NOSTRIN基因克隆及其在人脐静脉内皮细胞中的表达

目的 :构建内皮型一氧化氮合酶运输介导物 (endothelialnitricoxidesynthasetrafficinducer ,NOSTRIN)基因的真核表达载体 ,通过质粒转染人脐静脉内皮细胞 (humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC)获得高表达NOSTRIN基因的细胞克隆。方法 :构建真核表达载体pcDNA3.1 NOSTRIN ,采用脂质体介导将重组质粒导入体外培养的HUVEC ,Westernblot检测转染细胞和未转染细胞中NOSTRIN蛋白质的表达。结果 :成功构建了真核表达载体pcDNA3.1 NOSTRIN ,并用脂质体介导的方法获得了高稳定表达NOSTRIN的细胞克隆 ;Westernblot显示转染前后的细胞均有 5 8kD的蛋白质表达 ,转染后表达量明显增高。结论 :重组质粒pcDNA3.1 NOSTRIN经转染能在HUVEC细胞中高效表达 ,为进一步研究NOSTRIN对HUVEC的生物学影响奠定了基础     

尿皮素对体外培养的人脐静脉内皮细胞一氧化氮及一氧化氮合酶的影响

目的:通过检测尿皮素(UCN)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)一氧化氮(NO)生成及一氧化氮合酶(NOS)表达的影响,探讨UCN调节胎儿-胎盘血管张力的分子机制。方法:在离体培养的HUVEC中加入不同浓度的UCN(0、0.1、1、10nmol/L)、10nmol/L促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)及向以上各组UCN/CRH同时加α-helical-CRH进行体外培养,用硝酸还原酶法检测细胞上清液中NO的水平,蛋白印迹法检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白表达水平的变化。结果:在与UCN共同培养4~8h后,HUVEC细胞上清液中NO水平呈时间和剂量依赖性变化,随着培养时间的延长,UCN浓度增加,NO水平逐渐升高;UCN组HUVEC iNOS表达水平比对照组明显升高(P<0.05),且呈浓度依赖性升高。而各组eNOS表达水平与对照组比较无明显变化(P>0.05)。UCN/CRH α-helical-CRH组HUVEC上清液中NO水平和HU-VEC iNOS表达水平与对照组比较无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05),与相同浓度UCN/CRH组比较NO水平和iNOS蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:UCN可促HUVEC合成及释放NO,NO生成增多与UCN通过促进肾上腺皮质激素释放激素2β受体(CRH-R2β)正相调节iNOS蛋白表达有关,这可能是UCN调节胎儿-胎盘血管张力的分子机制之一。     

脐静脉体外舒缩反应及局部一氧化氮合酶变化在妊高征发病中 …

目的 探讨脐静血管舒缩反应及其病理生理学意义与局部一氧化氮合酶变化在妊高征发病中的作用。方法 测定、１４例妊高患者和１４妊娠分娩的 生儿脐静脉在离体血管功能实验中,对苯肾上腺素、异丙肾上腺素和乙酰胆碱的收缩和舒张反应曲线,计算反应的最大值和亲和力指数值;同时测定脐血管组织ＮＯＳ活性和历乐中一氧化氮代谢产物亚硝基／硝酸基（ＮＯ２／ＮＯ３）浓度。结果（１）对照组脐静脉乙酰胆碱舒张反应曲一的Ｅｍａｘ为（     

可溶性endoglin对脐静脉内皮细胞凋亡的影响

子痫前期是妊娠期特有的疾病,重度子痫前期是影响孕产妇和围产儿病率和病死率的主要原因之一,其发病机制尚未完全阐明,但内皮细胞损伤作为子痫前期的一个病理生理特征已是不争的事实,已有研究表明子痫前期患者血清中可溶性endoglin(soluble endoglin,sEng)明显升高[1],它与内皮细胞功能失调密切相关.     

细胞外信号调节蛋白激酶通路在胎盘生长因子1诱导脐静脉内皮细胞释放一氧化氮中的作用

目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶(ERK)通路在胎盘生长因子1(PLGF-1)诱导脐静脉内皮细胞(HUVEC)释放一氧化氮(NO)中的作用.方法 选择因头盆不称、胎儿窘迫或胎位异常行剖宫产分娩的新生儿50例,采用胰蛋白酶消化法进行脐带HUVEC原代培养.(1)培养成功后.用免疫组化法通过Ⅷ因子鉴定细胞形态;(2)用蛋白印迹法和RT-PCR技术检测HUVEC中酪氨酸激酶受体1(Fit-1)蛋白和mRNA表达;(3)用浓度为10 ng/ml的PLGF-1培养细胞(观察A组),并在培养前及培养后2.5、5、10、20 min收集细胞,提取蛋白,用蛋白印迹法检测ERK蛋白的表达;(4)用浓度为10 ng/ml的PLGF-1培养细胞,收集培养后20、40、160、360、480、720、1440 min的细胞培养液,用硝酸盐还原酶法检测培养液中NO的含量;(5)先用含ERK特异性抑制剂--PD98059(100μmo/L)的培养基培养细胞60 min后,换含PLGF-1的培养基继续培养(观察B组),收集培养后20、40、160、360、480、720、1440 min的细胞培养液,用硝酸盐还原酶法检测培养液中NO的含量.以无血清培养基培养的细胞为对照组,细胞处理时间、培养条件和收集细胞液时间同观察组.实验重复3次.结果 (1)免疫组化鉴定培养的细胞为HUVEC.(2)HUVEC中有Fit-1 mRNA和蛋白的表达.(3)观察A组PLGF-l培养HUVEC后2.5 min即有ERK蛋白表达强度的升高,5 min时表达强度达到高峰,10 min时表达强度降低.(4)PLGF-l培养20 min后HUVEC培养液中NO含量开始升高,为(6.96±0.34)μmol/L,培养40 min时NO含量为(9.45 4-0.59)μmol/L,培养360 min时NO达(15.82±0.69)μmo/L,各时间点NO含量比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(5)观察B组NO释放显著受到抑制,从培养160 min到1440 min,NO含量下降达50%以上.结论 ERK通路可能是PLGF诱导HUVEC释放NO的重要信号通路之一.     

胎盘生长因子-1对原代培养人脐静脉内皮细胞增殖及一氧化氮释放的影响

目的 了解胎盘生长因子-1(placenta growth factor-1,PLGF-1)对原代培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖及一氧化氮(nitric oxide,NO)释放的影响.方法 取正常晚孕期剖宫产儿脐带,采用胰蛋白酶消化法,进行HUVEC原代培养.培养成功后,收集细胞,用免疫印迹法和RT-PCR法检测酪氨酸激酶受体(fms-like tyrosine kinase,Fit-1)蛋白和基因表达,继之用不同浓度PLGF-1处理细胞,然后在不同时间点收集细胞培养液,用硝酸盐还原酶法测细胞培养液上清中NO水平;用MTT比色法测细胞增殖水平.结果 Flt-1基因和蛋白在HUVEC中有表达.PLGF-1可显著诱导HUVEC释放NO,并呈剂量依赖关系.PLGF-1对HUVEC有增殖作用.结论 PLGF-1可刺激HUVEC增殖和诱导HUVEC释放NO.     

人脐静脉内皮细胞中肿瘤坏死因子-α诱导NOSTRIN基因表达上调的实验研究

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)基因表达的诱导作用以及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对此诱导作用的抑制。方法:将培养的内皮细胞分为3组:第1组为无任何处理的HUVEC,第2组为子痫前期(PE)患者血清作用的HUVEC,第3组为正常晚孕妇女血清作用的HUVEC。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测3组细胞中NOSTRIN mR-NA的表达。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测PE患者和正常孕妇血清中TNF-α含量。用1,3,5ng/ml3种浓度的TNF-α分别作用3组细胞6h,以及用浓度3ng/ml的TNF-α作用3组细胞分别达6h、12h、24h,RT-PCR检测NOSTRIN mRNA的表达;将PDTC(5mmol/ml)与TNF-α(3ng/ml)同时作用以及TNF-α(3ng/ml)单独作用3组细胞6h,RT-PCR检测NOSTRIN基因mRNA的表达。结果:3组细胞中都有NOSTRIN表达,第2组表达量显著高于第1组和第3组(P0.01)。ELISA结果显示,PE患者血清中TNF-α含量显著高于正常晚孕妇女(P0.01)。TNF-α作用HUVEC细胞后NOSTRIN显著高表达,呈时间和剂量依赖关系(P0.01)。PDTC和TNF-α同时作用的HUVEC与TNF-α单独作用的HUVEC相比,其NOSTRIN表达显著降低(P0.01)。结论:TNF-α可上调NOSTRIN在HUVEC中的表达。     

雌二醇对同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞组织因子表达的影响

目的:探讨雌二醇(E2)对同型半胱氨酸(Hcy)诱导人脐静脉内皮细胞(HU-VEC)组织因子(TF)表达的影响及机制。方法:通过一期凝固法测总细胞促凝活性(PCA);采用RT-PCR测TF表达;用免疫组化法观察NF-κB的变化。结果:Hcy剂量依赖性促进HUVEC的PCA增加(与对照组相比r=0.969,P<0.01);E2单独作用对HUVEC的PCA没有影响(P>0.05);E2抑制Hcy诱导HUVEC表达TF(r=-0.686,P<0.01),最适浓度为1×10-7mol/L;E2可抑制Hcy引起的NF-κB核易位(P<0.01);ICI182,780对E2抑制Hcy诱导HUVEC的TF表达和核易位没有明显的拮抗作用(P>0.05)。结论:E2抑制Hcy诱导HUVEC表达TF;E2降低HUVEC的NF-κB核易位;E2抑制Hcy诱导HU-VEC表达TF作用未通过经典核受体途径。     

脐动脉血流异常孕妇胎盘一氧化氮合成酶的组织化学定位及活性测定

目的 研究脐动脉血流异常的胎盘绒毛、绒毛干血管和脐带一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)的分布及活性大小的变化,探讨胎儿胎盘循环中NOS在脐动脉血流波形异常发生中的作用.方法 对9名脐动脉血流检测正常和8名脐动脉血流检测异常孕妇的胎盘绒毛、绒毛干血管和脐带组织,用还原型辅酶Ⅱ-黄递酶组织化学法(NADPH-d组织化学法)研究NOS的组织分布,用比色法测定NOS活性.结果 NOS主要分布于合体滋养细胞和血管内皮细胞中.正常组大多数合体滋养细胞中的蓝色颗粒聚集成团块,主要位于细胞的基底部;异常组大多数合体滋养细胞中的蓝色颗粒呈弥散状于细胞核周围,无基底部聚集趋势,着色强度明显较正常组弱.异常组胎盘绒毛组织中,NOS活性显著降低.结论 在脐动脉血流异常胎盘绒毛组织中NOS的活性降低且位置异常,脐动脉血流异常的发生可能与合体滋养细胞中NOS活性降低有一定关系.     

NOSTRIN基因高表达诱导脐静脉内皮细胞生物活性改变的研究

目的研究人内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelialnitricoxidesynthasetrafficinducer,NOSTRIN)基因在体外培养的人脐静脉内皮细胞(humanumbilicalveinendothelialcells,HUVEC)中的过度表达对该细胞生物学特性的影响。方法脂质体介导转染体外培养的HU-VEC,G418筛选阳性克隆。免疫组织化学法检测第八因子相关抗原(FⅧRAg)的表达;细胞计数法绘制细胞生长曲线以观察细胞的增殖能力;Western印迹检测细胞中NOSTRIN和eNOS蛋白质的表达;分光光度法和硝酸还原酶法分别测定细胞培养上清中eNOS的活性和NO代谢产物亚硝酸基/亚硝基(NO2-/NO3-)水平;光镜、电镜观察细胞的形态和超微结构。结果转染前后细胞均为血管内皮来源细胞;转染NOSTRIN基因后细胞的增殖能力明显降低;Western印迹显示细胞转染NOS-TRIN基因后其表达量明显增高,而eNOS蛋白质的表达量在各组细胞之间无差异(P>0·05);转染NOSTRIN的细胞培养上清中eNOS活性[(11.727±3.09)U/ml]与转染空载体细胞[(22·69±3·36)U/ml]和对照组细胞[(21.85±3.47)U/ml]比较降低显著(P<0·01),同时转染NOSTRIN细胞培养上清中NO2-/NO3-[(25.56±2.49)μmol/L],与转染空载体细胞[(48.37±2.61)μmol/L]和对照组[(49.06±2.78)μmol/L]比较显著降低(P<0.01);光镜和电镜观察看到转染NOSTRIN后对HUVEC有损伤作用(HUVEC拉长、微绒毛变短、细胞膜损伤,胞浆内有脂滴空泡,核膜不完整)。结论NOSTRIN的高表达影响了HUVEC的生物学特性,对HUVEC有明显的损伤作用。     

脂氧素A4对缺氧损伤的人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的 探讨脂氧素A4(LXA4)对缺氧损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用及其机制.方法 体外培养HUVEC,培养后的细胞分别以单纯M199培养基培养(对照组)、氯化钴(CoCl2)诱导细胞缺氧(缺氧组)、不同浓度LXA4(1、10、100 nmol/L)加入缺氧组细胞培养液中(药物干预组);倒置相差显微镜下观察各组HUVEC的形态学变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度LXA4培养24 h和100 nmol/L的LXA4作用不同时间(4、8、12、24 h)后缺氧HUVEC存活率;免疫细胞化学法检测细胞胞质内第Ⅷ因子相关抗原抗体(vWF)水平变化(以灰度值表示),细胞质内出现棕黄色颗粒为阳性;激光共聚焦显微镜观察细胞质内游离Ca2+荧光强度变化.结果 (1)细胞形态:缺氧组HUVEC明显失去原有正常细胞形态,细胞变圆,核固缩;药物干预组正常细胞数量增多,加入100 nmol/L浓度的LXA4后,大部分细胞形态与正常细胞形态基本相似.(2)细胞存活率:缺氧组细胞存活率为(40.1±3.9)%,药物干预组细胞培养液中加入1、10、100 nmol/L浓度的LXA4后,细胞存活率分别为(52.9±1.4)%、(64.1±3.3)%、(76.6±1.6)%,分别与缺氧组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).药物干预组细胞培养液中LXA4浓度为100 nmol/L时,作用4、8、12、24 h,细胞存活率分别为(68.2±2.3)%、(82.5±1.4)%、(82.9±1.4)%和(72.2±8.5)%,且在12 h时达峰值;药物干预组各时间点细胞存活率分别与缺氧组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)vWF水平:随着药物干预组细胞培养液中LXA4浓度的增加,其胞质内vWF水平逐步降低,LXA4浓度为1、10、100 nmol/L时.vWF水平分别为203.9±0.7、204.6±0.9、191.8±0.5,分别与缺氧组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(4)Ca2+荧光强度:激光共聚焦显微镜观察结果显示,LXA4可提高缺氧HUVEC胞质内Ca2+荧光强度.结论 LXA4对缺氧HUVEC维持正常的细胞形态起重要作用,并可提高其细胞存活率及降低细胞质内vWF水平,其保护机制可能是通过降低细胞内钙超载和转移细胞核内Ca2+,使细胞质内Ca2+增加.     

脂氧素对脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞通透性的影响

目的 研究脂氧素对脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞通透性的影响,并进一步探讨其机制.方法 取华中科技大学同济医学院附属同济医院产科因社会因素行剖宫产术的健康产妇分娩的新生儿脐带,分离原代脐静脉内皮细胞后进行传代培养并分组:(1)对照组.(2)脂多糖组:加入10 mg/L脂多糖培养24 h.(3)脂多糖+脂氧素A4组:加入100 nmol/L脂氧素A4和10 mg/L脂多糖共同培养24 h.(4)脂多糖+脂氧素A4+BOC-2组:BOC-2为脂氧素受体拮抗剂,共同培养24 h.计算各组内皮细胞通透系数;逆转录(RT)PCR技术检测内皮细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达水平;观察不同浓度脂多糖(0、0.1、1、10 mg/L)对对照组内皮细胞功能的影响(以TNF-α mRNA水平表示);蛋白印迹法检测内皮细胞中核因子κB蛋白表达水平;ELISA法检测内皮细胞培养液中TNF-α水平.结果 (1)内皮细胞通透系数:脂多糖组内皮细胞通透系数为(183.1±1.7)%,脂多糖+脂氧素A4组为(103.1±2.2)%,脂多糖+脂氧素A4+BOC-2组为(162.2±2.8)%,对照组为100%,脂多糖+脂氧素A4组通透系数较脂多糖组减小了(80.0±2.2)%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).脂多糖+脂氧素A4+BOC-2组通透系数与脂多糖+脂氧素A4组相比增加了(59.1±2.8)%,两组比较,差异有统计学意义(P<0.01).脂多糖+脂氧素A4+BOC-2组与脂多糖组比较,差异无统计学意义(P>0.05).(2)TNF-α mRNA表达水平:脂多糖浓度为0、0.1、1、10 mg/L时,对照组脐静脉内皮细胞中的TNF-α mRNA表达水平分别为1.11±0.11、1.27±0.03、1.60±0.06、1.82±0.04,其中,脂多糖浓度为1、10 mg/L时,分别与0浓度比较,差异均有统计学意义(P<0.05).(3)核因子κB蛋白及TNF-αmRNA表达水平:核因子κB蛋白及TNF-αmRNA表达水平,对照组分别为0.24±0.06及0.25±0.05,脂多糖组分别为0.53±0.06及0.81±0.09,脂多糖+脂氧素A4组分别为0.19±0.05及0.41±0.07,脂多糖组核因子κB蛋白及TNF-α mRNA表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);脂多糖+脂氧素A4组核因子κB蛋白及TNF-αmRNA表达水平明显低于脂多糖组,差异有统计学意义(P<0.05).(4)细胞培养液中TNF-α水平:脂多糖组TNF-α水平[(31.94±0.01)ng/L]明显高于对照组[(18.17±0.03)ng/L],两组比较,差异有统计学意义(P<0.05);脂多糖+脂氧素A4组[(15.72±0.07)ng/L]明显低于脂多糖组,两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 脂氧素A4可以抑制脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞高通透性,其作用可能是首先与其受体结合然后通过抑制核因子κB及其下游细胞因子TNF-α的表达而实现的.

Abstract：

Objective To explore whether lipoxin A4 (LXA4)could prevent lipopolysaccharide (LPS)-induced human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) monolayer hyperpermeability and its possible mechanism. Methods Human umbilical cords were obtained from women with normal pregnancy immediately after delivery from Tongji Hospital Affiliated of Tongji Medical College. Primary HUVEC were isolated from umbilical veins and subcultured, then, HUVEC were divided into four groups:control group;LPS group (10 mg/L of LPS); LPS + LXA4 group(10 mg/L of LPS and 100 nmol/L of LXA4); LPS +LXA4 + BOC-2 group [10 μmol/L of BOC-2, an effective antagonist of formyl peptide receptor like 1 (FPRL-1)]. All expriments were performed after cells were treated for 24 hours. Endothelial permeability was measured by fluorescein isothiocyan-ate labelled bovine serum albumin (FITC-BSA) clearance across the monolayer; tumor necrosis factor α(TNF-o) mRNA and secretion were detected by reverse transcriplase (RT) -PCR and ELISA assay respectively, and nuclear factor κB(NF-κB) protein change was determined by western blot. Results (1) LPS induced a significant increase in the permeability [Pa value of LPS group was (183.1 ±1.7)%], while co-administrating with LXA4 obviously attenuated this LPS-induced hyperpermeability, Pa value of LPS + LXA4 group was (103.1 ±2.2)%, LPS + LXA4 + BOC-2 group was (162.2 ± 2.8)%, control group was 100%, the permeability of HUVEC monolayer was significantly increased by LPS which was (83.1 ± 1.7)% of control (P <0.01), however, it was notably inhibited by LXA4 (P<0.05); the blockade of FPRL-1 could attenuate the effect of LXA4, that is, there was no difference between the LPS + LXA4 + BOC-2 group and the LPS group. (2) After treatment with different concentration of LPS(0,0.1, 1,10 mg/L), the mRNA expressions of TNF-α were increased (1.11 ±0.11,1.27 ± 0.03, 1.60 ± 0.06, 1.82 ± 0. 04, respectively), compared with the control group, at the concentration of 1,10 mg/L LPS, the difference was statistically significant (P<0. 05). (3) The increased levels of NF-κB and inflammatory mediator TNF-α in the LPS group were both inhibited by LXA4. Levels of NF-κB protein and TNF-o mRNA secretion in LPS treated group (0.53 ±0.06 and 0.81 ±0.09 ,respectively)were both inhibited by LXA4 (0.19 ± 0.05 and 0.41 ± 0.07, respectively, and both had significant difference, P<0.05). (4) Levels of TNF-α in HUVEC culture medium of LPS group [(31.94 ±0.01)ng/L] was significantly higher than the control group [(18.17 ± 0.03) ng/L, P<0.05], LPS + LXA4 group [(15.72 ± 0.07) ng/L] was significantly lower than the LPS group (P<0.05). Conclusion Our findings demonstrated that LXA4 could prevent the endothelial cell hyperpermeability induced by LPS in HUVEC under which the possible mechanism was through inhibiting the expression of NF-κB and its related cytokines through receptor-dependent.     

Reduced endothelial nitric oxide synthase activity and concentration in fetal umbilical veins from maternal cigarette smokers

OBJECTIVE: This study aimed to investigate the effect of maternal cigarette smoking on endothelial nitric oxide synthase (eNOS) activity and concentration in the fetal umbilical vein, and subsequently, to relate the findings to the size of the newborn. STUDY DESIGN: Forty-four nonsmoking and 30 smoking women were included in the study. Umbilical vein endothelial cells were isolated immediately after delivery. The eNOS activity was determined in the samples by the conversion of (14)C-L-arginine to (14)C-L-citrulline, and the eNOS concentration was determined by a human eNOS immunoassay. RESULTS: Newborns of smokers had a lower weight (P=.014) and a smaller head circumference (P=.002) than those newborns of nonsmokers. The eNOS activity in fetal umbilical veins exposed to maternal smoking was 40% lower (P=.006), and the eNOS concentration 32% lower (P=.053) in newborns of smokers than in nonsmokers. CONCLUSION: The findings suggest that maternal smoking reduces nitric oxide production in the fetal circulation. This may contribute to retarded fetal growth caused by the subsequent endothelial dysfunction with reduction of dilatory capacity of the vessels.     

脂氧素对脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞氧化应激反应的影响

目的 探讨脂氧素对脂多糖诱导的脐静脉内皮细胞氧化应激反应的影响.方法 切取正常妊娠剖宫产手术4 h内的新生儿脐带,从中分离出脐静脉内皮细胞并进行传代培养,将培养的脐静脉内皮细胞分成4组:空白对照组,脂多糖处理组(10 μg/ml脂多糖),脂多糖+脂氧素处理组(10μg/ml脂多糖+100 nmol/L脂氧素),脂氧素处理组(100 nmol/L脂氧素).分别作用12 h和24 h后进行检测.采用免疫细胞荧光法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)的表达及核转位情况、内皮细胞特异性Ⅷ因子的表达;采用逆转录(RT)PCR检测Nrf2、血红素加氧酶(HO)1和还原型辅酶Ⅰ醌类氧化还原酶(NQO1)mRNA的表达.结果 (1)荧光显微镜下观察到脐静脉内皮细胞胞质内有黄绿色荧光反应,证实有内皮细胞特异性Ⅷ因子抗原存在.(2)免疫细胞荧光染色显示,空白对照组内皮细胞中Nrf2大部分表达在胞质,胞核内基本不表达.12 h后,脂多糖处理组Nrf2胞核内的表达增加,出现了由胞质向胞核的转位;但24 h后,Nrf2在胞质和胞核内的表达都明显下降.脂多糖+脂氧素处理组在12 h和24 h,Nrf2在胞质和胞核中的表达均明显高于脂多糖处理组;脂氧素处理组Nrf2大部分表达在胞质中.(3)脂多糖处理组和脂多糖+脂氧素处理组在12 h后,Nrf2和HO-1 mRNA表达水平分别为0.581±0.019、0.081±0.009及0.692±0.048、0.136±0.018,均明显高于空白对照组,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);脂多糖处理组在12 h后,NQO1 mRNA表达为0.381±0.009,虽高于空白对照组的0.355±0.044,但差异无统计学意义(P＞0.05),而脂多糖+脂氧素处理组NQO1 mRNA表达为0.574±0.034,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);脂多糖处理组24 h后,Nrf2和NQO1 mRNA的表达水平分别为0.180±0.017、0.472±0.064,与空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);脂多糖+脂氧素处理组Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA的表达均较脂多糖处理组明显增加,差异均有统计学意义(P＜0.05);脂氧素处理组Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA表达水平无论12 h还是24 h,与空白对照组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 脂氧素通过激活脐静脉内皮细胞胞质内的Nrf2,使其向胞核内转位,进而上调Nrf2下游对细胞有保护作用的抗氧化酶,如HO-1、NQO1,抑制脂多糖诱导的氧化应激,从而保护脐静脉内皮细胞免受损伤.     

一氧化氮及一氧化氮合酶与卵巢肿瘤凋亡的关系

目的探讨卵巢良、恶性肿瘤患者血清、肿瘤组织、腹水中一氧化氮(nitricoxide,NO)及其合酶(nitricoxidesynthase,NOS)含量与肿瘤凋亡的关系。方法用分光光度计测定NO、NOS、iNOS活性,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果恶性卵巢肿瘤患者血清、肿瘤组织中NO、NOS、iNOS高于良性肿瘤患者(P<0.05);腹水或腹腔冲洗液中iNOS亦高于良性(P<0.05),但腹水中NO、NOS与良性无差异(P>0.05)。恶性肿瘤细胞凋亡率高于良性(P<0.05)。结论NO、NOS、iNOS与卵巢肿瘤的恶性行为及凋亡有关,检测患者血清、组织、腹水中的NO、NOS、iNOS对鉴别良、恶性肿瘤有一定参考价值,可作为观测卵巢癌疗效及预后的指标。