光敏化姜黄素对人肝癌细胞HepG2的增殖影响

目的：研究姜黄素的光敏化效应并探讨光敏化姜黄素对人肝癌细胞株HepG2细胞的增殖和凋亡的影响。方法：采用人肝癌细胞株HepG2进行研究。细胞用不同浓度的姜黄素（2.5μmol/L,5μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L,80μmol/L,160μmol/L）孵育2 h后,用0.4 J/cm2剂量的紫光照射,光照的功率为10 mW。利用MTT法测定不同浓度的姜黄素对HepG2细胞的抑制作用,观察其紫光光敏化效应。在选择的姜黄素剂量下,分别用不同剂量的紫光照射,检测能量密度改变后光敏化姜黄素对细胞的杀伤作用。最终选定在20μmol/L浓度下,姜黄素用0.2 J/cm2紫光照射其对细胞的杀伤作用。利用Hoechst33342染色从形态学上在观察光敏化姜黄素对HepG2细胞的促凋亡效应,采用流式细胞仪定量检测光敏化姜黄素的凋亡率。结果 ：姜黄素在紫光下具有光敏化效应,IC50从单独作用的92.49μmol/L降到27.06μmol/L,且这种效应在低浓度姜黄素低剂量的能量密度下更加明显。形态学和流式细胞仪检测到光敏化姜黄素的促凋亡效应,且凋亡率是同剂量姜黄素作用的3倍。结论：紫光照射可明显增强低剂量姜黄素对HepG2的细胞毒性,并可显著诱导细胞凋亡。     

PAR-2激动剂对肝癌细胞增殖及Ca2+水平的影响

目的： 研究PAR-2激动剂对人肝癌HepG2细胞增殖及细胞内Ca2+浓度（［Ca2+］c）的影响。方法: 培养人肝癌细胞HepG2, 分别利用PAR-2激动剂SLIGKV-NH2及反PAR-2激动肽VKGILS-NH2干预肝癌细胞生长,用Fura-2荧光法测定肝癌细胞内［Ca2+］c,用MTT法检测对肝癌细胞增殖能力的影响,流式细胞术（FCM）检测细胞周期改变情况,RT-PCR法检测cyclinD1 mRNA表达变化。结果: 50 μmol/L SLIGKV-NH2刺激HepG2细胞后,［Ca2+］c迅速短暂升高（P<0.01）;G0/G1期比例明显降低,S期和G2/M期细胞比例和细胞增殖指数(PI)明显提高（P<0.01）;cyclinD1 mRNA的表达显著增加（P<0.01）。SLIGKV-NH2在1-50 μmol/L时可以促进HepG2细胞增殖,呈剂量依赖性（P<0.01或P<0.05）。而VKGILS-NH2组与对照组相比差异无显著（P>0.05）。结论: PAR-2激动剂在体外能通过激活PAR-2,诱导HepG2细胞内［Ca2+］c升高,上调cyclinD1 mRNA的表达,加速HepG2细胞周期进程,促进DNA合成,促进肝癌细胞增殖。     

HIF-1α对食管癌Eca109细胞体内外侵袭转移的影响及其分子机制

目的:采用RNA干扰技术(RNAi)观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)对食管癌Eca109细胞及其裸鼠移植瘤侵袭转移的影响及其作用机制。方法:CoCl2模拟肿瘤低氧微环境,分别用RT-PCR和免疫细胞化学法检测体外低氧条件下Eca109细胞中HIF-1α、E-钙黏蛋白及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA及蛋白的表达。RT-PCR检测RNAi沉默HIF-1α对E-钙黏蛋白及MMP-2 mRNA表达的影响。通过细胞划痕试验和Transwell试验检测RNAi对Eca109细胞侵袭和转移能力的影响。建立Eca109细胞裸鼠移植瘤模型,观察HIF-1α对肿瘤生长及淋巴结转移的影响;采用Western blot检测各组移植瘤中HIF-1α、E-钙黏蛋白及MMP-2的表达,分析HIF-1α在离体和在体对肿瘤生长、侵袭及转移的影响。结果:低氧诱导Eca109细胞的HIF-1α蛋白表达升高,E-钙黏蛋白的mRNA及蛋白表达降低和MMP-2 mRNA及蛋白表达升高,但对HIF-1αmRNA无明显影响。用RNAi能有效沉默HIF-1α,并可逆转低氧导致的E-钙黏蛋白及MMP-2的降低及升高,使Eca109细胞迁移速度减慢,侵袭穿膜细胞数减少(P<0.05);在体内使移植瘤生长减缓,淋巴结转移率降低(P<0.05)。结论:HIF-1α在体内外通过影响E-钙黏蛋白和MMP-2表达,来影响食管癌Eca109细胞的生长、侵袭和转移。     

扶正解毒通络方对人肝癌HepG2 细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨扶正解毒通络方对人肝癌HepG2 细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:MTT 法观察细胞增殖能 力;RT鄄PCR 检测细胞内Bax 和Bcl鄄2 mRNA 水平;免疫印迹(Western blot)检测细胞中Bax、Bcl-2、活化的caspase-3、SIRT3、P53 及Fas 蛋白水平。结果:扶正解毒通络方能明显诱导减少HepG2 细胞内Bcl-2 基因转录,增加Bax 基因转录;扶正解毒通络方 能明显诱导减少HepG2 胞内Bcl-2 蛋白表达,增加Bax、活化的caspase-3、SIRT3、P53 及Fas 蛋白表达。结论:与正常对照组比 较,正常血清组人肝癌细胞HepG2 细胞内Bax、Bcl-2、活化的caspase-3、基因及蛋白表达水平无明显改变;与正常血清组比较, 扶正解毒通络方低、中和高剂量含药血清和阳性对照组HepG2 细胞内Bcl鄄2 基因转录减少,蛋白表达减少;Bax 基因转录增 加,蛋白表达增加,活化的caspase鄄3 蛋白表达增加。     

不同缺氧状态对人肝癌HepG2细胞侵袭和转移能力的影响

目的: 探讨不同缺氧状态对人肝癌HepG2细胞黏附、侵袭和转移能力的影响及其可能机制。方法: 不同浓度的低氧处理对数生长期的人肝癌HepG2细胞,采用MTT法、Transwell膜侵袭系统、免疫细胞化学方法、明胶酶谱分析和反转录PCR检测变异型白细胞分化抗原CD44v6、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、低氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异。结果: HepG2细胞经低氧处理后,细胞的基质黏附率、穿透基底膜与游走迁移的细胞数均增高,以3%氧浓度最为显著(P<0.05);3%和5%氧处理还可显著促进CD44v6的表达,增加MMP-2和MMP-9的表达,并可上调HIF-1α和VEGF。结论: 适度缺氧能增强人肝癌细胞的黏附、侵袭和转移能力,其机制可能与CD44v6、基质金属蛋白酶、HIF-1α和VEGF的表达改变有关。     

乙型肝炎病毒对HepG2细胞侵袭的影响

目的 研究HBV全长对HepG2细胞侵袭相关基因表达及活性的影响,探讨HBV在整体水平对HepG2细胞侵袭的影响.方法 采用定量PCR分析HBV对HepG2细胞MMP2、9和TIMP1-4基因转录的影响;通过明胶酶谱及反相明胶酶谱检测MMP2、MMP9及TIMPs的活性;应用体外侵袭小室法检测细胞的侵袭能力.结果 HBV的复制可以促进HepG2细胞MMP2、MMP9、TIMP1和TIMP3基因的转录,抑制TIMP4基因转录,增强HepG2细胞MMP2 、MMP9的活性并增强细胞中TIMP1、TIMP3功能,HBV稳定复制的细胞具有更强的体外侵袭能力.结论 HBV可影响HepG2细胞MMPs和TIMPs的基因转录、表达及功能,促进HepG2细胞的体外侵袭,这可能与HBV相关的HCC侵袭转移密切相关.     

SLeX对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨唾液酸化路易斯寡糖X(sialyl Lewis X,SLeX)在肝癌HepG2细胞中的表达及其对HepG2细胞迁移能力和侵袭能力的影响。方法:实时荧光定量PCR和Western blot法检测α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ(α1,3-fucosyltransferase Ⅶ,FUT7)在HepG2细胞和L-02细胞中的表达,Western blot及免疫细胞化学染色检测SLeX在HepG2细胞和L-02细胞中表达,应用Transwell小室检测SLeX单克隆抗体封闭后HepG2细胞侵袭和迁移能力的改变。结果:FUT7和SLeX在HepG2细胞中表达,而在L-02细胞中无表达;0.05、0.5和5 mg/L的SLeX单克隆抗体封闭后,HepG2细胞的迁移率逐渐下降,与对照组相比差异显著(P0.05),侵袭穿膜细胞数明显少于对照组(P0.05);SLeX单克隆抗体封闭组间两两比较迁移率与侵袭细胞数的差异均有统计学意义(P0.05)。结论:SLeX在肝癌HepG2细胞中高表达,与HepG2细胞迁移能力和侵袭能力密切相关。     

家蝇幼虫抗菌肽对肝癌HepG2细胞增殖、侵袭及迁移的影响?

为了更全面的探究家蝇抗菌肽的抗肿瘤作用,本文从肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移的角度研究家蝇幼虫抗菌肽对肿瘤细胞的抑制作用。通过针刺诱导家蝇三龄幼虫、低温离心、固相萃取后冻干获取抗菌肽粗提物,将所获抗菌肽调整至不同浓度进行CCK8细胞增殖实验。并通过细胞划痕实验和细胞侵袭实验判断家蝇抗菌肽对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响。实验结果显示家蝇抗菌肽能够明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖,且作用效果与浓度呈剂量依赖特点。低浓度的抗菌肽（60μg／mL）能有效抑制肝癌HepG2细胞迁移及侵袭。     

葛根素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡与迁移的影响

目的 探讨葛根素对肝癌HepG2细胞增殖、凋亡与迁移的影响。方法 体外培养人肝癌细胞HepG2,将其分为对照组(DMSO)、10、20、40μmol/L葛根素组。各组细胞以不同浓度药物处理48h后,MTT实验与平板克隆实验检测HepG2细胞增殖能力变化;流式细胞术检测HepG2细胞的凋亡情况;Transwell实验检测HepG2细胞迁移能力变化;Western blot方法检测葛根素对HepG2细胞TGF-β1、Smad3、基质金属蛋白酶2/9(matrix metalloproteinase2/9, MMP2/9)的影响。结果 与对照组比较,不同浓度葛根素均能抑制HepG2细胞增殖与迁移能力,并诱导凋亡（P<0.05）。Western blot结果显示,葛根素能够降低HepG2细胞中TGF-β1、Smad3与MMP2/9的表达（P<0.05）。结论 葛根素抑制HepG2细胞增殖与迁移能力,并诱导凋亡。     

miR-181b对肝癌HepG2细胞增殖以及Bcl-2和SP1蛋白表达的影响

目的: 研究miR-181b对人肝癌G2细胞(HepG2)中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和转录因子SP1蛋白及mRNA表达的调节作用,探讨miR-181b对HepG2细胞增殖的影响。方法: 用人工合成的miR-181b相应的双链互补DNA片段,插入miRNASelect^TM pEGP-miR载体中,经测序鉴定后克隆microRNA的高表达质粒;用脂质体将miR-181b高表达质粒转染进HepG2细胞,经嘌呤霉素筛选获得阳性克隆。用RT-PCR技术和Western blotting方法分别检测该细胞系中Bcl-2和SP1的mRNA和蛋白表达情况。用MTT法检测HepG2细胞增殖的变化情况。结果: Western blotting结果显示miR-181b能够减少Bcl-2和SP1蛋白质的表达,RT-PCR分析显示Bcl-2和SP1 mRNA表达减少。MTT显示转染后细胞的生长速率比未转染的细胞明显减慢。 结论: miR-181b抑制HepG2肝癌细胞增殖, 提示可能与其下调Bcl-2和SP1 的表达有关。     

ITIH4基因沉默对人肝癌细胞HepG2增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默间-α-胰蛋白酶抑制剂重链H4(inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4,ITIH4)基因对人肝癌细胞系HepG2增殖、迁移及侵袭的影响.方法:将4个ITIH4基因沉默载体分别转染HepG2细胞,用2 mg/L嘌呤霉素筛选获得稳定表达细胞株.Western印迹评价沉默效率,并选择效率最高的细胞株(si-ITIH4)用于后续实验.转染无意义序列的细胞株(si-Control)作为对照组.分别用细胞计数及CCK-8细胞计数试剂盒评价两组细胞增殖.用Transwell小室评价两组细胞的迁移及侵袭.结果:成功获得ITIH4基因沉默的HepG2细胞株si-ITIH4,与si-Control组相比,si-ITIH4组沉默效率达到86%.与si-Control组相比,si-ITIH4组细胞增殖显著降低、细胞迁移及侵袭均显著减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论:ITIH4基因沉默可显著抑制HepG2的增殖、迁移及侵袭,提示其可能是参与肝细胞癌发生发展的重要基因之一.     

Inhibition of ecto-ATPase activity by curcumin in hepatocellular carcinoma HepG2 cells

Effects of curcumin, a major constituent of turmeric, on ecto-nucleotidases have not been clarified. Here, we investigated whether curcumin affects ecto-nucleotidase activities in human hepatocellular carcinoma HepG2 cells. In the cells, high levels of Mg²⁺-dependent activity of ecto-nucleotidases were observed in the presence of 1 mM adenosine triphosphate (ATP). The activity was inhibited by ecto-ATPase inhibitors such as suramin, ZnCl₂ and 4,4′-diisothiocyanatostilbene-2,2′-disulfonic acid. On the other hand, the activity was significantly decreased at alkaline pH (pH 9) and was not inhibited by levamisole, an inhibitor of alkaline phosphatase. In the presence of ATP, curcumin inhibited the activity in a concentration-dependent manner (IC₅₀ = 6.2 μM). In contrast, curcumin had no effects on ecto-nucleotidase activity in the presence of ADP (1 mM) or AMP (1 mM). The K _m value for ATP hydrolysis of curcumin-sensitive ecto-ATPase was similar to the value of NTPDase2, an isoform of ecto-nucleoside triphosphate diphosphohydrolase. These results suggest that curcumin is a potent inhibitor of ecto-ATPase and may affect extracellular ATP-dependent responses.     

Runx3对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭的影响

目的探讨siRNA干扰Runx3对人肝癌Hep G2细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法以人肝癌Hep G2细胞为研究对象,构建Runx3-siRNA,转染入细胞。将细胞分为对照组、脂质体组、NC-siRNA组和Runx3-siRNA组。用RT-PCR法检测Runx3 mRNA表达,用Western blot检测Runx3蛋白表达。用MTT法、流式细胞法和Transwell小室法观察Runx3对Hep G2细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。结果 Runx3-siRNA可抑制Hep G2细胞的增殖(P0.05);Runx3-siRNA可促进Hep G2细胞凋亡(P0.05);Runx3-siRNA可抑制Hep G2细胞的侵袭(P0.05)。结论Runx3基因在肝癌的发生发展中发挥一定的促进作用,有可能成为肝癌治疗的新靶点。     

木犀草素对人肝癌HepG2细胞株侵袭、迁移和黏附能力的影响

目的:探讨木犀草素对人肝癌HepG2细胞株侵袭、迁移和黏附能力的影响及其作用机制。方法:采用不同浓度木犀草素处理体外培养的人肝癌HepG2细胞株,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,黏附实验评价细胞的黏附能力,Western blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snai1蛋白的表达。结果:木犀草素可明显降低肝癌HepG2细胞的体外侵袭、迁移及黏附能力(P0.01),且在一定浓度范围内呈明显量效关系。木犀草素处理肝癌细胞后,上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达明显上调,间质细胞标志蛋白N-cadherin和vimentin以及转录因子Snai1表达均明显下调,木犀草素对以上蛋白的调节呈明显浓度依赖性。结论:木犀草素体外具有抑制肝癌HepG2细胞株侵袭、迁移和黏附的作用,其作用机制可能与调控上皮-间质转化有关。     

三氧化二砷对肝癌细胞HepG2迁移、侵袭和凋亡的影响

本文旨在探究三氧化二砷(As2O3)对肝癌细胞HepG2作用的最佳浓度,以及此浓度As2O3对HepG2细胞迁移、侵袭和凋亡的影响。本研究采用CCK-8法检验0、1、2、4、8、16、32μmol/L As2O3处理后HepG2细胞活力,计算半抑制浓度(IC50),并且观察IC50浓度As2O3作用12、24、48 h后HepG2细胞形态变化。通过伤口愈合实验和Transwell侵袭实验验证As2O3对细胞迁移侵袭能力的影响。Western blot和qRT-PCR实验检测As2O3对细胞迁移、侵袭及凋亡相关蛋白和基因表达水平的影响。结果显示,与对照组相比,HepG2细胞活力随As2O3处理浓度的升高而降低,呈现剂量依懒性,其IC50为7.3μmol/L;8μmol/L As2O3处理24 h后,HepG2细胞发生明显凋亡,且其迁移和侵袭能力显著降低;此外,细胞中RhoA、Cdc42、Rac1、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平下调,抑凋亡基因Bcl-2的蛋白和mRNA表达水平显著下调,而促凋亡基因Bax、Caspase-3的蛋白和mRNA表达水平显著上调。以上结果说明一定浓度的As2O3能够抑制肝癌细胞迁移和侵袭,促进肝癌细胞凋亡。     

Peroxisomal trans-2-enoyl-CoA inhibits proliferation,migration and invasion of hepatocellular carcinoma cells

ObjectivesPeroxisomal trans-2-enoyl-CoA reductase (PECR) encodes proteins related to fatty acid metabolism and synthesis. It has been confirmed that PECR has decreased expression in colon cancer and breast cancer, while the role of PECR in liver cancer is unknown. We aimed to study the role and mechanism of PECR in the genesis and development of liver cancer.MethodsIn this study, the expression of PECR was queried in the Cancer Genome Atlas Database and Western Blotting and RT-PCR experiments were carried out in paired liver cancer tissues to detect the expression of PECR. Functional tests were evaluated by cell count kit-8 (CCK-8), Flow cytometry, wound healing assay, Transwell, migration. In vivo study, we constructed a nude mouse tumorigenic model to observe the effect of PECR on the proliferation of liver cancer. And the tumor body of the mouse was taken out for histochemistry (IHC). Multiple Cox regression was used to analyze the correlation between PECR and Clinicopathology.ResultsWe confirmed that the overexpression of PECR inhibited the proliferation, migration and invasion of hepatocellular carcinoma and promoted the apoptosis of hepatocellular carcinoma. The low expression group of PECR promoted the proliferation and metastasis of liver cancer. In vivo, overexpression of PECR inhibits the proliferation of mouse tumors. In addition, the mechanism study shows that PECR may indirectly affect the proliferation of hepatocellular carcinoma cells through ERK pathway.ConclusionIn general, PECR may be a new diagnostic marker and a potential therapeutic target for hepatocellular carcinoma.     

外源性层黏连蛋白在姜黄素对人肝癌HepG-2细胞生长抑制作用中的影响

目的 探讨在外源性层黏连蛋白（LN）与其受体结合下,姜黄素对人肝癌HepG-2细胞生长、凋亡的影响。 方法 实验分为对照组、LN组（20μg/L LN）、姜黄素组（40μmol/L 姜黄素）、联合组（20μg/L LN+40μmol/L姜黄素）。采用酸性磷酸酶法(APA)、流式细胞术（FCM）和Western blotting 法等探讨在外源性LN与其受体结合下,姜黄素对人肝癌HepG-2细胞生长、细胞凋亡率、线粒体膜电位、细胞增殖相关蛋白α-蛋白激酶（α-PKC）及细胞凋亡相关蛋白人多聚ADP核糖聚合酶（PARP）、Caspase-3、Bcl-2和p53表达的影响。 结果 LN组与对照组相比,细胞存活率增加。姜黄素组与联合组能显著抑制人肝癌HepG-2细胞的增殖,并呈时间依赖性。姜黄素组与联合组作用48h时,倒置显微镜下,细胞数量明显减少,皱缩变圆,大部分细胞悬浮;中晚期凋亡和坏死细胞比率（%）分别为97.04±1.50,98.02±1.35;细胞内钙离子浓度升高;线粒体膜电位下降;增殖相关蛋白α-PKC含量减少;凋亡相关蛋白PARP出现剪切带,Caspase-3表达下调,p53表达上调,Bcl-2表达无明显变化。 结论 在外源性层黏连蛋白与其受体结合下,姜黄素与人肝癌HepG-2细胞作用后抑制生长并诱导细胞发生凋亡;显示出姜黄素抗肿瘤作用稳定,其机制可能与上调p53,下调α-PKC有关。     

PHLDA2对肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响

目的 探讨血小板白细胞C激酶底物同源性样结构域蛋白家族A成员2（PHLDA2）在肝癌中的表达及对肝癌细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响。方法 在线数据库基因表达谱数据动态分析（GEPIA）PHLDA2在369例肝癌组织和160例癌旁组织中的表达差异以及其表达水平对肝癌患者总体生存率的影响。包装PHLDA2敲减慢病毒。细胞计数试剂盒-8（CCK-8）和集落形成实验检测细胞增殖,Transwell法检测细胞侵袭和迁移,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blotting检测Bax和cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果 PHLDA2在肝癌组织中高表达,高表达的PHLDA2降低肝癌患者的总体生存率;敲低PHLDA2可以抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力,促进肝癌细胞凋亡。结论 PHLDA2可促进肝癌的发生发展,具有肿瘤促进因子的功能。     

MIB2对HepG2肝癌细胞恶性生长的影响

目的：探讨Mindbomb E3泛素蛋白连接酶2（MIB2）对HepG2肝癌细胞恶性生长的影响,并分析其可能机制。方法：以HepG2肝癌细胞为研究对象,首先筛选过表达MIB2稳定株,利用细胞软琼脂克隆实验观察集落形成情况;使用炎性细胞因子TNF-α和RNA病毒SEV处理MIB2过表达稳定株和阴性对照4 h,免疫印迹法检测Notch1的表达水平;同时收取细胞培养上清,ELISA检测IL-6及TNF-α的分泌情况。其次通过小干扰RNA(siRNA)转染HepG2细胞,48 h后通过免疫印迹法验证MIB2敲低情况;同样使用TNF-α和SEV处理4 h,收取细胞培养上清,ELISA检测IL-6及TNF-α的分泌情况。结果：过表达MIB2对HepG2细胞的克隆形成有明显的抑制作用;过表达MIB2导致HepG2细胞IL-6本底水平的分泌和TNF-α及SEV诱导的分泌均下降,在上述各条件下均未检测到TNF-α的分泌,Notch1表达水平无显著变化。MIB2敲低后,HepG2细胞IL-6本底水平的分泌和TNF-α及SEV诱导的分泌均增强,反向验证上述效应。结论：MIB2能够明显抑制肝癌细胞的恶性生长,该效应可能和IL-6的表达下降有关。