P＜0.05);Gleason评分≥7分与Gleason评分＜7分前列腺癌15-LOX-2的表达阳性程度差异无统计学意义(H =0.313,P＞0.05).结论 PPAR-γ蛋白在前列腺癌组织中高表达,并且与病理分期及Gleason评分有关;15-LOX-2在前列腺癌组织中低表达.它提示PPAR-γ和15-LOX-2与前列腺癌发生与发展有关.     

曲古抑菌素A联合单纯疱疹病毒Ⅰ型对U251细胞增殖、凋亡的影响

目的 以体外培养的U251细胞为模型,观察曲古抑菌素A(TSA)联合单纯疱疹病毒Ⅰ型( HSV-1)对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响.方法 以0.5 ×10-3μmol/L TSA和10 MOI HSV-1及0.5 × 101 μmol/L TSA与10 MOIHSV-1组合作用于U251人胶质瘤细胞,72 h后噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞增殖情况,显微镜下观察各组细胞形态,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况.结果 单一TSA组、单一HSV-1组、TSA与HSV-1联合组U251细胞增殖抑制率分别为(48.0±1.8)％、(18.0±3.1)％、(58.0±5.8)％;凋亡率分别为(47.4±3.5)％、(29.6±3.0)％、(59.6±4.0)％.TSA与HSV-1联合组U251细胞增殖抑制率及凋亡率明显高于单一使用TSA或HSV-1组(P＜0.01).结论 TSA联合HSV-1对体外培养的U251细胞具有协同或叠加杀伤作用.     

LRIG3基因过表达对神经胶质瘤细胞株U251与U87增殖及增殖细胞核抗原和Ki-67表达的影响

目的 探讨过表达LRIG3基因对神经胶质瘤细胞株U251与U87增殖及增殖细胞核抗原(PCNA)和Ki-67表达的影响及其机制。方法 用携带LRIG3过表达特异性序列和只含空白载体的质粒用慢病毒法感染胶质瘤细胞株U251与U87,筛选稳定株,分别分成实验组和对照组,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测各组细胞LRIG3表达的变化,应用噻唑蓝(MTT)比色法检测病毒感染后对胶质瘤细胞株U251与U87增殖的影响,用免疫组织化学链霉亲和素生物素复合物(SABC)法分别检测各组细胞中PCNA和Ki-67的表达差异。结果 LRIG3过表达组细胞中LRIG3 mRNA水平与对照组比较分别升高67.6％( U251)和79.9％ (U87),LRIG3蛋白表达水平分别升高62.3％(U87)和91.0％( U251)。MTT法结果显示两实验组细胞增殖率均低于相应对照组。U251细胞对照组PCNA阳性率为(47.81 ±4.67)％,实验组为(27.49±3.17)％,U87细胞对照组PCNA阳性率为(55.50±4.01)％,实验组为(33.60±4.82)％,差异均有统计学意义(P＜0.05)。U251细胞对照组中Ki-67的阳性率为(48.50±6.11)％,实验组为(24.30±3.76)％,U87细胞对照组Ki-67阳性率为(55.20±4.19)％,实验组为(23.50±4.60)％,差异均有统计学意义(P＜0.0l)。结论 LRIG3基因过表达可减少胶质瘤细胞的增殖。     

WWOX表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨含有WW结构域的氧化还原酶基因(WWOX)表达对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 用脂质体转染法将WWOX重组真核表达质粒转染QBC939细胞;采用荧光定量逆转录－聚合酶链反应(RT-PCR)和Westem blot法鉴定WWOX在QBC939细胞中的表达;流式细胞仪(FCM)法检测转染前后各细胞凋亡率的变化;JC-l染色法检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化;荧光定量RT-PCR和Western blot法检测胆管癌细胞bcl-2表达的变化;将未转染和转染空质粒的细胞作为对照组接种到裸鼠皮下以检测荷瘤,TUNEL方法原位检测移植瘤的凋亡.结果 建立了稳定表达WWOX基因的QBC939/WWOX细胞株,mRNA及蛋白表达明显增加.FCM显示QBC939/WWOX组的细胞凋亡率明显增高[(1.24±0.35)％比(1.73±0.48)％比(21.40±2.35)％,P＜O.01],JC-l显示转染组的线粒体膜电位下降[(4.27±0.64)％比(4.96±0.52)％比(28.60±3.94)％,P＜O.01],bcl-2 mRNA及蛋白的表达均显著降低(P＜0.05).转染组的皮下肿瘤较对照组生长速度明显减慢(P＜0.05),TUNEL实验证实转染组的皮下肿瘤凋亡指数为(13.6±1.5)％,较对照组明显增高,差异有统计学意义(P＜0.O1).结论 WWOX基因能促进胆管癌细胞的凋亡,其机制可能与下调bcl-2的表达,激活线粒体凋亡通路有关.     

Ku80高表达对肝癌SMMC7721细胞凋亡的影响

目的 观察Ku80高表达对SMMC7721肝癌细胞凋亡的影响。方法 将Ku80基因转染到SMMC7721细胞;流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡;Western blot检测凋亡相关蛋白表达。结果 筛选获得稳定高表达Ku80的克隆细胞;流式检测显示,Ku80高表达克隆的凋亡率(9.44±1.52)％和(9.26±1.72)％与对照组(1.81±0.15)％和(1.83±0.25％)比较轻度增高,差异有统计学意义(P ＜0.05);TUNEL实验显示,Ku80高表达克隆形成裸鼠皮下瘤的凋亡率(9.3±2.0)％和(10.0±2.1)％与对照组(3.5±1.0)％和(3.6±1.1)％比较轻度增高,差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot检测显示,Ku80高表达克隆cleaved PARP-1、active Caspase-3和cleaved Caspase-9的表达与对照组比较明显增高,bcl-2的表达减低,而bax无变化。结论 体内外实验均证实Ku80高表达可引起SMMC7721细胞凋亡轻度增加。     

MS-275阻断STAT3信号通路诱导U251细胞凋亡

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂MS-275对脑胶质瘤细胞株U251细胞增殖的影响及促凋亡机制.方法 以不同药物浓度梯度和U251细胞分别共培养24、48、72 h后,应用CCK-8法检测肿瘤细胞增殖,瑞氏-姬姆萨染色法观察细胞形态变化,PI单染法检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI法经流式检测细胞凋亡率,免疫印迹检测STAT3蛋白和PARP蛋白表达.结果 MS-275能显著抑制U251细胞的增殖,药物浓度40 nmol/ml,培养72 h,抑制率为(79.0±1.7)%;经药物作用后,细胞呈现凋亡形态,胞质和胞核浓缩或碎裂;G0/G1期细胞由(66.320±0.456)%降至(38.288±1.242)%(P＜0.01),G2/M期细胞由(19.940±0.580)%升高至(35.650±0.507)%,而后降至(22.343±1.224)%(P＜0.01),亚G0凋亡峰由(0.230±0.035)%增高至(18.393±1.449)%(P＜0.01);总凋亡率由(2.133±0.416)%增高至(29.000±2.307)%(P＜0.01);免疫印迹检测提示磷酸化STAT3表达水平降低,PARP被剪切.结论 MS-275对胶质瘤细胞的增殖抑制作用具有浓度和时间依赖性,它通过阻断STAT3磷酸化,诱导激活Caspase-3凋亡途径.

Abstract：

Objective To investigate the effect of MS-275 on the proliferation of brain glioma cells. Methods U251 cells were respectively cultured for 24, 48, 72 h, with different concentrations of MS-275. CCK-8 assay was used to assess the proliferation of U251 cells. The morphological changes of U251 cells were observed by Wright-Giemsa staining. The cell cycle was analyzed by PI dyeing. The apoptosis rate was assayed by flow cytometry using annexin V-FITC/PI. The protein expression of STAT3 and PARP was detected by Western blotting. Results MS-275 could significantly inhibited proliferation of U251 cells. After treatment with MS-275, apoptosis of U251 cells was seen; The ratio of G0/G1 was decreased from ( 66.320 ± 0.456 ) % to ( 38. 288 ± 1. 242 ) % ( P ＜ 0. 01 ), the percentage of G2/M cells was increased from ( 19. 940 ± 0. 580 ) % to ( 35.650 ± 0. 507 ) %, then decreased to ( 22. 343 ± 1. 224 ) %(P＜0.01), and ratio of sub-G0 was increased from (0.230 ±0.035)% to (18.393 ±1.449)% (P＜0. 01 ); Total apoptosis rate was increased from ( 2. 133 ± 0.416 ) % to ( 29. 000 ± 2. 307 ) % ( P ＜ 0. 01 );The expression level of phosphorylated STAT3 was significantly downregulated, and the cleavage of PARP was detected by Western blotting. Conclusion MS-275 inhibites proliferation of brain glioma cells in a time- and dose-dependent manner, which is achieved by inducing apoptosis.     

血卟啉单甲醚-光动力疗法诱导瘢痕成纤维细胞凋亡

目的探讨血卟啉单甲醚-光动力疗法（HMME—PDT）诱导瘢痕成纤维细胞（HSF）的凋亡效应。方法将手术切除的瘢痕组织进行原代培养,建立增生性HSF的传代细胞系,取第4～6代HSF爬片后分为HMME—PDT组（实验组）和对照组,Hoechst 33258染色后在荧光显微镜下观察HMME-PDT后HSF形态学变化;Annexin V—FITC和碘化丙啶（PI）双染后经流式细胞仪（FCM）检测HMME-PDF后HSF凋亡率和坏死率。结果HMMEPDT处理后核染色质高度凝聚,呈团块颗粒状,或呈波纹状、折缝样改变;Annexin V-FITC和PI双染结果表明,PDT后凋亡率显著升高[（34．82±1．42）％VN（3.12±0．28）%,P〈0．05],并伴有细胞坏死的发生,但组内坏死率显著低于凋亡率[（14．65±1．02）％VS（34．82±1．42）％,P〈0．05]。结论经HMME-PDT（治疗参数：HMME：4ug／ml．照射波长630nm,功率密度10mW／cm2,能量密度2．5J／cm2）处理后HSF发生死亡,其中凋亡率显著高于坏死率,HMME-PDT能诱导原代培养HSF凋亡。     

过氧化物酶体增殖活化受体γ激动剂罗格列酮对MG63细胞抑制生长及促进凋亡的作用

目的 观察过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对骨肉瘤细胞株MG63的生长抑制及诱导凋亡作用.方法 取人骨肉瘤MG63细胞,用终质量浓度为0.5、5.0、50.0、100.0 μmol/L罗格列酮分别处理细胞,对照组不给予药物,噻唑蓝(MTT)比色法测定药物作用24、48、72 h对细胞生长的抑制率;流式细胞术(FCM)检测终质量浓度0、0.5、5.0、50.0 μmol/L罗格列酮处理24、48 h细胞周期分布;TUNEL法检测终质量浓度0.5μmol/L罗格列酮处理48 h的细胞凋亡,并计算凋亡指数(AJ).结果 细胞生长抑制率:(1)罗格列酮各浓度作用24、48、72 h,2个时间点抑制率两两比较的差异均有统计学意义(P＜0.01),有随时间增长而增加的趋势,其中0.5μmol/L对细胞的抑制率(％)分别为30.10±0.01、46.70±0.01和48.80±0.02;(2)在各时间点,各浓度组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01),在0.5～50.0 μmol/L浓度组区间,相同时间点的抑制率有随浓度升高而降低的趋势.细胞周期:(1)不同浓度的各细胞周期分布差异有统计学意义(P＜0.01).在24、48h时间点均表现为用药组G0/G1期细胞比例高于对照组,0.5mol/L组细胞比例最高,但随用药浓度增加,G0/G1期比例有下降趋势;用药组S期细胞比例均低于对照组,随用药浓度增加,S期比例有增高趋势;即用药可将细胞周期阻滞在G0/G1期的作用;(2)不同时间点间细胞周期分布变化的差异无统计学意义(F=0.36,P＞0.05).细胞凋亡:0.5 μmol/L组凋亡率(14.33±3.35)％明显高于对照组(2.82±0.63)％(P＜0.01),光镜下可见药物组细胞核固缩及散在的凋亡小体.结论 PPARγ激动剂罗格列酮能明显抑制人骨肉瘤MG63细胞的增殖,诱导该细胞G1期阻滞和细胞凋亡.     

水通道蛋白4调控恶性胶质瘤细胞凋亡的研究

目的 观察抑制胶质瘤细胞LN229中水通道蛋白4(AQP4)的表达对胶质瘤细胞凋亡的影响,探讨其分子机制.方法 利用小RNA干扰(siRNA)技术稳定转染恶性胶质瘤细胞株LN229并得到细胞克隆(实验组siAQP4/LN229和对照组scr/LN229),Western blot技术检测AQP4的蛋白表达;噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的存活率;流式细胞术(FCM)检测细胞色素C(Cyt-C)含量的变化,并用Western blot检测Cyt-C、bcl-2及Bacl的变化.建立裸鼠皮下成瘤模型,接种siAQP4/LN229和scr/LN229两组细胞(每组20只),观察AQP4降表达对移植瘤生长的影响.结果 稳定转染LN229筛选出AQP4降表达的稳定克隆(clone 2),与对照组比较AQP4的表达明显降低,MTT比色法分别检测在6 d内两组细胞的存活率,第6天存活率分别为:scr/LN229组(587.00±4.68)%.siAQP4/N229组(317.00±26.30)%,差异有统计学意义(P＜0.05);应用流式细胞术检测发现Cyt-C的平均荧光强度分别为ser/LN229组(57.20±16.64),siAQP4/LN229组(468.80±46.90),差异有统计学意义(P＜0.05);在蛋白水平上,siAQP4/LN229组Cyt-C含量的相对灰度值(1.62±0.16)较scr/LN229组(0.83±0.29)显著升高,siAQP4/LN229组B8d含量(1.30±0.24)较ser/LN229组(0.56±0.21)显著增加,而siAQP4/LN229组bcl-2含量(0.53±0.03)较scr/LN229组(0.73±0.12)的表达明显降低(P＜0.05).裸鼠皮下成瘤实验显示第6周时,成瘤平均体积分别为对照组(402.67±34.27)mm3,实验组(65.15±32.12)mm3,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AQP4能够调控胶质瘤细胞LN229的凋亡,其调节机制可能与Cyt-C的释放及凋亡相关基因Bad和bcl-2有关.

Abstract：

Objective To investigate the effects of apuaporin 4 (AQP4) on apoposis of LN229 glioblastoma cells by AQP4 small RNA interference (siRNA) technology and the molecular mechanism.Methods AQP4 expression was knocked down in LN229 glioblastoma cells by AQP4 siRNA (scr/LN229 and siAQP4/LN229 cells). The expression level of AQP4 protein in LN229 cells was detected by Western blotting. Stable clones were used to measure cells survival ratio (6 days) by methyl thiazol tetrazolium ( MTT) assay. Flow cytometry (FCM) was used to examine the content of cytochrome C in siAQP4/LN229 and scr/LN229. Western blotting was used to measure the levels of cytochrome C, bcl-2 and Bad. Nu/Nu mice were subcutaneously injected with siAQP4/LN229 and scr/LN229 cells to study the growth of tumor in the two groups (20 mice in each group). Results Western blotting showed that the expression of AQP4 was decreased significantly; MTT assay suggested that the survival ratio was decreased with deficiency of AQP4: the survival ratio of scr/LN229 was (587.00 ±4.68)%, and the ratio of siAQP4/N229 was (317. 00 ± 26. 30)% at sixth day (P＜0. 05). The mean fluorescence density of cytochrome C in scr/LN229 and siAQP4/LN229 by FCM was (57.2 ± 16.64) and (468.8 ±46.9) respectively (P＜0.05). The relative intensity of cytochrome C and Bad in siAQP4/N229 cells was ( 1. 62 ±0. 16) and (1. 30 ±0. 24) respectively, and that in scr/LN229 cells was (0. 83 ±0. 29) and (0. 56 ±0. 21) respectively (P＜0. 05). The intensity of bcl-2 in siAQP4/N229 cells (0.53 ±0.03) was decreased compared to scr/LN229 cells (0. 73 ± 0. 12) ( P ＜ 0. 05). The subcutaneous mouse xenograft model showed that the mean tumor volume of scr/LN229 group was (402. 67 ±34. 27) mm3, and that of siAQP4/N229 group was (65. 15 ±32. 12) mm3 at the 6th week. Conclusion AQP4 can regulate apoptosis of glioblastoma cell line LN229, which may be related with the release of cytocherome C, Bad and bcl-2.     

姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌抑制效应及其机制

目的 检测姜黄素在体外对雄激素非依赖性前列腺癌细胞(PC-3)生物学行为的影响,并探讨其机制.方法 分别采用CFSE染色、Annexin V-PI染色和PI染色法,使用流式细胞仪分析姜黄素对PC-3细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响.然后采用荧光素酶报告基因系统检测姜黄素在体外对核因子-κB(NF-κB)、激活蛋白-1(AP-1)和p53三个信号通路的影响.结果 50μmol/L的姜黄素作用后,PC-3细胞的增殖指数从7.08±0.20降到4.38±0.19(P＜0.05);凋亡率从(5.34±0.96)%提高到(21.53±2.87)%(P＜0.05);G2/M期细胞比例由(34.27±1.87)%上升到(57.29±1.91)%(P＜0.05).荧光素酶活性检测结果显示,姜黄素能在体外抑制NF-κB和AP-1信号通路活性(P＜0.05).结论 姜黄素能在体外显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的增殖,诱导细胞凋亡并导致细胞周期的阻滞.姜黄素可能通过抑制NF-κB和AP-1信号通路发挥抑癌效应.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ对人肝癌细胞生长和凋亡的影响及其机制

目的 检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在人肝癌、癌旁和正常肝组织的表达,探讨激活或抑制PPARγ在肝癌细胞株生长和凋亡中的作用及其机制.方法 应用免疫组织化学方法检测20例肝癌、癌旁和正常肝组织中PPARγ的表达,Western blot检测2种肝癌和1种正常肝细胞株中PPARγ表达;PPARγ激动剂15dPGJ2和拮抗剂T0070907分别干预培养的2种肝癌细胞株,噻唑蓝(MTT)检测细胞生存率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期及凋亡,试剂盒检测Caspase-3活性变化.结果 肝癌组织中PPARγ表达高于癌旁和正常肝组织(P＜0.05),PPARγ主要在肝癌细胞质中表达;肝癌细胞株PPARγ表达比正常肝细胞株高(P＜0.05);15dPG-J2抑制肝细胞增殖而T0070907则促进肝癌细胞增殖(P＜0.05).15dPG-J2可使肝癌HepG2和SMMC7721细胞G0/G1期细胞比例由(42.5±0.9)%和(49.0±3.8)%增高至(61.0±2.0)%和(67.5±2.2)%,(P＜0.05),S期由(30.5±0.3)%和(43.0±2.5)%降低至(6.6±1.1)%和(25.1±2.0)%(P＜0.05).而且,15dPG-J2可明显促进两种肝癌细胞凋亡,凋亡率分别增加约24.4%和22.4%,并可增强细胞Caspase-3活性(P＜0.05);Caspase抑制剂Z-VAD-FMK则可逆转15dPG-J2对肝癌细胞的促凋亡作用.结论 PPARγ在肝癌细胞中表达升高,其表达主要位于细胞质中,为无活性状态.PPARγ激动剂可活化PPARγ和Caspase通路,抑制肝癌细胞生长,促进细胞凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the expression of peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) in human liver cancer tissue and cells, and to explore the effects and mechanisms of PPARγ on growth and apoptosis in human hepatocellular carcinoma cells. Methods The expression of PPARγ in 20 cases of liver cancer, tumor adjacent tissue, normal liver, one liver cell line and two liver cancer cell lines were detected by immunohistochemistry or Western blotting. Two incubated malignant cell lines were exposed to PPARγ agonist 15dPGJ2 or antagonist T0070907, cell viability was determined by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay and cell cycle distribution and apoptosis were examined by flow cytometry (FCM). Consequently, the activity of caspase-3 following treatments of 15dPGJ2 or T0070907 was observed by the commercial Caspase-3 Activity Kit. Results The expression of PPARγin liver cancer was higher than that in adjacent and normal liver tissue ( P ＜ 0. 05) and PPART was predominantly expressed in the cytoplasm. Further,the expression of PPARγwas higher in hepatoma cell line than that in normal liver cell line (P＜ 0.05 ). PPARγ agonist 15dPG-J2 inhibited the proliferation while the antagonist T0070907 induced the growth of hepatoma cells (P ＜ 0. 05). G0/G1 phase of HepG2 and SMMC772 cells was blocked by 15dPG-J2, and the ratio were raised from (42.5 ±0.9)% and (49.0 ±3.8)% to (61.0 ±2. 0)% and (67.5 ±2. 2)% ,respectively. Meantime,S phase ratio were decreased from (30. 5 ± 0. 3 ) % and (43.0 ± 2. 5 ) % to ( 6. 6 ± 1. 1 ) % and ( 25. 1 ± 2. 0 ) %. Further, 15 dPG-J2 facilitated significant apoptosis in those cell lines and the increased apoptosis ratio were 24. 4% and 22. 4% respectively.Accordingly,the activity of Caspase-3 induced by 15dPGJ2 were 21-and 23-fold higher than those in control groups (P ＜ 0. 05 ). The Caspase inhibitor Z-VAD-fmk expectedly reversed the apoptosis induced by 15dPGJ2 in HepG2 and SMMC772 cells. Conclusion The expression of PPARγ increases in human hepatoma predominantly in cytoplasm with its inactivated form. 15dPG-J2 ,an agonist of PPART inhibits growth and induces apoptotic in hepatoma cells through activation of PPARγ pathway and the consequent Caspase3 signal.