乙型肝炎病毒感染者外周血CD4+T细胞CD25、CD127不同亚群表达的检测及临床意义

目的 研究乙型肝炎病毒(HBV)感染者外周血CD4+T细胞表面CD25、CD127不同亚群的表达情况及临床意义。方法 用荧光抗体CD127-FITC、CD4-PECY5、CD25-PE标记T细胞。用流式细胞仪分别测定53例慢性乙型肝炎患者和53例HBV携带者CD4+T细胞表面CD25、CD127不同亚群的表达情况。对20例HBV-DNA阳性乙型肝炎病毒感染者干扰素治疗进行随访。结果与健康对照组[7.26％(6.15％,8.50％)]比较,慢性乙型肝炎患者[11.23％(9.10％,14.86％)]、HBV携带者[13.34％( 10.73％,18.90％)]CD25-CD 127-均显著升高,差异均有统计学意义(Q=4.559,P＜0.05;Q=6.230,尸＜0.05)。慢性乙型肝炎患者CD25hiCD127low/-[8.78％ (7.62％,10.44％)]显著高于健康对照[6.76％(5.73％,8.23％)]和HBV携带者[6.99％(5.77％,9.34％)],差异均有统计学意义(Q=3.497,P＜0.05;Q=3.103,P＜0.05)。HBV-DNA阳性组CD25-CD127-显著低于阴性组,两者差异有统计学意义[(12.92±5.20)％比(15.78±6.91)％,t=2.290,P=0.024],而CD25+/-CD127+显著高于阴性组,两者差异有统计学意义[(79.27±5.20)％比(76.02±7.04)％,t=2.194,P=0.030]。与治疗前比较,干扰素治疗12周CD25hiCD127low/-显著升高[(9.29±2.51)％比(11.08±2.38)％,t=2.820,P=0.011],而CD4+CD25-CD127-显著降低,两者差异有统计学意义[(13.86±5.72)％比( 10.86±3.60)％,t=2.469,P=0.024]。结论 HBV感染者外周血CD4+T细胞中CD25-CD127-亚群的表达与病毒的感染和清除有关;CD25hiCD 127low/-亚群的表达升高与发病有关。外源性干扰素可升高CD25hiCD127low/-的表达,降低CD25-CD127-的表达,从而抑制免疫反应。     

流式细胞术不同设门方法对CD4+CD25+调节性T细胞的检测方法比较

目的 比较CD4+CD25hi、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127-/low 3种设门方法对CD4+CD25+调节性T细胞(Treg细胞)的界定效果.方法 完全随机法选择33例本院健康体检者,分别采用CD4+CD25hi、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127-/low设门的方法进行检测.结果 (1)CD4+CD25hi、CD4+CD25+FoxP3+设门方法对CD4+CD25+Treg细胞的检测结果差异无统计学意义[(6.85±2.72)%,(6.69±2.30)%,t=0.270,P=0.788],相关性检验显示,两者呈正相关(r=0.866,P＜0.001);(2)CD4+CD25+CD127-/low设门方法的细胞检测结果[(8.07±2.18)%]高于CD4+CD25hi和CD4+CD25+FoxP3+设门方法(t=2.055,P=0.043;t=2.325,P=0.022),相关性检验显示,均呈正相关(r=0.615,P＜0.001;r=0.683,P＜0.001);(3)CD4+CD25hi细胞群中FoxP3+细胞占(57.11±12.42)%,CD4+CD25hi细胞群中FoxP3+细胞占所有FoxP3+细胞的比例为(54.4±9.0)%.结论 CD4+CD25hi设门方法可用于人外周血CD4+CD25+Treg细胞的检测,CD4+CD25+CD127-/low设门方法可应用于CD4+CD25+Treg细胞的纯化.     

流式技术测定乙型肝炎患者外周血特异性CD8＋T细胞及其临床意义

目的 探讨流式细胞技术检测乙型肝炎患者HBV特异性CD8＋T细胞的水平并分析其临床意义.方法 采用HLA-A2分子胞外段与HBV核心表位肽core18-27结合的HLA-肽五聚体（Pentamers）对25例急性乙肝患者、35例慢性乙肝患者和10例正常健康人的外周血进行染色,设计流式细胞技术检测其针对该肽段的特异性CD8＋T细胞数量,以占总计数CD8＋细胞数的百分比表示.结果 12例HLA-A2＋的急性乙肝患者急性期可检测到高水平的特异性CD8＋T细胞,中位数为2.93%（1.12%～4.63%）,16例HLA-A2＋的慢性乙肝患者特异性CD8＋T细胞水平较低,中位数为0.75%（＜0.01%～1.76%）,两组之间差异有统计学意义（P＜0.01）.10例HLA-A2＋正常对照组、13例HLA-A2-急性乙肝对照组和19例HLA-A2慢性乙肝对照组的特异性CD8＋T细胞均不超过0.02%.结论 HLA-肽五聚体流式细胞技术能在体外直接检测HBV特异性的CD8＋T细胞数量,其水平可能影响着HBV感染者体内病毒的清除,且与乙肝的不同临床转归有关.     

异体角膜刺激引起的人外周血T细胞及其亚群CD25分子表达

目的：观察异体角膜体外对人外周血T细胞及其亚群CD25分子表达的影响。方法： 异体角膜与外周血淋巴细胞体外共同培养后，进行单克隆抗体标记和流式细胞分析。结果： 对照组T细胞CD25表达为25.2％；受角膜或沸波醇酯（PDB）激活后T细胞CD25表达分别为56.8％和80.9％；受角膜和沸波醇酯共同激活后T细胞CD25表达为70.2％；受异体角膜激活后，CD4和CD8 T淋巴细胞CD25表达分别为67.3％和52.3％。结论： 异体角膜组织体外能够刺激人外周T细胞CD25表达和T细胞活化，CD4 T细胞比CD8 T细胞活化更明显。     

慢性HBV感染者调节性T细胞水平及Foxp3与CD127表达关系的研究

目的 探讨慢性HBV感染者外周血中CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞（RegulatoryT,Treg）的水平,并研究其两种细胞标志--CD127分子的低表达与Foxp3转录因子表达之间的关系.方法 采集34例免疫耐受期、26例免疫清除期和31例非活动或低（非）复制期慢性HBV感染者的外周全血,用流式细胞术分析CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞和CD4^＋CD25^＋CD127^（low）T细胞的频率.结果 在慢性HBV感染者外周血中,免疫耐受组CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞和CD4^＋CD25^＋CD127^（low）T细胞的频率均比非活动或低（非）复制组高（Z=-2.693,P=0.007和t=3.251,P=0.002）;且病毒阳性组（免疫耐受组＋免疫清除组）比非活动或低（非）复制组高（t=2.266,P=0.026和t=3.208,P=0.002）;ALT异常组（免疫清除组）与ALT正常组（免疫耐受组＋非活动或低（非）复制组）之间的比较差异无统计学意义（P〉0.05）.91例病例外周血中CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋T细胞和CD4^＋CD25^＋CD127^（low）T细胞之间的表达有一致性,但两者频率的差异有统计学意义（Z=-4.718,P〈0.001）.结论 调节性T细胞在慢性HBV感染者病毒高复制组中明显升高.CD4^＋CD25^＋T细胞中CD127分子的低表达与Foxp3转录因子的表达有一致性,但前者代表Treg的频率明显高于后者.     

慢性乙型肝炎患者外周血CD45RA+、CD45RO+T淋巴细胞亚群的特点及临床意义

目的：探讨慢性乙型肝炎患者外周血CD4^＋CD45RA^＋、CD4^＋CD45RO^＋、CD8^＋CD45RA^＋和CD8^＋CD45RO^＋T淋巴细胞亚群的特点及其与肝病病情的关系。方法：采集46例轻中度慢性乙型肝炎患者、58例重度慢性乙型肝炎患者和30例健康人的外周抗凝血，应用流式细胞技术三色荧光分析法对其外周血中CD4^＋CD45RA^＋、CD4^＋CD45RO^＋、CD8^＋CD45RA^＋和CD8^＋CD45RO＋T淋巴细胞亚群进行检测。结果：轻中、重度慢性乙型肝炎患者与正常人相比，其外周血中CD4^＋、CD8^＋T细胞均无明显改变；CD8^＋CD45RA^＋T细胞均明显降低，CD8^＋CD45RO^＋T细胞均明显增高，而CD4^＋CD45RA^＋、CD4^＋CD45RO^＋T细胞均无明显改变；重度慢性乙型肝炎患者与轻中度慢性乙型肝炎患者相比，CD8^＋CD45RA^＋T细胞明显降低（P〈0.05），CD8^＋CD45RO^＋T细胞明显升高（P〈0.05）。结论：乙型肝炎慢性化过程中，CD8^＋CD45RO^＋T细胞起重要作用且与慢性乙型肝炎患者病情的进展呈正相关；检测CD4^＋CD45RA^＋、CD4^＋CD45RO^＋、CD8^＋CD45RA^＋和CD8^＋CD45RO^＋T淋巴细胞亚群比检测CD4^＋和CD8^＋T细胞亚群更能正确、充分、全面地了解慢性乙型肝炎的发病机制和预后，从而有效地指导临床治疗。     

HIV/AIDS患者疾病进程与CD4+CD25hi调节性T细胞之间相关性研究

目的 通过分析不同阶段HIV感染者外周血CD4+CD25hi调节性T细胞(CD4+CD25hiregulatory T cells,Treg cells)与外周血免疫状态和病毒载量的相关性,探讨Treg细胞对HIV/AIDS发病进程的影响.方法 采集116例HIV感染者和21例正常人对照外周血,用4色流式细胞术进行CD4+和CD8+T细胞绝对数计数;用3色流式细胞术进行Treg细胞测定;用荧光定量PCR法进行HIVRNA载晕测定.实验数据用回归统计学方法和T检验方法进行分析.结果 HIV感染者外周血Treg细胞频率在HIV感染初期显著下降,之后随着疾病的进程逐渐升高.在CD4+T细胞大于300/μl的患者低于正常对照组,在CD4+T细胞小于100/μl的患者高于正常对照组,差异具有统计学意义.Treg细胞频率与CD4+T淋巴细胞绝对数和CD4+/CD8+之间均呈负相关.其相关系数r和P值各为r=-0.564,P＜0.001和r=-0.377,P＜0.001;Treg细胞频率与血浆HIV病毒载量呈正相关,其相关系数r=0.514.P＜0.001.结论 CD4+CD25hi Treg细胞可能是参与艾滋病免疫发病机理的重要细胞,在HIV感染发病进程的不同阶段具有不同的意义,其确切机制有待进行进一步研究.     

肾移植患者外周血中的CD4+ CD25+ CD127low/-调节性T细胞

背景：越来越多的实验在分析免疫耐受标志,以期能够更好地辅助患者进行移植后免疫抑制治疗。 目的：分析肾移植后患者外周血中CD4⁺ CD25⁺ CD127^low/-调节性T细胞在肾移植免疫耐受中的作用。 方法：采集62例肾移植后患者(急性排斥反应组22例,移植稳定组40例)及20例健康对照者的外周抗凝血,经免疫染色,应用流式细胞仪分析CD4⁺ CD25⁺ CD127^low/-调节性T细胞所占CD4⁺ T细胞百分含量,同时采用ELISA方法检测患者血清中白细胞介素2和白细胞介素10的质量浓度。 结果与结论：移植稳定组中CD4⁺ CD25⁺ CD127^low/-调节性T细胞所占CD4⁺ T细胞百分含量显著高于健康对照组和急性反应排斥组(P < 0.01);CD4⁺ CD25⁺ CD127^low/-调节性T细胞百分含量与白细胞介素2呈显著负相关(P < 0.05),与白细胞介素10呈显著正相关(P < 0.01)。提示CD4⁺ CD25⁺ CD127^low/-调节性T细胞在肾移植后免疫耐受的机制中发挥了一定作用。     

急性髓系白血病患者外周血CD4+CD25highFOXP3+调节性T细胞变化及临床意义

目的:观察急性髓系白血病(Acute myelogenous leukemia,AML)患者外周血中调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg细胞)的变化,探讨其在AML发病中的作用及临床意义.方法:应用流式细胞术检测31例初诊AML患者(初诊组)、23例经化疗取得完全缓解患者(CR组)及20例健康人群(对照组)外周血CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞、CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+细胞的比例,同时还分析了外周血CD4+/CD8+比值、NK细胞及血清乳酸脱清酶(LDH)水平.结果:与对照组相比较,AML患者初诊组及CR组外周血CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞和CD4+FOXP3+ T细胞均升高(P＜0.01).与初诊组相比较,CR组CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞无显著降低(P＞0.05),CD4+FOXP3+T细胞明显下降(P＜0.01).CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞的升降与CD4+FOXP3+T细胞呈正相关(r=0.86;P＜0.01).CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞及CD4+FOXP3+ T细胞比例与CD4+/CD8+比值呈负相关(r分别为-0.54、-0.52;P＜0.01)、与NK细胞比例呈负相关(r分别为-0.41、-0.43;P＜0.05),而与LDH水平呈正相关(r分别为0.51、0.57;P＜0.05).结论:CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞增多可能是AML患者免疫功能受抑的重要原因之一,其变化对于AML的预后判断有一定的意义.CD4+FOXP3+ T细胞的作用类似于CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞,其在AML疗效评价方面可能更有价值.     

胃癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的检测及临床意义

目的研究胃癌患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞频数的变化,并探讨该群细胞频数的变化与肿瘤的病理类型及临床分期的相关性.方法应用流式细胞仪分析胃癌患者和健康对照组外周血中单个核细胞(pBMCs)的CD4+CD25+调节性T细胞频数,并探讨该种细胞频数的变化与胃癌的相关性.结果32例胃癌患者CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞19.40%±8.76%,高于25例健康对照组的10.68%±3.57%(P＜0.01).分化较好的胃癌患者CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞16.79%±4.21%,低分化胃癌患者CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞20.02%±10.42%,两者之间差异显著(P＞0.05).Ⅲ、Ⅳ期的胃癌患者CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞22.43%±8.36%,明显高于Ⅰ、Ⅱ期的胃癌患者(CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的15.27%±6.85%,P＜0.05).结论CD4+CD25+T细胞在胃癌患者中比例升高,可能是产生肿瘤免疫抑制的重要机制,CD4+CD25+T细胞的高表达可作为胃癌患者肿瘤进展的重要标志.     

自身免疫性肝炎CD4+CD25+high调节性T细胞的研究

目的探讨CD4^＋CD25^＋high调节性T细胞（Tr）在自身免疫性肝炎（AIH）发病中的作用。方法用流式细胞仪技术比较分析AIH患者16例、慢性乙型肝炎（CHB）22例及键康正常人20例外周血中的CD4^＋CD25^＋high细胞，同时用免疫组织化学法检测AIH和CHB患者肝组织Foxp3的表达情况。结果AIH组外周血中CD4^＋CD25^＋high／CD4^＋百分比显著低于正常组（P〈0、05）和CHB组（P〈O．01），并且CHB组显著高于正常组（P〈0．05）；同时AIH组外周血中CD4^＋ T细胞也显著高于CHB组（P〈0．01））；肝组织Foxp3^＋细胞主要分布于肝小叶内窦周隙、汇管区，AIH组肝组织Foxp3^＋表达显著低于CHB组（P〈0．01）。结论CD4^＋CD25^＋high Tr细胞下降可能是自身免疫性肝炎发病的原因之一。     

慢性HBV感染患者肝组织内CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的表达

目的 观察慢性HBV感染患者免疫耐受期与免疫清除期肝组织中CD4+ CD25+调节性T细胞的表达及分布情况.方法 应用免疫组织化学法检测19例免疫耐受期及12例免疫清除期慢性乙型肝炎患者肝组织中FoxP3的表达,6例正常肝组织为对照.结果 FoxP3阳性信号位于淋巴细胞胞核内,阳性细胞主要聚集在汇管区,肝窦内亦可见散在单个淋巴细胞呈阳性.在免疫耐受期及免疫清除期患者肝组织中FoxP3较正常肝组织明显增加(P<0.01),免疫清除期患者肝组织内Fox P3明显高于免疫耐受期患者(P<0.01).免疫清除期患者肝组织中FoxP3阳性标记指数与ALT、HBeAg及HBV-DNA水平无明显相关性.免疫耐受期与免疫清除期两组相比,在年龄、ALT、TBIL、PTA、HBeAg及HBV-DNA水平方面差异均有统计学意义.结论 肝组织中CD4+ CD25+调节性T细胞在慢性HBV感染慢性化和抑制免疫,控制肝脏炎症反应方面可能起了重要作用.     

慢性乙型肝炎患者外周血树突细胞CD40、CD80表达和免疫活性的体外研究

目的 :探讨慢性乙型肝炎患者DC表面协同刺激分子CD4 0和CD80表达与其抗原呈递功能的关系 ,为进一步研究慢性乙型肝炎的发病机制及治疗提供新的思路。方法 :分离培养慢性乙型肝炎患者和健康人外周血DC ,流式细胞仪测定DC表面CD4 0和CD80的表达 ,混合淋巴细胞反应测定两组DC的功能。结果 :慢性乙型肝炎患者DC表面CD4 0和CD80的表达较健康人低 ,刺激同种异种T细胞增殖反应也较健康人低。结论 :乙肝病毒感染可通过抑制患者DC表面CD4 0、CD80等协同刺激分子的表达 ,从而使其抗原呈递功能降低     

恶性肿瘤患者CD4+CD25+/CD4+CD25high调节性T细胞的研究

目的：探讨恶性肿瘤患者外周血CD4^＋CD25^＋/CD4^＋CD25^high调节性T细胞（Regulatory T cell，Treg）水平的特点及其临床意义。方法：采用流式细胞术检测Treg水平，并进行分层分析。结果：62例恶性肿瘤患者外周血中CD4^＋CD25^＋/CD4^＋CD25^high Treg占T细胞的百分比分别为19.61%±8.17%和4.20%±1.90%，高于正常对照组（分别为P〈0.05和P〈0.001），它们与NK细胞呈负相关（r分别为-0.2361和-0.306）。随疾病进展，CD4^＋ CD25^＋Treg水平升高，肿瘤进展期（IV期）与前3期比较有极显著差异（P〈0.001）。CD4^＋CD25^high Treg占CD4＋T细胞的百分比率逐渐升高，中期（Ⅲ期）患者与早期患者、正常对照组比较有极显著差异（P〈0.001）；晚期患者与中期患者比较有极显著差异（P〈0.001）。结论：恶性肿瘤患者外周血CD4^＋CD25^＋/CD4^＋CD25^high Treg水平的升高，与恶性肿瘤免疫功能低下及肿瘤的发生发展密切相关。     

妊娠期高血压患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化及意义

目的:研究CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在妊娠期高血压疾病患者(HDCP)外周血中比例改变,并探讨其在妊娠期高血压疾病进程中的意义。方法:选取2007年11月至2008年6月在镇江市妇幼保健院、镇江市润州区人民医院门诊及住院妊娠期高血压疾病患者56例,其中妊娠期高血压20例,轻度子痫前期16例,重度子痫前期20例。选择同期正常妊娠妇女20例,正常育龄妇女16例。采用细胞内染色的流式细胞术及定量PCR的方法,分别在蛋白质和mRNA水平检测调节性T细胞Foxp3的表达。结果:(1)轻度子痫前期和重度子痫前期妇女外周血中CD4+CD25+T细胞比例分别为6.78%±1.18%、4.79%±1.17%,显著低于正常妊娠妇女11.95%±3.73%(P0.01)和正常育龄妇女8.99%±2.40%(P0.05);重度子痫前期CD4+CD25+T细胞比例明显低于妊娠期高血压的10.17%±1.46%(P0.05);正常妊娠妇女外周血CD4+CD25+细胞比例显著高于正常育龄妇女(P0.05)。(2)妊娠期高血压、轻度子痫前期和重度子痫前期患者CD4+CD25+Foxp3+细胞分别为1.80%±0.45%、1.36%±0.21%和0.72%±0.25%,显著低于正常妊娠妇女的4.23%±1.28%(P0.01)和正常育龄妇女的2.75%±1.09%(P0.05),而轻度子痫前期和重度子痫前期患者CD4+CD25+Foxp3调节性T细胞明显低于妊娠期高血压(P0.05);正常妊娠妇女外周血CD4+CD25+Foxp3+细胞显著高于正常育龄妇女(P0.05)。(3)Foxp3mRNA表达水平与蛋白质水平相一致。结论:妊娠期高血压疾病发病时CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞明显减少,这些调节性T细胞改变可能参与了妊娠高血压疾病的病理进程。     

慢性乙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞的变化和意义

目的 观察慢性乙型肝炎感染者外周血CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)的频率,特征性表型及与临床指标的相关性.方法 采集44例慢性乙型肝炎,29例健康人外周血,多色流式分析Treg的频率,CD4 CD25 Foxp3 调节性T细胞的频率.所有病例均经酶联免疫吸附实验(ELISA)检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb,实时荧光定量RT-PCR检测血清HBV DNA载量及肝功能的检测.结果 慢性乙型肝炎组Treg的频率(5.02%±2.07%)显著高于正常对照组(3.35%±1.51%,P＜0.05);Foxp3在Treg上特异性表达,慢性乙型肝炎组CD4 CD25 Foxp3 调节性T细胞的频率(2.05%±1.03%)显著高于正常对照组(1.30%±0.68%,P＜0.05);慢性乙型肝炎组Treg的频率与病毒载量呈正相关.结论 Treg在慢性乙型肝炎感染者中明显增高,并与病毒载量相关,提示Treg在慢性乙型肝炎中担负着重要的免疫调节作用,可能是造成乙肝病毒感染慢性化的重要因素.