表达HIV-1 gag基因的重组AAV2/1和Ad5疫苗免疫原性比较

目的 在小鼠体内比较表达HIT-1 gag基因的重组AAV2/1和Ad5疫苗的免疫原性.方法 分别用rAAV2/1-gag或rAd5-gag单独免疫BALB/c小鼠一次或两次,于免疫后不同时间点用CFSE染色法和胞内细胞因子染色法检测Gag特异性细胞免疫应答,用ELISA方法检测Gag特异性抗体反应.结果 单次免疫结果显示,在所有检测点rAd5-gag所诱导的Gag特异性CTL应答都比rAAV2/1-gag强,抗体反应在免疫后4周无明显差异.两次免疫后4周的检测结果表明,rAd5-gag所诱导的Gag特异性CTL应答比rAAV2/1-gag强,但抗体反应比rAAV2/1-gag组弱.结论 rAd5-gag诱导了很好的HIV-1特异性细胞和抗体反应,而rAAV2/1-gag诱导的HIV-1特异性抗体反应很强,但细胞免疫应答较弱.     

含E型沙眼衣原体MOMP基因的重组腺病毒和DNA疫苗联合免疫效果的研究

目的探讨E型沙眼衣原体（Ct）主要外膜蛋白（MOMP）DNA疫苗和重组腺病毒联合免疫小鼠诱导的免疫效应。方法构建、纯化重组腺病毒Ad-MOMP及重组真核表达质粒pVAX1-MOMP。设计4种免疫方案,分别为DNA免疫（ DNA组）、重组腺病毒免疫（ Ad组）、DNA初次免疫-重组腺病毒加强免疫（ DNA/Ad组）、重组腺病毒初次免疫-DNA加强免疫（ Ad/DNA组）。末次免疫后2周检测小鼠血清特异IgG、IgG1、IgG2a、IgA抗体,阴道分泌物SIgA抗体及脾淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-10水平。结果DNA组诱导较弱免疫应答,未产生SIgA抗体及Th1反应。 Ad组诱导出Th1反应及SIgA抗体,且血清抗体显著高于DNA组。联合免疫均能诱导明显强于单独免疫的黏膜SIgA、血清抗体及Th1反应。 Ad/DNA组的Th1反应强于DNA/Ad组;而DNA/Ad组的血清抗体和黏膜抗体水平强于Ad/DNA组。结论Ad-MOMP能诱导黏膜免疫及Th1细胞免疫应答,DNA/Ad及Ad/DNA联合免疫产生的特异性免疫应答明显强于单独免疫。其中Ad/DNA的Th1反应优势更明显,DNA/Ad的血清抗体和黏膜抗体反应更强。接种顺序会影响联合免疫的强弱及类型,这为Ct疫苗的设计研究提供新的思路和实验依据。     

Ad5F35-LMP2重组腺病毒免疫效果的研究

目的了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒(Ad5F35-LMP2),免疫恒河猴的特异性细胞和体液免疫的效果。方法分别使用高剂量(1.5×1010TCID50/只)、中剂量(1.5×109TCID50/只)、低剂量(1.5×108TCID50/只)Ad5F35-LMP2重组腺病毒,同时设对照组(PBS4.0ml/只)。肌内注射免疫恒河猴,每个月一次,共免疫3次,第0、4、8、12周时使用Elispot方法检测猴外周血EBV-LMP2细胞毒性T细胞应答,同时应用免疫酶方法检测血清中LMP2抗体。结果3个剂量Ad5F35-LMP2腺病毒免疫恒河猴均可以诱导出有效的细胞免疫应答及一定的抗体应答,免疫应答水平的高低与病毒剂量的高低有一定的关系,较高剂量产生的细胞及体液免疫应答水平比低剂量的高。结论Ad5F35-LMP2非复制型重组腺病毒疫苗可以有效的诱导恒河猴产生EBV-LMP2特异性细胞和体液免疫反应。     

Ad-LMP2重组腺病毒疫苗在恒河猴体内免疫效果的研究

目的观察带有EBV-LMP2的非复制型Ad-LMP2重组腺病毒疫苗免疫恒河猴诱导的针对EBV-LMP2的特异性细胞和体液免疫应答。方法分别使用高剂量(4·5×1011VP/kg)、中剂量(1·5×1011VP/kg)、低剂量(0·5×1011VP/kg)三个剂量的Ad-LMP2重组腺病毒,肌内注射免疫恒河猴,每5d免疫一次,共免疫6次,第7周时使用ELISPOT方法检测猴外周血细胞毒性T细胞应答,同时应用免疫酶方法检测血清中抗LMP2抗体。结果3个剂量免疫恒河猴均可以诱导出有效的细胞免疫应答及一定的抗体应答,免疫应答水平的高低与病毒剂量的高低有一定的关系,较高剂量产生的细胞及体液免疫应答水平比低剂量的要高。抗腺病毒中和抗体和抗LMP2抗体免疫2周后就可以检测到,其中抗LMP2抗体在免疫3~4周时滴度较高,7周时则与3~4周时接近或有所下降。结论非复制型Ad-LMP2重组腺病毒疫苗可以有效的诱导恒河猴产生EBV-LMP2特异性细胞和体液免疫反应。     

CVB3腺病毒载体疫苗Ad/MDC-VP1的构建及免疫效果研究

目的:构建巨噬细胞源趋化因子(Macrophage-derived chemokine,MDC)与柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)VP1融合基因腺病毒载体疫苗Ad/MDC-VP1,并观察对小鼠的免疫效果.方法:利用AdEasy-1系统构建重组腺病毒Ad/MDC-VP1及腺病毒Ad,并检测融合蛋白MDC-VP1的表达.BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,每组18只,分别肌肉注射Ad/MDC-VP1和Ad,免疫2次,间隔2周.分别用ELISA法和微量中和试验法检测血清CVB3 VP1特异性IgG抗体和中和抗体;末次免疫后3周,CCK-8法检测脾淋巴细胞增殖活性和特异性CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击后检测小鼠血中病毒滴度并观察保护率.结果:Ad/MDC-VP1和Ad构建成功,并检测到MDC-VP1融合蛋白的表达.Ad/MDC-VP1组血清CVB3 特异性VP1 IgG、中和抗体水平、特异性CTL活性较对照组明显增强(P＜0.01);病毒攻击后实验组血中病毒滴度明显降低,生存率明显高于对照组(P＜0.01).结论:Ad/MDC-VP1能提高小鼠细胞和体液免疫水平,增加病毒攻击后的保护率.     

基因工程杂交酵母艾滋病疫苗研究

目的 对以酵母为载体所制得的艾滋病候选疫苗进行研究。方法 构建表达Gag及IL-2的质粒载体，将表达载体分别转化入酵母细胞，通过酵母杂交获得同时表达两种基因的酵母杂交体，放大培养后经灭活、分装、冻干，制得细胞干粉作为试验的疫苗。用小鼠及食蟹猴对试验疫苗进行有效性及安全性研究。结果 杂交酵母可以稳定表达Gag及IL-2；经皮下注射可以分别在小鼠及食蟹猴体内诱导一定水平的细胞免疫反应；对小鼠肿瘤模型的研究表明，疫苗可以诱导有效的免疫保护反应；疫苗的安全性良好，没有明显的毒副作用，只在注射部位引起轻微的红肿，个别动物有低热反应，但均在一周左右恢复正常。结论杂交酵母艾滋病疫苗具有诱导细胞免疫反应的能力；杂交酵母载体疫苗在相关疾病的治疗方面有良好的应用前景。     

HIV gag DNA疫苗诱导小鼠特异性细胞免疫应答的研究

目的 研究小鼠注射HIV gag DNA疫苗后的抗原特异性细胞免疫应答.方法 C57BL/6小鼠以初免/加强的策略经肌肉注射HIV gag DNA疫苗,一周后获取其脾与肺的单个细胞,体外经Gag抗原多肽刺激后,采用ELISA法检测细胞培养上清中IFN-γ的水平,ELISPOT法检测IFN-γ分泌细胞的频率,流式细胞仪分析特异性T细胞的亚群.结果 经Gag多肽刺激后,加强免疫组IFN-γ产生的总体水平和分泌细胞频率均高于对照组及初次免疫组.HIV gag DNA疫苗可同时诱导产生Gag-特异性CD4 和CD8 T细胞.结论 HIV gagDNA疫苗免疫小鼠后可诱导抗原特异性效应性T细胞应答.     

含HIV-1 gag基因的重组腺病毒5型与35型嵌合病毒免疫效果研究

目的探讨含HIV-1 gag基因的重组腺病毒5型与35型嵌合病毒(rAd5/F35)在BALB/c小鼠中的免疫效果。方法PCR,间接免疫荧光鉴定HIV-1gag基因在重组腺病毒(rAd5/F35-mod.gag)的正确插入和体外细胞水平的表达,用rAd5/F35-mod.gag以不同的方式免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中的p24特异性抗体,细胞内细胞因子染色法检测小鼠的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答。结果重组腺病毒rAd5/F35-mod.gag在体外细胞水平可以很好的表达目的基因gag;在小鼠体内重组腺病毒rAd5/F35-mod.gag可诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应,用rAd5/F35单独免疫2次,所诱发的CTL和血清IgG反应最强。但Ad5初次感染后,产生的抗Ad5抗体可以抑制rAd5/F35疫苗的特异性免疫反应。结论重组腺病毒rAd5/F35-mod.gag单独免疫可在小鼠体内诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应。只改变Ad5纤突蛋白Fiber,不能避免抗Ad5抗体的抑制作用。     

CVB3VP1核酸疫苗与重组腺病毒Ad/VP1联合应用的免疫效果

目的:观察柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus group B type 3,CVB3)VP1核酸疫苗pcDNA3/VP1与重组腺病毒Ad/VP1联合应用的免疫效果。方法:大量制备pcDNA3/VP1和Ad/VP1,肌肉注射免疫小鼠。4～6周龄雄性BALB/c小鼠随机分为4组:质粒组,注射pcDNA3/VP1,共3次;腺病毒组,注射Ad/VP1,共2次;质粒/腺病毒组,第1、2次注射pcDNA3/VP1,第3次注射Ad/VP1;PBS对照组。各次注射间隔时间为3周。质粒每次接种100μg/只,腺病毒每次接种4×107pfu/只。用微量中和试验和ELISA法分别检测每次免疫后血清中和抗体和IgG抗体滴度;CCK-8法检测淋巴细胞增殖活性和CTL杀伤活性;用致死量病毒感染后检测血中病毒滴度,并观察小鼠的生存情况。结果:各实验组小鼠的中和抗体和IgG抗体水平均随免疫次数增加而提高,末次免疫后,质粒/腺病毒组血清中和抗体和特异性IgG抗体滴度(31.70±1.41,2425.15±1.86)明显高于质粒组(23.78±1.37,918.96±1.36)和腺病毒组(18.88±1.22,800.00±1.63)(P0.05);各实验组淋巴细胞增殖活性和CTL杀伤活性高于PBS对照组(P0.05);以致死量病毒感染后,质粒/腺病毒组血清病毒滴度低于其他组(P0.05),生存率高于其他组(P0.05)。结论:核酸疫苗与重组腺病毒联合应用可以明显提高免疫效果。     

酵母表达的HIV-1中国株CN54 Gag蛋白的免疫原性研究

目的评价毕赤酵母表达的HIV-1中国株CN54 Gag蛋白在Balb／c小鼠诱导体液和细胞免疫的能力。方法利用重组Gag蛋白单独及与重组DNA或痘苗联合免疫Balb／c小鼠，检测小鼠产生的特异性结合抗体和IgG1／IgG2a，同时检测T淋巴细胞增殖反应和CTL反应。结果3个蛋白单独免疫组均能诱导小鼠产生抗体和T淋巴细胞增殖反应，其中不加佐剂的免疫组诱导免疫反应低于其它两组。但3组的CTL杀伤活性均不明显。重组蛋白和重组DNA及痘苗联合免疫均诱导产生了较好的体液和细胞免疫反应，而且重组痘苗初始免疫一蛋白加强免疫组还诱导产生了较强的CrL反应。结论酵母表达的HIV-1 Gag蛋白具有良好的免疫原性，在与重组DNA和痘苗疫苗联合使用时具有协同作用，能刺激动物产生更强的HIV-1特异性体液和细胞免疫反应。本研究为构建HIV-1蛋白疫苗和探讨各类疫苗的联合免疫方式提供了有价值的参考数据。     

CVB3腺病毒载体疫苗Ad/VP1的构建及免疫效果研究

 目的 构建柯萨奇病毒B3(coxsackievirus B3,CVB3)VP1基因重组腺病毒疫苗Ad/VP1,并观察其对小鼠的免疫效果。方法 利用AdEasy-1系统构建、包装重组腺病毒Ad/VP1,并检测目的蛋白的表达。BALB/c小鼠随机分为Ad/VP1、Ad和PBS 3组,肌肉注射免疫,共免疫2次,每次间隔16d。用ELISA法和微量中和试验法分别检测血清CVB3 VP1 IgG和中和抗体滴度;CCK-8法检测特异性CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击小鼠后,检测血中病毒滴度并观察小鼠的存活率。结果 成功构建、包装了重组腺病毒Ad/VP1,并在293细胞中检测到VP1蛋白的表达。免疫小鼠后,Ad/VP1组血清CVB3 VP1 IgG滴度、中和抗体水平明显高于PBS和Ad对照组(P<0.01),CTL杀伤活性和对小鼠的保护率也高于对照组(P<0.05),血清病毒滴度低于两对照组(P<0.05)。结论 重组腺病毒疫苗Ad/VP1能显著提高小鼠的细胞和体液免疫应答及免疫保护作用。     

CVB3腺病毒载体Ad/sVP1-C3d3的构建及免疫效果研究

目的:构建柯萨奇病毒B3(CVB3)VP1基因重组腺病毒Ad/sVP1-C3d3,并观察对小鼠的免疫效果。方法:利用AdEasy-1系统构建、包装重组腺病毒Ad/sVP1-C3d3。BALB/c小鼠随机分为Ad/sVP1-C3d3、Ad/VP1、Ad和PBS4组,肌肉注射免疫,共免疫2次,每次间隔16d。用ELISA法和微量中和试验法分别检测血清CVB3VP1IgG和中和抗体滴度;CCK-8法检测特异性CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击小鼠后,检测血中病毒滴度。结果:成功构建、包装了重组腺病毒Ad/sVP1-C3d3。免疫小鼠后,Ad/sVP1-C3d3组血清CVB3VP1IgG滴度和中和抗体水平明显高于Ad/VP1(P<0.01),CTL杀伤活性明显高于Ad和PBS对照组(P<0.01)及Ad/VP1组(P<0.05),血清病毒滴度低于Ad和PBS对照组(P<0.05)。结论:重组腺病毒Ad/sVP1-C3d3能明显提高小鼠的细胞和体液免疫应答并降低血液病毒载量。     

rAd5和rAAV2／1载体疫苗诱导载体特异性和外源基因特异性免疫反应的研究

目的 在小鼠体内比较携带相同外源基因的rAd5和rAAV2/1载体疫苗诱导的载体特异性和外源基因特异性免疫应答的差异.方法 分别用携带HIV-1 gag基因的rAd5和rAAV2/1疫苗免疫BALB/c小鼠,在免疫后不同时间点用Elispot方法和ELISA方法检测小鼠体内的rAd5或rAAV2/1载体特异性及HIV-1 gag特异性细胞免疫反应和抗体反应.结果 rAd5-gag能够诱导较强的gag特异性细胞免疫反应,显著高于针对Ad5载体的细胞免疫反应;而rAAV2/1 -gag诱导的gag特异性及AAV2/1载体特异性细胞免疫反应水平都较低.rAd5-gag诱导的P24特异性和Ad5特异性IgG抗体水平都较高,并且二者相当;与rAd5-gag相比rAAV2/1 -gag可诱导更高水平的P24 IgG抗体,而且rAAV2/1 -gag诱导的P24 igG高于AAV2/1载体特异性IgG水平.结论 rAd5载体可诱导强的外源基因特异性细胞免疫和抗体反应,针对载体的细胞免疫反应较弱而抗体反应较强;rAAV2/1载体可诱导强的外源基因特异性抗体反应,明显高于针对载体的抗体反应,外源基因特异性和载体特异性细胞免疫反应水平都很低.     

rAd5和rAAV2/1载体疫苗诱导载体特异性和外源基因特异性免疫反应的研究

目的 在小鼠体内比较携带相同外源基因的rAd5和rAAV2/1载体疫苗诱导的载体特异性和外源基因特异性免疫应答的差异.方法 分别用携带HIV-1 gag基因的rAd5和rAAV2/1疫苗免疫BALB/c小鼠,在免疫后不同时间点用Elispot方法和ELISA方法检测小鼠体内的rAd5或rAAV2/1载体特异性及HIV-1 gag特异性细胞免疫反应和抗体反应.结果 rAd5-gag能够诱导较强的gag特异性细胞免疫反应,显著高于针对Ad5载体的细胞免疫反应;而rAAV2/1 -gag诱导的gag特异性及AAV2/1载体特异性细胞免疫反应水平都较低.rAd5-gag诱导的P24特异性和Ad5特异性IgG抗体水平都较高,并且二者相当;与rAd5-gag相比rAAV2/1 -gag可诱导更高水平的P24 IgG抗体,而且rAAV2/1 -gag诱导的P24 igG高于AAV2/1载体特异性IgG水平.结论 rAd5载体可诱导强的外源基因特异性细胞免疫和抗体反应,针对载体的细胞免疫反应较弱而抗体反应较强;rAAV2/1载体可诱导强的外源基因特异性抗体反应,明显高于针对载体的抗体反应,外源基因特异性和载体特异性细胞免疫反应水平都很低.     

Immunogenicity of the recombinant adenovirus type 5 vector with type 35 fiber containing HIV-1 gag gene

The immune efficiency of a recombinant adenovirus type 5 with type 35 fiber containing HIV-1 gag gene (rAd5/F35-mod.gag) was investigated in BALB/c mice, in which the rAd5/F35-mod.gag was firstly identified with PCR, then transfected to 293 cells and the in vitro expression level of Gag protein was determined by Western blotting and indirect immuno-fluorescent assay. Mice were immunized with intramuscular injections of rAd5/F35-mod.gag, rAd5-mod.gag or DNA and were boosted after 3 weeks. To test the effect of pre-existing anti-viral immunity on immunization, mice were also injected with Ad5-GFP vector and then immunized 4 and 7 weeks later with Ad5/F35-mod. gag vector. The P24-specific IgG antibody in sera of immunized mice was determined by ELISA and the specific cytotoxic T lymphocyte (CTL) response was assayed by intracellular cytokine staining. It was demonstrated that the rAd5/F35-mod. gag vector could express efficiently the HIV Gag protein in 293 cells in vitro and induce strong HIV-specific immune responses in vivo. The strongest CTL and serum IgG response occurred when mice were immunized twice with injection of rAd5/F35 alone, but the anti-Ad5 antibody after primary infection with adenovirus could inhibit the specific immune responses induced by rAd5/F35 vector. It is concluded that single immunization with recombinant adenovirus rAd5/F35-mod. gag can induce specific CTL and serum IgG antibody responses in mice, but the immunogenicity of rAd5/F35 is comparably weaker than that of rAd5.     

含密码子优化的SIV gag基因的DNA疫苗与rAd5疫苗构建及免疫原性评价

目的 构建含有SIVgag基因的DNA疫苗和重组腺病毒疫苗,为后期在SIV感染的猴模型中进行多载体疫苗联合免疫策略的治疗效果评价奠定基础.方法 将SIV gag基因按照哺乳动物偏嗜密码子进行优化并构建至pVR载体,作为DNA疫苗.以Western Blot方法比较优化前后gag基因表达水平.将优化后的gag基因插入重组腺病毒载体,构建rAd5-SIVgag疫苗.在BALB/c小鼠中分别比较DNA疫苗及rAd5-SIV.gag疫苗单独及联合免疫的效果.结果 密码子优化的SIVgag基因的表达水平远高于野生型SIVgag基因.重组腺病毒疫苗免疫一次或两次诱导的细胞免疫反水平分别高于DNA疫苗免疫一次或两次.两种疫苗联合免疫的反应水平与腺病毒疫苗免疫两次的水平相当,高于DNA疫苗单独免疫及腺病毒疫苗单独免疫一次的结果.结论 成功优化了SIV gag基因,使其不依赖Rev高水平表达;成功构建了表达优化后SIV gag基因的DNA疫苗和rAd5疫苗,可以在小鼠体内诱导较强的gag基因特异性CTL应答.     

柯萨奇病毒B3 VP1蛋白、rAd/VP1和pcDNA3/VP1的免疫效果比较

目的 观察柯萨奇病毒B3(Coxsackievirus B3,CVB3)衣壳蛋白VP1、表达VP1蛋白的重组腺病毒rAd/VP1和重组质粒pcDNA3/VP1的免疫效果.方法 用原核细胞表达VP1蛋白并纯化、扩增重组腺病毒rAd/VP1,扩增并提取真核表达质粒pcDNA3/VP1.BALB/c小鼠随机分为4组,每组18只,分别在股四头肌注射VP1蛋白、rAd/VP1、pcDNA3/VP1和PBS.VP1蛋白组和pcDNA3/VP1组免疫3次,间隔3周;rAd/VP1组免疫2次,间隔2周.VP1蛋白、pcDNA3/VP1和rAd/VP1每次每只注射剂量分别为50μg、100μg和1.2×107PFU.用ELISA法和微量中和试验法检测各次免疫后血清CVB3特异性IgG抗体和中和抗体滴度;末次免疫后3周,CCK-8法检测脾脏淋巴细胞的CTL杀伤活性;用致死量CVB3攻击小鼠后,检测血中病毒滴度并观察动物的存活情况.结果 VP1蛋白组血清特异性IgG抗体和中和抗体滴度明显高于其他实验组(P＜0.05),而脾脏淋巴细胞CTL杀伤活性低于rAd/VP1组(P＜0.05);致死量病毒攻击后,VP1蛋白组血中病毒滴度低于pcDNA3/VP1和rAd/VP1组(P＜0.05),生存率明显高于这两组(P＜0.05).结论 VP1蛋白疫苗能诱导较高水平的体液免疫应答,对动物有明显的免疫保护作用,免疫效果优于质粒pcDNA3/VP1和重组腺病毒rAd/VP1.

Abstract：

Objective To compare the immune effects of Coxsackievirus B3 (CVB3) capsid protein VP1 expressed bacterially, recombinant adenovirus rAd/VP1 and recombinant plasmid pcDNA3/VP1which express VP1 protein in mice. Methods After expressed in prokaryotic cells, VP1 protein was purified. Recombinant adenovirus rAd/VP1 and recombinant plasmid pcDNA3/VP1 were amplified and extracted. Six to 8-week-old, male BALB/c mice were divided into four groups randomly. Each group contained 18 mice. The mice of pcDNA3/VP1 group or VP1 protein group were immunized intramuscularly with three injections at three weeks apart, of recombinant plasmid pcDNA3/VP1 at a dose of 100 μg/mouse or recombinant protein VP1 at a dose of 50 μg/mouse. The mice of rAd/VP1 group were immunized intramuscularly twice at two weeks interval with rAd/VP1 at a dose of 1.2 × 107 PFU. The control group was mock-immunized with 100 μl of PBS intramuscularly. Mice were bled from the retroorbital sinus plexus every two weeks after each immunization. ELISA and micro-neutralization test were used to detect levels of CVB3-specific IgG antibody and neutralizing antibody titers in the sera of immunized mice. Three weeks after the last immunization, the cytotoxic T lymphocyte(CTL) killing activity of spleen lymphocytes was detected with CCK-8 assay. Subsequently, virus titers in the sera of immunized mice were determined by the 50% cell culture infective dose( CCID50 ) assay on HeLa cell monolayers and percentage of animals surviving were observed after lethal CVB3 attack over a period of 21 days. Results The titers of specific IgG antibody and neutralizing antibody in sera of VP1 protein immunized mice were higher than other groups( P ＜0.05 ). While CTL killing activity of spleen lymphocytes of VP1 protein immunized mice was lower than mice in rAd/VP1 group( P ＜0. 05). Virus titers in sera of VP1 protein immunized mice were lower than the mice in pcDNA3/VP1 or rAd/VP1 groups ( P ＜ 0.05 ), while survival rate was significantly higher than these two groups ( P ＜ 0.05 ).Conclusion VP1 protein induced higher level of humoral immune response and acquired obvious immune protection effects in mice. The immunizing potency of VP1 protein vaccine surpassed plasmid pcDNA3/VP1or recombinant adenovirus rAd/VP1. It appeared to be a promising candidate among the three different vaccines.     

Efficient intranasal immunization of newborn mice with recombinant adenovirus expressing rotavirus protein VP4 against oral rotavirus infection

Efficacy of passive protection of newborn mice against rotavirus infection by the rotavirus VP4 protein expressed by an adenoviral vector in mice was studied. The VP4 gene was inserted into the E1 region of adenoviral vector pJM17. Recombinant adenovirus Ad5N/VP4 was grown in 293 cells. Intramuscular (i.m.), oral or intranasal (i.n.) immunization of newborn mice with Ad5/VP4 resulted in appearance of VP4-specific antibodies. Specific IgG antibodies were detected in the serum and intestine specimens of i.m. vaccinated mice. Oral immunization elicited serum IgG antibodies and intestinal IgG and IgA antibodies. Compared with i.m. and oral applications, i.n. immunization led to higher levels of serum IgG and intestinal IgG and IgA antibodies. Pups were challenged twice with simian rotavirus SA11 strain orally at the days 7 and 8 after birth. Pups born to i.n. immunized dams achieved 100% protection from rotavirus-induced diarrhea after both challenges. The protection of pups born to orally immunized dams was 80%, while only 30% of pups born to i.m. immunized dams were protected after both challenges. I.n. immunization was most efficient in inducing rotavirus VP4-specific serum, intestinal and milk IgG or IgA in mice that protected newborn mice completely.