海马脑源性神经营养因子前体在社会隔离所致小鼠认知障碍中的作用

目的 探讨海马脑源性神经营养因子前体(proBDNF)在社会隔离所致小鼠认知障碍中的作用.方法 30只4周龄C57BL/6 J雄性小鼠随机分成正常群居组(GH,n=15)和社会隔离组(SI,n=15).各组于相同的环境饲养,GH组5只/笼,SI组1只/笼.采用新旧事物识别和新旧位置识别实验检测小鼠认知功能.Real-t...     

三七总皂苷对脂多糖诱导小鼠抑郁样行为及脑内小胶质细胞表达的影响

目的探讨三七总皂苷(PNS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠抑郁样行为及脑内小胶质细胞活化的影响。方法 24只雄性昆明小鼠随机分为溶媒对照(NS)组、LPS组、三七总皂苷预处理(PNS+LPS)组,采用新奇环境抑制摄食实验、糖水偏好实验、悬尾实验、强迫游泳实验观察小鼠的抑郁样行为;采用免疫组织化学法检测海马、杏仁核小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白分子1(IBA-1)的表达变化。结果 LPS导致小鼠出现抑郁样行为,包括新奇环境摄食潜伏期延长(P<0.05),糖水偏好百分比下降(P<0.05),悬尾不动时间延长(P<0.05),强迫游泳不动时间增加(P<0.01),PNS干预可逆转上述抑郁行为表现(P<0.05);LPS导致小鼠海马和杏仁核IBA-1阳性细胞数目显著增多(P<0.0001),PNS预处理能明显减少IBA-1的阳性细胞数(P<0.05)。结论三七总皂苷能有效缓解LPS诱导的小鼠抑郁行为,其机制可能与抑制脑内小胶质细胞活化有关。     

丰富环境通过抑制NOD样受体蛋白3炎性小体活化缓解脂多糖小鼠的认知障碍

目的探讨丰富环境(EE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠认知功能障碍的影响及其可能机制。方法36只3周龄昆明小鼠进行8周的EE刺激或者标准环境(SE)饲养后分为以下3组:标准环境+生理盐水(SE+NS)组、标准环境+脂多糖(SE+LPS)组及丰富环境+脂多糖(EE+LPS)组。采用旷场实验检测小鼠的活动度;新旧事物识别实验检测小鼠认知功能;免疫组织化学方法检测小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白分子1(IBA1)表达;Western blotting方法检测海马组织小胶质细胞激活标记物CD68及NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein3,NLRP3)炎性小体相关蛋白的表达。结果旷场实验中,各组小鼠穿越的总格数无明显差异。在新旧事物识别实验中,与SE+NS组相比,SE+LPS组新事物辨别指数明显下降(P<0.05);与SE+NS组相比,小胶质细胞标记物IBA1表达上调(P<0.05);SE+LPS组海马CD68及NLRP3炎性小体相关蛋白的表达明显上调(P<0.05);而丰富环境可以逆转上述改变(P<0.05)。结论丰富环境可缓解脂多糖诱导的认知功能损伤,其机制可能与抑制海马小胶质细胞激活及NLRP3炎性小体的产生有关。     

丰富环境对脓毒症相关性小鼠认知功能障碍的影响

目的:探讨幼年期丰富环境(EE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠认知功能障碍及海马区小胶质细胞活化的影响。方法:36只幼年雌性昆明小鼠随机分为对照组(Control)、脂多糖(LPS)组、丰富环境+脂多糖组(EE+LPS)。给予小鼠单次腹腔注射LPS(O.83 mg/kg)构建脓毒症小鼠模型.EE+LPS组小鼠在注射LPS前给予8周的丰富环境干预。新旧事物识别实验检测小鼠认识功能,免疫组织化学法检测小鼠海马区lba-1的表达,Western Blot检测CD68和IL-1β的表达。结果:与Control组相比,LPS组小鼠新事物辨别指数明显下降;与LPS组相比,EE+LPS组小鼠新事物辨别指数明显增加。LPS可诱导小鼠海马区小胶质细胞活化,表现为Iba-1阳性细胞数目增加,CD68和IL-1β的上调;而丰富环境干预可明显抑制小胶质细胞活化,表现为lba-1阳性细胞数目减少,CD68和IL-1β表达下调。结论:丰富环境可能通过抑制海马区小胶质细胞的激活从而改善LPS诱导的小鼠认知功能障碍。     

肠易激综合征内脏痛大鼠海马胶质细胞炎症反应的相关研究

目的 探讨肠易激综合征（IBS）内脏痛模型大鼠行为学和海马组织内炎症改变。方法 SD大鼠随机分为2组，即正常对照组（10只）、IBS内脏痛模型组（10只）。采用母婴分离、乙酸灌肠、卵清白蛋白腹腔注射等复合方法制备动物模型；采旷场实验评估各组大鼠的情绪心理行为；采用腹壁撤退反应(AWR)评估大鼠内脏敏感性；HE染色观察结肠黏膜组织病理改变；酶联免疫吸附法(ELISA)检测海马区IL-6、TNF-α，血清sIgE、IFN-γ、IL-4的变化；应用免疫组织化学法检测大鼠脑海马区小胶质细胞特异性标记物OX-42、星形胶质细胞特异性标记物GFAP以及P物质（SP）的表达情况。结果 相比于正常对照组，IBS内脏痛模型组大鼠行为学症状明显（P<0.01），在60、40、20 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)压力下AWR评分（大鼠内脏敏感性）明显上升（P<0.05），结肠组织黏膜损伤加重，海马组织内IL-6、TNF-α、SP、OX-42、GFAP均表达升高（P<0.01）。结论 IBS内脏痛大鼠同时存在海马区神经胶质细胞炎症反应加重和情绪行为活动增强。     

吡格列酮对异氟醚麻醉引起的老年小鼠认知功能损伤的影响*

 目的：研究高选择性的过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂吡格列酮（Pi）对异氟醚引起的老年小鼠认知功能障碍和脑内炎症细胞因子的影响。方法：136只11个月大的雄性C57BL/6J 小鼠随机分成5组：对照组（Con）、异氟醚组（Iso）、吡格列酮（10 mg/kg）+异氟醚组（Pi10+Iso）、吡格列酮（20 mg/kg）+异氟醚组（Pi20+Iso）和单纯吡格列酮（20 mg/kg）组（Pi20）。各异氟醚处理组的小鼠吸入混合1.4%异氟醚的氧气2 h;Con和Pi20组的小鼠仅吸入氧气2 h。吡格列酮溶于1%的羧甲基纤维素钠（CMC）,在小鼠吸入异氟醚或单纯氧气前2 h,按10 mg/kg或20 mg/kg灌胃,Con组和Iso组小鼠仅给予相同容量的1% CMC。在异氟醚处理结束后48 h行恐惧记忆实验以检测小鼠的学习记忆功能;6 h时取部分小鼠分离皮质和海马行Western blotting检测PPARγ蛋白及ELISA法检测脑组织IL-1β和TNF-α水平。结果：与Con组比较,Iso组的僵住行为减少（P<0.05）,海马IL-1β水平增加 （P<0.05）;与Iso组比较,Pi10+Iso组的僵住行为和PPARγ蛋白表达无明显变化（P>0.05）,而Pi20+Iso组的僵住行为和PPARγ蛋白表达均明显增加（P<0.05）且海马中IL-1β水平降低（P<0.05）。各组海马和皮质TNF-α水平以及皮质中IL-1β水平无明显差异（P>0.05）。结论：吡格列酮可以减轻异氟醚引起的老年小鼠的认知功能障碍,并可以缓解异氟醚引起的小鼠海马IL-1β含量的增加。     

尼古丁抑制脂多糖诱导的小鼠脑小胶质细胞的激活

目的探讨尼古丁(NIC)对脂多糖(LPS)诱导小鼠脑小胶质细胞激活的影响。方法将32只小鼠随机分为正常对照(CON)组、NIC组、LPS组、NIC+LPS组,每组各8只。NIC+LPS组首先腹腔注射尼古丁建立慢性暴露尼古丁的动物模型,后腹腔注射脂多糖诱导小鼠脑小胶质细胞激活;LPS组同时间只腹腔注射等量脂多糖;NIC组仅腹腔注射尼古丁;CON组腹腔注射等量生理盐水。免疫组织化学方法检测大脑皮质、海马、黑质CD11b阳性小胶质细胞表达情况。结果CD11b阳性小胶质细胞表达NIC组与CON组无差异,LPS组和NIC+LPS组均高于CON组(P<0.01),并且NIC+LPS组明显低于LPS组(P<0.01)。结论慢性NIC处理可以抑制LPS诱导的小鼠脑小胶质细胞激活,提示尼古丁可能对LPS引起的炎症反应具有保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后极化的小胶质细胞排斥性导向分子A的表达变化

目的 探讨大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤后极化的小胶质细胞排斥性导向分子A（RGMa）的表达变化。 方法 取雄性SD大鼠30只,随机分成对照组,缺血再灌注损伤7 d、14 d模型组（I/R）,采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型(tMCAO);Real-time PCR检测M1、M2型小胶质细胞标记分子白细胞介素-1β（IL-1β）、诱导性一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶1（Arg-1）及CD206 mRNA的表达;免疫荧光检测缺血区小胶质细胞RGMa的表达;体外培养小胶质细胞,分别用M1或M2型小胶质细胞的诱导物脂多糖（LPS）或IL-4诱导24 h后,利用Real-time PCR检测M1、M2型小胶质细胞标记分子IL-1β、iNOS、Arg-1、CD206 mRNA的表达;Western blotting检测M1、M2型小胶质细胞上RGMa的表达。 结果 缺血再灌注损伤后7 d、14 d,M1、M2型小胶质细胞的标记分子表达增加。缺血后7 d、14 d激活的小胶质细胞上RGMa大量表达。RGMa在体外培养的LPS诱导极化的M1型小胶质细胞和IL-4诱导极化的M2型小胶质细胞上表达均显著增加。 结论 大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤后,RGMa在缺血区M1型和M2型极化的小胶质细胞上均大量表达,RGMa可能在小胶质细胞激活极化过程中发挥重要作用。RGMa可能是缺血性脑卒中治疗的新靶点。     

石杉碱甲的抗炎作用及其对大鼠神经干细胞的保护作用

 目的： 探讨石杉碱甲（HupA）的抗炎作用及其对大鼠神经干细胞的保护作用。方法：取新生SD大鼠海马组织,分离并培养神经干细胞和小胶质细胞,建立Transwell共培养体系。将细胞分成3组：空白对照组、淀粉样β肽（Aβ）组和HupA组。Aβ组小胶质细胞层中加入终浓度为10 μmol/L的Aβ1-42,HupA组于加入Aβ1-42前4 h用1 μmol/L HupA预处理小胶质细胞。液相芯片技术检测炎症因子白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和巨噬细胞炎症蛋白1α（MIP-1α）的表达,流式细胞术和Western blotting检测神经干细胞的凋亡。结果：小胶质细胞与神经干细胞共培养72 h后,与空白对照组相比,Aβ组IL-6、TNF-α和MIP-1α水平以及神经干细胞凋亡率（25.46%）均显著升高(P<0.01);HupA预处理小胶质细胞后,Aβ诱导的小胶质细胞炎症因子分泌显著减少,IL-6、TNF-α和MIP-1α的水平降低(P<0.01),同时神经干细胞凋亡率降低至8.05% (P<0.01)。Western blotting检测结果显示,HupA组Bcl-2/Bax值显著高于Aβ组(P<0.05)。结论：石杉碱甲可以抑制小胶质细胞分泌细胞因子和趋化因子,减弱Aβ诱导的炎症反应,降低神经干细胞凋亡率,从而发挥抗炎和神经保护作用。     

羚羊角与钩藤联合用药抑制热性惊厥大鼠脑损伤作用机制研究

目的:探讨羚羊角与钩藤联合用药对热性惊厥所致发育期大鼠脑损伤的保护作用及其作用机制。方法:采用热水浴建立热性惊厥大鼠模型,实验分为5 组,空白对照组、模型组、羚羊角组、钩藤组、羚羊角与钩藤联合用药组(简称联用组),每组10 只,共50 只。通过HE 染色法观察组织病理情况;ELISA 法检测各组大鼠脑组织TNF-α、IL-1β、Glu 及Asp 含量;免疫组化法检测大鼠海马区TNF-α、IL-1β表达情况。结果:联用组、羚羊角组、钩藤组脑组织Asp、Glu、TNF-α及IL-1β及海马区TNF-α、IL-1β含量显著低于模型组(P<0.01,P<0.05)。联用组脑组织Asp、TNF-α及IL-1β含量较钩藤组显著降低(P<0.05)。联用组海马区TNF-α较羚羊角组、钩藤组显著降低(P<0.05),IL-1β较钩藤组表达显著降低(P<0.05)。结论:羚羊角与钩藤联合用药抑制热性惊厥所致大鼠脑损伤,效果优于羚羊角及钩藤单用,其作用机制可能与其抑制促炎症因子TNF-α、IL-1β及兴奋性氨基酸Asp、Glu 表达有关。     

BMSCs脑内移植改善AD小鼠学习记忆功能的分子机制研究

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)脑内移植对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆能力及病理改变的影响,并对其分子机制进行探讨。方法:将C57/BL6野生型(WT)小鼠和C57/BL6 APP/PS1转基因(Tg)小鼠随机分为4组:WT/PBS组、WT/BMSCs组、Tg/PBS组及Tg/BMSCs组,侧脑室注射法将PBS或BMSCs注入小鼠脑内。术后第3天起进行持续8 d的Morris水迷宫实验以检测小鼠认知能力。术后第10天取材,组织免疫荧光染色检测小鼠脑内小胶质细胞的激活;real-time PCR检测CX3C趋化因子配体1(CX3CL1)、CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)、IL-1β、TNF-α、Nurr1、YM1、胰岛素降解酶(IDE)和基质金属蛋白酶9(MMP9)的mRNA表达;ELISA检测脑组织匀浆CX3CL1和Aβ42的含量;Western blot检测突触后致密蛋白95(PSD95)、突触小泡蛋白(SYP)、p85和p110蛋白表达以及Akt磷酸化水平的变化。结果:术后第10天,在APP/PS1小鼠海马区附近观察到移植的BMSCs。水迷宫实验结果显示,与WT/PBS组小鼠相比,Tg/PBS组小鼠逃避潜伏期明显延长(P0.01),BMSCs移植治疗后APP/PS1小鼠逃避潜伏期明显缩短(P0.05);与Tg/PBS组相比,Tg/BMSCs组CX3CL1在海马区的mRNA水平(P0.01)及皮质区的蛋白水平(P0.05)明显增加;BMSCs移植可以促进WT和Tg小鼠脑内小胶质细胞的激活,同时M2型小胶质细胞表面标志物YM1的mRNA表达上调(P0.05)。Tg/PBS组与WT/PBS组相比,皮质区和海马区TNF-α的mRNA表达明显升高(P0.05),皮质区Nurr1的mRNA表达降低(P0.01);而与Tg/PBS组相比,Tg/BMSCs组皮质区的TNF-α(P0.01)mRNA表达降低,CX3CR1和Nurr1的mRNA表达明显上调(P0.05),海马区TNF-α和IL-1β的mRNA明显下调(P0.05),CX3CR1和Nurr1的mRNA表达明显增加(P0.05)。此外,Tg/BMSCs组的PSD95、p85和p110蛋白表达及Akt的磷酸化水平均较Tg/PBS组明显增加(P0.05)。与Tg/PBS组比,BMSCs移植降低了APP/PS1小鼠脑内Aβ42蛋白的水平(P0.05),增加了海马区Aβ清除相关酶IDE和MMP9的表达(P0.05)。结论:BMSCs移植可以调控神经炎症因子分泌,促进神经保护因子和突触蛋白的表达,从而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力,其分子机制可能是BMSCs移植上调CX3CL1后激活了PI3K/Akt通路。     

经皮三叉神经电刺激减轻戊四氮诱导的大鼠癫痫发作并抑制海马内IL-1β和TNF-α的表达

 目的:探讨经皮三叉神经电刺激预处理对戊四氮（PTZ）诱发的急性癫痫大鼠的行为学及海马致痫细胞因子白细胞介素1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。方法:动物随机分为对照组、致痫组（PTZ组）和经皮三叉神经电刺激组,分别给予7 d、14 d和28 d的假刺激和三叉神经电刺激预处理后,腹腔注射PTZ 建立急性癫痫动物模型,观察给药后大鼠癫痫行为学表现,并分别用免疫组织化学方法及ELISA方法对海马IL-1β、TNF-α进行检测。结果:经皮三叉神经电刺激可以明显减轻大鼠的痫性发作级别,减少癫痫发作持续的时间（P<0.05）, 且海马细胞因子IL-1β及TNF-α的表达明显少于PTZ组（P<0.05或P<0.01）。结论:经皮三叉神经电刺激预处理在PTZ 急性点燃癫痫大鼠模型中不仅具有抗惊厥作用, 还可以减少海马致痫细胞因子IL-1β及TNF-α的表达,可能为癫痫的防治带来新的策略。       

Calorie restriction ameliorates neurodegenerative phenotypes in forebrain-specific presenilin-1 and presenilin-2 double knockout mice

Conditional double knockout of presenilin-1 and presenilin-2 (cDKO) in forebrain of mice led to brain atrophy, tau hyperphosphorylation, synaptic dysfunction and cognitive deficit. These brain changes recapitulated most of the neurodegenerative phenotypes of Alzheimer's disease (AD). In this report, we have investigated the effects of 4-month calorie restriction (CR) regimen on different phenotypes in cDKO mice. We found that CR improved novel object recognition and contextual fear conditioning memory in the cDKO mice. Histological and biochemical analysis showed that CR attenuated ventricle enlargement, caspase-3 activation and astrogliosis. In addition, the induction of tau hyperphosphorylation in the cDKO mice was reduced by CR, possibly through reduction of p25 accumulation and aberrant CDK5 activation. Finally, DNA microarray analysis demonstrated that CR could increase the expression of neurogenesis related genes and decrease the expression of inflammation related genes in the hippocampus of cDKO mice. The possible molecular mechanisms of the CR effects on alleviating AD pathogenesis have been discussed.     

紫薯花色苷提取物对ApoE~(-/-)小鼠动脉粥样硬化和高脂血症的作用

目的:研究紫薯花色苷提取物对Apo E-/-小鼠动脉粥样硬化和高脂血症的作用。方法:将8周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠随机分为对照组、高脂饮食组、花色苷低剂量组、花色苷高剂量组和立普妥组,共5组(n=10),除对照组小鼠饲喂普通饲料外,其它4组在饲喂高脂饲料8周后,再给予蒸馏水、紫薯花色苷提取物(1. 67 mg·kg~(-1)·d~(-1)和8. 35 mg·kg~(-1)·d~(-1))或立普妥(阿托伐他汀钙,2 mg·kg~(-1)·d~(-1))灌胃8周。心脏取血检测小鼠血清的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;油红O和HE染色评估主动脉根部斑块面积和肝脏的脂肪变性程度; RT-q PCR方法检测主动脉和肝脏中炎症因子的表达。结果:与对照组比较,高脂饮食组小鼠血清的TC、LDL-C和HDL-C水平明显升高(P 0. 01),动脉的斑块面积明显增大(P 0. 01),肝脏的脂肪变性明显,白细胞介素1β(IL~(-1)β)、IL-6和单核细胞趋化蛋白1(MCP~(-1))的表达增加(P 0. 01),而过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)的表达降低(P 0. 05);高剂量紫薯花色苷提取物可以明显降低TC、TG和LDL-C水平(P 0. 01),减少动脉的斑块面积(P 0. 01),减轻肝脏的脂肪变性程度,同时还可以降低IL~(-1)β、IL-6和MCP~(-1)的表达(P 0. 05),提高PPAR-α的表达(P 0. 05)。结论:紫薯花色苷提取物可调节血脂,降低炎症细胞因子表达,从而抑制动脉粥样硬化的发展和高脂血症引起的肝组织脂肪变性。