p75神经营养素受体在新生和成年大鼠背根神经节中的不同表达

目的：研究神经生长因子低亲和力受体p75NTR在新生和成年大鼠背根经节中的表达，以探讨p75NTR在背根神经节神经元中的作用。方法：取新生和3月龄大鼠背根神经节，免疫组化ABC法观察p75NTR在神经元中分布和表达。结果：新生大鼠背根神经节中可见较多的p75NTR阳性反应神经元，免疫反应产物主要位于胞浆。成年大鼠背根神经节大多数神经元有p75NTR阳性免疫反应产物，主要位于细胞核。结论：p75NTR在新生和成年大鼠背根神经节神经元中表现为不同表达方式，提示其在神经元发育和分化的不同阶段发挥着一定的作用。     

Expression of neurotrophin-3 and its receptors in lung tissues of rats with asthma

目的 研究神经营养素3 (NT-3)及其受体酪氨酸激酶C(TrkC)和p75神经营养素受体(p75 NTR)在哮喘大鼠肺组织中的表达情况.方法 将28只4～6周龄的SD大鼠随机分为分为哮喘组(n=16)(以卵蛋白致敏和激发建立大鼠哮喘模型)和正常对照组(n=12).取两组大鼠的肺组织制作病理切片,HE染色后光学显微镜下观察支气管和肺组织的病理学特征.采用Real-Time PCR技术检测两组大鼠肺组织中NT-3、TrkC和p75NTR mRNA的表达,并分析三者之间的相关性.结果 光学显微镜观察发现:哮喘组大鼠支气管壁周围有较多淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润,可见支气管气道上皮脱落、杯状细胞增生及黏液栓增多等变化;正常对照组大鼠支气管及肺泡结构未见明显异常.哮喘组大鼠肺组织中NT-3、TrkC和p75NTR mRNA的相对表达量均显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).相关性分析结果显示:NT-3 mRNA与TrkC mRNA的表达、NT-3mRNA与p75NTR mRNA的表达以及TrkC mRNA与p75NTR mRNA的表达均呈正相关(r分别为0.89、0.90和0.82,均P＜0.01).结论 致敏哮喘大鼠肺组织内NT-3 mRNA表达水平升高.NT-3通过上调TrkC和p75NTR mRNA的表达,增强NT-3的功能效应,三者共同参与了哮喘气道神经源性炎症的发生.     

神经营养素-4及其受体的研究进展

神经营养素-4(NT-4)作为神经营养素家族的新成员,与其他家族成员-神经生长因子(NGF),脑源性神经生长因子(BDNF),神经营养素-3(NT-3),神经营养素-5(NT-5),神经营养素-6(NT-6)一起对神经元的生存及发育起重要作用。近来的研究结果显示,它在基因结构,氨基酸序列,生理功能等方面与其他家族成员相比有进化的保守性,又有自己进化的特殊性。它在哺乳动物体内有广泛表达,通过低亲和力NGF受体(P75~(LNCFR)),高亲和力trkA受体,高亲和力trkB受体发挥作用。NT-4在神经退行性疾病中的临床应用价值也在研究中。     

神经生长因子及其受体在呼吸道合胞病毒感染肺组织中的表达

目的 探讨NGF及其trk以p75受体在肺内的表达是否具有年龄依赖性，RSV感染是否会引起NGF表达增加。方法 将无病原体感染的F344大鼠分别于第2、4、8及12周龄时处死，并分别将2周龄(乳鼠)和12周龄(成年)大鼠分为RSV接种组和无病毒基质接种组。采用RT—PCR技术进行肺组织内NGF及其高亲和力受体(trkA)和低亲和力受体(p75)mRNA的定量分析，同时采用免疫分析法进行NGF蛋白的定量。结果 无病原体感染的大鼠肺组织中NGF及其受体的表达随年龄增加而逐渐减少，成年大鼠NGF及其受体mRNA和蛋白表达水平均较幼鼠降低50％。RSV感染可使乳鼠和成年大鼠肺内NGF、trkA和p75表达双倍增加。结论 肺内NGF及其受体的表达随着年龄的增加而出现生理性减少，但RSV感染可上调NGF及其受体的表达，这可能促发了RSV感染过程中和感染后异常的神经免疫炎症反应。     

大鼠胚胎脊髓神经细胞的原代培养及其神经营养素受体表达的初步研究

目的：建立哺乳动物胚胎脊髓神经细胞体外培养的细胞模型，提高培养用脊髓神经细胞的产率以及活性，使实验的细胞模型有良好的一致性和可比性。方法：18d的大鼠胚胎的脊髓经取材、分离、消化后作原代细胞培养，从细胞形态学及细胞计数角度观察细胞生长与分化过程。应用免疫细胞化学技术，观察了神经营养素受体TrKA、TrKB、TrKC在脊髓神经细胞的表达。结果：大鼠胚胎的脊髓神经细胞在体外条件下，可良好存活并有正常的表型分化，TrKA、TrKB、TrKC在细胞膜上呈阳性反应。其细胞数量(集落数)与形态以及存活周期可满足体外实验的基本要求。结论：这种分离培养方法简便、成功率高、稳定性强、细胞产量高且质量好，有助于离体研究的开展。     

TGF-β1及其受体mRNA在哮喘大鼠肺组织中的表达

目的研究哮喘大鼠肺组织中TGF-β1及受体TGF-βRⅠ、TGF-β RⅡmRNA的表达水平,以了解TGF-β1在哮喘中的作用及其受体对其作用的调节机制.方法将30只成年雌性SD大鼠分为正常对照组,单纯致敏组和哮喘模型组,采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射法复制大鼠哮喘模型,利用RT-PCR法检测肺组织中TGF-β1、TGF-βRⅠ及TGF-βRⅡmRNA的表达水平.结果TGF-β1mRNA的表达水平致敏组与正常组相比增加(70.21±11.68 vs 53.07±10.27,P＜0.05),哮喘组与正常组相比显著增加(114.14±16.57 vs 53.07±10.27,P＜0.01),TGF-β R Ⅰ mRNA的表达水平在致敏组和哮喘组相当,均较正常组下调(83.21±11.52 vs 100.14±16.13,85.76±12.95 vs 100.14±16.13,P＜0.05).TGF-βRⅡmRNA的表达水平致敏组与正常组相比有下降(89.04±9.23 vs 103.05±11.46,P＜0.05),哮喘组与正常组相比则显著下降(56.53±7.34 vs 103.05±11.46,P＜0.01).结论TGF-β1可能作为一个抗炎因子在哮喘的变应性炎症前阶段及炎症过程中起着重要作用,TGF-β RⅠ、TGF-β RⅡ的表达水平在哮喘组和致敏组的下降说明TGF-β1信号通路在哮喘的变应性炎症中和炎症前阶段的活化程度,TGF-βRⅡ表达水平在哮喘组的显著下降则显示TGF-β1信号通路可能被下调从而抑制其抗炎作用的发挥.     

神经营养素—3及其受体的基因调控及生物学功能

神经营养素 ( neurotrohpins,NTs) [1 ] 又称神经营养因子家族是近几年发现的对神经元在胚胎期及成熟发育期存活和发育所必须的一些生长因子 ,随着分子生物学技术的不断发展及应用 ,对神经营养因子家族的研究越来越深入。目前已知的神经营养因子家族成员包括神经生长因子 ( nerve growth factor,NGF)、脑源性神经生长因子 ( brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、神经营养素 -3 ( neuro trophin-3,NT-3)、神经营养素 -4 /5( neu-rotrophin-6,NT-6)。它们之间具有相当的氨基酸序列相似性 ,其氨基酸同源性达 50 %左右 [2 ,3 ] 。但…     

神经营养素受体p75NTR在不同胎龄人胎脑海马中的表达

0引言 神经营养素是一个高度保守的生长因子家族,包括两种受体：低亲和力的神经营养素受体p75（p75neurotrophi nreceptor,p75NTR）和高亲和力的Trk．p75NTR是一种M,为75000的Ⅰ型膜蛋白,属于肿瘤坏死因子受体超家族（TNFRI）的成员．在不同的条件下p75NTR发挥完全不同的生物学效应,一方面它与Trk共表达时,二结合成杂合二聚体,形成神经营养因子的高亲和性受体,促进神经细胞的存活与生长;另一方面,当p75NTR单独表达时,它能以相同的亲和力与所有的神经营养因子结合而诱导细胞凋亡．海马属边缘系统,与学习记忆、情绪、行为及内脏活动密切相关,     

氧糖剥夺条件下p75神经营养素受体在人神经母细胞瘤细胞中的表达和作用

目的 探讨氧糖剥夺（OGD）条件下p75神经营养素受体（p75NTR）在人神经母细胞瘤细胞（SH-SY5Y）中的表达变化和作用。方法 SH-SY5Y细胞OGD模型的建立采用三气培养箱无糖无血清培养方法。模型成功建立后设立3组：无血清常规培养组（对照组）、OGD组和OGD+p75NTR竞争性阻断剂LM11A-31处理组（OGD+LM11A-31组）。在细胞培养12 h时用利用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测3组细胞存活率,乳酸脱氢酶（LDH）活力检测试剂盒测定LDH释放活力,流式细胞术检测凋亡细胞比例,蛋白质印迹法检测p75NTR的蛋白表达。结果 成功构建SH-SY5Y细胞OGD模型。细胞培养12 h时,对照组、OGD组和OGD+LM11A-31组细胞存活率分别为（94.80±4.06）%、（50.34±5.55）%、（64.68±4.59）%,LDH释放活力分别为（46.93±5.49）U/L、（353.09±30.67）U/L和（282.20±25.60）U/L,凋亡细胞比例分别为（1.82±0.45）%、（14.98±2.59）%和（7.36±1.98）%,p75NTR蛋白相对表达量分别为0.06±0.01、0.41±0.02和0.19±0.03,差异均有统计学意义（F=67.94、142.10、36.28、221.20,P均<0.05）。多重比较显示,OGD组细胞存活率低于对照组,LDH释放活力高于对照组,凋亡细胞比例高于对照组,p75NTR蛋白表达高于对照组,差异均有统计学意义（Bonferroni法,P''均<0.05）;而LM11A-31处理后OGD+LM11A-31组细胞存活率高于OGD组,LDH释放活力低于OGD组,凋亡细胞比例低于OGD组,p75NTR蛋白表达低于OGD组,差异均有统计学意义（Bonferroni法,P''均<0.05）。结论 OGD条件下p75NTR在人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y中表达增加,可能促进了神经损伤和凋亡。     

酪氨酸激酶受体RON在慢性阻塞性肺疾病大鼠肺内表达的研究

目的:探讨酪氨酸激酶受体RON在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠气道炎症中的作用。方法:单纯熏香烟法建立COPD大鼠模型;支气管肺泡灌洗计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数与肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)数,培养正常和COPD大鼠AM,采用逆转录-聚合酶链式反应法检测大鼠肺组织中酪氨酸激酶受体RON mRNA的表达情况,免疫组化法观察大鼠气道和离体培养的AM中RON蛋白的表达水平,图像分析系统测定肺平均内衬间隔(MLI)、平均肺泡数(MAN)和肺泡腔面积与总面积比(PAA)。结果:COPD组MLI、PAA较正常对照组明显增高[MLI:(111.451±49.334)×10-6m vs(44.803±10.624)×10-6m;PAA:(79.653±7.594)%vs(48.352±13.063)%],而MAN则明显低于正常对照组[(81.621±20.394)×106/m2vs(170.098±42.398)×106/m2],差异均有统计学意义(P<0.01)。COPD组BALF中细胞总数和AM计数均明显高于正常对照组[细胞总数:(6.029±0.420)×108/L vs(1.463±0.0692)×108/L;AM数:(5.752±0.571)×108/L vs(1.387±0.105)×108/L,P<0.01)]。COPD组大鼠肺组织RON mRNA表达较正常对照组明显上调[(0.892±0.088)vs(0.353±0.080),P<0.01],COPD组大鼠气道上皮及AM中RON蛋白水平也较正常对照组显著增加[气道RON蛋白:(0.171±0.027)vs(0.073±0.009);AM RON蛋白:(0.310±0.101)vs(0.110±0.006),P<0.01]。结论:RON与COPD气道炎症调节密切相关。     

RON蛋白在正常胚胎食管组织发育成熟过程及肿瘤组织中的表达特征

目的：探讨原癌基因RON在正常胚胎食管组织发育成熟及肿瘤组织中的表达特征及临床意义     

经典瞬时受体电位通道在哮喘小鼠肺组织中的表达

目的探讨经典瞬时受体电位(transient receptor potential canonical,TRPC)通道在慢性哮喘小鼠肺组织中的表达。方法随机将BALB/c小鼠分成对照组和哮喘组。应用5%鸡卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏和雾化激化的方法制备小鼠慢性哮喘模型,对照组用生理盐水代替OVA。最后一次激发24h后处死小鼠,取肺组织进行RT-PCR和免疫组织化学检测,观察哮喘小鼠肺组织TRPC mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 RT-PCR结果显示,正常小鼠肺组织分别表达TRPC1、TRPC2、TRPC3、TRPC6mRNA;与对照组相比,哮喘小鼠肺组织TRPC1、TRPC6mRNA表达显著增高(P<0.05);免疫组织化学检测发现TRPC1、6蛋白在哮喘小鼠肺组织的支气管上皮细胞、血管平滑肌细胞及浸润的炎症细胞表达明显增强。结论 TRPC1、TRPC6可能与哮喘发病机制密切相关。     

DCs和NSPCs共培养促进NSPCs增殖及其机制的初步研究

目的 观察体外Transwell共培养系统中树突状细胞(dendritic cells,DCs)对神经干/前体细胞(neural stem/progenitor cells,NSPCs)增殖的影响,初步探讨神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)在DCs调控NSPCs中的作用机制.方法 根据是否采用Transwell小室将DCs和NSPCs共培养分为分隔培养(DCs/NSPCs组)和混合培养(DCs+ NSPCs组),ELISA法测定DCs组、NSPCs组、DCs+ NSPCs组、DCs/NSPCs组共培养48 h上清中的NT-3的含量.为观察NT-3在DCs调控NSPCs中的作用及可能的机制,成球法检测NSPCs组、NSPCs/DCs+ K252a组、NSPCs+ DCs组、NSPCs+ NT-3组的NSPCs增殖,免疫细胞荧光法和Western blot法检测各组NSPCs表面酪氨酸激酶受体C(TrkC)的表达.结果 ELISA实验结果显示,Transwell共培养48 h上清NT-3的含量,NSPCs/DCs组较DCs组和NSPCs组明显升高(P＜0.05).镜下观察、测量结果显示NSPCs/DCs组和NSPCs+ NT-3组神经球数量增多,平均直径明显增大(P＜0.05).免疫细胞荧光和Western blot检测结果表明,NSPCs+ DCs组和NSPCs+ NT-3组中NSPCs的TrkC表达较NSPCs组和NSPCs/DCs +K252a组高(P＜0.05).结论 体外DCs与NSPCs共培养,促进NSPCs增殖、NT-3的分泌及TrkC的表达,NT-3可能是通过TrkC受体参与NSPCs增殖的调控.     

神经生长因子及其受体在哮喘大鼠肺组织的变化以及对气道炎症的影响

目的：探讨神经生长因子（NGF）和其受体酪氨酸激酶受体A (trkA)和总神经营养因子受体( p75)变化对哮喘大鼠气道炎症的影响。方法：通过鸡卵蛋白致敏激发建立哮喘模型,并将32只SD大鼠随机分为4组：正常对照组、哮喘组、外源性NGF干预组（NGF组）及抗NGF抗体干预组（抗NGF组）。各组测定支气管肺泡灌洗液(BALF)总细胞及细胞分类计数,并行支气管肺组织切片HE染色观察病理改变;通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量检测哮喘组和对照组肺组织NGF mRNA,4组肺组织trkA和p75 mRNA表达变化。结果：哮喘组与对照组比较,BALF总细胞计数、嗜酸性粒细胞（Eos）计数及淋巴细胞（Lym）计数显著增多（均P<0.001）,支气管肺组织炎症表现显著;肺组织NGF mRNA及trkA和p75 mRNA表达明显增强（均P<0.01）;哮喘组NGF mRNA与BALF细胞总数、Lym数呈正相关（均P<0.001）。NGF组与哮喘组比较,BALF总细胞、Eos及Lym计数均显著增多（均P<0.01）,支气管肺组织炎症表现更为显著,p75和trkA mRNA表达明显增强（均P<0.05）。抗NGF组与哮喘组比较,BALF总细胞、Eos及Lym计数显著减少（均P<0.001）,支气管肺组织炎症表现显著减轻,p75和trkA mRNA表达明显减弱（均P<0.01）。结论：致敏哮喘大鼠肺组织内NGF mRNA表达水平显著增高,并与气道炎症密切相关;NGF上调trkA和p75 mRNA表达,从而增强NGF的功能效应,共同参与哮喘的气道神经源性炎症。     

BDNF及其受体TrkB在不同程度癫痫患者颞叶或海马中的差异性表达

目的 检测不同发病程度的癫痫患者颞叶或海马中脑源性神经营养因子(BDNF)及其酪氨酸激酶B 受体(TrkB)差异性表达情况,探讨其在癫痫发病机制中的作用.方法 取82例癫痫患者颞叶或海马脑组织,用免疫组化方法检测BDNF及其受体TrkB的表达,分析不同病程和发作频率患者脑组织中BDNF及TrkB的表达差异.结果 癫痫患...     

神经营养素3基因克隆及其真核表达载体的构建

目的 克隆大鼠神经营养素-3(NT-3)基因的表达序列,构建大鼠NT-3基因真核表达载体.方法 应用RT-PCR从大鼠脑组织总RNA中扩增NT-3基因cDNA,将其克隆到真核表达载体pcDNA3中构建重组质粒pcDNA3-N3,用限制酶酶切鉴定和DNA序列分析鉴定重组质粒.结果 RT-PCR产物为822 bp的特异片段,重组质粒酶切后产生822 bp和5.2 kb片段,DNA测序证实822 bp片段的碱基序列与大鼠NT-3 cDNA序列完全一致.结论 成功克隆大鼠NT-3基因表达序列并构建了NT-3基因真核表达载体pcDNA3-N3.     

酪氨酸激酶受体 RON 在慢性阻塞性肺疾病患者肺组织中的表达及意义

目的:观察酪氨酸激酶受体RON在慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者肺组织中的表达及分布,以探讨RON在人类COPD发病机制中的作用。方法:收集2013年5月至2013年12月在川北医学院附属医院心胸外科因肺癌进行手术治疗的患者,将其分为对照组(25例)和COPD组(20例),于手术切除标本中选取距肺癌病灶5cm以上的新鲜肺组织。采用免疫组化方法观察两组患者肺内RON蛋白的表达和分布情况。结果:COPD组患者肺组织中肺泡区与支气管区RON蛋白的表达较对照组均明显增强(P<0.05),而且COPD组患者支气管区的RON蛋白表达量多于肺泡区(P<0.01)结论:COPD患者肺组织中RON的合成与表达增强,其表达量与患者气流受限严重程度相关。     

神经营养素-3及其在脊髓损伤修复中的作用

神经营养素-3(NT-3)属于神经营养素(NTs)家族,是神经系统神经元存活、分化和功能维持的重要营养因子,在脊髓损伤后的神经修复方面发挥了重要作用。NT-3分泌后能通过p75^NTR和Trks受体激活其下游信号通路,促进轴突生长和血管发生。本文就NT-3及其受体结构、受体信号以及在脊髓损伤修复中的研究进展作一综述,并对NT-3与其他药物联合治疗脊髓损伤（SCI）的临床应用前景进行展望。     

神经生长因子受体在腺样囊性癌神经侵袭中的作用

目的研究神经生长因子受体TrkA及p75在涎腺腺样囊性癌（ACC）嗜神经性中的作用。方法采用免疫组织化学方法（S-P法）检测40例涎腺腺样囊性癌组织中TrkA及p75的表达,并比较嗜神经组与非嗜神经组间Tr-kA/p75染色强度相对值的差异并进行统计分析。结果在40例ACC组织中,神经侵袭组19例,非神经侵袭组21例。TrkA表达阳性率90%,嗜神经组TrkA表达较非嗜神经组增强,差异有统计学意义（P〈0.05）。p75阳性表达率90%,嗜神经组p75表达较非嗜神经组亦增强,差异有统计学意义（P〈0.05）。嗜神经组TrkA/p75染色强度相对值较非嗜神经组显著增高,差异有显著统计学意义（P〈0.01）。结论 TrkA与p75的表达升高与ACC的嗜神经性均有关;TrkA在腺样囊性癌神经侵袭过程中可能发挥更为重要的作用。