雷帕霉素抑制人前列腺癌细胞增殖及其作用机制

目的 观察雷帕霉素(Rapamycin)对体外培养的人前列腺癌PC-3M-2B4细胞增殖及凋亡的影响,探讨其机制.方法 分别用不同浓度的雷帕霉素(100、200、400、800μg/L)对细胞进行干预后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖变化,流式细胞术检测细胞凋亡变化,Western blot 法检测凋亡相关蛋白bcl-2及bax表达的变化.结果 雷帕霉素能明显抑制PC-3M-2B4细胞的增殖活性,此作用呈现量-效、时-效关系.雷帕霉素呈浓度依赖性诱导细胞凋亡.雷帕霉素作用PC-3M-2B4细胞后,细胞内凋亡抑制蛋白bcl-2的表达明显降低,bax蛋白的表达明显增加.结论 雷帕霉素能够通过调节凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达比例,诱导前列腺癌细胞凋亡,从而抑制肿瘤生长.

Abstract：

Objective To investigate the effects of Rapamycin on the growth and apoptosis of human prostate carcinoma cell line PC-3M-2B4. Methods The inhibitory effect of Rapamycin was observed at 100,200,400,800μg/L on the growth of human prostate carcinoma cell line PC-3M-2B4 in serum-free medium for different concentrations by methyl thiazol tetrazolium (MTF) assays. Flow cytometry (FCM)analysis was used to study the changes of cell apoptosis. The expression level of bcl-2 and bax was determined by Western blotting. Results Rapamycin caused dose-dependent inhibition on the growth of human prostate carcinoma cell line PC-3M-2B4 in a concentration-and time dependent manner. Rapamycin induced the apoptosis of PC-3M-2B4 cells in a concentration-dependent manner. The levels of bcl-2 protein were reduced gradually with the increase of concentration or action time. Conclusion Rapamycin, a mTOR inhibitor, inhibits the growth of human prostate cancer cell and induces apoptosis of human prostate cancer cell. mTOR might be a potential target for anti-prostate cancer.     

雷帕霉素的研究进展

雷帕霉素 (ｒａｐａｍｙｃｉｎ ,ＲＰＭ )是 1975年由加拿大Ａｙｅｒｓｔ研究室从太平洋Ｅａｓｔｅｒ岛的土壤样品中分离的链霉菌ＡＹＢ Ｐ44所产生的代谢产物。最初 ,ＲＰＭ作为低毒性抗真菌抗生素 ,1978年发现它对自身免疫性疾病有免疫抑制作用。受此启发 ,1989年Ｍｏｒｒｉｓ正式开始把ＲＰＭ作为器官移植抗排斥的新型免疫抑制剂进行试用 ,现在ＲＰＭ不但已进行了ＩＩＩ期临床试验 ,美国食品药品管理局已批准其应用于临床 ,而且已完成其化学结构的全合成。一、ＲＰＭ的理化性质、体内分布及代谢、药物动力学ＲＰＭ是 31元环组成的三烯大…     

RNA干扰沉默雷帕霉素靶蛋白基因表达对血管平滑肌细胞增殖活性的影响

目的 构建靶向雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的RNA干扰表达载体，观察其对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖活性的影响。方法 根据大鼠mTOR基因序列设计2个短发夹环RNA（shRNA）序列，化学法合成单链寡核苷酸序列，将cDNA序列插入逆转录病毒载体pLXIN，脂质体介导转染包装细胞PT67后获得mTOR的重组逆转录病毒shRNA表达载体，感染VSMC，Northern blot和Western blot法检测mTOR及其下游底物真核细胞启动子4E结合蛋白（4E-BP1）、p70s6k等表达的变化，流式细胞仪检测VSMC细胞周期的变化，噻唑蓝（MTT）法检测VSMC增殖活性的改变。结果 shRNA序列插入pLXIN载体并感染VSMC，证实其能够显著抑制mTOR的mRNA和蛋白产物表达，mTOR通路下游的核糖体蛋白S6激酶（p70s6k）表达相应减少，而4E-BP1的表达却显著增强；感染前VSMC细胞G1／Go期比例为71％，S期为15％，凋亡细胞为2％；转染后72h，G1／岛期比例为87％，S期为6％，凋亡细胞为6％（P＜0．01）；表明G0／G1→S过程受阻，VSMC的分裂、增殖受到抑制，凋亡机制启动，更多细胞停滞在G0／G1期。结论 成功构建靶向mTOR基因的shRNA表达载体，能够明显抑制VSMC分裂、分化和增殖。     

雷帕霉素对肝移植大鼠皮下移植瘤生长的影响

目的探讨雷帕霉素对肝移植大鼠皮下移植瘤生长的影响。方法建立大鼠肝移植模型后实验分为五组,Ⅰ组:以Wistar大鼠作为供体,SD大鼠作为受体,术后不接受任何治疗作为急性排斥对照组。Ⅱ组:以SD大鼠作为供体及受体,术后3 d在左肩胛区皮下接种腹水瘤Wlaker- 256细胞,生理盐水灌胃作为皮下肿瘤生长的对照组。Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组:均以Wistar大鼠作为供体,SD大鼠作为受体,术后分别服用环孢素(每日20mg,/kg体重,灌胃)、他克莫司(每日1 mg/kg体重,灌胃)和雷帕霉素(每日1 mg/kg体重,灌胃),术后3 d在左肩胛区皮下接种腹水瘤Wlaker-256细胞。每周3次记录Ⅱ-Ⅴ组受体大鼠皮下肿瘤生长情况,绘制成瘤曲线;并于皮下接种肿瘤后14 d处死大鼠,检测受体大鼠的肝功能、移植肝病理及皮下肿瘤大小。结果与急性排斥大鼠(Ⅰ组)比较,接受免疫抑制剂治疗的各组受体大鼠(Ⅲ～Ⅴ组)均未出现严重的急性排斥反应;同时,与生理盐水灌胃的同基因肝移植术后皮下荷瘤大鼠(Ⅱ组)比较,雷帕霉素明显抑制了大鼠皮下肿瘤的生长[(1.41±0.87)与(3.65±0.87)cm3,P<0.05],环孢素及他克莫司则促进了皮下肿瘤的生长[(9.56±2.81)与(3.65±0.87)cm3,P<0.01;(8.11±1.69)与(3.65±0.87)cm3,P<0.01]。结论雷帕霉素在有效保护移植物的同时抑制了移植受体体内肿瘤的生长;环孢素和他克莫司抑制了机体的排斥反应,但也同时促进了受体体内肿瘤的生长。     

雷帕霉素对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响

目的:雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的抑制作用,深入探讨其作用机制。方法:用雷帕霉素的不同药物浓度干预体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞,CCK-8方法检测对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的影响;免疫组化、RT-PCR和western blot检测干预前后瘢痕疙瘩成纤维细胞中磷酸化的P70s6k、4E-BP1表达情况。结果:CCK-8检测体外培养瘢痕疙瘩成纤维的吸光度,随浓度和时间的增大而减小,各组之间差别具有统计学意义(P0.05);免疫组化(药物浓度取10nmol/L),RT-PCR和western blot对不同药物浓度(0.1nmol/L、1nmol/L、10nmol/L、100nmol/L)干预前后,基因表达和蛋白表达均下降,各组之间差别具有统计学意义(P0.05)。结论:雷帕霉素对体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖有明显的抑制作用,也抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中磷酸化的P70s6k、4E-BP1表达。     

雷帕霉素对肾脏缺血再灌注损伤的影响

移植肾在经历缺血再灌注损伤后可以产生不同程度的损伤,而雷帕霉素作为临床上常用的免疫抑制剂,又可对再灌注的移植肾产生多方面的影响.本文就雷帕霉素对肾脏缺血再灌注损伤的影响作一综述.     

雷帕霉素免疫抑制机理的研究进展

雷帕霉素免疫抑制的机理不同于ＣｓＡ及ＦＫ５０６，在细胞内与ＦＫＢＰ结合，该复合物抑制细胞从Ｇ１期向Ｓ期的过渡并抑制某些激酶活性。在动物移植中，雷帕霉素抑制细胞因子介导的Ｔ细胞激活及增殖，对抗体生成、巨噬细胞、中性粒细胞及内皮细胞的活性及功能都显著的抑制作用，抑制加速排斥反应的发生，并可诱导免疫耐受的产生。     

雷帕霉素对大鼠心脏移植的免疫抑制效果

为了探讨雷帕霉素对ＳＤ、Ｗｉｓｔａｒ大鼠心脏移植的免疫抑制效果，将大鼠分为３组，实验组给ＲＰＭ，对照且包括未治疗组及环孢素组。结果显示ＲＰＭ为一强效免疫抑制剂，治疗优于ＣｓＡ。ＲＰＭ具有强大的免疫抑制效果，可显著延长心脏移植物的存活时间。     

雷帕霉素及其在肾移植中的应用

雷帕霉素是一种高效低毒的大环内酯类免疫抑制药 ,在国内外已开始较广泛地应用于肾移植 ,本文就雷帕霉素免疫抑制作用机理、临床药理学和在肾移植中应用的研究进展综述如下。     

Ezrin shRNA联合HSP70对骨肉瘤细胞凋亡和增殖的影响

 目的 探讨Ezrin基因沉默联合热休克蛋白（heat shock protein, HSP）70诱导的免疫杀伤对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法 采用人成骨肉瘤MG63细胞系作为研究对象,将人HSP70和Ezrin-shRNA的DNA片段分别克隆至含CMV和pU6双启动子的表达载体pGFP-V-RS中构建含HSP70和Ezrin-shRNA的真核表达载体pGFP-V-RS-shRNA和pGFP-V-RS-shRNA-HSP70。重组质粒分别转染入细胞,筛选出稳定表达的细胞克隆。荧光显微镜观察细胞形态及转染效果;荧光定量RT-PCR及蛋白印迹western blot检测稳定转染细胞株Ezrin和HSP70基因及蛋白水平的变化;采用MTT、流式细胞术检测细胞增殖、凋亡能力变化,Western blot检测凋亡及周期相关蛋白表达量变化;MTT法检测HSP70刺激产生特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对靶肿瘤细胞的杀伤作用。结果 荧光图像及基因和蛋白表达分析证实,首次成功构建同时沉默Ezrin和过表达HSP70的特异性载体。较单纯沉默Ezrin,同时过表达HSP70会在一定程度上减弱沉默Ezrin蛋白促进细胞凋亡和抑制增殖的效果,但与对照细胞相比,M63细胞凋亡率仍明显上升,自11.01%±0.22%上升至24.28%±0.50%,增殖速度则自395.14%±2.24%减少至310.00%±2.83%。另外,Western blot检测发现Ezrin-shRNA可促进凋亡基因Bax的表达,相反可降低抗凋亡基因Bcl-2和细胞周期蛋白Cyclin D1的表达。而Ezrin-shRNA/HSP70组较Ezrin-shRNA组促Bax表达和降低Bcl-2、细胞周期蛋白Cyclin D1表达有所减弱,但较阴性对照组仍有明显效果。MG63细胞的CTL细胞毒杀伤效应显示各效靶浓度下CT+IL-2+HSP70组的杀伤活性高于CT+IL-2组,最高达56.33%±1.95%。结论 同时沉默Ezrin、过表达HSP70既可以促进骨肉瘤细胞凋亡抑制其增殖,并利用HSP70诱导的CTL,增强对靶肿瘤细胞的杀伤作用。     

Dexamethasone enhances the osteogenic effects of fluoride in human TE85 osteosarcoma cellsin vitro

Thein vitro osteogenic effects of fluoride have not always been consistently observed in human bone cells. The present study sought to test if dexamethasone (Dex)_ could potentiate the action of fluoride to increase the detectability of the stimulatory effects of fluoride on [³H]thymidine incorporation, alkaline phosphatase (ALP) specific activity, collagen synthesis, and osteocalcin secretion in human TE85 osteosarcoma cells. Neither Dex at 10⁻¹⁰–10⁻⁶ M or fluoride at a mitogenic dose (100 μM) had any consistent stimulatory effects on thymidine incorporation. When the cells were treated with both agents simultaneously, significant and highly reproducible stimulations were observed. The mitogenic effects of the two agents were confirmed with cell number counting. Analysis of variance (ANOVA) revealed a significant interaction (P<0.001) between fluoride and Dex on cell proliferation. The enhancing effect of Dex on [³H]thymidine incorporation was not due to a shift of the optimal dose response of fluoride. Though fluoride alone or Dex alone also had no consistent effect on ALP specific activity, the co-treatment with fluoride and Dex for 24 hours produced significant (P<0.001, ANOVA) stimulation in ALP specific activity. Fluoride alone had no consistent effect on collagen synthesis and on 1,25(OH)₂D₃-dependent osteocalcin secretion, whereas Dex treatment consistently inhibited these two osteoblastic parameters in a dose-dependent manner. However, both the collagen synthesis and osteocalcin secretion rates were significantly higher (P<0.001 ANOVA for each) when the cells were co-treated with Dex and fluoride (100 μM) than when they were treated with Dex alone. Thus, these data indicate that the response in collagen synthesis and osteocalcin secretion to fluoride stimulation was more readily observed in the presence of Dex than in its absence. ANOVA analysis revealed that the interaction between fluoride and Dex on collagen synthesis, but not the 1,25(OH)₂D₃-dependent osteocalcin secretion, was significant (P<0.02). In summary, we have demonstrated for the first time that in TE85 cells (1) Dex potentiated the effects of fluoride on cell proliferation, ALP specific activity, and collagen synthesis; (2) while Dex at 10⁻⁷–10⁻⁶ M alone inhibited the collagen synthesis and at 10⁻⁹–10⁻⁶ M reduced osteocalcin secretion, Dex at 10⁻⁸–10⁻⁶ M significantly stimulated the proliferation of TE85 cells; and (3) Dex interacted with fluoride to increase the percentage of experiments showing an osteogenic action of fluoride. In conclusion, thein vitro osteogenic actions of fluoride in human TE85 cells are more consistently observed in the presence than in the absence of Dex.     

腺病毒介导的血管内皮生长因子小干扰RNA对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的研究

目的 观察腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹状小分子干扰RNA(siRNA)对骨肉瘤细胞株MG63增殖和凋亡的影响.方法 将携带VEGF短发夹状siRNA的腺病毒载体Ad-VEGF-siRNA感染MG63.噻唑蓝(MTT)比色分析细胞体外增殖力,Hoechst染色、流式细胞术观察细胞凋亡.建立30只裸鼠移植瘤模型,Ad-VEGF-siRNA组瘤内注射Ad-VEGF-siRNA病毒纯化液0.2ml,通过免疫组织化学技术,观察肿瘤组织中MG63细胞的增殖和凋亡.结果 与对照组比较,Ad-VEGF-siRNA组MG63细胞生长减慢,Hoechst染色可见到典型的凋亡细胞,24、48、72h凋亡率分别为7.27%、12.01%和20.09%.Ad-VEGF-siRNA明显抑制移植瘤生长,抑瘤率达40.7%.Tunel染色可见MG63细胞典型凋亡特征,同时肿瘤组织中PCNA、bcl-2表达明显减少(P<0.01). 结论 Ad-VEGF-siRNA可高效而特异地阻断VEGF基因表达,抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡.     

百里醌对人骨肉瘤SaOS-2细胞生长的抑制作用

目的 探讨百里醌对体外人骨肉瘤SaOS-2细胞生长的影响及其机制.方法 百里醌作用人骨肉瘤SaOS-2细胞24h后,细胞计数CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;DAPI染色后荧光显微镜下观察细胞形态学变化;Western blot检测SaOS-2细胞中Caspase-3、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和Smac的表达.结果 不同浓度(20、40、80μmol/L)百里醌作用人骨肉瘤SaOS-2细胞24h后,细胞存活率分别为(75.5±4.2)%、(62.1±6.7)%和(52.5±4.9)%;细胞早期凋亡率分别为(8.1±0.7)%、(13.2±1.1)%和(20.2±1.7)%;百里醌作用后,SaOS-2细胞出现典型凋亡的形态学改变;百里醌可明显上调Caspase-3和Smac在SaOS-2细胞中的表达,而显著抑制XIAP的表达.结论 百里醌具有抑制体外人骨肉瘤SaOS-2细胞生长和促进细胞凋亡的作用,可能是通过上调人骨肉瘤SaOS-2细胞中Caspase-3和Smac的表达和下调XIAP的表达而实现.

Abstract：

Objective To investigate the inhibitory effect of thymoquinone on the growth of human osteosarcoma cell line SaOS-2 in vitro.Methods After human osteosarcoma SaOS-2 cells were treated with different concentrations of thymoquinone, the proliferation was measured by Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay. The flowcytometry (FCM) was used to determine apoptosis of SaOS-2 cells. The morphological changes of SaOS-2 cells were observed under the fluorescence microscopy after DAPI staining. Western blotting was used to detect the protein expression of Caspase-3, X-linked inhibitor of apoptosis protein (XIAP) and Smac.Results Thymoquinone obviously suppressed proliferation of SaOS-2 cells in a dose-dependent manner, and the apoptosis rate was (8.1±0.7)%, (13.2±1.1)% and (20.2±1.7)% respectively when the concentrations of thymoquinone exposed were 20, 40 and 80 μmol/L. After treatment with thymoquinone, the expression of Caspase-3 and Smac was up-regulated in SaOS-2 cells, and thymoquinone treatment significantly decreased the XIAP levels in SaOS-2 cells.Conclusion Thymoquinone has the anti-tumor effect on the human osteosarcoma SaOS-2 cells in vitroprobably by up-regulating the expression of Caspase-3 and Smac and down-regulating the expression of XIAP.     

七氟醚对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、凋亡及化疗敏感性的影响

目的探讨七氟醚对骨肉瘤细胞增殖、侵袭、凋亡及化疗敏感性的影响。方法选取骨肉瘤MG63细胞,随机分为四组:对照组、1.7%七氟醚组、3.4%七氟醚组和5.1%七氟醚组,分别为不给予七氟醚、给予1.7%、3.4%和5.1%七氟醚处理。采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell细胞侵袭实验检测细胞迁移;给予各组顺铂处理,检测各组细胞凋亡情况。结果培养24、36和72 h的1.7%七氟醚组、3.4%七氟醚组和5.1%七氟醚OD值明显低于对照组(P0.05),培养24、36和72 h的5.1%七氟醚组OD值明显低于1.7%七氟醚组、3.4%七氟醚组(P0.05)。四组细胞凋亡率、细胞迁移数差异无统计学意义。顺铂作用后,1.7%七氟醚组、3.4%七氟醚组和5.1%七氟醚组细胞凋亡率明显低于对照组(P0.05),5.1%七氟醚组细胞凋亡率明显低于1.7%七氟醚组和3.4%七氟醚组(P0.05)。结论七氟醚可抑制骨肉瘤MG63细胞增殖,对细胞迁移、凋亡无明显影响;七氟醚可降低骨肉瘤MG63细胞对顺铂的敏感性。     

华蟾酥毒基诱导骨肉瘤细胞凋亡的体外实验研究

 目的 研究华蟾酥毒基（cinobufagin）对多种骨肉瘤细胞系的增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其相关机制。方法 不同浓度的华蟾素毒基分别处理骨肉瘤细胞系U2OS、MG63和SaO2后,四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察不同骨肉瘤细胞系的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期的变化,细胞核荧光染色及Annexin V/ PI染色检测细胞凋亡,Western blot检测IAPs和Bcl-2家族凋亡相关蛋白凋亡相关蛋白Bax、cleaved-PARP、xIAP、cIAP-1、survivin及p65的表达。结果 MTT检测显示,华蟾酥毒基可明显抑制骨肉瘤细胞U2OS、MG63和SaO2的增殖,其抑制细胞增殖的作用呈剂量和时间依赖性,其对U2OS、MG63和 SaO2细胞的48 h IC50值分别为（104.83±16.96） nmol/L、（47.07±7.5） nmol/L和（136.72±10.08） nmol/L。100 nmol/L 华蟾酥毒基处理骨肉瘤细胞12 h后,流式细胞仪检测可见骨肉瘤U2OS、MG63和 SaO2的G₀/G₁期细胞比例下降,G2/M 期细胞比例增加,表明华蟾素毒基主要通过将细胞阻滞在G₂/M 期,以抑制骨肉瘤细胞的增殖。进一步Hoechst 33258细胞核染色发现,华蟾素毒基可诱导骨肉瘤细胞产生典型凋亡小体,Annexin V/ PI检测100 nmol/L 华蟾酥毒基作用48 h后,U2OS、MG63和 SaO2细胞凋亡率分别为33.6%±6.4%、36.4%±7.8% 及 29.3%±5.1%。表明华蟾酥毒基的抗骨肉瘤效果是通过诱导骨肉瘤细胞凋亡来实现。在探讨其诱导骨肉瘤细胞凋亡的相关机制中,通过Western blot检测发现其诱导凋亡的作用机制是通过上调IAPs和Bcl-2家族凋亡相关蛋白Bax、cleaved-PARP,下调xIAP、cIAP-1、survivin及p65蛋白来实现。结论 华蟾酥毒基可明显抑制骨肉瘤细胞株U2OS、MG63和 SaO2细胞增殖,阻滞细胞在G₂/M期,并诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用机制为调节IAPs和Bcl-2凋亡相关家族蛋白的活性。     

STIM1和Orail在骨肉瘤细胞HOS增殖和凋亡中的作用

目的：探讨钙库操纵的钙内流（ SOCE）组成蛋白STIM1和Orai1蛋白在骨肉瘤细胞系HOS增殖和凋亡中的作用。方法用shRNA干扰技术抑制STIM1和Orai1蛋白的表达。 Western blot测定STIM1和Orai1的蛋白表达;激光共聚焦检测细胞Ca2＋内流变化;噻唑蓝（ MTT）比色法检测HOS细胞的增殖能力;流式细胞技术检测HOS 细胞的凋亡变化。结果与空白对照组和转染negative-shRNA的对照组相比,转染48 h后STIM1-shRNA 组STIM1蛋白的表达均明显降低（ P＜0.01）,Orai1-shRNA组Orai1蛋白的表达也明显降低。抑制STIM1和Orai1蛋白后,细胞Ca2＋内流减少。转染24、48和72 h后,STIM1-shRNA组及Orai1-shRNA组HOS细胞的增殖能力明显下降（ P＜0.01）。流式细胞检测显示,与control组和negative-shRNA组相比,转染48 h后细胞的周期受到明显抑制,而凋亡水平明显升高（P＜0.01）。结论 STIM1和Orai1在骨肉瘤细胞HOS增殖中有重要作用,抑制STIM1和Orai1蛋白表达可以抑制HOS细胞增殖、促进凋亡。     

硫化砷对骨肉瘤细胞生长和凋亡的影响

目的 研究硫化砷对骨肉瘤细胞生长和凋亡的影响，并探讨其可能的机制。方法 应用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长抑制率、倒置显微镜观察细胞形态、AnnexinV法检测细胞凋亡、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测bcl-2及bax基因的表达，观察硫化砷对骨肉瘤细胞株MG-63诱导凋亡的作用。结果 硫化砷可明显抑制MG-63细胞的增殖，1．0mg／L浓度的硫化砷作用24h后，MG-63细胞的抑制率可达26．43％。倒置显微镜观察被硫化砷抑制的MG-63细胞呈典型的凋亡改变．流式细胞仪检测凋亡率与硫化砷处理时间、处理浓度呈正相关。在硫化砷的作用下，MG-63细胞的bcl-2表达下调，而bax表达无明显改变．结论 硫化砷可有效地诱导骨肉瘤细胞凋亡，bcl-2表达下调是诱导细胞凋亡的重要机制。     

染料木黄酮对骨肉瘤细胞增殖及侵袭的影响及作用机制

目的 探讨染料木黄酮对人骨肉瘤MG-63细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制.方法 用染料木黄酮处理MG-63细胞,CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室体外侵袭实验法检测MG-63细胞侵袭能力;实时定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白印迹法(Western blot)分别检测MG-63细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2／MMP-9的mRNA及蛋白水平.结果CCK-8法表明染料木黄酮处理组MG-63细胞增殖被明显抑制,抑制率最高(85.3±5.1)％(P＜0.05);染料木黄酮在0、12.5、25.0、50.0 μmol/L时穿膜细胞数分别为(96.5±5.5)、(88.4±3.2)、(53.8±4.4)、(36.6±3.8)个,可明显降低MG-63细胞的侵袭能力(P＜0.05);染料木黄酮处理后MMP-2及MMP-9的mRNA表达水平明显下降(P＜0.05);MMP-2/MMP-9蛋白表达水平也明显下降,且具有时间依赖性.结论染料木黄酮抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖及侵袭转移能力,这种作用与MMP-2及MMP-9表达变化有关.