miR-187靶向S100A4抑制胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、迁移并诱导细胞凋亡

目的探讨miR-187对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及其机制。方法将体外培养的U251细胞分为Con组(未处理)、NC组(转染miR-NC)、miR-187组(转染miR-187 mimics)。采用实时定量PCR检测miR-187的表达,MTT法、Transwell小室实验和流式细胞仪分别检测细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡,实时定量PCR和Western blot检测S100A4 mRNA和蛋白的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-187和S100A4的靶向关系。结果与Con组相比,miR-187组细胞中miR-187表达水平和细胞凋亡率均明显升高,而细胞增殖活性、侵袭细胞数、迁移细胞数和S100A4 mRNA、S100A4蛋白的表达水平均明显降低(P0.05);而miR-NC组与Con组相比无显著性差异(P0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实S100A4是miR-187的靶基因。结论 miR-187通过靶向S100A4抑制U251细胞增殖、迁移、侵袭并诱导细胞凋亡。     

miR-708-5p通过靶向URGCP抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭、转移的研究

目的 探讨miR-708-5p对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与上调基因-4(upregulated gene-4/upregulator of cell proliferation,URG4/URGCP)的靶向关系.方法 选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据A549细胞转染物质的不同,分为Control组(未进行任何处理),NC组(转染随机序列RNA Oligo),miR-708-5p组(转染miR-708-5p mimics).MTT检测增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell小室实验检测侵袭能力,划痕实验检测迁移能力,Western blot检测URGCP表达水平;实时荧光定量PCR检测miR-708-5p、URGCP基因mRNA表达水平;荧光素酶实验验证miR-708-5p与URGCP的靶向关系.结果 与HLF-1细胞株相比,肺癌细胞株A549细胞miR-708-5p表达水平降低,URGCP-mRNA表达升高(P<0.05),同时,URGCP蛋白水平升高.转染72h后,与Control、NC组比较,miR-708-5p组细胞URGCP基因mRNA明显降低,URGCP蛋白表达量明显降低(P均<0.01).miR-708-5p组细胞增殖、迁移和侵袭能力明显低于Control、NC组(P<0.05).与WT-URGCP组相比,miR-708-5p+WT-URGCP组细胞荧光素酶活性明显降低(P<0.01).结论 miR-708-5p在非小细胞肺癌A549细胞中低表达,过表达miR-708-5p可抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭,机制可能与负性调控URGCP有关.     

miR-98-5p通过降低STAT3水平促进A549细胞凋亡并抑制其侵袭和迁移

目的研究微小RNA-98-5p (miR-98-5p)对肺癌A549细胞生长的影响及机制。方法实时定量PCR检测正常支气管上皮细胞HBE细胞和非小细胞肺癌来源的细胞(A549细胞、H1299细胞和H460细胞)中miR-98-5p的水平,后续选择miR-98-5p水平最低的A549细胞进行实验。CCK-8法检测miR-98-5p模拟物(miR-98-5p mimic)及miR-98-5p抑制物(anti-miR-98-5p)对A549细胞增殖的影响,流式细胞术检测miR-98-5p对A549细胞的凋亡的影响,商品化试剂盒检测胱天蛋白酶3(caspase-3)和caspase-9的活性,TranswellTM小室实验检测miR-98-5p对A549细胞侵袭和迁移的影响,实时定量PCR检测miR-98-5p对A549细胞信号转导子与转录激活子3(STAT3) mRNA水平的影响,Western blot法检测miR-98-5p对A549细胞STAT3蛋白水平的影响。结果与HBE细胞相比,A549细胞、H1299细胞和H460细胞中miR-98-5p的表达水平降低。上调A549细胞miR-98-5p水平后,能够显著抑制A549细胞的增殖、促进细胞凋亡,并抑制细胞侵袭和迁移,同时,miR-98-5p可以显著降低STAT3的表达。结论 miR-98-5p通过降低STAT3水平促进A549细胞凋亡,并抑制其增殖、侵袭和迁移。     

miR-873-5p通过靶向自噬相关基因Beclin1抑制肺癌细胞进展和抗血管生成的机制

目的 探讨微小RNA(miRNA)-873-5p通过靶向自噬相关基因Beclin1抑制肺腺细胞进展和抗血管生成的机制研究。方法 通过双荧光素酶报告验证miR-873-5p靶向Beclin1。将人肺癌细胞系A549随机分为4组：对照组、Mimic组、Mimic+Beclin1组和Beclin1组。通过质粒转染技术过表达miR-873-5p以及Beclin1。实时荧光定量PCR(q PCR)和Western blot检测RNA或蛋白的表达水平。分别通过CCK-8、克隆形成实验和流式细胞术检测细胞活力、增殖和凋亡，细胞划痕实验、Transwell实验和管生成实验检测各组的细胞迁移、侵袭和血管生成能力。结果 MiR-873-5p直接靶向Beclin1。过表达miR-873-5p抑制Beclin1 mRNA和蛋白的表达水平，过表达Beclin1显著逆转miR-873-5p对Beclin1的抑制作用。Mimic组的细胞活力和细胞增殖能力显著低于对照组，凋亡率高于对照组（P<0.05）,Beclin1组的细胞活力和细胞增殖能力显著高于对照组，细胞凋亡率低于对照组（P<0.05），并且Mi...     

宫颈癌组织miR-574-5p的表达及其下调后对宫颈癌SiHa细胞的影响

目的探讨宫颈癌患者组织中miR-574-5p的表达及其下调时对宫颈癌Si Ha细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法用实时荧光定量PCR测定80例宫颈癌组织中miR-574-5p水平。将miR-574-5p抑制物转染宫颈癌Si Ha细胞,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Tanswell迁移实验检测细胞侵袭能力。结果宫颈癌组织中miR-574-5p相对表达水平高于正常宫颈组织(P0.05);高表达的miR-574-5p与肿块大小、临床分期、病理分级和淋巴结转移有关(P0.05);转染miR-574-5p抑制物组与空白组及阴性对照组相比,Si Ha细胞增殖能力下降(P0.05);细胞凋亡率明显增加(P0.05);转染后细胞穿膜能力明显减弱(P0.05)。结论 miR-574-5p的高表达与宫颈癌的进展有关,下调miR-574-5p的表达抑制了宫颈癌Si Ha细胞的增殖和迁移,促进其凋亡,有望成为宫颈癌基因治疗的靶点。     

miR-646高表达抑制EGFR/Akt通路及肺癌细胞增殖扩散的研究

目的 探讨微小RNA(microRNA,miR)-646对EGFR/Akt通路的作用及对肺癌A549细胞增殖扩散的影响及相关的作用机制.方法 利用Lipo2000将miR-646转染到肺癌A549细胞中,采用实时荧光定量PCR(real time PCR,RT-PCR)法检测转染后各组细胞中miR-646的表达;CCK-8法检测细胞增殖;划痕和Transwell小室分别检测细胞的迁移和侵袭能力;Western blotting法检测EGFR/Akt通路中各蛋白的变化水平.结果 RT-PCR结果显示,转染miR-646组其miR-646表达水平显著高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05),A549细胞转染miR-646后,细胞增殖和扩散能力均显著降低(P＜0.05);Western blotting结果显示,转染miR-646组中p-EGFR和p-Akt的蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05).结论 miR-646可显著降低肺癌A549细胞中p-EGFR、p-Akt的蛋白水平,进而抑制细胞的增殖和扩散能力.     

miR-195-5p表达上调抑制肺癌细胞系A549的迁移和侵袭

目的探讨miR-195-5p对肺癌细胞系A549细胞迁移和侵袭的影响及其机制。方法实时荧光定量PCR检测肺癌组织及肺癌细胞系中miR-195-5p的表达;通过脂质体介导将miR-195-5p模拟物作用于A549细胞,用Transwell法检测细胞迁移和侵袭; Western blot检测细胞内上皮间质转化标志物及ZEB1的表达。结果相对于癌旁组织及人正常肺上皮细胞,miR-195-5p在肺癌组织及肺癌细胞系中低表达(P0. 001);过表达miR-195-5p可显著抑制A549细胞的迁移和侵袭(P0. 001),伴随E-cadherin蛋白表达的上调,N-cadherin和vimentin蛋白表达的下调(P0. 01);过表达miR-195-5p可抑制A549细胞ZEB1的表达(P0. 001)。结论 miR-195-5p可能通过下调ZEB1的表达,抑制肺癌细胞迁移和侵袭。     

miR-202-5p靶向结合TSPAN12抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为

目的 探讨miR-202-5p调控胶质瘤细胞恶性生物学行为的潜在分子机制。方法 应用实时定量PCR实验检测miR-202-5p在人脑胶质瘤U87MG细胞中的内源性表达;实时定量PCR实验和Western blot实验用于检测TSPAN12在人脑胶质瘤U87MG细胞的内源性表达;应用CCK-8、transwell、流式细胞术检测过表达miR-202-5p或沉默TSPAN12对U87MG细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响;应用双荧光素酶报告基因分析系统检测miR-202-5p和TSPAN12的结合作用。结果 miR-202-5p在U87MG细胞中低表达,TSPAN12在U87MG细胞中高表达。过表达miR-202-5p或沉默TSPAN12显著抑制U87MG细胞的增殖、迁移、侵袭,促进细胞凋亡。miR-202-5p靶向结合TSPAN12 mRNA的3’UTR。结论 miR-202-5p通过靶向结合TSPAN12抑制胶质瘤细胞的恶性生物学行为。     

miR-195靶向调控CHEK1对非小细胞肺癌细胞增殖、转移及侵袭的作用

目的研究miR-195靶向调控细胞周期检测点激酶1(CHEK1)对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、侵袭和转移能力的影响。方法选取非小细胞肺癌A549、H1299、H197细胞株为研究对象,分别转染miR-195及RNA阴性对照序列。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-195的表达水平; MTT检测转染miR-195对肿瘤细胞分裂增殖能力的影响; Transwell侵袭实验分析miR-195对细胞侵袭能力的作用;细胞划痕实验检测miR-195对细胞迁移能力的作用;流式细胞仪检测并评价转染miR-195对肿瘤细胞分裂周期的影响; Western blot探究miR-195对肿瘤细胞CHEK1表达的调节;采用Spearman相关分析法分析miR-195及CHEK1表达的相关性。结果 MTT实验表明高表达miR-195可明显抑制肺癌A549、H1299、H1975细胞的体外增殖能力; Transwell侵袭实验结果提示转染miR-195可导致肺癌A549、H1299、H1975细胞侵袭能力明显降低;流式细胞术结果表明,转染miR-195后A549、H1299、H1975细胞系的G1和G2期细胞增加,S期细胞减少;划痕实验结果表明,转染miR-195可以抑制细胞的迁移能力;Western blot结果显示,转染miR-195后A549、H1299、H1975细胞中CHEK1蛋白水平显著降低,上述差异均具有统计学意义(P 0. 05)。Spearman相关分析显示细胞miR-195 mRNA水平与CHEK1蛋白含量呈负相关(r=-0. 464 8,P=0. 00)。结论miR-195可靶向调控CHEK1抑制非小细胞肺癌细胞增殖、转移及侵袭。     

miR-342对胶质瘤细胞增殖,迁移侵袭及凋亡的影响

目的研究miR-342的表达变化对胶质瘤细胞生物学行为的影响。方法应用real-time PCR方法检测miR-342的内源性表达。CCK-8检测细胞增殖,Transwell法检测细胞的迁移侵袭,流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果miR-342在胶质瘤细胞中表达水平较正常脑组织低;过表达miR-342能够抑制U87胶质瘤细胞的增殖、迁移侵袭,促进凋亡;相反,表达沉默miR-342能够促进U251胶质瘤细胞增殖、迁移侵袭,并抑制细胞凋亡(P0.05)。结论miR-342能够调控胶质瘤细胞的增殖、迁移侵袭,起抑癌基因的作用。