脂质过氧化对整装培养人脐静脉内皮细胞的损伤

脂质过氧化对整装培养人脐静脉内皮细胞的损伤张弘陈铁镇过氧化脂质可引起培养内皮细胞损伤，特别是对生物膜系统的损伤。此工作目的是进一步研究这种生物膜系统损伤中内质网和线粒体整体结构的病理变化。一、材料与方法１．ＰＦ膜的制备：将Ｆａｌｃｏｎ培养皿的原材料以...     

丙氨酰谷氨酰胺二肽对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用

目的 观察丙氨酰谷氨酰胺二肽（丙谷二肽）对人脐静脉内皮细胞ECV304缺氧缺糖损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法 在以低氧低糖培养人脐静脉内皮细胞ECV304为细胞损伤模型的基础上,以噻唑蓝（MTT）比色法优化丙谷二肽的最佳作用浓度,显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测线粒体膜电位。自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶（LDH）活性,比色法检测谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）的浓度,RT-PCR方法检测细胞内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6 (IL-6)、热休克蛋白70 (HSP70)、葡萄糖调节蛋白78 (GRP78) 和缺氧诱导因子-1α (HIF-1α) mRNA的表达。结果 丙谷二肽能够使细胞在缺氧缺糖应激下存活率增加,线粒体损伤减轻,LDH分泌降低,GSH产生增加,HSP70和HIF-1α mRNA的表达增加。结论 丙谷二肽对细胞缺氧缺糖损伤有明显的保护作用,这种保护作用可能与保护线粒体、维持细胞膜结构完整、上调细胞中应激基因HSP70和HIF-1α的表达有关。     

人脐静脉内皮细胞体外培养方法

目的探索人脐静脉内皮细胞体外培养方法和注意事项。方法采用0.1%I型胶原酶分离脐静脉内皮细胞,于RPMI-1640和20?S内培养,待细胞80%融合后,以0.25%胰蛋白酶和0.02?TA消化传代,并以倒置光显微镜观察内皮细胞生长情况,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果原代培养细胞在接种4 h后开始贴壁生长,5~7 d后融合成单层,倒置光显微镜下观察细胞呈鹅卵石状排列,有接触抑制现象,免疫组化显示细胞胞浆内Ⅷ因子相关抗原阳性。结论用胶原酶灌注消化脐静脉是获得内皮细胞的一种较可靠的方法,成活率较高,培养的多个环节均需关注。     

人脐静脉内皮细胞的体外培养

目的 建立能大量分离人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的体外培养方法,为血管内皮细胞的体外实验研究提供基础.方法 用0.25%胰蛋白酶消化法收集HUVECs,加入含20%优质胎牛血清的RPMI1640培养基在37℃、5%CO2孵箱中培养.结果 体外培养的HUVECs在24h完全贴壁,在4～5天融合成片,呈现单层铺路石样.流式细胞仪测定内皮细胞纯度为71.38%.结论 胰蛋白酶消化法可以获得大量HUVECs.     

高渗液对缺氧／复氧人脐静脉内皮细胞内游离钙离子浓度的影响

目的：观察高渗液（HS）对缺氧／复氧的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）内游离钙离子浓度（［Ca²⁺］i）的影响,阐明高渗液治疗休克时对血管内皮细胞的保护机制。方法：体外分离和培养的HUVECs分为对照组和实验组,采用荧光探针技术,应用激光共聚焦显微镜,测定细胞内［Ca²⁺］i的变化,两组细胞先置于缺氧（95％氮气,5％CO₂）环境中8 h,然后将实验组细胞置于配制好的HS中15 min,再在常氧状态下（95％空气,5％CO₂）培养16 h。对照组细胞加对照液（M199培养液）15 min后同实验组。两组细胞分别于缺氧前（T₀）、缺氧后（T₁）、处理后（T₂）、复氧后1/2、2、8、16 h（T_3~6）测定细胞内Fluo-3荧光强度。结果：两组细胞荧光强度T₁与T₀比较显著升高（P<0.05）;实验组细胞荧光强度T₂低于实验组T₁及对照组T₂（P<0.05）,但仍高于T₀（P<0.05）,且复氧过程中逐渐降低,至T₅恢复到T₀水平;两组细胞T3时点荧光强度均高于各T₂时点（P<0.05）;实验组复氧过程中不同时点（T_3~6）荧光强度低于各自同一时间点的对照组（P<0.05）。结论：缺氧／复氧可以引发HUVECs内［Ca²⁺］i升高,而HS能减轻HUVECs内的钙超载,保护缺氧／复氧损伤的内皮细胞。     

黄芪注射液对烟碱损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用

观察黄芪注射液对烟碱损伤人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的保护作用及分子机制.方法 MTT法检测烟碱、黄芪对HUVEC细胞生长的影响,硝酸还原酶法检测总NO水平、化学比色法检测HUVEC细胞总NOS水平、酶联免疫法检测ET-1的水平. 结果烟碱作用后的HUVEC细胞总NO水平和总NOS水平均降低显著(P＜0.01),而...     

复方通络胶囊对人脐静脉内皮细胞保护的作用机制

目的：观察复方通络胶囊对缺氧-复氧所致人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的作用机制。方法：体外培养HUVECs,建立缺氧-复氧模型,收集培养液,测定内皮素（ET）、一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）水平。结果：复方通络胶囊中、高剂量组能抑制缺氧-复氧诱导的ET释放,提高NOS的活性,促进NO的释放（P〈0.05,P〈0.01）。结论：复方通络胶囊通过抑制ET释放,提高NOS的活性,促进NO的释放,对人脐静脉内皮细胞缺氧-复氧损伤有明显的保护作用。     

不同浓度黄芪总黄酮对高糖诱导人脐静脉系内皮细胞损伤的保护作用

目的探讨不同浓度黄芪总黄酮对高糖诱导人脐静脉系内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的保护作用。方法将HUVECs随机分为正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、高糖模型组(30mmol/L葡萄糖)、高渗对照组(5.5mmol/L葡萄糖+24.5mmol/L甘露醇)及黄芪总黄酮高剂量组(2mg/mL黄芪总黄酮+30mmol/L葡萄糖)、黄芪总黄酮中剂量组(1mg/mL黄芪总黄酮+30mmol/L葡萄糖)、黄芪总黄酮低剂量组(0.5mg/mL+30mmol/L葡萄糖)。37℃,5%CO2培养箱中培养24h后,检测各组HUVECs的一氧化氮(nitric oxide,NO)及总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)水平、病理学改变、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)mRNA及蛋白表达水平。结果培养24h后,与正常对照组比较,高糖模型组NO、T-SOD水平明显降低,细胞数量明显减少,ET-1mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05)。与高糖模型组比较,黄芪总黄酮高、中、低剂量组NO、T-SOD水平明显升高,细胞数量明显增加,ET-1mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.05);且黄芪总黄酮高剂量变化最为显著(P<0.05)。     

蜕皮甾酮对TNF所致脐静脉内皮细胞损伤的保护作用的初步观察

目的 观察肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）对体外培养的脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）分泌功能及能量代谢的影响,及应用植物药物成分蜕皮甾酮（ＥＤＳ）进行防治的效果。方法 ①ＭＴＴ法对培养内皮细胞琥碧酸脱氢酶活必的影响。②内皮细胞培养上清液ＥＴ、ＮＯ、ＭＤＡ、ＬＤＨ、ＳＯＤ测定。③采用反相高效液相色谱分析法测定内皮细胞ＡＴＰ、ＡＤＰ、ＡＭＰ及能荷。结果 ＴＮＦ与内皮细胞孵育后低浓度、早期内皮细胞被激活,随着ＴＮＦ     

人脐静脉内皮细胞的培养及鉴定

目的:摸索人脐静脉内皮细胞体外培养的方法和注意事项。方法:采用0.25%胰蛋白酶分离人脐静脉内皮细胞,用含20%FBS的DMEM培养基培养,待细胞80%融合后,以0.25%胰蛋白酶消化传代,并以倒置显微镜观察内皮细胞的生长情况,以免疫组化方法对内皮细胞进行鉴定。结果:原代培养的细胞在接种4h后开始贴壁生长,3～5天后融合成单层,倒置显微镜下观察细胞呈铺路石状排列,免疫组化显示人第Ⅷ因子相关抗原阳性。结论:用胰蛋白酶消化脐静脉可获得内皮细胞且成活率较高,是一种可靠的方法。     

甜橙黄酮对斑马鱼及人脐静脉内皮细胞抗血管新生活性的作用

目的:观察甜橙黄酮在斑马鱼及人脐静脉内皮细胞(HUVECs)上的抗血管新生能力,并探讨其相关作用机制。方法:以150 nmol/L内皮细胞生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(VRI)为阳性对照组、以相应浓度DMSO为空白对照组,观察不同浓度(3,10,30μmol/L)甜橙黄酮对转基因斑马鱼血管系统的影响,并通过实时荧光定量PCR检测相关血管新生基因表达的影响;分别采用XTT与流式细胞术检测3～100μmol/L甜橙黄酮对20 ng/ml内皮细胞生长因子(VEGF)诱导的HUVECs增殖和细胞周期的影响。结果:甜橙黄酮可以剂量依赖性地抑制斑马鱼节间血管(ISV)的形成,下调血管新生相关基因hras、kdrl和vegfaa的表达;可剂量依赖性抑制VEGF诱导的HUVECs增殖,并诱导HUVECs停滞于细胞周期G0/G1期。结论:甜橙黄酮可能通过阻滞细胞周期和影响相关基因的表达达到在斑马鱼体内模型和HUVECs体外模型的抗血管新生作用。     

Connexin43 Modulates X-Ray-Induced Pyroptosis in Human Umbilical Vein Endothelial Cells

Objective Pyroptosis is an inflammatory form of programmed cell death. This phenomenon has been recently reported to play an important role in radiation-induced normal tissue injury. Connexin43(Cx43) is a gap junction protein that regulates cell growth and apoptosis. In this study, we investigated the effect of Cx43 on X-ray-induced pyroptosis in the human umbilical vein endothelial cells(HUVECs). Methods HUVECs, Cx43 overexpression, and Cx43 knockdown strains were irradiated with 10 Gy. Proteins were detected using western blot analysis. Cell pyroptosis was evaluated using the fluorescence-labeled inhibitor of caspase assay(FLICA) and propidium iodide staining through flow cytometry and confocal microscopy. Cell morphology and cytotoxicity were detected by scanning electron microscopy and lactate dehydrogenase release assay, respectively. Results Irradiation with 10 Gy X-ray induced pyroptosis in the HUVECs and reduced Cx43 expression. The pyroptosis in the HUVECs was significantly attenuated by overexpression of Cx43 as it decreased the level of active caspase-1. However, interference of Cx43 expression with si RNA significantly promoted pyroptosis by increasing the active caspase-1 level. Pannexin1(Panx1), a gap junction protein regulates pyroptosis, and its cleaved form is used to evaluate channel opening and active state. The level of cleaved Panx1 in the HUVECs and Cx43 knockdown strains increased in the presence of X-ray, but decreased in the Cx43 overexpression strains. Furthermore, interference of Panx1 with si RNA alleviated the upregulation of pyroptosis caused by Cx43 knockdown. Conclusion Results suggest that single high-dose X-ray irradiation induces pyroptosis in the HUVECs. In addition, Cx43 regulates pyroptosis directly by activating caspase-1 or indirectly by cleaving Panx1.     

丙泊酚在缺血/再灌注损伤中的保护机制

缺血/再灌注损伤(IRI)是指在缺血基础上恢复血流后,加重细胞的功能代谢障碍和结构损伤的现象。如何有效降低由IRI所引起的各组织器官的损害,促进其恢复已成为当今临床医学研究的重点。现就IRI的发病机制及丙泊酚在IRI中对组织器官起保护作用的机制予以综述,从而探讨丙泊酚能否作为防治IRI的常规用药奠定理论基础。     

Corilagin抗PAF诱导血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究Corilagin抗血小板活化因子（PAF）损伤人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的保护作用及其机制．方法用PAF损伤HUVEC,采用MTT法测定Corilagin对HUVEC活性的影响;以Fura-2／AM荧光探针负载细胞,用双波长荧光分光光度法测定HUVEC细胞内游离钙离子浓度;用ELISA法测定培养的细胞上清液中t-PA、PAI-1含量的变化．结果1μmol／L的PAF刺激内皮细胞2h后,可明显降低HUVEC的吸光度值,细胞内钙离子浓度升高,PAI-1含量明显升高,t-PA含量无明显变化;50～200μmol／L的Corilagin可升高PAF引起HUVEC吸光度值的降低,呈浓度依赖性显著降低HUVEC内游离钙浓度;Corilagin明显抑制PAF诱导的PAI-1分泌增高,对t-PA水平无明显影响．结论Corilagin对PAF诱导的HUVEC损伤具有保护作用,其机理可能与降低细胞内钙离子浓度、抑制PAI-1产生、调节t-PA／PAI-1平衡密切相关．     

注射用地龙冻干粉针对大鼠颈动脉血栓形成的影响

目的：评价注射用地龙冻干粉针的抗血栓作用。方法：SD雄性大鼠40只，利用血栓生成仪复制颈动脉血栓模型，模型成功后72h，将动物随机分成空白组、地龙冻干粉针1．8，0．9mg·kg^-1剂量组及阳性药疏血通注射液对照组，每组lO只，各组大鼠分别尾静脉注射（iv）生理盐水、地龙冻干粉针1．8，0．9mg·kg^-1剂量溶液和疏血通注射液（O．1mL·kg^-1）12d后，剥离颈动脉血栓，测定血栓重量，并对各组大鼠腹主动脉取血，利用ELISA法测定血浆组织型纤溶酶原激活剂（tissue type plasminogen activator，t-PA）含量，采用观察法测定各组大鼠的凝血时间（clotting time，CT）、血浆复钙时间（recalcification time，RT），利用血小板聚集仪测定血小板最大聚集率（maximal platelet aggregation rate，PAgR-max）。结果：与空白组相比较，地龙冻干粉针1．8mg·kg^-1剂量组大鼠血栓重量显著减少（P〈0．05）；阳性药疏血通组与地龙冻干粉针0．9mg·kg^-1剂量组大鼠血浆t-PA含量显著升高（P〈0．05）；阳性药疏血通组、地龙冻干粉针1．8mg·kg^-1剂量组大鼠CT、RT显著延长（P〈0．05），0．9mg·kg^-1剂量组RT显著延长（P〈0．05），且地龙冻干粉针对RT延长呈剂量依赖性。结论：注射用地龙冻干粉针具有显著的溶解血栓的作用，并能够抑制内源性凝血途径，溶血栓作用可能与提高血浆t-PA含量有关。     

胎盘多肽注射液对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的:研究胎盘多肽注射液对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)增殖的影响.方法:采用细胞计数和MTT法观察不同稀释度胎盘多肽作用72 h后,ECV-304细胞增殖情况.同时以免疫组织化学法检测不同稀释度胎盘多肽对ECV-304细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果:一定稀释度的胎盘多肽可促进ECV-304细胞的增殖,25 ml/L即可发挥作用,200 ml/L作用最明显.ECV-304细胞PCNA表达阳性率与胎盘多肽稀释度呈剂量相关性.结论:胎盘多肽可促进体外培养的ECV-304细胞增殖.     

黄秋葵总黄酮对氧化应激损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用及其机制研究

目的 观察黄秋葵总黄酮对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）氧化应激损伤的影响。方法 采用MTT法检测黄秋葵总黄酮对HUVECs的保护作用,采用分光光度法测定细胞培养上清液中细胞内超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、丙二醛（malondialdehyde,MDA）及一氧化氮（nitric oxide,NO）含量,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中内皮素-1（endothelin-1,ET-1）含量,采用二氯荧光乙酰乙酸盐法检测活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;Western blot方法检测内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）的表达水平。结果 黄秋葵总黄酮可以提高氧化应激损伤的HUVECs存活率,增加SOD活性,升高NO水平,降低MDA、ET-1水平,降低细胞ROS水平,升高eNOS的表达水平。结论 黄秋葵总黄酮对过氧化氢诱导的HUVECs氧化应激损伤有保护作用,其作用机制可能与调节SOD、MDA、ET-1、NO氧化应激相关因子,调控内皮细胞功能相关蛋白eNOS的表达有关。     

柴胡注射液对小鼠灌流肝脏缺氧复氧损伤的保护作用

采用小鼠离体肝灌流术在Krebs－Henseleit（K－H）灌流液中加入柴胡注射液，观察柴胡对肝缺氧（1h）复氧（1h）的影响。结果表明：柴胡组与缺氧组相比，光镜电镜下肝组织损伤较轻，且肝组织乳酸脱氢酶（LDH）漏出量显著减少，脏／体比、还原型谷胱甘肽（GSH）及黄嘌呤氧化酶（XOD）含量有显著性差异，丙二醇（MDA）生成延迟。揭示柴胡对小鼠离体灌流肝缺氧复氧损伤有明显拮抗作用，其机制与抑制氧自由基形成有关。     

氨甲环酸对体外人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究氨甲环酸（tranexamic acid, TXA）对H₂O₂诱导人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVECs）损伤的保护作用及给药时机选择。方法 体外培养HUVECs,加入100μmol/L的H₂O₂作用12h,在H₂O₂作用开始后30min和60min以及H₂O₂作用结束前1h和2h这4个时间点加入TXA （150μmol/L）;Hoechst 33258染色法观察HUVECs形态;Western blot法检测细胞内细胞间黏附分子（intercellular cell adhesion molecule, ICAM）的表达;酶联免疫吸附双抗体夹心法（ELISA） 检测细胞上清液多配体聚糖、tPA和PAI-1含量。结果 HUVECs经H₂O₂作用后,可显著诱导细胞凋亡,上调ICAM、多配体聚糖和tPA的表达,同时抑制PAI-1的表达;TXA在H₂O₂作用60min内给药可抑制H₂O₂对HUVECs的凋亡诱导作用,同时下调ICAM、多配体聚糖和tPA的表达,并上调PAI-1的表达,TXA在60min后给药无上述保护作用。结论 早期TXA给药对H₂O₂诱导HUVECs损伤有明显抗纤维蛋白溶解和保护作用,从而表明临床应用TXA需早期给药。