嘌呤受体P2X7对视网膜毛细血管周细胞凋亡的影响

目的：探讨嘌呤受体P2X₇在体外培养大鼠视网膜毛细血管周细胞上的功能意义。

方法：利用显微镜下观察结合TUNEL计数法分别测定P2X₇激动剂BzATP和拮抗剂OxATP对体外培养的正常视网膜毛细血管周细胞以及糖尿病大鼠视网膜毛细血管周细胞存活率的影响。

结果：P2X₇受体激动后可介导视网膜毛细血管周细胞死亡,糖尿病大鼠视网膜毛细血管周细胞较正常视网膜毛细血管周细胞,在同等激动剂浓度下或在同样的时间点,能引起更多的细胞凋亡。而拮抗剂OxATP可以明显减轻BzATP对视网膜毛细血管周细胞的毒性作用,提高其存活率。

结论：P2X₇受体活性对视网膜毛细血管周细胞凋亡有一定调控作用。     

P2X7受体对缺氧诱发小鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响

目的：：探讨嘌呤受体P2X7对缺氧诱发小鼠视网膜神经节细胞凋亡的影响。方法：以小鼠视网膜神经节细胞株RGC-5为研究对象,按照不同处理因素将细胞随机分为4组：正常对照组( G1)、缺氧组( G2)、缺氧+激动剂( BzATP )组( G3)、缺氧+拮抗剂(BBG)组(G4);采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的存活率;用Annxin V/PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率;Western Blot检测细胞内cleave-caspase-3和cleave-PARP蛋白的表达。结果：与正常对照组相比, RGC-5细胞经缺氧处理后,细胞存活率明显降低;凋亡率显著升高;细胞内 cleave-caspase-3和cleave-PARP蛋白表达增加;P2X7受体激动剂BzATP能明显加重缺氧诱发的细胞凋亡,而BBG预处理可以显著拮抗缺氧所致的细胞凋亡。结论：缺氧能激活视网膜神经节细胞嘌呤受体P2X7,并参与视网膜神经节细胞的凋亡。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶在视网膜毛细血管周细胞凋亡中的活性及意义

目的探讨糖基化终产物（AGE）在糖尿病视网膜病变（DR）发生中的作用。方法培养的牛视网膜毛细血管周细胞分别与不同浓度（0．47、1．88、7．50μmol／L）的AGE共同培养4d后,分别检测细胞凋亡、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase-3）活性及caspase-3抑制剂Z—DEVD-fmk对周细胞凋亡及凋亡调节基因Bcl-2／Bax比率的影响。结果AGE能以剂量依赖的方式诱导培养的牛视网膜毛细血管周细胞凋亡（r=0．867,P〈0．01）、增加细胞内caspase-3的活性,而选择性caspase-3抑制剂Z—DEVD—fmk能明显抑制AGE作用下的周细胞凋亡及提高凋亡调节基因Bcl-2／Bax的比率。结论凋亡是DR中视网膜毛细血管周细胞选择性丧失的机制之一,caspase-3活性的增加是AGE诱导周细胞发生凋亡的关键因素。     

糖尿病早期大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡研究

目的：研究早期糖尿病视网膜病变大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡及其特征。方法：腹腔内注射链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型。应用PAS染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记（TUNEL）法标记和透镜观察进行研究。结果：在糖尿病3月和6月,可见周细胞和内皮细胞鬼影;周细胞和内皮细胞核异染色质聚集靠边并随病程进展而加重;被TUNEL法标记的细胞核染色质分布不均,表现为环形核、新月形核等。结论：早期糖尿病视网膜病变大鼠视网膜毛细血管周细胞丧失的性质为细胞凋亡,内皮细胞亦存在凋亡。     

早期糖尿病大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡及其特征

目的：研究早期糖尿病大鼠视网膜毛细血管细胞凋亡及其特征。方法：腹腔内注射链脲佐菌素诱导40只糖尿病大鼠模型,随机分为正常对照组（CON）、糖尿病1月组（DM1）、3月组（DM3）、6月组（DM6）。应用PAS染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记（TUNEL）法标记和染射电镜观察进行研究。结果：于糖尿病3月和6月组,见周细胞和内皮细胞鬼影。周细胞和内皮细胞核异染色质聚集靠边,并随病程进展而加重。被TUNEL法标记的细胞核染色质分布不均,表现为环形核、新月形核等。结论：早期糖尿病大鼠视网膜毛细血管周细胞丧失的性质为细胞凋亡,内皮细胞亦存在调亡。     

糖尿病视网膜毛细血管周细胞凋亡分子生物学机制的研究进展

随着糖尿病视网膜病变研究的进展,已证实糖尿病视网膜毛细血管周细胞的丧失是由细胞凋亡所引起的。糖尿病患者体内血糖水平的增加使视网膜毛细血管周细胞内氧自由基产生增加,导致DNA修复酶聚ADP核糖多聚酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)激活、线粒体内细胞色素C(cytochrome C,CytC)的释放激活半胱天冬酶(caspase)家族、周细胞内Ca2 浓度增加、激活核转录因子-κB(the nuclear factor-κB,NF-κB),从而引起细胞凋亡。糖尿病患者由于糖化血红蛋白的增多等原因,视网膜长期处于低氧状态。低氧则引起视网膜毛细血管周细胞DNA损伤、氧自由基的产生增加、细胞凋亡抑制基因Bcl-2的低表达,导致细胞凋亡。糖尿病患者体内高血糖水平和继发形成的糖基化终末产物(advancedglycation end-products,AGEs)都能够使视网膜毛细血管周细胞的Bax基因高表达与Bcl-2基因的表达减少,引起促凋亡、抗凋亡基因比例失衡,导致细胞凋亡。色素上皮衍生因子(pig-ment epithelium-derivedfactor,PDEF)可以增加视网膜毛细血管周细胞内谷胱苷肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)mRNA转录水平,阻止高糖引起的视网膜毛细血管周细胞内氧自由基的增加,因而具有细胞凋亡作用。糖尿病患者体内PDEF水平的降低,导致了视网膜毛细血管周细胞凋亡的发生。     

嘌呤P2X7受体在视网膜变性类疾病中的作用研究进展

视网膜变性类疾病是世界上主要的一类致盲性眼病,感光细胞等视网膜神经元细胞损伤及凋亡是其共同的病理基础.嘌呤能离子通道型7(P2 X7)受体在视网膜多种类型的细胞均有表达.研究发现,P2 X7受体激活及其介导的信号异常表达与视网膜神经元细胞变性死亡过程相关,而阻断或下调P2 X7受体的激活表达可显著减少视网膜胶质细胞激活...     

嘌呤受体P2X7在人眼小梁网细胞上的表达及分布

目的　探讨嘌呤受体Ｐ２Ｘ７在体外培养正常人眼小梁网细胞上的表达及分布。方法　体外培养、鉴定正常人眼小梁网细胞,利用ＲＴ－ＰＣＲ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ和免疫荧光法分别检测正常人眼小梁网细胞上Ｐ２Ｘ７受体ｍＲＮＡ和蛋白的表达情况及受体蛋白的主要分布部位。结果　光镜下观察原代培养的细胞具有人眼小梁网细胞的典型形态;免疫组织化学方法检测结果表明,培养的细胞纤维连接蛋白、层粘连蛋白、神经元特异性烯醇化酶及波形蛋白染色阳性,第Ⅷ因子染色阴性,鉴定为人眼小梁网细胞;ＲＴ－ＰＣＲ扩增到了Ｐ２Ｘ７ｍＲＮＡ１５２ｂｐ大小的基因片段,Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ得到了相对分子质量约为７４０００的Ｐ２Ｘ７的蛋白条带,免疫荧光法证实Ｐ２Ｘ７受体在小梁网细胞膜、细胞质及细胞核内均有广泛分布。结论　人眼小梁网细胞上有Ｐ２Ｘ７受体表达,其在细胞内分布广泛。     

糖尿病视网膜病变时血管周细胞的凋亡

周细胞因其自身特点,能够维持血管的稳定性,并能够控制内皮细胞的增殖。周细胞的缺失是糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)主要特征之一。当发生DR时,毛细血管周细胞的凋亡途径被激活。人们对周细胞增殖与凋亡机制的研究不断深入,将会从毛细血管周细胞方面找到更多DR治疗的切入点。     

微血管周细胞及其与糖尿病视网膜病变

概述了微血管周细胞的命名、定位、形态、常见标记物及来源;介绍了周细胞在微血管的生理、病理活动中所起的重要作用;总结了周细胞与糖尿病视网膜病变的相关性.深化对周细胞的认识是未来微血管疾病研究的方向,亦是挑战.     

周细胞条件培养液对视网膜色素上皮细胞、胶质细胞及巨噬细胞增殖的影响

目的观察体外培养的视网膜周细胞条件培养液对视网膜色素上皮细胞、巨噬细胞及胶质细胞生长的影响。方法MTT法测定不同稀释度的周细胞条件培养液对色素上皮细胞、巨噬细胞及胶质细胞生长的影响。结果随着周细胞条件培养液稀释度的增加,其对上述细胞的抑制生长作用亦越明显。结论周细胞的缺失将导致色素细胞、巨噬细胞及胶质细胞的增殖,细胞间相互作用对于糖尿病视网膜病变的发生和发展是非常重要的。     

Nogo受体在早期糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用

目的:探讨Nogo受体(nogo receptor,NgR)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用及机制。方法:链脲佐菌素诱导SD大鼠DM模型,实验分4组,对照组;DM组;siNgR组:DM大鼠玻璃体内给予NgR反义核苷酸序列;siRNA空白组:DM大鼠玻璃体内给予阴性核苷酸序列。1mo后TUNEL染色检测视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡,试剂盒检测视网膜丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western-blot检测视网膜NgR及caspase-3含量。结果:对照组、DM组、siRNA空白组及siNgR组MDA含量分别为3.74±0.49,7.21±0.96,6.41±1.34及4.02±0.53nmol/mg prot。与对照组相比,DM组及siRNA空白组视网膜RGC凋亡增加,NgR及caspase-3表达上调,MDA含量升高(P<0.05),而siNgR组视网膜RGC数量、NgR及caspase-3表达、MDA含量较对照组均无明显变化(P>0.05)。结论:NgR表达增加是糖尿病RGC凋亡的重要原因之一,其机制可能与NgR诱导视网膜氧化应激、上调caspase-3表达有关。     

高糖及不同幅度高糖波动下牛视网膜毛细血管周细胞增生与凋亡的研究

目的分析不同浓度葡萄糖培养下的牛视网膜毛细血管周细胞增生、细胞周期改变及凋亡与葡萄糖浓度及高糖波动幅度的相关性，并对比同一水平下恒定高糖与高糖波动对周细胞作用的强度。方法以体外培养3代近融合的牛视网膜毛细血管周细胞为对象。分另q在不同浓度高糖（15mmol·L^-1、25mmol·L^-1、35mmol·L^-1）、不同幅度的高糖波动（5．5／15mmol·L^-1、5．5／25mmol·L^-1、5．5／35mmol·L^-1）及对照组（5、5mmol·L^-1）下孵育7d，采用MTT比色法观察周细胞增生情况；流式细胞术观察周细胞细胞周期变化情况；TUNEL法检测培养后周细胞的凋亡率。结果（1）高糖及高糖波动抑制周细胞增生，与葡萄糖浓度及高糖波动幅度呈正相关（P〈0．01），同一水平下持续高糖组作用强于高糖波动组（P〈0.05）；（2）高糖及高糖波动阻滞用细胞周期，使G0／G1期细胞比例增加，S期细胞比例减少，G2／M细胞比例无明显改变；（3）高糖及高糖波动诱导周细胞凋亡，高糖各组凋亡率分别为23．78％、37．22％．48．73％，而高糖波动组分别为15．53％、28．73％、39.14％，与对照组的4.25%相比差异有显著性意义（P〈0.01）且周细胞凋亡率与高糖的浓度呈正相差（P〈0.01）；与高糖波动幅度呈正相关（P〈0.01）；同一水平下持续高糖组作用强于高糖波动组（P〈0.05）。结论同一水平下恒定高糖较高糖波动可能具有更强的周细胞增生抑制，周期阻滞及诱导凋亡作用，这些作用可能与葡萄糖浓度及波动的幅度正相关。【眼科新进展2007；27（2）：87-90]     

周细胞对缺氧诱导下视网膜微血管内皮细胞增生的影响

目的探讨视网膜微血管内皮细胞（RMECs）与共培养的周细胞（PCs）及PCs条件培养液（PCM）对常氧和缺氧条件下RMECs增生的影响。方法传代培养大鼠RMECs和PCs,采用兔抗鼠Ⅷ因子多克隆抗体和小鼠抗大鼠CD31单克隆抗体免疫组织化学法鉴定RMECs,PCs采用小鼠抗大鼠desmin多克隆抗体和兔抗鼠抗血小板衍生生长因子受体-β（PDGFR-β）进行免疫荧光双标鉴定。Millicell小室建立PCs和RMECs共培养系统,PCs培养近融合期后制备PCM,向共培养系统或PCM中加入终浓度为200μmol/L的CoCl2诱导形成细胞化学缺氧模型,观察常氧和缺氧条件下PCs和PCM对RMECs增生的影响。使用MTT法、3H-TdR掺入法检测RMECs在不同培养条件下的增生数量,并用流式细胞仪检测RMECs在不同细胞周期的细胞率。结果近融合期的RMECs呈类纺锤状、单层生长,可见明显的接触抑制,Ⅷ因子和CD31均阳性表达。PCs形状不规则,细胞重叠生长无接触抑制,PDGFR-β和desmin抗体双标阳性。缺氧3～9d缺氧RMECs单独培养组较常氧RMECs单独培养组各时间点的RMECs均明显增生,缺氧6d时增生达高峰（P〈0.01）,细胞生长抑制率（GIR）为-24.9%。缺氧共培养组较缺氧RMECs单独培养组RMECs增生下降（P〈0.05）。缺氧3、6、9d时常氧共培养组较常氧RMECs单独培养组RMECs数目均明显下降（P〈0.05,P〈0.01,P〈0.01）。缺氧6d时S期RMECs数量明显增加,占各期细胞总数的（43.9±0.8）%;常氧或缺氧共培养组,PCs均可抑制RMECs的增生,S期细胞分别占各期细胞总数的（3.6±0.1）%、（15.1±0.9）%（P〈0.05,P〈0.01）。常氧PCM组RMECs的吸光度（A）值和3H-TdR掺入量4～24h均低于对照组（P〈0.05）。结论缺氧和常氧条件下RMECs和PCs共培养时PCs均可抑制RMECs的增生,常氧条件下PCM可抑制RMECs的增生。     

Increased basement membrane thickness, pericyte ghosts, and loss of retinal thickness and cells in dopamine beta hydroxylase knockout mice

Diabetes can cause damage to sympathetic nerves, and we have previously shown that experimental sympathectomy can produce capillary abnormalities in the retina similar to those seen in early diabetes. We postulate that the diabetes-induced loss of the sympathetic system, and at least in part the sympathetic neurotransmitter norepinephrine (NE), contributes to the development of retinal vascular and neural abnormalities in diabetes. Thus, we predict that non-diabetic animals that lack NE will develop microvascular and neural changes that are similar to those that are characteristic of diabetic retinopathy. To test this, retinas from non-diabetic dopamine beta hydroxylase (Dbh, Dbh^−/−) knockout mice and their littermate controls were assessed for diabetic-like capillary and neural changes at 5 months of age. Genetic deletion of Dbh resulted in a significant decrease in retinal thickness and number of cells in the retinal ganglion cell layer (central retinal region). In addition, the number of pericyte ghosts and the basement membrane of retinal capillaries were significantly increased in the Dbh^−/− mice. These results provide evidence that loss of sympathetic neurotransmission may contribute to the microvascular and neural changes of diabetic retinopathy. Restoration of sympathetic neurotransmission may be a new target for therapeutic intervention to inhibit the early phases of diabetic retinopathy.