三磷酸腺苷对小鼠肌源性干细胞增殖和细胞周期的影响

目的 探讨三磷酸腺苷（ATP）对体外培养的小鼠肌源性干细胞（MDSC）增殖和细胞周期的影响。方法 根据细胞贴壁能力的差异。采用差速贴壁法分离培养MDSC，应用MTT比色测定法和流式细胞仪（FCM）分析检测实验组和对照组细胞的增殖情况和细胞周期的变化。结果 经ATP作用后。A490波长的光吸收值明显升高，处于S期的MDSC数量（S％）明显升高，G1％降低，增殖指数PrI值（S＋G2M）％增高。结论 ATP能促进小鼠MDSC增殖。这一作用可能是通过促进MDSC从G1期进入S期来实现的。     

三磷酸腺苷抑制肿瘤坏死因子-α诱导的肌源性干细胞凋亡及机制

目的 探讨三磷酸腺苷(ATP)对肌源性干细胞(MDSCs)凋亡的抑制作用及其机制.方法 采用差速贴壁法分离新生小鼠MDSCs,利用40μg/L肿瘤坏死因子(TNF)-α诱导MDSCs凋亡,100 μmol/L ATP抑制细胞凋亡.经流式细胞仪检测MDSCs的凋亡率和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶( Caspase) -3/8的表达.结果 TNF-α诱导后,脱壁细胞明显增多,MDSCs的凋亡率由5.17％升至31.58％,增加了5倍,Caspase-3染色阳性细胞率由5.01％增至19.25％,Caspase-8染色阳性细胞率由2.97％增至8.58％.ATP作用后,MDSCs的凋亡率降至12.06％,减少了2/3,Caspase-3染色阳性细胞率降至9.86％,Caspase-8染色阳性细胞率降至6.96％,但仍高于对照组.结论 ATP能抑制MDSCs表达Caspase-3/8,减轻TNF-α诱导的MDSCs凋亡.     

三磷酸腺苷对体外培养大鼠雪旺细胞的作用

目的观察三磷酸腺苷（ATP）对体外培养的大鼠雪旺细胞的影响，探讨ATP促进周围神经再生的作用机制。方法用SD乳鼠坐骨神经双酶消化后的剩余组织块培养雪旺细胞，G-418纯化后培养24h，分成5组继续培养10d：ATP组（按不同浓度分4组）和正常组。相差显微镜下观察计数，绘制各自的增殖曲线。在24和72h对各组细胞进行流式细胞分析。结果0．1mmol ATP组雪旺细胞的增殖不明显；1、10mmol组24h和72h后处于S期的雪旺细胞明显增多；100mmol组雪旺细胞数则明显减少；1、10、100mmol组和对照组的倍增时间分别为6．4、5．6、10．2、8．0d，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论ATP能显著地促进雪旺细胞的增殖从而促进外周神经再生，但其作用具有浓度依赖性，高浓度ATP反而抑制雪旺细胞的增殖。     

丹参抑制骨骼肌肌源性干细胞合成胶原蛋白的机制研究

目的 研究丹参抑制体外骨骼肌肌源性干细胞(MDSCs)合成胶原纤维的机制.方法 采用差速贴壁法分离大鼠骨骼肌MDSCs,利用TGF-β1诱导MDSCs表达胶原纤维,观察丹参对细胞的作用.将体外培养的细胞分为四组,A组:对照组;B组:150 mg/L丹参组;C组:10 μg/L TGF-β1组;D组:10μg/LTGF-β1+ 150 mg/L丹参组.利用免疫细胞化学方法,RT-PCR及Western Blot检测MDSCs中Smad3和COLⅠ表达.结果 在体外,TGF-β1能加强Smad3表达,诱导MDSCs表达胶原蛋白,丹参能拮抗TGF-β1的作用,降低细胞Smad3和COL Ⅰ的表达和合成水平.结论 丹参可以抑制MDSCs表达和合成细胞外基质,其机制是通过干预TGF-β1-Smad3信号通路,抑制MDSCs分化,从而降低细胞合成和分泌胶原纤维.     

靶肌肉注射三磷酸腺苷对周围神经再生作用的实验研究

目的通过对大鼠靶肌肉注射不同剂量的三磷酸腺苷(adenosine triphosphate，ATP)，观察其对神经再生的作用并为临床应用提供实验室依据。方法健康雌性Wistar大鼠48只，横断其左侧坐骨神经伤后立即作外膜缝合术。按手术先后随机分成3组，每组16只。高剂量组：靶肌肉注射ATP 0．5mg(0．2ml)。低剂量组：注射ATP 0．02mg(0．2ml)。对照组：注射同体积的生理盐水。术后每日用药1次至取材为止。于术后4周、8周时每组各取8只大鼠，取左侧三头肌称肌湿重。术后8周时同时检测坐骨神经的运动神经传导速度(MNCV)及形态学观察神经再生情况。结果高剂量组的所有指标均优于低剂量组，但高、低剂量组的指标均优于对照组。结论靶肌肉注射ATP对周围神经损伤有治疗作用；高剂量ATP可以发挥更好的作用。     

胰岛素样生长因子1基因转染肌源性干细胞及表达

目的检测胰岛素样生长因子1（IGF-1）转染肌源性干细胞效果及IGF-1基因表达情况。方法取失神经骨骼肌，分离、接种培养肌源性干细胞。取第3代细胞，用Lipofectamine介导，将重组质粒PAD—CMV—IGF-1转染肌源性干细胞。荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达，酶联免疫吸附试验检测培养上清液中IGF-1的浓度变化，Westernblot及实时荧光定量RT-PCR检测细胞内IGF-1及其mRNA的表达，流式细胞仪检测细胞周期。结果在转染2周内细胞表达绿色荧光蛋白。转染后上清液中分泌IGF-1浓度上升，72h达到高峰为（32．2±5．3）ng／ml，后其浓度逐渐下降。Westernblot证实有与IGF-1大小相符条带出现。实时荧光定量RT—PCR证实mRNA表达明显增高，第3天达到高峰。流式细胞检测表明转染后肌源性干细胞S期比例增加。结论PAD—CMV—IGF-1质粒可有效转染肌源性干细胞。     

腺苷在神经源性疼痛中的作用

神经源性疼痛的治疗是临床医生经常面临的难题,腺苷镇痛作用的发现为解决这一难题提供了重要的治疗手段。本文就腺苷类药物镇痛作用的机制、临床应用近况及其副作用作一介绍。     

大鼠股薄肌早期压疮局部腺苷三磷酸酶活性与兰尼碱受体1mRNA表达

目的 了解ATP酶活性与兰尼碱受体1(RyR1)mRNA表达变化在早期压疮形成过程中的作用机制.方法 将36只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为3组,每组12只:(1)未施压组,大鼠股薄肌部位未施予压强.(2)3次缺血再灌注(IR)组,用特制压力装置对大鼠一侧大腿股薄肌持续施压(22.47 kPa)2.0 h模拟缺血状态,继而停止施压0.5 h模拟再灌注变化,如此进行3次即完成3个IR循环.(3)5次IR组,处理条件同3次IR组但重复操作5次.处理结束后处死各组大鼠,取受压中心(未施压组取相同解剖部位)肌肉组织标本,用比色法检测总ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和Na+-K+-ATP酶活性,用ELISA法检测丙二醛含量,实时荧光定量RT-PCR法测定RyR1 mRNA表达水平.对实验数据行单因素方差分析,用Pearson相关分析法分析总ATP酶活性分别与丙二醛含量、RyR1 mRNA表达水平的相关性,RyR1 mRNA表达水平与丙二醛含量的相关性.结果 未施压组总ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶、Na+-K+-ATP酶活性分别为(1.629±0.004)、(0.907±0.061)、(0.697±0.083)U/mg,均高于3次IR组[(1.365±0.004)、(0.784±0.020)、(0.581±0.017)U/mg,F值分别为1707.0、29.8、15.2,P<0.05或P<0.01]以及5次IR组[(1.055±0.049)、(0.619±0.016)、(0.436±0.039)U/mg,F值分别为1107.0、169.9、65.7,P值均小于0.01];5次IR组此3项指标明显低于3次IR组(F值分别为322.8、341.7、94.0,P值均小于0.01).未施压组丙二醛含量为(7.5±0.6)nmol/L,明显低于3次IR组[(9.9±0.6)nmol/L,F=53.2,P<0.01]和5次IR组[(13.7±1.3)nmol/L,F=76.9,P<0.01];后2组比较,差异有统计学意义(F=82.9,P<0.01).实时荧光定量RT-PCR 结果表明,未施压组RyR1 mRNA表达水平为8.5±4.2,与3次IR组(3.3±2.1)接近(F=0.9,P>0.05),但明显高于5次IR组(0.6±0.5,F=23.6,P<0.05);5次IR组明显低于3次IR组(F=39.3,P<0.05).总ATP酶活性与丙二醛含量呈显著负相关,r=-0.918,P<0.01;总ATP酶活性与RyR1 mRNA表达水平呈显著正相关,r=0.713,P<0.01;RyR1 mRNA表达水平与丙二醛含量呈显著负相关,r=-0.702,P<0.01.结论 能量代谢障碍可能是早期压疮发生的始动因素;RyR1 mRNA表达降低初步反映局部组织受压一定时间后存在钙超载损伤.

Abstract：

Objective To investigate changes in adenosine triphosphatase (ATPase) activity and expression of ryanodine receptor 1 (RyR1) mRNA in formation of pressure ulcer at early stage,and to analyze its mechanism. Methods Thirty-six male Sprague-Dawley rats were divided into three groups according to the random number table as follows,with 12 rats in each group. (1) Ischemia-reperfusion (IR) for 3 times (3IR) group: unilateral gracilis of rats were loaded with 22.47 kPa pressure with a special pressure apparatus for 2.0 h to simulate ischemia,and unloaded for 0.5 h to simulate reperfusion. All rats were treated with above-mentioned manoeuvre for 3 times. (2) IR for 5 times (5IR) group: rats were treated with the same manoeuvre as that in 3IR group except for IR for 5 times. (3) Control group: gracilis of rats were subjected to a load of 0 kPa pressure. Rats in 3IR,5IR groups were sacrificed,and then central part of pressured tissue was harvested for detection of activity of total ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase,and Na+-K+-ATPase with spectrophotometer colorimetry,the level of malondialdehyde (MDA) with enzyme linked immunosorbent assay (ELISA),and the level of RyR1 mRNA with real-time fluorescence quantitative RT-PCR. The same part of gracilis muscle of rats in control group was harvested for determination of indexes as above. Data were processed with one-way analysis of variance. Pearson correlation analysis was respectively performed between total ATPase activity and MDA level,total ATPase activity and RyR1 mRNA expression level,and RyR1 mRNA expression level and MDA level. Results Activity of total ATPase,Ca2+-Mg2+-ATPase,Na+-K+-ATPase in control group was respectively (1.629±0.004),(0.907±0.061),(0.697±0.083) U/mg,all significantly higher than those in 3IR group[(1.365±0.004),(0.784±0.020),(0.581±0.017) U/mg,with F value respectively 1707.0,29.8,15.2,P<0.05 or P<0.01]and 5IR group[(1.055±0.049),(0.619±0.016),(0.436±0.039) U/mg,with F value respectively 1107.0,169.9,65.7,P values all below 0.01],and the values of 3 indexes in 5IR group were obviously lower than those in 3IR group (with F value respectively 322.8,341.7,94.0,P values all below 0.01). The level of MDA in control group[(7.5±0.6) nmol/L]was lower than that in 3IR group[(9.9±0.6)nmol/L,F=53.2,P<0.01]and 5IR group[(13.7±1.3) nmol/L,F=76.9,P<0.01]. There was also statistical difference in MDA level between 3IR group and 5IR group (F=82.9,P<0.01). Expression level of RyR1 mRNA in control group (8.5±4.2),which was similar to that in 3IR group (3.3±2.1,F=0.9,P>0.05),was significantly higher than that in 5IR group (0.6±0.5,F=23.6,P<0.05);while the RyR1 mRNA expression level was lower in 5IR group than in 3IR group (F=39.3,P<0.05). Activity of total ATPase was negatively correlated with MDA level (r=-0.918,P<0.01). Activity of total ATPase was positively correlated with RyR1 mRNA expression level (r=0.713,P<0.01). RyR1 mRNA expression level was negatively correlated with MDA level (r=-0.702,P<0.01). Conclusions Energy dysbolism may be an initial factor in the development of pressure ulcer at early stage. Calcium overload injury in pressure tissue can be identified by determination of RyR1 mRNA expression.     

经肺动脉输注三磷酸腺苷治疗小儿心脏术后肺动脉高压

目的探讨经肺动脉输注三磷酸腺苷（ａｄｅｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ＡＴＰ）对心脏术后合并肺动脉高压患儿的肺血管扩张效应。方法对１３例确诊为室间隔缺损合并重度肺动脉高压患儿术后早期经肺动脉输入３０～１５０μｇ／ｋｇ．ｍｉｎ的ＡＴＰ，观察用药前后血流动力学参数的变化。结果与用药前相比，低剂量输入（３０～５０μｇ／ｋｇ．ｍｉｎ）ＡＴＰ，在不明显降低平均体动脉压（ＭＢＰ）的前提下，特异性的降低肺动脉压力（Ｐ＜０．０５）及肺血管阻力（ＰＶＲ）（Ｐ＜０．０１）；中－高剂量（１００～１５０μｇ／ｋｇ．ｍｉｎ）的ＡＴＰ，在明显降低平均肺动脉压（ＭＰＡＰ）（Ｐ＜０．０１）的同时，ＭＢＰ亦明显下降（Ｐ＜０．０１），ＰＶＲ与体循环阻力（ＳＶＲ）呈现相似的减低趋势。结论利用ＡＴＰ半衰期短的特点，自肺动脉直接输注ＡＴＰ，在一定剂量下可出现选择性的肺血管扩张效应     

高糖刺激对人THP-1巨噬细胞肝X受体和三磷酸腺苷结合盒转运子A1表达的作用

目的 探讨高糖对人THP-1巨噬细胞肝X受体（LXR）和三磷酸腺苷结合盒转运子A1（ABCA1）表达的影响。 方法 人THP-1单核细胞经佛波脂（PMA）诱导转化成巨噬细胞。用CD68检测巨噬细胞表面标志物表达。以不同浓度葡萄糖（5.6、11.1、22.2、33.3 mmol/L）和不同时间（0、0.5、2、6、12、24、48、72 h）刺激巨噬细胞,用实时荧光定量PCR法检测其LXRα、LXRβ、ABCA1 mRNA表达;Western 印迹法检测LXRα、LXRβ和ABCA1蛋白的表达,并分析其相互间作用。 结果 PMA诱导72 h后,TPH-1细胞CD68呈阳性表达。与正常浓度糖（5.6 mmol/L）刺激比较,高糖刺激24 h后,TPH-1巨噬细胞LXR和ABCA1 mRNA和蛋白表达均下调。高糖刺激30 min后, LXRα、LXRβ和ABCA1 mRNA和蛋白表达上调;2 h后开始下调,随着时间延长而逐渐减少。 结论 高糖可能通过抑制LXR和ABCA1的表达,参与了动脉粥样硬化的发生和发展。     

肌源干细胞的原代培养及量子点标记

目的 探讨大鼠肌源干细胞(MDSCs)的分离、培养新方法,并应用量子点进行标记.方法 应用差速贴壁法对10只新生SD大鼠腓肠肌进行原代培养获取肌源干细胞(MDSC),然后量子点对其进行标记,荧光显微镜下观察效果.结果 应用新生SD大鼠取材,消化时间25 min,可明显提高获取细胞数量(每高倍视野增加约25％);荧光显微镜下观察量子点标记后的肌源干细胞,紫外光激发(激发波长≤400 nm)呈现明亮的橘红色.结论 应用新生SD大鼠取材缩短消化时间可明显提高肌源干细胞的获取量,量子点可成功标记肌源干细胞.     

大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞的分离与表型鉴定

目的 探讨阴茎海绵体中肌源性干细胞(MDSCs)的分离与表型鉴定的方法.方法 取2个月龄SD大鼠阴茎海绵体组织,用0.5％Ⅰ型胶原酶、0.1％胰蛋白酶进行酶消化初步分离.应用改良的Preplate差速贴壁法进一步行细胞纯化,细胞培养1h,贴壁细胞为PP1;未贴壁细胞转瓶培养2h,贴壁细胞为PP2;未贴壁细胞再次转瓶培养18h,贴壁细胞为PP3;此后,每次间隔24h转瓶培养依次获得的贴壁细胞为PP4、PP5、PP6,观察细胞形态变化.流式细胞仪检测PP3、PP6细胞中干细胞抗原l (Sca-l)和结蛋白(Desmin)的阳性表达量;Western blot检测PP1 ～ PP6细胞中Sca-1和Desmin的阳性表达;免疫荧光细胞化学法检测Sca-1、Desmin、Sca-1/Desmin在PP6细胞中的表达.结果 PP1～ PP6细胞贴壁能力逐渐减慢,PP6细胞贴壁最慢,2～3d后才开始贴壁成圆形或短梭形.流式细胞仪检测结果显示,PP3细胞中Sca-1阳性表达量为(0.3±0.2)％,与同型对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05),Desmin阳性表达量为(15.3±1.5)％,与同型对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);PP6细胞中Sca-1、Desmin阳性表达量分别为(5.7±0.7)％、(41.1±1.6)％,与PP3比较差异均有统计学意义(P＜0.05).Western blot显示PP1 ～ PP5细胞中未检测到Sca-1蛋白明显表达,但在PP6细胞中则检测到Sca-1蛋白的表达,Desmin蛋白在PP1 ～ PP6细胞中表达逐渐增强.免疫荧光细胞化学显示在PP6细胞中有少量细胞表达Sca-1、散在分布、以胞质表达为主;表达Desmin细胞聚集、数量较多、主要表达于胞质;亦发现有极少量双阳性标记细胞(Sca-1/Desmin),共同表达于同一细胞的胞质.结论 在大鼠阴茎海绵体中分离出既有于细胞表型又有肌源性表型的细胞,提示此类细胞为MDSCs.     

大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞向内皮细胞分化的研究

目的 观察大鼠阴茎海绵体肌源性干细胞(MDSCs)在血管内皮细胞生长因子(VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)共同作用下向内皮细胞分化的潜能.方法 采用Preplate差速贴壁法结合密度梯度离心法分离、纯化大鼠阴茎海绵体MDSCs,获得差速贴壁细胞(PP1-PP6),免疫荧光细胞化学法检测PP6细胞干细胞抗原-l(Sca-1)和结蛋白(Desmin)的表达,并传代培养.取PP6第3代细胞在VEGF和bFGF共同诱导21 d后,免疫荧光细胞化学法鉴定内皮细胞标志物[CD31、胎肝激酶-l(Flk-1)]的表达;分别在诱导0、5、10、15、21 d,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测干细胞标志物(Oct-4)和内皮细胞标志物[CD31、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、Flk-1] mRNA的表达量;通过Dil-Ac-LDL摄取实验检测细胞吞噬低密度脂蛋白的能力;划痕24h后观察划痕空白处的距离,评估细胞的迁移能力.结果 PP6细胞表达肌源性干细胞标志物Sca-1和Desmin;PP6诱导21 d后表达内皮细胞标志物(CD31和Flk-1),诱导21 d后与诱导0d比较,干细胞标志物Oct-4的mRNA表达量下降(下降倍数为0.445±0.025),而内皮细胞标志物mRNA表达量升高(CD31、eNOS、Flk-1升高倍数分别为2.541±0.146、2.364±0.175、2.538±0.100),差异均有统计学意义(P＜0.05).Dil-Ac-LDL摄取实验提示诱导后的细胞具有吞噬低密度脂蛋白的能力;划痕实验观察到诱导组空白处距离为282.01±3.84,未诱导组空白处距离为450.35±1.86,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 大鼠阴茎海绵体MDSCs在VEGF和bFGF的共同诱导下可分化为内皮细胞,且具有成熟内皮细胞的功能.     

体外循环对瓣膜置换术病人血细胞胰岛素受体和红细胞ATP含量的影响

目的：观察体外循环（ＣＰＢ）对１０例瓣膜置换术病人全血细胞胰岛素受体和红细胞ＡＴＰ含量的影响。方法：利用放射配体结合试验，测定全血细胞胰岛素受体密度和亲和力；用高效液相色谱法测定红细胞ＡＴＰ含量，同时监测血糖和胰岛素浓度。结果：转流３０分钟，血细胞高亲和胰岛素受体（Ｒ１）密度明显增加（Ｐ＜０．０１），亲和力（Ｋ１）明显降低（Ｐ＜０．０１），低亲和胰岛素受体（Ｒ２）密度也明显增加（Ｐ＜０．０１），但亲和力（Ｋ２）变化不大（Ｐ＞０．０５）；停机３０分钟，上述变化有所恢复，但未到转流前的水平。转流３０分钟红细胞ＡＴＰ含量明显降低（Ｐ＜０．０１），并持续到停机后３０分钟，同时伴随血糖明显升高（Ｐ＜０．０１），胰岛素／血糖比值明显降低（Ｐ＜０．０１）。结论：ＣＰＢ可致血细胞胰岛素受体密度增加而亲和力下降，以及红细胞ＡＴＰ含量下降。     

红细胞生成素对模拟急性肾损伤微环境下培养骨髓间充质干细胞增殖的影响及机制探讨

目的 观察经红细胞生成素（EPO）干预后,体外模拟急性肾损伤（AKI）微环境下培养骨髓间充质干细胞（MSC）的分裂增殖情况,并探讨产生这种变化的可能机制。 方法 抽取C57BL/6小鼠的骨髓,经Percoll密度梯度离心联合贴壁培养法分离纯化出小鼠MSC（mMSC）,以流式细胞仪鉴定。夹闭雄性C57BL/6小鼠双侧肾蒂30 min再开放30 min的方法制作AKI鼠模型,即刻取双侧肾脏皮质制作缺血再灌注（IR）肾脏匀浆上清。取扩增第3代的mMSC分组培养：A组：含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基;B组：含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基＋IR肾脏匀浆上清,体外模拟AKI微环境干预mMSC;C组：含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基＋IR肾脏匀浆上清+不同浓度EPO（1、5、10、50 U/ml）。培养1、3、5、7 d。CCK-8法检测各组培养mMSC的增殖,TUNEL法检测mMSC凋亡,Western印迹法检测mMSC表面EPO受体（EPOR）及增殖凋亡相关信号通路蛋白的表达。 结果 CCK-8法检测显示,经IR肾脏匀浆上清干预后,不同时间点mMSC的增殖效应显著减弱（P ＜ 0.01）,而TUNEL检测表明其胞核染色阳性细胞的百分比显著高于A组（P ＜ 0.01）;给予EPO干预后,mMSC的增殖能力增强,胞核染色阳性细胞百分比降低,具有浓度依赖效应。Western印迹结果显示,第3代mMSC表面存在EPOR表达,培养5 d后EPOR相对表达量为0.092±0.015。EPO以剂量和时间依赖性降低AKI微环境下凋亡相关蛋白caspase-3的表达,同时上调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达。用10 U/ml EPO干预5 d后,相对于B组,磷酸化蛋白酪氨酸激酶2及磷酸化信号转导和转录因子的表达均显著上调（均P < 0.01）。 结论 EPO能促进体外AKI微环境干预下培养mMSC的增殖,减轻其凋亡,该效应经EPOR介导,并与增殖凋亡相关信号通路蛋白有关。     

褪黑素对大鼠脊髓神经干细胞增殖和分化的影响

目的:研究不同浓度的褪黑素(melatonin,MT)对胚胎大鼠脊髓神经干细胞(neuralstemcells,NSCs)增殖和分化的影响。方法:取孕14d胚胎大鼠脊髓,分离并原代培养脊髓NSCs。传四代后分为对照组和实验组,实验组分别加入不同浓度的MT(100μmol/L、1μmol/L及10nmol/L)。采用细胞计数结合免疫荧光检测法,观察脊髓NSCs的生长增殖及分化状况,并作统计学分析。结果:100μmol/L和1μmol/L的浓度的MT均能促进脊髓NSCs增殖;10nmol/L时则抑制脊髓NSCs的增殖;3种浓度的MT均能使脊髓NSCs向神经元分化的比率增加,对照组和实验组的神经元分化比率分别为(23.6±2)%、(45.3±1)%、(42.5±2)%、(50.7±2)%。结论:3种不同浓度的褪黑素对大鼠脊髓NSCs体外增殖有着不同的作用,但都有促进其向神经元分化的作用。     

Effects of adenosine triphosphate (ATP) on somatosensory evoked potentials in humans anesthetized with isoflurane and nitrous oxide

In order to examine the usefulness of adenosine triphosphate (ATP) as an adjuvant to anesthesia for surgery requiring intraoperative somatosensory evoked potential (SSEP) monitoring, we have studied the effects of ATP on SSEPs in patients anesthetized with isoflurane and nitrous oxide (N₂O). A control recording of SSEP was performed while anesthesia was maintained with 0.5% end-tidal concentration of isoflurane in 60% N₂O. The recordings were repeated after an ATP infusion had been added to this basal anesthesia at the rates of 100 μgkg bw^-1 min^-1 and 200 μg kg bw^-1 min^-1. SSEP was also studied when end-tidal isoflurane concentration was increased to 1.5% after cessation of ATP infusion. An infusion of ATP combined with 0.5% isoflurane and 60% N₂O effectively inhibited an increase in blood pressure during surgery. The amplitude of the cortical component of SSEP was lowered by 1.5% isoflurane, which also increased both cortical and spinal latencies as well as central conduction time (CCT). In contrast ATP infusions at both rates induced no significant changes in latencies, amplitude and CCT. The results indicate that ATP infusion combined with 0.5% isoflurane in 60% N₂O can be a useful anesthetic technique for intraoperative SSEP monitoring because adequate anesthetic depth can be maintained by a low concentration of anesthetics without further suppression of SSEPs.     

Effect of prostacyclin and adenosine triphosphate on vasospasm of canine basilar artery

Cerebral vasospasm is one of the most important factors influencing morbidity and mortality of intracranial operations or diseases. Platelet aggregation and adhesion is increased in spastic vessels. Degradation of platelets liberates mediators, which in turn increase vasospasm, thus creating a vicious cycle. Healthy vessels cope with this by increasing the synthesis of prostacyclin. The purpose of this study was to increase experimentally the levels of arterial prostacyclin and adenosine triphosphate (ATP) in animals through intraarterial injection of these substances because they are lower in spastic vessels. Prostacyclin promotes antiaggregation and dilatation, increases blood flow, inhibits thromboxane A2, and prevents synthesis of angiotensin II. Most of these effects were done by increasing cyclic adenosine monophosphate (cAMP). After injecting autogenous blood into the cisterna magna of male dogs, both the acute and chronic phases of vasospasm and the degenerative changes in the arterial wall were observed. Injecting ATP increased the severity of vasospasm. During vasospasm it was found that when prostacyclin is used intraarterially, vasodilatation began, but degeneration of the arterial wall could not be prevented. In the group of animals in which both ATP and prostacyclin were used, there was no degeneration of the arterial wall and the basilar artery was seen to be normal when viewed under the electron microscope.     

传代种植密度对人间充质干细胞增殖及成骨分化的影响

目的 :研究人间充质干细胞 (mesenchymalstemcells ,MSCs)传代培养时 ,细胞种植密度对MSCs增殖及成骨诱导分化影响。方法 :将第 2代MSCs以 8× 10 3 /cm2 、 3× 10 3/cm2 、 8× 10 2 /cm2 密度接种 ,分析其生长曲线 ,并扩增培养 18d ,记录细胞扩增数量 ,再分析扩增后细胞的生长曲线和成骨诱导能力。结果 :人骨髓MSCs阴性表达ALP、CD3 4;在 8× 10 3/cm2 种植密度下 ,细胞倍增时间 40h ,18d后细胞数量扩增 (5 1± 13 )倍 ;在 3× 10 3 /cm2 种植密度下 ,细胞扩增 (2 8± 6)倍 ;在 8× 10 2 /cm2 种植密度下 ,细胞总数仅增加 (5± 3 )倍。在低密度下获得的细胞增殖能力强于高密度组 ,两组细胞均具有成骨诱导能力。结论 :种植密度对MSCs增殖有明显影响 ,快速扩增MSCs作为骨组织工程种子细胞 ,宜选择 8× 10 3 /cm2 种植密度。