凋亡诱导因子在慢性砷中毒大鼠附睾上皮细胞凋亡中的表达

目的:探讨砷对大鼠附睾上皮细胞凋亡及凋亡诱导因子(AIF)和核酸内切酶G蛋白表达的影响。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组和亚砷酸钠染毒组。采用自由饮用方式进行连续染毒6个月。采用TUNEL细胞凋亡染色法测定大鼠附睾上皮凋亡细胞的凋亡情况,采用免疫组织化学测定附睾组织内AIF、核酸内切酶G的分布,蛋白免疫印迹检测AIF、核酸内切酶G及具有活性的已剪切的cl-caspase-3及cl-caspase-9的表达水平。结果:免疫组织化学结果显示,与对照组比较,砷中毒组大鼠附睾内AIF、核酸内切酶G蛋白阳性表达明显升高,差异有统计学意义;TUNEL法结果显示,与对照组比较,砷中毒组大鼠附睾的细胞凋亡水平较高,差异均有统计学意义;蛋白免疫印迹结果显示与对照组比较,砷中毒组大鼠附睾内AIF、核酸内切酶G、cl-caspase-3及cl-caspase-9蛋白表达水平均较高,差异有统计学意义。结论:慢性砷中毒时以AIF为主的非caspase依赖性凋亡途径和caspase介导的经典途径共同参与了大鼠附睾组织的损伤及凋亡。     

衰老大鼠睾丸生精细胞增殖凋亡及相关因素的变化

目的:观察衰老大鼠睾丸生精细胞增殖、凋亡及相关因素的变化。方法:D-半乳糖连续腹腔注射制作亚急性衰老的大鼠模型。SP免疫组织化学法观察睾丸生精细胞衰老过程中增殖细胞核抗原(PCNA)和端粒酶的表达,TUNEL法观察生精细胞的凋亡,原位杂交、Western印迹分析观察生精细胞p53基因的表达。结果:与正常大鼠相比,衰老大鼠睾丸PCNA阳性细胞率显著下降,端粒酶阳性细胞数明显减少,凋亡管数和凋亡阳性细胞率显著升高,p53 mRNA阳性细胞率和p53蛋白含量均有所升高。结论:衰老大鼠睾丸生精细胞增殖能力下降、凋亡增多,睾丸机能减退。     

谷胱甘肽对染锰大鼠生精细胞凋亡与增殖的影响

目的:研究谷胱甘肽(GSH)对染锰大鼠生精细胞凋亡与增殖的作用及机制。方法:雄性SD大鼠48只随机分为6组,各组给锰途径为腹腔注射。采用TUNEL法检测生精细胞凋亡指数(AI);免疫组织化学法检测生精细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达。结果:与空白对照组比较,GSH对照组和15mg/kg GSH组生精细胞AI与生精细胞PCNA增殖指数(PI)均无显著性差异;与各自对应的单纯染锰组比较,15mg/kg GSH组和30mg/kg GSH组生精细胞AI均显著降低而PI均显著升高;30mg/kg组与15mg/kg组比较,生精细胞AI显著升高而PI显著降低;各组大鼠生精细胞AI和PI呈负相关。结论:15mg/kg和30mg/kg氯化锰可诱发大鼠睾丸生精细胞凋亡,两者存在剂量-效应关系;各组大鼠睾丸生精细胞AI和PI呈显著负相关;GSH对锰诱发大鼠生精细胞凋亡具有拮抗作用;GSH可能拮抗锰对大鼠生精细胞增殖的抑制作用。     

过氧化物酶6在慢性砷中毒大鼠附睾的表达及意义

目的:研究过氧化物酶6(Prdx6)在慢性砷中毒大鼠附睾中的表达及意义,为砷中毒导致的男性不育提供理论依据。方法:健康清洁级雄性SD大鼠随机分为高(60 mg/L)、中(12 mg/L)、低(2.4 mg/L)剂量砷染毒组和对照(蒸馏水)组,采用经口自由饮用方式进行染毒,连续染毒6个月。采用免疫印迹及实时荧光定量PCR法检测Prdx6的表达变化及意义,透射电镜观察精子超微结构变化。结果:免疫印迹及实时荧光定量PCR结果显示,与对照组比较,各染毒组Prdx6的蛋白及mRNA表达水平均显著较低。透射电镜结果显示对照组精子结构正常,砷染毒各组精子尾部中段线粒体均出现了病理损害。结论:慢性砷中毒对大鼠附睾中Prdx6的表达有影响,引起精子超微结构改变,说明其与男性不育有一定的关系。     

锰诱导大鼠生精细胞凋亡过程中生殖激素和乳酸脱氢酶及PARP的作用

目的研究锰对大鼠体内生殖激素和乳酸脱氢酶(LDH)和多聚ADP核糖聚合酶(PARP)表达的影响,探讨它们在生精细胞凋亡过程中的作用。方法雄性SD大鼠48只,随机分为空白对照组,低剂量组和高剂量组,腹腔注射Mn Cl24周和6周,TUNEL法检测生精细胞凋亡,放射免疫测定血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)含量,化学比色测定血清和睾丸LDH含量。免疫组织化学法检测生精细胞PARP表达。结果各染锰组生精细胞凋亡指数、血清FSH、LH及LDH含量升高,血清T、睾丸LDH含量及PARP表达降低。结论锰可使大鼠T和睾丸LDH降低,FSH、LH和血清LDH活性升高,抑制大鼠生精细胞PARP表达,导致生精细胞凋亡。     

羊睾丸提取液对铅染毒小鼠睾丸生精细胞凋亡及超微结构的影响

目的:探讨羊睾丸提取液对铅染毒小鼠睾丸生精细胞凋亡及超微结构的影响.方法:雄性性成熟小鼠,随机分为对照组(蒸馏水灌胃),模型组(醋酸铅灌胃),给药组(醋酸铅灌胃+腹腔注射羊睾丸提取液),染毒2周.Tunel法观察睾丸生精细胞的凋亡,透射电镜观察生精细胞超微结构的变化. 结果:与对照组相比,模型组睾丸生精细胞凋亡指数明显增高,多数细胞胞质内出现空泡,核固缩,核膜结构模糊,线粒体数目减少、空泡化,溶酶体增多;与模型组相比,给药组睾丸生精细胞凋亡指数有所降低,细胞结构趋于正常,核膜结构清晰,线粒体数量增多.结论:羊睾丸提取液可抑制铅染毒小鼠睾丸生精细胞的凋亡,对精原细胞、精母细胞、精子细胞的超微结构具有显著的保护作用.     

葛根素减轻乙醇导致大鼠生精细胞的凋亡

目的 观察乙醇导致大鼠生精细胞的凋亡及葛根素的干预。方法 将大鼠30 只,随机均分为对照组、乙醇组及葛根素干预组。于实验第40天免疫组织化学法（SABC）检测左侧睾丸各组Bcl-2、Bax 蛋白在生精细胞的表达; RT-PCR检测右侧睾丸各组Bcl-2及Bax mRNA的表达;TUNEL 法检测生精细胞的凋亡。结果 醇组平均每个生精小管断面中Bcl-2 蛋白阳性细胞数和A值低于对照组(P<0.01),而平均每个生精小管断面中Bax 蛋白的阳性细胞数和A值高于对照组(P<0.01);乙醇组Bax mRNA表达较葛根素干预组及对照组强（P<0.05）,而Bcl-2 mRNA表达较葛根素干预组及对照组弱（P<0.05）;乙醇组每个生精小管横切面中的凋亡细胞数目高于对照组(P< 0.01),葛根素干预组显著缓解上述变化。结论 根素对乙醇导致的大鼠生精细胞凋亡有干预作用。     

SB203580对大鼠隐睾生精细胞凋亡的影响

目的:探讨SB203580对大鼠隐睾所致生精细胞凋亡过程中的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为隐睾组、隐睾 SB203580(p38MAPK抑制剂)组、隐睾 溶媒组、假手术组。复制单侧隐睾模型,术后分别腹腔内注射溶媒或SB203580。7 d后快速断颈椎处死,TUNEL原位末端标记法结合流式细胞术(FCM)检测各组右侧睾丸生精细胞凋亡,免疫组化观察各组右侧睾丸磷酸化p38MAPK蛋白表达的变化。结果:FCM及TUNEL法均显示隐睾 SB203580组生精细胞凋亡指数低于隐睾组和隐睾 溶媒组,同时磷酸化p38MAPK蛋白表达减少。结论:SB203580能降低p-p38MAPK蛋白表达并抑制热压诱导的生精细胞凋亡。     

血管内皮细胞生长因子及其受体2在慢性砷染毒大鼠睾丸中的表达及其意义*

目的：研究血管内皮细胞生长因子（ VEGF）及其受体2（ VEGFR2）在慢性砷中毒大鼠睾丸中的表达及意义。 方法：健康清洁级雄性SD大鼠随机分为高、中、低剂量砷染毒组和对照（ 蒸馏水）组,采用经口自由饮用方式 进行染毒,连续染毒6 个月。H-E 染色观察睾丸一般形态学变化,免疫荧光化学法对睾丸组织VEGF 和VEGFR2 的表达进行定位,采用实时荧光定量PCR法检测睾丸组织VEGF 和VEGFR2 的mRNA表达变化,流式细胞术观 察精子的凋亡率。结果：与对照组比较,中、高剂量砷组大鼠体质量明显降低,睾丸组织质量也明显降低,而低 剂量砷组大鼠体质量、睾丸质量、睾丸脏器系数差异无统计学意义。对照组睾丸结构正常,染砷组大鼠睾丸组织 上皮结构疏松,层次排列紊乱,层次逐渐减少,精原细胞出现空泡样改变,睾丸间质充血、渗出等,尤其中、高 剂量砷组有较明显的变化。与对照组比较,各染毒组VEGF 和VEGFR2 的mRNA表达水平均较低,砷染毒组大鼠 精子凋亡率较高,差异均有统计学意义。结论：慢性砷中毒时,VEGF 可能通过旁分泌- 自分泌的方式参与调控 大鼠睾丸的功能,VEGF 及其受体2 在砷中毒大鼠精子发生和发育过程中起重要作用。     

染锰大鼠生精细胞凋亡中caspase-3 mRNA、凋亡蛋白酶活化因子-1及多聚ADP核糖聚合酶的表达变化

目的:研究染锰诱导的大鼠生精细胞凋亡过程中,天冬氨酸特异性半胱氨酸酶-3(caspase-3)mRNA和凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、多聚ADP核糖聚合酶(PARP)的表达及其关系,探讨它们在生精细胞凋亡过程中的作用。方法:雄性SD大鼠,设立空白对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30 mg/kg MnCl_2)组。实验组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,TUNEL法检测生精细胞凋亡,原位杂交法和免疫组织化学法检测生精细胞caspase-3 mRNA、Apaf-1和PARP的表达。结果:与空白对照组比较,各染锰组生精细胞凋亡指数(AI)和caspase-3mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。染锰剂量相同,6周与4周组比较,以及染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,生精细胞AI和caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,Apaf-1和PARP阳性细胞率均显著降低。各组大鼠生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率呈正相关,与Apaf-1和PARP阳性细胞率呈负相关。结论:锰可影响大鼠生精细胞caspase-3 mRNA表达,促进Apaf-1和PARP分解,导致生精细胞凋亡,产生生殖毒性效应。     

DahlS高血压大鼠生精细胞凋亡及Bcl-2蛋白的表达

目的　为阐明高血压导致生精障碍的确切机制。方法　应用原位末端标记法 (TUNEL)、免疫组织化学、流式细胞检测及电镜等方法 ,对DahlS高血压大鼠生精细胞凋亡的定性、定位、定量及其相关蛋白Bcl 2的表达进行了研究。结果　实验组随高血压病程延长 ,血压升高 ,生精细胞凋亡率增高 ,15、17周龄明显高于对照组 (P <0 0 5 )。Bcl 2蛋白表达降低 ,15、17周龄与对照组相比差异显著 (P <0 0 5 )。随糖尿病病变加重 ,Bcl 2表达减少 ,而且 ,糖尿病组比对照组Bcl 2表达率低。随糖尿病病程进展和年龄增加 ,表达均呈增加趋势 ,而且 ,糖尿病组比对照组Bax表达率高。结论　高血压可导致凋亡抑制基因Bcl 2表达降低 ,从而使生精细胞凋亡增加 ,这可能是高血压导致生精障碍的机制之一     

高压氧对精索静脉曲张大鼠睾丸组织缺氧诱导因子1α、 脂质过氧化物、血管紧张素转化酶的影响及其作用机制*

目的：分析高压氧对精索静脉曲张大鼠睾丸组织缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、脂质过氧化物（LPO）、血管 紧张素转化酶（ACE）表达的影响及其机制。方法：将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和高压氧组;模 型组和高压氧组行精索静脉曲张手术造模,假手术组仅手术而不造模;假手术组和模型组大鼠手术或造模成功后 正常饲养,高压氧组采用高压氧进行干预治疗;取睾丸计重,行TUNEL法检测睾丸生精细胞凋亡;用免疫印迹 和实时荧光定量PCR法检测睾丸组织中HIF-1α、LPO、ACE及其mRNA表达;用ELISA 检测试剂盒测定睾丸组 织LPO、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、ACE表达水平。结果：高压氧组大鼠左侧、右侧和两侧 睾丸质量均明显高于模型组;高压氧组大鼠睾丸细胞凋亡率均明显低于模型组,睾丸组织LPO表达水平明显低于 模型组,而SOD、CAT、ACE表达水平均明显高于模型组;高压氧组大鼠睾丸组织HIF-1α、LPO蛋白和mRNA 表达均明显低于模型组,ACE蛋白和mRNA水平明显高于模型组。结论：高压氧对雄性SD大鼠精索静脉曲张干 预后可有效调节大鼠睾丸组织中HIF-1α、LPO和ACE的表达,进而减少睾丸细胞凋亡。     

染砷大鼠睾丸生精细胞凋亡的变化

目的观察不同剂量的三氧化二砷（As2O3）对成年大鼠生精细胞凋亡的影响。方法40只健康雄性SD大鼠随机分成4组，分别为0．375mg／kg、0．75mg／kg、1．5mg／kg3个染毒组和对照组，灌胃法连续给药16周后对各组大鼠进行睾丸脏器系数、精子头计数，并计算每日精子生成量（DSP）。采用甲基绿—派诺宁染色法和TUNEL原位细胞杂交方法检测大鼠生精细胞凋亡情况。结果①中剂量组（0．75mg／kg）和高剂量组（1．5mg／kg）睾丸精子头计数和DSP均低于对照组（P〈0．05）；②与对照组相比，中剂量组和高剂量组生精细胞凋亡指数（AI）均显著升高（P〈0．01）；③生精细胞凋亡指数与每日精子生成量呈负相关（r=-0．563，P〈0．01）。结论一定剂量的As2O3可通过促进生精细胞凋亡而导致精子生成量的减少，产生生殖毒性。     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠实验性隐睾生精细胞凋亡及Bax表达的影响

目的研究N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对大鼠实验性隐睾生精细胞凋亡及凋亡相关基因Bax表达的影响。方法手术建立大鼠单侧隐睾模型,实验分为隐睾组、隐睾 L-NAME组[术后腹腔注射溶于生理盐水的L-NAME 50 mg/(kg.d)]、隐睾 生理盐水组、假手术组,7 d后采用化学比色法检测睾丸组织NOS活性,流式细胞术(FCM)和原位缺口末端标记法(TUNEL)检测生精细胞凋亡,RT-PCR和免疫组织化学法检测Bax基因表达变化。结果隐睾组和隐睾 生理盐水组之间检测指标无明显差异;隐睾 L-NAME组隐睾凋亡细胞百分比和生精细胞凋亡指数均低于隐睾组及隐睾 生理盐水组,高于假手术组(P<0.05);Bax mRNA和蛋白表达水平隐睾组及隐睾 生理盐水组最高,假手术组次之,隐睾 L-NAME组最低。结论隐睾生精细胞Bax表达增加,L-NAME可通过下调Bax的表达抑制隐睾生精细胞凋亡。     

硝普钠和L-硝基-精氨酸甲酯对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的　观察硝普钠 (SNP)和L 硝基 精氨酸甲酯 (L NAME)对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。　方法雄性SD大鼠分为 4组 :分别于腹腔内注射SNP、L NAME、SNP +L NAME与生理盐水 ,每天 1次 ,共 12d。颈动脉放血处死动物。流式细胞术 (FCM)结合TUNEL法检测睾丸生精细胞的凋亡。　结果　FCM结合TUNEL法检测发现SNP组亚单倍体峰 (AP峰 )及凋亡指数 (AI)较生理盐水组明显增高 ,L NAME组AP峰及AI显著低于生理盐水组 (P<0 0 1)。SNP和L NAME混合注射时 ,AP峰及AI与生理盐水组无显著性差异 (P >0 0 5 )。　结论　SNP促进生精细胞的凋亡 ,L NAME抑制生精细胞的凋亡 ,其对生精细胞凋亡的调节可能是由一氧化氮 (NO)介导的。     

褪黑激素对小鼠睾丸生精细胞凋亡和睾丸间质细胞nNOS表达的影响

目的：观察外源性褪黑激素(MT)对睾丸生精细胞凋亡和nNOS表达的影响，探讨MT诱导生精细胞凋亡的可能机制。方法：20d和30d小鼠，应用化学发光法检测血清睾酮浓度，TUNEL测定生精细胞凋亡，免疫组化，SABC法观察nNOS在睾丸中的表达。结果：20d和30d实验组血清中睾酮水平明显下降，TUNEL阳性生精细胞数显著增多，TUNEL阳性生精细胞数与睾酮浓度呈负相关；20d实验小鼠中睾丸间质nNOS阳性细胞数与对照组相比明显减少，且与睾酮浓度呈正相关，而与TUNEL阳性生精细胞数呈负相关。结论：MT具有促进生精细胞凋亡的作用，与睾酮分泌受抑制有关；青春期前MT引起生精细胞凋亡可能还与nNOS表达有关。     

慢性酒精中毒大鼠海马神经元凋亡及caspase-8、AIF的表达升高

目的　观察慢性酒精中毒大鼠海马神经元凋亡及caspase-8、AIF蛋白表达情况,探讨慢性酒精中毒脑损伤可能的发病机制。方法　清洁级8周龄雄性SD大鼠45只,随机分为对照组和酒精组,采用逐步增加浓度自由饮方法建立慢性酒精中毒大鼠动物模型。应用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆功能,采用HE染色法观察海马神经元病理形态学改变,TUNEL法、免疫组化法检测凋亡神经元数量及caspase-8、AIF蛋白的表达。结果　酒精组可见海马神经元数目缺失及细胞变性和损伤,其凋亡神经元数和caspase-8、AIF蛋白表达阳性细胞数均高于对照组（p<0.01）。结论　慢性酒精中毒大鼠海马存在明显神经元凋亡,伴有caspase-8、AIF蛋白表达增加,通过胱冬酶(caspase)依赖性和非依赖性两种通路发生细胞凋亡可能是其病理基础之一。     

锰诱导大鼠生精细胞凋亡过程中半胱氨酸酶-3mRNA与增殖细胞核抗原表达变化

目的:研究氯化锰对生精细胞凋亡过程半胱氨酸酶3(caspase-3)mRNA和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨两者在生精细胞凋亡过程中的作用。方法:雄性SD大鼠随机分为空白对照组、低剂量(15 mg/kg MnCl_2)和高剂量(30mg/kg MnCl_2)组。MnCl_2组分别染锰4周和6周,空白对照组给予等容生理盐水,给药途径均为腹腔注射,TUNEL法检测睾丸生精细胞凋亡,原位杂交和免疫组织化学(SABC)检测生精细胞caspase-3 mRNA和PCNA和表达。结果:与空白对照组比较,各染锰组生精细胞凋亡指数(AI)均升高,caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,染锰4周:PCNA阳性细胞率显著降低,染锰6周反而升高。染锰剂量相同,6周与4周组比较,生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率、PCNA阳性细胞率均显著升高。染锰时间相同,高剂量组与低剂量组比较,生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率均显著升高,PCNA阳性细胞率显著降低。各组大鼠生精细胞AI与caspase-3 mRNA阳性细胞率呈正相关,与PCNA阳性细胞率呈负相关,而caspase-3 mRNA阳性细胞率与PCNA阳性细胞率呈负相关。结论:锰可诱导大鼠生精细胞caspase-3mRNA表达,促使生精细胞凋亡并且抑制细胞增殖,产生生殖毒性效应。     

亚慢性砷染毒对大鼠睾丸中水通道蛋白9及睾酮表达的影响

目的：研究亚慢性砷染毒对大鼠睾丸中水通道蛋白9（ AQP9）及睾酮表达的影响，为砷中毒导致的男性不 育提供理论依据。方法：雄性SD大鼠随机分为高、中、低剂量砷染毒组和对照（ 蒸馏水）组，采用经口自由饮用 方式进行染毒，连续染毒14 周。染毒结束后，取血和双侧睾丸，采用电感耦合等离子体发射光谱仪测定血浆及睾 丸中砷浓度，采用免疫组织化学法检测AQP9的表达变化， ELISA 检测血清中睾酮的浓度， H-E 染色观察睾丸组织 形态学改变。结果：与对照组比较，染砷组血浆和睾丸中有明显的砷积累。AQP9蛋白在睾丸组织中间质细胞表达 增强，中、高剂量组与对照组比较，差异有统计学意义。与对照组比较，低剂量组睾酮浓度下降，差异无统计学意义， 中、高剂量组与对照组比较，差异有统计学意义。染毒组大鼠生精上皮出现不同程度损害，睾丸间质充血、渗出等， 尤以中、高剂量组变化明显。结论：亚慢性砷中毒可以引起血浆及睾丸砷浓度增加，影响AQP9的表达，导致大鼠 睾丸组织病理学改变和睾酮分泌紊乱，对大鼠的睾丸组织和生殖功能造成损伤。     

N-硝基-L-精氨酸甲酯对大鼠隐睾生精细胞凋亡的影响

目的：研究N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)对实验性大鼠隐睾生精细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：手术建立大鼠单侧隐睾模型，术后分别注射L-NAME及生理盐水，7d后采用流式细胞术检测2组大鼠隐睾生精细胞凋亡，免疫组化法检测隐睾内Bcl-2和Bax基因表达变化。结果：实验组隐睾重量较对侧正常睾丸重量减轻的程度低于对照组，生精细胞凋亡百分比及Bax表达较对照组低，而Bcl-2表达较对照组高。结论：L-NAME可通过调控Bcl-2和Bax的表达抑制隐睾导致的生精细胞凋亡。