小鼠卵胞浆内单精子显微注射改良技术在辅助生殖技术应用中的价值

目的研究鼠卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)改良技术在人类辅助生殖技术应用中的价值。方法将小鼠分为两组:采用固定人卵子的固定针组(C-ICSI组)和改良的喇叭型固定针组(N-ICSI组),观察两组ICSI操作后卵子存活数、卵裂情况。结果 N-ICSI组卵子存活率为77.4%,明显高于C-ICSI组的7.8%,差异有高度统计学意义(χ2=483.183,P<0.01);两组正常受精率及异常受精率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。N-ICSI组卵裂数为97.3%,明显高于C-ICSI组的80.0%,差异有高度统计学意义(χ2=18.399,P<0.01),桑葚胚、囊胚和孵化的胚胎比例差异无统计学意义(P>0.05)。结论改良的小鼠ICSI技术,可以明显提高操作时卵子的存活率,这将为人类实验室ICSI技术的质量控制和研究提供保障,同时,该项研究成果可以分析人精子激活卵母细胞的能力和人精子的核型,因此有重要的研究价值。     

小鼠精子激活力减弱模型制备技术的初步研究

[目的]:人类辅助生殖技术中,低受精率的发生机理及辅助激活提高受精率的安全性尚不清楚,缺乏激活力减弱的精子模型是其中一个主要研究障碍.本研究拟探索减弱小鼠精子激活力的新技术.[方法]首先,分别对精子进行化学破膜、机械脱尾及其联合操作于37℃孵育12h,比较各操作对显微授精后的受精率的影响;然后进一步结合时间因素,观察处理时间与精子激活力减弱程度的联系.同时,对操作后的胚胎早期发育的影响也进行了相应观察.[结果]①化学破膜法与机械脱尾法对精子破膜并温育后,均能有效降低精子受精率;②相对于正常的精子,对小鼠精子进行吹打机械脱尾,37℃下温育2、4、8、12h后,受精率和卵裂率均出现程度逐步增加的显著降低(P＜0.01);③与对照相比,以吹打机械脱尾并37℃下温育后的精子进行显微授精后,其受精卵的囊胚率和孵出率也显著降低(P＜ 0.001).[结论]将小鼠精子机械脱尾并在37℃下温育,精子激活力随温育时间增加而显著降低,同时其胚胎发育能力下降.本研究初步探索了程度可控的降低精子受精激活力的新技术,其安全性及导致精子激活力下降的机制尚需进一步研究.     

卵胞浆内单精子显微注射治疗男性不育

目的：总结卵脑浆内单精子显微注射(ICSI）治疗男性不育的临床效果和经验。方法：43例接受ICSI治疗的患者，采用常规超排卵方案，注射绒毛膜促性腺激素35—37小时内，在B超指引下经阴道取卵，选MⅡ卵做显微注射。结果：387个卵—冠—丘复合物中，获336个(86．8％)成熟MⅡ卵，其中285个(84．8％)卵成活，正常受精率和卵裂率分别为66．7％(224/336)和81．2％(199／245)；获12例临床妊娠，每胚胎移植周期妊娠率为29．3％，并诞生了5例健康新生儿。结论：ICSI是治疗男性不育的有效方法，技术水平可改善ICSI治疗结局；精子参数和来源不影响ICSI结局。     

对前次体外受精失败患者行部分卵胞浆内单精子显微注射的临床结局分析

目的 探讨体外受精(IVF)失败患者后续性治疗时行部分卵胞浆内单精子显微注射(half-ICSI)以及 ICSI 治疗的结局差异.方法 回顾性分析在我中心进行辅助生殖技术,选取前次 IVF受精失败(包括完全受精失败和受精低下即受精率为 0 和低于 25%),在随后周期中行 half- ICSI 治疗的 8 个周期作为研究组(后续性 half-ICSI组),同时因前次 IVF 受精失败在随后治疗周期采取全部卵行 ICSI 方法受精的16个周期(后续性 ICSI 组)的治疗结局作为对照组.结果 后续性 half-ICSI 组总的受精率显著低于后续性 ICSI 组(51.79% vs 67.81%,P<0.01),后续性half-ICSI 组卵裂率、优胚率、植入率、妊娠率、流产率与后续性 ICSI 组相比均差异无统计学意义.妊娠率两组分别为 50%、25.0%,流产率分别为0、6.2%.后续 half-ICSI 组中 IVF 受精率显著低于 ICSI 的受精率(29.82% vs 74.55%)(P<0.001).结论 IVF 受精失败将影响后续性 IVF 治疗的受精率,但是 IVF受精失败并不是 ICSI 治疗的绝对指征,考虑到安全性,half-ICSI 治疗优于ICSI 治疗.     

授精后5h补救性卵胞浆内单精子显微注射的临床应用价值

目的 探讨授精后5h对可能受精失败的卵子行补救性卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)的可行性。方法 授精后3、4、5h分别观察卵子是否排出第二极体。若已经排出第二极体,则认为卵子已经被激活,是受精的征象。如果患者在授精后5h观察少于65%的卵子排出第二极体,则剩余的只有第一极体的卵子接受补救性ICSI。1050例接受体外受精-胚胎移植(IVF ET)的患者,按照有无补救性ICSI 将患者分为2组：Ⅰ组：部分接受补救性ICSI,本组又按照有无补救性ICSI将卵子分为两部分：补救性ICSI部分及IVF部分;Ⅱ组：未接受补救性ICSI。201例接受ICSI治疗的患者作为对照组。结果 ①Ⅰ组患者卵子在授精后3、4、5h第二极体排出率均低于Ⅱ组(P<0.05),Ⅰ组患者原发不孕的比例、不明原因性不孕的比例高于Ⅱ组(P<0.05);②Ⅰ组、Ⅱ组、对照组,受精率、多精受精率、临床妊娠率、种植率均无显著性差异(P>0.05),但Ⅰ组补救性ICSI部分卵子优胚率低于Ⅱ组和对照组(P<0.05)。结论 IVF中精卵共培养3h是可行的;授精后5h第二极体的排出可作为卵子激活的征象;授精后5h行补救性ICSI可获得可观的临床结局,且不会增加多精受精率;低受精率可能更易出现在原因不明性不孕及原发不孕患者。     

卵泡浆内单精子显微注射—胚胎移植的研究进展

卵胞浆内单精子显微注射 -胚胎移植 (ｉｎｔｒａｃｙ ｔｏｐｌａｓｍｉｃｓｐｅｒｍｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｅｍｂｒｙｏｔｒａｎｓｆｅｒ,ＩＣＳＩ ＥＴ)是通过显微操作技术将单个精子注入卵母细胞浆内使精卵结合受精 ,并将受精卵体外培养形成早期胚胎植入母体子宫内的一种较为精细、尖端的辅助生殖技术。主要适用于少弱畸精症 ,甚至经精液常规检查无精子而只要在附睾或睾丸内能取到活精子的患者。该项技术最早应用于人类是在 1992年 ,由Ｐａｌ ｅｒｍｏ等〔1〕获得成功。随后各国相继报道并肯定了该项技术。本文就ＩＣＳＩ的发展、受精机理、…     

收获卵子数目对卵胞浆内单精子显微注射结局的影响

目的：探讨收获卵子数目对卵胞浆内单精子显微注射（ ICSI）结局的影响。方法：对355个ICSI移植周期进行回顾性分析,比较获卵数≤3、4-14、15-20、〉20各组的MII卵率、受精率、卵裂率、优质卵泡数等。结果：4组MII卵率、受精率、卵裂率和移植周期妊娠率差异均无统计学意义（P〉0.05）,而4组可用胚胎率差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：ICSI周期中获卵数多少对MII卵率、受精率、卵裂率和移植周期妊娠率方面无显著影响,而获卵数〉20组可用胚胎率下降。     

精子脱尾温育降低小鼠卵胞浆内单精子显微注射的受精率

目的 脱尾的精子头注射是小鼠显微授精的一种常用方法,脱尾对精子造成的膜损伤是否影响卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)的受精率和卵裂率尚不清楚,该研究拟初步探索精子的机械脱尾等膜损伤以及不同温育条件对ICSI的受精率和卵裂率的影响.方法 首先,用机械吹打法处理小鼠精子悬液,使得部分精子脱尾,于不同温度下孵育,观察孵育温度对ICSI的受精率和卵裂率的影响;然后比较精子化学破膜与吹打脱尾处理后温育一定时间对显微授精的受精率、卵裂率的影响.结果 相对于对照组,对小鼠精子进行吹打脱尾,经37℃下温育12h后的显微授精双原核形成率和卵裂率显著下降(75.6％ vs 15.1％,P＜0.01;91.1％ vs 18.9％,P＜0.01),而4℃下温育12h的结果未见正常受精率和卵裂率受显著影响.用Triton-100精子进行化学破膜后温育,尽管其没有机械脱尾法效果显著,也同样明显降低了受精率和卵裂率(P＜0.01).结论 该研究初步提示,精子脱尾等破膜损伤在经37℃较长时间温育后会降低小鼠ICSI的受精率,常规小鼠ICSI操作中小鼠精子批量脱尾处理后不宜在37℃下放置过久.     

对单个卵子不同授精方式的妊娠结局分析

目的探讨常规体外受精（IVF）和单精子卵胞浆内显微注射（ICSI）两种不同授精方式对仅获得单个卵子周期的临床结局分析。方法回顾性分析接受治疗并仅获得单个卵子的525对不孕夫妇的777个周期的病例资料。根据精液质量分为3组：IVF组（563个周期）,严重男性因素SMF-ICSI组（151个周期）,非严重男性因素NSMF-ICSI组（63个周期）。比较各组间正常受精率、可利用胚胎率、优质胚胎率、每周期临床妊娠率。结果IVF组、SMF-ICSI组和NSMF-ICSI组的正常受精率分别为70.3%、81.4%和80.7%,差异有统计学意义（P<0.05）;可利用胚胎率分别为81.6%、84.8%和87.0%;优质胚胎率分别为42.2%、53.3%和34.8%;每周期临床妊娠率分别为19.8%、12.5%和11.1%;可利用胚胎率、优质胚胎率和每周期临床妊娠率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论对每周期只获得单个卵子的患者应严格根据男方精液质量及过往病因选择授精方式。     

卵胞浆内单精子显微注射术成功妊娠2例

我院于2008年5月开展卵胞浆内单精子显微注射术（ICSI）,实施的2例患者获成功临床妊娠,现报告如下。     

卵母细胞第一极体形态与卵胞浆内单精子显微注射受精率和胚胎质量的关系

目的:了解人卵母细胞第一极体形态与卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)后正常受精率、卵裂率和优质胚胎率的关系。方法:选择行ICSI治疗的110个周期中1017枚人卵母细胞。将卵母细胞第一极体分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四种类型,采用3种来源的精子[手淫取精精子、附睾穿刺/睾丸活检(PESA/TESA)取精精子、冷冻精液精子]授精。ICSI操作后,了解各型第一极体卵母细胞受精率、卵裂率和优质胚胎率。结果:手淫取精患者:各型第一极体卵母细胞正常受精率和卵裂率比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中Ⅲ、Ⅳ型正常受精率低于Ⅰ和Ⅱ型,Ⅱ型卵裂率低于Ⅰ和Ⅲ型。PESA/TESA取精患者:各型第一极体卵母细胞正常受精率和取卵后第3天优质胚胎率比较,差异有统计学意义(χ2=8.488和6.789,P=0.044和0.034),Ⅰ型正常受精率低于Ⅱ和Ⅲ型,Ⅰ和Ⅲ型第3天优质胚胎率高于Ⅱ型。冷冻精液取精患者各指标比较,差异无统计学意义。结论:排除精子来源对受精的影响,正常受精可能和卵母细胞第一极体形态有关。     

卵细胞质内单精子注射治疗不孕症34例临床总结

目的总结应用单精子卵细胞质内注射（ICSI）治疗不孕症的临床效果。方法对34对男性因素、原因不明、受精障碍不孕患者采用GnRHa长周期促排卵方案,给有第一极体的卵细胞行单精子注射。结果34例34个治疗周期中,1例因反应不良取消。取卵数378个,注射卵数317（83．9％）个,正常受精卵231个（72．9％）卵裂228（98．3％）个,良好胚胎99（43．4％）个,平均移植胚胎数36个,临床妊娠12例（移植周期妊娠率为36.4％）。结论ICSI是治疗男性因素、原因不明、受精障碍等因素引起不孕症的一种切实可行的方法。     

卵母细胞体外培养时间对单精子胞浆内注射临床结局的影响

目的 探索最适合的单精子胞浆内注射(ICSI)时机.方法 根据从患者取卵结束到开始ICSI的时间(t),将患者分为3组:A组(2h≤t＜4h,n=60),B组(4h≤t≤6h,n=85),C组(6h＜t≤8h,n=62).回顾性分析了卵母细胞体外培养时间对于ICSI患者的受精、胚胎发育及临床结局的影响.结果 B组及C组患者的临床妊娠率及植入率均显著高于A组.结论 适度的卵母细胞体外培养时间(4～8 h)有利于改善ICSI患者的临床结局.     

卵胞浆内单精子注射对母儿妊娠结局的影响

目的 探讨不同辅助生殖技术(in vitro fertilization/ intracytoplasmic sperm injection, IVF/ICSI)妊娠后单胎分娩的新生儿出生缺陷和母体并发症的发生情况及影响因素。方法 回顾性分析2010年1月至2013年6月在同济大学附属第一妇婴保健院生殖医学中心接受体外受精(in vitro fertilization, IVF)、卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection, ICSI)新鲜胚胎移植后单胎分娩的新生儿的临床资料,比较IVF与卵子透明带侵入性操作后出生的母体并发症、新生儿一般情况、出生缺陷及出生缺陷受累系统。结果 共有1016例新生儿分娩,其中13例有出生缺陷,出生缺陷发生率1.28%,其中IVF组、ICSI组的出生缺陷率分别1.12%、1.67%,差异无统计学意义(P>0.05)。IVF组与ICSI组分娩的新生儿的体质量、孕周、性别无明显差异(P>0.05);两组母体产科并发症发生率、早产率、低体质量儿率、极低出生体质量儿率、巨大儿发生率也无显著性差异(P>0.05)。ART子代发生出生缺陷可能与亲代低生育力、孕母年龄等有关。结论 不同助孕方式对母体产科并发症的发生、新生儿的一般情况及出生缺陷没有显著区别,有必要告知不孕患者辅助生殖技术的潜在风险。     

A live birth of activated one-day-old unfertilized oocyte for a patient who experienced repeatedly near-total fertilization failure after intracytoplasmic sperm injection

Total or near-total fertilization failure after intracytoplasmic sperm injection (ICSI) is a rare event, but it occurs repeatedly because of sperm defects in activating oocyte. The case presents a successful pregnancy and live birth after calcium ionophore A23187 (A23187) activation on one-day-old unfertilized oocytes in a patient whose husband suffered oligoasthenoteratozoospermia, and who had experienced repeated near-total fertilization failure after ICSI. In the second ICSI cycle, only one oocyte was fertilized while nine were unfertilized. Oocyte activation with A23187 were performed on the one-day-old unfertilized oocytes after ICSI and resulted in fertilization and embryo transfer. A clinical pregnancy was achieved and a healthy baby was born. To our knowledge, this is the first reported case of a healthy birth after oocyte activation on the one-day-old unfertilized oocyte. This indicates that “rescue oocyte activation” on one-day-old unfertilized oocytes after ICSI may be helpful for preventing total or near-total fertilization failure after ICSI.

     

单精子注入卵胞浆过程对胚胎发育的影响

目的探讨卵胞浆内单精子注射（ＩＣＳＩ）操作过程对胚胎发育的影响。方法　选取５３个体外受精－胚胎移植治疗不 育症周期为对象,将同一周期的同胞卵子分为两组,分别进行ＩＣＳＩ和常规体外受精（ＩＶＦ）,比较两组的胚胎发育情况。结 果ＩＣＳＩ组受精率７８％,显著高于常规ＩＶＦ组６７％的受精率,但卵子的溶散率亦高（８％νｓ３．４％）;ＩＣＳＩ组的优良胚胎数 与ＩＶＦ组相比,差异不显著（Ｐ＞０．０５）,但碎片率大于５０％的胚胎数前者与,后者差异具有显著性（Ｐ＜０．０１）;移植后ＩＣＳＩ组 可供冻融的胚胎数较常规ＩＶＦ组少。结论ＩＣＳＩ操作对卵子及其后的胚胎发育潜能有影响。     

人类精子中段形态对胚胎发育的影响

目的在高倍镜下观察精子中段的形态,从而评估精子中心体功能,从而探讨精子中段形态与中心体功能的关系以及中段
形态不同的精子对胚胎发育的影响。方法针对57例在成都市锦江区妇幼保健院生殖医学中心行ICSI（卵胞浆内单精子注射）
技术治疗的患者,将首先在低倍镜（×200~×400）下挑选过的精子再次利用MSOME（精子细胞器官形态学检查）系统,在6 000倍
放大镜下对精子进行精子中心体形态分组（A组：1≤a/b≤1.2;B组：a/b≥1.5;C组：其他不规则形态）,然后分别将这3组精子注射
入卵后,分组进行胚胎培养,最终观察每组胚胎发育和着床情况。结果A,B,C 3组比较发现D3移植优胚率（79.7% vs 55.6% vs
33.3%）和胚胎着床率（43.2% vs 11.1% vs 0%）在3组之间均有显著性差异（P<0.05）;而正常受精率（73.3% vs 80.4% vs 63.5%）、
囊胚利用率（23.2% vs 22.2% vs 9.09%）、胚胎冷冻率（29.2% vs 25.0 % vs 13.0%）、D3优胚率（35.3% vs 37.8% vs 18.8%）上均无显著
性差异（P>0.05）。结论中心体形态较好的精子注射入卵后,可获得较高正常受精的胚胎,能显著提高第3天可移植优胚的几率,
同时能显著改善胚胎的着床率,但由于样本量较少,仍然需要较大的样本量来进一步证实,为精子中心体的相关研究提供参考。
     

单精子卵胞浆内注射术中不同来源精子的处理方法

目的：介绍单精子卵胞浆内注射术（ICSI）中不同来源精子的洗涤处理方法。方法：轻度少、弱精精液或正常精液精子,采用Percoll梯度离心法或直接离心加上游法处理;严重少、弱精液精子或无精子症的附睾液精子,采用直接离心法处理;无精子症的睾丸组织内精子,采用组织磨碎加直接离心法处理。结果：三种方法处理后,均获得足够的活动精子用于ICSI治疗。ICSI操作均能顺利进行。采用直接离心法获得的精子行ICSI可以获得相似的治疗结果。结论：不同来源精子都可以经直接离心法处理,并能有效用于ICSI治疗中。     

不同来源的精子显微受精治疗男性不育

目的回顾分析不同来源精子的单精子卵胞浆内注射(ICSI)治疗男性不育62个周期.方法比较采用手淫射精获得精子、睾丸活切及附睾穿刺获得精子行ICSI治疗后的受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率.结果射出精子组50个周期,受精率72.3% 、卵裂率80%、优质胚胎率40%及临床妊娠率40%;睾丸及附睾精子组12个周期,受精率64.1%、卵裂率76.3%、优质胚胎率35.2%及临床妊娠率33.3%.两组结果比较,无显著性差异.结论不同来源精子行ICSI治疗男性因素不育可以获得相似的治疗结果.     

不同精子来源及参数对卵胞浆内单精子注射术结局的影响

目的:探讨不同源性精子、不同参数精子对卵胞浆内单精子注射术(intracytoplasmic sperm injection, ICSI)结局的影响.方法:回顾性分析2005年6月至2008年12月在中南大学湘雅医院生殖医学中心接受ICSI治疗的433个周期.根据行ICSI的精子来源,分为射出精子组(A组)336个周期...