联合应用c—Ha—ras,c—myc反义寡聚脱氧核苷酸对人膀胱癌细胞生长增殖…

作者联合应用人工合成的ｃ－Ｈａ－ｒａｓ，ｃ－ｍｙｃ反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｒ、ＡＳＯ－ｍ）对人膀胱癌细胞株进行作用，观察到ＡＳＯ－ｒ、ＡＳＯ－ｍ能明显抑制癌细胞中ｒａｓＰ２１、ｍｙｃＰ６２的表达，抑制了癌细胞ＤＮＡ合成及生长增殖，经ＡＳＯ－ｒ、ＡＳＯ－ｍ处理后癌细胞裸鼠致瘤力下降，这一结果表明：针对多外癌基因联合应有反义寡聚脱氧核苷酸，可能给膀胱癌的治疗提供新的途径，有进一步探索的价值。     

联合应用c－Ha－ras，c－myc反义寡聚脱氧核苷酸对人膀胱癌细胞生长增殖的抑制作用

作者联合应用人工合成的ｃ－Ｈａ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｒ，ＡＳＯ－ｍ）对人膀胱癌细胞株进行作用，观察到ＡＳＯ－ｒ、ＡＳＯ－ｍ能明显抑制癌细胞中ｒａｓＰ２１、ｍｙｃＰ６２的表达，抑制了癌细胞ＤＮＡ合成及生长增殖，经ＡＳＯ－ｒ、ＡＳＯ－ｍ处理后癌细胞裸鼠致瘤力下降。这一结果表明：针对多个癌基因联合应用反义寡聚脱氧核苷酸，可能给膀胱癌的治疗提供新的途径，有进一步探索的价值     

反义寡核苷酸抑制Survivin基因表达对移植静脉内膜增生的影响

目的研究反义寡脱氧核苷酸（ASODN）抑制Survivin基因表达对移植静脉内膜增生的抑制作用。方法Wistar大鼠60只，建立自体静脉移植模型，术后随机分为：对照组、Survivin ASODN 50、200μg组、正义对照组、Lipofectin＋pluronic等五个组，施加不同的处理因素，在移植后1、2周取材。组织形态学方法比较内膜增生程度，逆转录．聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin基因的mRNA表达，Westem blot检测Survivin基因的蛋白产物表达，免疫组织化学方法检测Survivin及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，脱氧核苷酸转移酶末端标记法（TUNEL）检测血管平滑肌细胞（VSMC）凋亡的变化。结果移植后1、2周内膜增生明显，局部转染50μg Survivin ASODN组内膜增生明显受抑制（P〈0．05），200μg组受抑制程度更为明显（P〈0．05）；与对照组相比，Survivln ASODN组Survivin的mRNA及蛋白产物表达显著减少（P〈0．05），PCNA阳性表达同时减少，而TUNEL阳性细胞却明显增加。结论Survivin ASODN可显著抑制移植静脉的内膜增生，其作用可能是通过抑制Survivin基因及其蛋白产物表达，从而抑制VSMC增殖、促进其凋亡而实现的。     

反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞c—myc,增殖细胞核抗原 …

目的 研究反义ｃ－ｍｙｃ、增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）基因片断对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣＳ）增殖的作用。方法 使用正义、反义及错配反义ｃ－ｍｙｃ、ＰＣＮＡ,分别艇于体外培养的ＶＳＭＣＳ,蛋白印迹和免疫组化法测定燕经计算机图像分析,观察其对ｃ－ｍｙｃ、ＰＣＮＡ蛋白表达的影响。结果 １０μｍｏｌ／Ｌ浓度的反义ｃ－ｍｙｃ、ＰＣＮＡ作用于ＶＳＭＣＳ后１￣５ｄ相庆ｃ－ｍｙｃ和ＰＣＡＮ蛋白表达减弱,计算机图像分     

α1（Ⅰ）型前胶原基因反义核酸对增生瘢痕动物模型的抑？…

目的 研究α１（Ⅰ）型前胶原基因反义寡聚核苷酸对人烧伤所致增生性瘢痕裸鼠模型的作用,探讨增生性瘢痕的基因治疗。方法 以人烧伤增生性瘢痕移植于裸鼠建立动物模型,分别合成寡聚核苷酸１（ＯＤＮ１）和寡聚核苷酸２（ＯＤＮ２）,作用于动物模型,观察不同寡聚核苷酸的抑制作用。结果 位于５’端翻译区域的２１ｂｐ的反义寡聚核苷酸１和位于第１个外显子与第１个内含子之间的２２ｂｐ的反义寡聚核苷酸２能有效抑制增生性瘢痕     

TGFβ1、VEGF在自体移植静脉中的表达状况及意义

目的 探讨自体静脉移植后率生长因子β１（ＴＧＦβ１）和血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）表达的动态变化及其与内膜增生的关系。方法 １００只Ｗｉｓｔａｒ大鼠,分为１０组,第１组为对照组,第２～９组为自体静脉移植模型组。应用原位杂交和免疫组化方法,观察大鼠自体移植静脉后不同时期,移植静脉的内膜增生情况、ＴＧＦβ１ ｍＲＮＡ、ＴＧＦβ１和ＶＥＧＦ蛋白表达的变化动态。结果 自体静脉移植后２周,移植静脉内膜明     

反义c-fos核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

目的:利用反义核酸技术和显微外科技术,探讨反义c-fos核酸对自体移植静脉内膜增生的影响.方法:选择20只新西兰家免,等分为实验组和对照组,均行自体颈外静脉、颈总动脉移植手术,实验组移植静脉周围和血管吻合口周围应用反义c-fos核酸凝胶涂布;对照组仅行凝胶涂布.术后2周取出移植血管,分别行病理学、免疫组织化学检测移植血管内膜厚度,内膜平滑肌细胞数及PCNA阳性表达情况.结果:实验组移植血管内膜厚度、管腔狭窄度及VSMC数均较对照组减少,PCNA阳性表达情况亦较对照组明显减少.结论:反义c-fos核酸可有效的抑制移植静脉内膜的增生,是一种比较有发展前途的防治移植静脉内膜增生的基因疗法.     

人arresten基因转染对自体移植静脉内膜增生的影响

目的:探讨体内转染arresten基因对自体移植静脉内膜增生的影响。方法:建立大鼠自体静脉移植模型。血管吻合术前，用脂质体介导重组质粒pSecTag2-AT（Ⅰ组），空载体pSecTag2转染（Ⅱ组）移植血管，等体积脂质体溶液处理移植血管(空白对照组，Ⅲ组）。各组动物均于4周后切取移植血管，RT-PCR检测移植血管中arresten mRNA的表达；常规HE，Verhoeff弹力纤维染色；计算机图象分析检测移植静脉血管内膜及中膜面积、厚度；免疫组化检测移植血管内膜α-SMA及PCNA的表达；Western blot检测TGF-β1蛋白的表达。结果:Ⅰ组转染的移植静脉中有目的基因mRNA的表达, 而Ⅱ、Ⅲ组无Ⅰ组内膜、中膜面积小均于Ⅱ组和Ⅲ组，差异有显著性（P<0.05）。而内膜面积/中膜面积3组间无统计学差异（P>0.05）；Ⅰ组内膜厚度小于Ⅱ组和Ⅲ组，组间比较有统计学差异（P<0.01）；α-SMA染色表明增生内膜中的细胞是血管平滑肌细胞；PCNA阳性细胞数及表达指数Ⅰ组均低于Ⅱ组和Ⅲ组（P<0.05）；Ⅰ组TGF-β1蛋白的表达明显低于Ⅱ组和Ⅲ组。结论:移植血管转染arresten基因，可有效抑制自体移植静脉内膜的增生，在防治血管移植术后再狭窄方面显示出良好的临床应用前景。     

联合转染eNOS基因反义ET核酸对自体移植静脉内膜增生的影响

目的;探讨联合转染eNOS基因和反义ET核酸对自体移植静脉内膜增生的影响。方法：制作20只自体颈静脉腹主动脉移植Wistar大鼠模型,实验组,对照组各10只,实验组移植血管行腺病毒介导的eNOS溶液浸泡和反义ET核酸凝胶涂布,对照组仅行空载腺病毒溶液浸泡和凝胶兴布。术后2周取出移植血管,利用病理学,免疫组织化学,RT－PCR方法检测移植血管内膜厚度,管腔狭窄度,内膜VSMC数及PCNA阳性表达,血管ETmRNA,eNOSmRNA表达情况。结果：实验组移植血管内膜厚度,管腔狭窄及VSMC数均较对照组减小或减少,PCNA阳性表达及ETmRNA表达较对照组减少,而eNOSmRNA表达则明显增加。结论;联合转染NOS基因和反义ET核酸可有效地抑制移植静脉内膜的增生,是一种有效地防治移植静脉再狭窄的基因疗法。     

c—Ha—ras反义寡聚脱氧核苷酸对人膀胱癌细胞生长增殖的抑…

应用人工合成的ｃ－Ｈａ－ｒａｓ反义寡聚脱氧核苷酸（ＡＳＯ－ｒ）对人膀胱癌细胞株Ｔ２４进行作用。结果表明：ＡＳＯ－ｒ能够抑制膀胱癌细胞株Ｔ２４中ｒａｓＰ２１的表达及Ｔ２４细胞的生长增殖，抑制作用大小与ＡＳＯ－ｒ的浓度有关。     

纳米粒子介导反义mTOR基因转染抑制移植静脉内膜增生

目的:观察以纳米粒子为载体的外源性反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载mTOR基因，制备纳米级粒子混合物。建立自体静脉移植模型72只，随机分成转基因组(转染以纳米粒子为载体的反义mTOR基因)，空载体组(单纯转染纳米粒子包载的空载体)和对照组(不予特殊处理)。分别于术后3，7，14，28d取材。检测mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达，以及血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。 结果:转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P<0.05)；转基因组内膜增生厚度于7，14，28d较其他组明显减少(P<0.01)；转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论:纳米粒子可以作为转基因载体。反义mTOR基因的表达能有效抑制自体移植静脉内膜的增生及促进VSMC凋亡。     

可溶性支架转染c-myc基因反义寡核苷酸对静脉移植物c-myc及PCNA表达的影响

目的采用可溶性支架将原癌基因c—myc反义寡核苷酸转染静脉移植物，观察其对静脉移植物内c—myc蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白产物表达的影响。方法50只新西兰大耳白兔建立兔颈外静脉颈总动脉旁路移植模型后随机分成5组，每组10只。对照组：无支架；组1：植入单纯可溶性支架；组2：植入正义c—myc寡核苷酸可溶性支架；组3：植入反义c—myc寡核苷酸可溶性支架；组4：植入不匹配c—myc寡核苷酸可溶性支架。于静脉移植后7d、28d和90d取出静脉移植物，采用免疫组织化学方法检测其c—myc蛋白和PCNA蛋白的表达。结果对照组、组1、组2、组4静脉移植术后7d、28d、90d时静脉移植物内膜和中膜内可见大量c—myc蛋白和PCNA蛋白表达阳性的细胞，与同时间点组3比较差别均有统计学意义（P〈0．01）。28d、90d时5组静脉移植物内c—myc蛋白的表达与同组7d时比较明显增强（P〈0．01）。结论可溶性支架转染c—myc反义寡核苷酸可显著抑制静脉移植物内c—myc蛋白和PCNA蛋白的表达。     

Vein to artery grafts: a morphological and histochemical study of the histogenesis of intimal hyperplasia.

Failure of vein to artery grafts has been associated with intimal thickening (hyperplasia) and atherosclerosis. Current theories of intimal development, derived from arterial studies, show that smooth muscle cells migrate from the media to the intima after endothelial damage, where they proliferate and produce intimal hyperplasia. However, little is known of the histogenesis of these lesions in vein grafts. Experimental ilio-lumbar vein to iliac artery autografts were placed in 52 rats and analysed by light microscopy and histochemistry from 2 to 140 days after surgery. On day 2 the grafts and adjacent artery were severely damaged. Regeneration of damaged arterial tissue occurred by day 5, and thickening was already evident in the arterial intima. The intimal cells had histochemical characteristics of smooth muscle. By day 15, this hyperplastic intima was continuous across the anastomosis from the artery into the graft. After day 28 a wedge of densely packed cells was present in the vein graft intima for approximately 2 mm into the graft. By day 140, all the grafts were fully re-endothelialized. Intimal hyperplasia was present in all grafts and varied in thickness from 3 to 20 cells. Histochemical staining of these cells showed them to be of smooth muscle origin.     

VEIN TO ARTERY GRAFTS: A MORPHOLOGICAL AND HISTOCHEMICAL STUDY OF THE HISTOGENESIS OF INTIMAL HYPERPLASIA

Failure of vein to artery grafts has been associated with intimal thickening (hyperplasia) and atherosclerosis. Current theories of intimal development, derived from arterial studies, show that smooth muscle cells migrate from the media to the intima after endothelial damage, where they proliferate and produce intimal hyperplasia. However, little is known of the histogenesis of these lesions in vein grafts. Experimental ilio-lumbar vein to iliac artery autografts were placed in 52 rats and analysed by light microscopy and histochemistry from 2 to 140 days after surgery. On day 2 the grafts and adjacent artery were severely damaged. Regeneration of damaged arterial tissue occurred by day 5, and thickening was already evident in the arterial intima. The intimal cells had histochemical characteristics of smooth muscle. By day 15, this hyperplastic intima was continuous across the anastomosis from the artery into the graft. After day 28 a wedge of densely packed cells was present in the vein graft intima for approximately 2 mm into the graft. By day 140, all the grafts were fully re-endothelialized. Intimal hyperplasia was present in all grafts and varied in thickness from 3 to 20 cells. Histochemical staining of these cells showed them to be of smooth muscle origin.     

经外膜缓释雷公藤内酯醇抑制自体移植静脉内膜增生

目的:探讨经外膜缓释雷公藤内酯醇（triptolide）对自体移植静脉内膜增生的抑制作用。方法:健康雄性新西兰大白兔24只，建立颈外静脉-颈总动脉移植模型。随机将动物等分为3组。空白组移植血管不给任何处理， F-127多聚凝胶对照组在移植血管外膜喷洒20 %F-127多聚凝胶0.5 mL，实验组在移植血管外膜喷洒携带雷公藤内酯醇300μg的F-127多聚凝胶0.5 mL。术后2周取标本。用组织形态学方法检测血管内膜增生程度，免疫组化检测标本中bcl-2和Fas的表达，TUNEL法检测标本中血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的水平。结果:静脉移植2周后，与空白组和F-127对照组比较，实验组血管内膜增生明显受抑制（P<0.05），bcl-2的表达［（18.2±8.4） %］显著减少，而Fas的表达［（21.4±8.9） %］显著增加，凋亡细胞［（28.4±7.6） %］也显著增加（P<0.05）。结论:经外膜缓释雷公藤内酯醇可有效抑制移植静脉内膜增生，这一作用可能系通过促进VSMC凋亡而实现的。     

反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞c-myc、增殖细胞核抗原蛋白表达的影响

目的　研究反义c myc、增殖细胞核抗原 (PCNA)基因片断对血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖的作用。　方法　使正义、反义及错配反义c myc、PCNA ,分别作用于体外培养的VSMCs ,应用蛋白印迹和免疫组化法测定并经计算机图像分析 ,观察其对c myc、PCNA蛋白表达的影响。　结果　 10μmol/L浓度的反义c myc、PCNA作用于VSMCs后 1～ 5d ,相应c myc和PCNA蛋白表达减弱 ,计算机图像分析表明其表达产物与对照组相比 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,而正义和错配反义寡核苷酸无此效应 (P >0 0 5 )。　结论　反义c myc、PCNA寡核苷酸可通过阻遏其相应基因表达进而抑制蛋白表达及VSMCs增殖。     

手术缝线携载反义基因预防血管吻合口内膜增生的实验研究

目的：探讨预防血管吻合口内膜增生的新方法。了解手术缝线携载反义基因对吻合口内膜增生的影响。方法：用分别浸泡过反义，正义及错配c-myc基因溶液的保护薇乔缝线行兔颈外静脉间置于同侧颈总动脉的血管吻合。实验动物24只随机分为对照组，反义组，正义组和错配组，每组6只，4周后血管造影观察吻合口通畅情况，同时取材制片显微镜下观察其内膜增生情况，计算机图像分析测量其内膜，中膜厚度及两者比值；内膜，中膜面积及两者比值。结果：所有吻合口通畅，未见闭塞，扩张或动脉瘤，反义组的内膜厚度，内膜／中膜厚度比值及内膜面积，内膜／中膜面积比值较其他组均低（P＜0．05），其他3组间比较差异均无显著意义（P＞0．05）；各组间的中膜厚度及中膜面积间差异无显著意义（P＞0．05），结论：用浸泡过反义 c-myc溶液的保护薇乔缝线进行血管吻合，能有效地抑制血管吻合口内膜增生。     

反义雷帕霉素靶蛋白基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响

目的:观察以纳米粒子为载体的反义雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因局部转染对移植静脉内膜增生的影响。方法:应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)和聚乙烯醇(PVA)包载mTOR基因,制备纳米级粒子混合物。检测其包埋率、体外释放情况及粒子大小。建立自体静脉移植模型,随机分成转基因组、空载体组、对照组。转基因组移植静脉转染以纳米粒子为载体的反义mTOR基因,空载体组单纯转染纳米粒子包载的空载体,对照组不予特殊处理。分别于术后3d、7d、14d、28d取材,常规HE、Verhoeff染色,RT-PCR、Westernblot检测mTOR基因的mRNA及蛋白的变化,TUNEL法观察血管平滑肌细胞(VSMC)凋亡的动态变化。结果:转基因组内膜中mTOR基因的mRNA及蛋白产物表达较其他两组明显减少(P<0.05);转基因组内膜增生厚度7d、14d、28d较其他组明显减少(P<0.01);转基因组凋亡细胞较其他组明显增高(P<0.05)。结论:纳米粒子可以作为转基因载体,反义mTOR基因的表达能够有效抑制自体移植静脉内膜的增生,促进VSMC的凋亡。     

反义单核细胞趋化蛋白-1基因抑制移植静脉内膜增殖的实验研究

目的探讨反义单核细胞超化蛋白-1(MCP-1)转基因表达对移植静脉术后局部血管MCP-1mRNA表达、单核巨噬细胞浸润及与其相关的内膜增生的影响.方法建立14只兔颈外静脉-颈总动脉移植模型,并随机分为基因治疗组、载体对照组和空白对照组.应用阳离子脂质体介导,将反义MCP-1基因通过局部定位转染的方法转染至移植静脉段.RNA斑点杂交,检测反义基因转染、表达情况;病理形态学观察移植血管新生内膜增生以及血管壁中单核巨噬细胞粘附、浸润的情况.结果RNA斑点杂交提示基因治疗组中有反义MCP-1基因表达.移植静脉自身MCP-1mRNA的表达受到明显抑制(降低38%,P＜0.05).相应的单核巨噬细胞在移植静脉中的粘附、浸润明显减少(减少34%,P＜0.05).内膜增生程度显著减轻(减轻49%,P＜0.05).结论反义MCP-1局部移植静脉内转基因表达,可抑制移植静脉自身MCP-1的表达,抑制单核巨噬细胞的浸润,减轻新生内膜的增殖.     

反义c-myc和增殖细胞核抗原抑制移植血管狭窄研究

目的探讨血管移植后联合应用c-myc和增殖细胞核抗原(PCNA)反义寡核苷酸(AODN)抑制血管平滑肌增殖和防止移植血管狭窄的作用。方法选40只新西兰雄性白兔,随机分为对照组(A组)、c-myc-AODN组(B组)、PCNA-AODN组(C组)和c-myc—AODN加PCNA-AODN组(D组),每组10只;将同一只兔的左、右髂外动脉(各1.0 cm)对换移植,移植血管用c-myc-AODN和PCNA-AODN液浸泡转染;术后4周时B超观察移植血管通畅情况和内径,同时取移植血管制片显微镜下测量其内膜厚度、内膜面积和移植血管狭窄率,并用免疫组织化学染色计数c—myc和PC—NA阳性细胞数。结果D组的移植血管内膜厚度、内膜面积、管腔狭窄程度和c-myc阳性细胞及PCNA阳性细胞数均显著低于A组(P<0.01),而且亦明显低于B组或C组(P<0.05);其内径比A组(P<0.01)、B组和C组显著增大(P<0.05);B组和c组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论联合应用c-myc—AODN和PCNA-AODN能有效抑制VSMC增殖,阻止内膜增生,防止移植血管狭窄。