HO通过减少ROS生成抑制AngⅡ的致血管平滑肌细胞增殖肥大

目的:观察血红素加氧酶（HO）在AngⅡ致血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖和肥大中的作用并探讨其可能机制。方法:（1)免疫印迹法测定平滑肌细胞HO-1蛋白表达水平;（2）β-液体闪烁记数仪测定［3H］-TdR和［3H］-亮氨酸掺入量;（3)乙酰乙酸双氯荧光素（DCFH-DA）法测定平滑肌细胞内活性氧（ROS）水平。结果:（1) Hemin组HO-1蛋白表达水平与对照组和AngⅡ组相比均明显升高（P<0.01）。（2）AngⅡ使血管平滑肌细胞［3H］-TdR和［3H］-亮氨酸掺入量较对照组分别升高20.7％和18.0％（P<0.01）,而给予HO底物Hemin则抑制了［3H］-TdR和［3H］-亮氨酸掺入量的增加, 给予HO的抑制剂ZnPPIX则可以促进AngⅡ所致的［3H］-TdR、［3H］-亮氨酸掺入量的增加。(3) AngⅡ组ROS水平明显高于对照组（P<0.01）;Hemin组ROS水平较AngⅡ组降低了62.7％,而ZnPPIX组高于AngⅡ组39.5％。结论:HO可抑制AngⅡ所导致的VSMCs的增殖和肥大,其机制可能与减少细胞内ROS生成有关。     

Mas基因沉默对血管紧张素-(1-7)拮抗血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠肾间质成纤维细胞活化的影响

 目的： 探讨Mas基因沉默后对血管紧张素-(1-7) ［Ang-(1-7)］拮抗血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠肾间质成纤维细胞活化的影响。方法：（1）有效Mas siRNA的筛选：设计合成3对不同序列针对Mas基因的siRNA,瞬时转染大鼠肾间质成纤维细胞（NRK-49F）,实验分5组：Mas siRNA序列1、Mas siRNA序列2、Mas siRNA序列3、阴性siRNA序列及正常对照组。转染后48 h,分别用半定量RT-PCR及Western blotting检测Mas mRNA和蛋白的表达水平。（2）研究有效Mas siRNA对Ang-(1-7)拮抗AngⅡ的影响：实验分6组：正常对照组、AngⅡ组、Ang-(1-7)组、AngⅡ+Ang-(1-7)组、阴性siRNA对照组和Mas siRNA转染组。分别培养72 h后,细胞免疫化学法检测细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,ELISA法检测上清液中细胞外基质成分Ⅰ型胶原（ColⅠ）的含量。结果：（1）与组相比,Mas siRNA各组Mas基因的表达均下降,其中以Mas siRNA序列2最明显（P<0.05）。 （2）有效Mas siRNA转染组在加AngⅡ+Ang-(1-7)干预72 h后,较非转染组和阴性siRNA转染组α-SMA及ColⅠ表达均增加,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Mas siRNA能有效抑制Mas的表达,使Ang-(1-7)拮抗AngⅡ诱导的大鼠肾间质成纤维细胞活化作用明显减弱。     

Rho激酶在血管紧张素Ⅱ刺激大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用

目的： 探讨Rho激酶在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激心肌成纤维细胞（CFBs）增殖和胶原合成中的作用。方法： 采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生Sprague-Dawley (SD) 大鼠CFBs，并用AngⅡ诱导CFBs增殖和胶原合成。采用四氮唑盐（MTT）比色法测定细胞增殖,羟脯氨酸法测定CFBs胶原含量, RT-PCR检测Rho激酶mRNA表达，Western blotting检测肌球蛋白结合亚基磷酸化（MBS-P）表达作为Rho激酶功能活化的标志。结果：（1）AngⅡ（10-７ mol/L）刺激48h可诱导CFBs增殖和胶原合成(均P<0.01)；（2) AngⅡ（10-7 mol/L）可显著上调新生SD大鼠CFBs的Rho激酶mRNA表达并诱导Rho激酶快速活化；（3）在一定浓度范围内，Rho激酶特异性抑制剂hydroxyfasudil (H4413)对AngⅡ（10-7 mol/L）刺激的CFBs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01)。结论： AngⅡ可诱导新生SD大鼠CFBs的Rho激酶mRNA转录并活化Rho激酶，抑制Rho激酶活化对AngⅡ刺激的CFBs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用，提示Rho激酶在调控AngⅡ刺激大鼠CFBs增殖与胶原合成中可能具有重要作用。     

ACE2内源性激动剂DIZE对糖尿病肾病大鼠的保护作用

目的:观察血管紧张素转换酶2(ACE2)内源性激动剂乙酰甘氨酸重氮氨苯脒(DIZE)对糖尿病肾病(DN)大鼠的保护作用。方法:30只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NC组)、DN组和DIZE处理组(DIZE组)。DN组与DIZE组一次性腹腔注射链脲佐菌素(65 mg/kg)建立糖尿病模型,12周后糖尿病肾病大鼠模型建立后给予DIZE 15 mg·kg~(-1)·d~(-1)或等量生理盐水皮下注射4周处理。16周末称量体重和肾重,计算肾质量体质量比(KW/BW),收集血、尿标本,检测血糖(GLU)、24 h尿蛋白(24UP)及血清肌酐(SCr)等指标。通过PAS染色观察各组肾脏病理变化;ELISA法检测大鼠AngⅡ、Ang-(1-7)、TGF-β1及VCAM-1水平的变化;通过免疫组化观察collagenⅠ和FN蛋白表达的变化;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测大鼠肾组织collagenⅠ和FN mRNA含量的变化;Western blot观察各组大鼠ACE2蛋白表达的变化。结果:DIZE显著提高了糖尿病大鼠ACE2的表达(P0.05),降低了糖尿病大鼠血浆AngⅡ含量(P0.05),提高了Ang-(1-7)的水平(P0.05)。与NC组大鼠相比,DN组与DIZE组大鼠的24UP、SCr和KW/BW明显升高(P0.05),collagenⅠ和FN mRNA水平及蛋白表达量增加,肾脏组织TGF-β1及VCAM-1明显上升(P0.05)。DIZE组与DN组大鼠相比,24UP和SCr水平降低(P0.05),GLU和KW/BW无明显差异,collagenⅠ和FN mRNA含量及蛋白表达量减少,肾脏组织TGF-β1及VCAM-1水平降低(P0.05)。结论:ACE2内源性激动剂DIZE显著提高了ACE2的活性,增加了Ang-(1-7)的含量,从而降低了肾脏纤维化及炎症水平,并对糖尿病肾病大鼠起到保护性作用。     

心脏糜酶活性改变在心肌肥厚患者心肌纤维化中的意义

目的： 观察心脏糜酶与心肌肥厚患者心肌组织胶原合成和心肌纤维化的关系。方法: 应用病理检查、放射免疫、计算机分析和逆转录-聚合酶链式反应等方法，检测心肌肥厚患者（心肌肥厚组）和正常人（对照组）心脏糜酶活性、心肌局部血管紧张素II（Ang II）水平、心肌胶原容积分数（CVF）、心肌血管周围胶原面积比（PVCA）及心肌组织I型和III型胶原mRNA表达。心脏糜酶活性和心肌局部Ang II水平与CVF及PVCA之间的关系采用相关分析。结果: 心肌肥厚组心脏糜酶活性为(0.27±0.06) kU/g蛋白，对照组为(0.12±0.06) kU/g蛋白，心肌肥厚组心脏糜酶活性明显高于对照组（P<0.01）。心肌肥厚组心肌组织匀浆液Ang II水平为(179.3±36.1) ng/g心肌组织，对照组心肌组织匀浆液Ang II水平为(103.2±13.6) ng/g心肌组织，心肌肥厚组心肌组织Ang II水平明显高于对照组（P<0.01）。心肌肥厚组CVF为39.5%±9.8%，对照组为20.9%±8.2%，心肌肥厚组明显高于对照组（P<0.01）；心肌肥厚组PVCA为1.98±1.05，对照组为0.41±0.12，心肌肥厚组也明显高于对照组（P<0.01）。心肌肥厚患者心肌组织I型胶原及III型胶原mRNA表达相对含量均明显高于正常人（均P<0.01）。心脏糜酶活性与CVF及PVCA呈明显正相关（相关系数分别为0.52和0.69，P<0.05和P<0.01）。心肌局部Ang II水平也与CVF及PVCA呈明显正相关（相关系数分别为0.49和0.58，均P<0.05）。结论: 心脏糜酶可增加胶原的合成，参与细胞外基质的形成和降解，促进心肌纤维化。     

肌原纤维调节因子-1在心肌肥大中的作用研究

目的：研究肌原纤维调节因子-1(MR1)在心肌肥大中的变化及其作用。 方法： 选取rMR1 mRNA的3个Stem-loop结构作为靶点，构建RNA干扰载体，对乳鼠心肌细胞进行瞬时转染，通过定量RT-PCR，选定第1靶点进行RNA干扰以封闭MR1基因；采用心肌细胞［3H］-亮氨酸掺入、形态学检测、蛋白质提取、Western blotting技术，检测蛋白合成速率、细胞表面积、rMR1蛋白表达等指标，观察MR1基因沉默对于血管紧张素Ⅱ (angiotensin Ⅱ, AngⅡ)诱导的乳鼠心肌细胞肥大的影响。 结果： AngⅡ组［3H］-亮氨酸掺入较对照组增加24.1%(P<0.01)，其细胞表面积较对照组高65.8%(P<0.01)，rMR-1蛋白表达水平升高；AngⅡ的上述作用可被卡托普利完全消除；MR1基因封闭后，由AngⅡ诱导的［3H］-亮氨酸掺入降低30.2%(P<0.01)，细胞表面积较AngⅡ组降低31.1%(P<0.01)，rMR-1蛋白表达较对照组减少。 结论： AngⅡ诱导的心肌细胞肥大与rMR-1表达上调有关。MR-1可能通过促进心肌收缩蛋白的合成参与心肌肥大的发生。     

表皮生长因子对传代培养的大鼠生长板软骨细胞增殖与胶原合成的影响

目的：探讨不同浓度的表皮生长因子（EGF）对传代培养的大鼠肋生长板软骨细胞（RGC）增殖和胶原合成的影响。 方法： 分离、培养RGC，分别用Western blot和阿尔新蓝（Alcine blue）染色检测各代RGC中Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达；用［³H］-TdR和［³H］-proline掺入分别检测1、10和100 μg/L EGF对第1、3和5代RGC增殖和胶原合成的影响。 结果： 原代培养的RGC表达Ⅱ型胶原和蛋白多糖，从第4代起Ⅱ型胶原和蛋白多糖的表达迅速降低，RGC发生了去分化。［³H］-TdR掺入表明，EGF促进第1代RGC的增殖（P<0.01），3个浓度的作用依次为：1 μg/L>10 μg/L>100 μg/L，差异显著（P<0.01）；3个浓度的EGF对第3代RGC保持了相近的促增殖作用（P<0.01）；对第5代RGC均无促增殖作用(P>0.05)。与促增殖作用不同，不同浓度EGF促不同传代的RGC的［³H］-proline掺入率比对照组均高20%左右（P<0.01）。 结论： EGF具有促进培养RGC增殖和胶原合成的作用，连续传代引起的去分化降低了RGC对EGF促增殖作用的反应，但对EGF的促胶原合成作用没有产生影响。     

甘草酸二铵对肝纤维化大鼠肝脏脂质过氧化与间质性胶原酶活性的影响

目的：探讨甘草酸二铵影响纤维化肝脏脂质过氧化与间质性胶原酶活性的抗肝纤维化作用机制。 方法： 以四氯化碳(CCl4)皮下注射与高脂肪低蛋白饮食复合因素诱导大鼠肝纤维化模型，而后予以甘草酸二铵口服治疗，正常大鼠与模型对照组给予等量生理盐水。HE染色与胶原染色观察大鼠肝组织炎性坏死与胶原沉积病理改变，按试剂盒方法检测血清肝功能（ALT、AST、Alb与总胆红素等）变化，检测肝组织主要过氧化损伤指标：超氧化物歧化酶（SOD）活性, 丙二醛（MDA）含量，谷胱甘肽（GSH）含量与谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，水解法测定肝组织羟脯氨酸含量，酶底物反应法分析肝组织间质性胶原酶活性变化，RT-PCR法分析肝组织Ⅰ型前胶原基因表达。 结果： 与正常大鼠相比，模型大鼠肝脏有明显胶原沉积与肝纤维化，伴有不同程度的肝细胞炎性损伤坏死；甘草酸二铵药物组明显减轻模型大鼠肝组织损伤坏死与胶原沉积等病理变化。模型大鼠肝功能指标,包括血清总胆红素含量、ALT与AST活性、白蛋白含量均明显减少（P<0.01）。药物组大鼠血清总胆红素含量、AST与ALT活性显著低于模型组（P<0.05），而白蛋白含量高于模型组（P<0.05）。此外，药物组大鼠肝组织羟脯氨酸含量(151.3±37.3 μg/g)明显少于模型组(170.9±15.3 μg/g，P<0.05)，Ⅰ型前胶原基因表达弱于模型组（P<0.05）；肝组织MDA含量(1.96±0.23 μmol/g)低于模型组(2.44±0.32 μmol/L, P<0.05)，SOD水平(19.60±0.97 NU/g)高于模型组(20.60±0.33 NU/g，P<0.05)，GSH含量(47.0±9.1 g/g)与GSH-Px活性(53.1±4.1 U/g)高于模型组(41.2±3.5 g/g；46.7±6.1 U/g，P<0.05)；肝组织间质性胶原酶活性(43.89±7.74 U)高于模型组(32.01±2.75 U，P<0.05)。 结论： 甘草酸二铵有明显抗肝纤维化大鼠肝脏脂质过氧化损伤与提高肝组织间质性胶原酶活性的作用，该作用是药物抗肝纤维化的重要机制。     

肾通胶囊对单侧输尿管梗阻大鼠ET-1及AngⅡ含量的影响

目的研究单侧输尿管梗阻(UUO)后肾间质纤维化的发生机制及肾通胶囊对其的保护作用。方法24只大鼠随机分为假手术组及对照组、手术模型组和肾通治疗组,术后第8天观察各组肾组织病理改变,检测血浆和肾组织内皮素-1(ET-1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)的含量。结果模型组血浆和肾组织中ET-1、AngⅡ增高,与对照组比较有显著差异(P<0.01),肾通治疗组与模型组比较肾组织ET-1、AngⅡ明显降低(P<0.05)。结论肾通胶囊可通过影响血浆和肾组织中ET-1和AngⅡ含量而延缓肾间质纤维化的进程。     

内源性一氧化氮对哮喘大鼠支气管平滑肌细胞钾通道的影响

目的：观察体内应用一氧化氮（NO）前体左旋精氨酸（L-Arg）对哮喘大鼠支气管平滑肌细胞（BSMC）钾通道电生理特性的影响，为哮喘治疗提供理论基础。 方法： 雄性SD大鼠，随机分为对照组、哮喘组和哮喘L-Arg(300 mg/kg)治疗组（L-Arg组）。急性酶消化法分离获得大鼠单个BSMC。用常规全细胞膜片钳技术记录3组BSMC的静息膜电位（Em）、钙激活钾通道(BKCa)电流和电压依赖性钾通道（Kv）电流的差异。 结果： （1）哮喘组的静息膜电位为(-29.4±5.6) mV，显著低于对照组(-34.8±6.2)mV, (P<0.05)；L-Arg治疗组的静息膜电位为(-36.1±6.8) mV, 与哮喘组差异显著(P<0.05)。（2）钙激活钾通道电流：+50 mV电压刺激时，方波刺激模式下哮喘组大鼠BSMC的BKCa峰值电流密度［(43.8±16.5) pA/pF, n=8］低于对照组［(72.5±19.9)pA/pF, n=8］,(P<0.01)；L-Arg组的BKCa电流密度［(58.7±12.4) pA/pF, n=8］则高于哮喘组(P<0.05)。（3）电压依赖性钾通道电流：+50 mV电压刺激时，方波刺激模式下哮喘组大鼠BSMC的Kv峰值电流密度为［(32.4±8.7)pA/pF, n=8］，显著低于对照组［(57.7±9.8)pA/pF, n=8］ (P<0.01)；L-Arg组的Kv峰值电流密度［(43.6±7.9)pA/pF, n=8］，显著高于哮喘组［(32.4±8.7)pA/pF, n=8］ (P<0.05)。结论： 体内应用L-Arg可增加钙激活钾通道和电压依赖性钾通道电流，明显改善哮喘大鼠BSMC的静息膜电位，从而降低气道平滑肌细胞的兴奋性，可能具有抑制气道高反应性的作用。     

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导的脐静脉内皮细胞MCP-1和ICAM-1表达的影响

目的： 研究血管紧张素-(1-7)［Ang-(1-7)］对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的脐静脉内皮细胞（HUVEC）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的影响,阐明Ang-(1-7)对AngⅡ在炎症方面的拮抗作用。方法: 体外培养HUVEC,随机分为：对照组;AngⅡ组;Ang-(1-7)组;AngⅡ+Ang-(1-7)组;AngⅡ+ Ang-(1-7) + Ang-(1-7)受体阻断剂A-779组。以ELISA法和半定量RT-PCR法从蛋白和mRNA水平检测MCP-1和ICAM-1的表达情况。结果: 与对照组比,AngⅡ（100 nmol/L）使MCP-1和ICAM-1的蛋白和mRNA表达明显增加（P<0.05）;Ang-(1-7)（1 000 nmol/L）使MCP-1和ICAM-1的蛋白和mRNA表达降低（P<0.05）;混合刺激组中,与AngⅡ组比较,Ang-(1-7) （10 nmol/L、100 nmol/L、1 000 nmol/L、10 000 nmol/L）呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的HUVEC MCP-1、ICAM-1蛋白和mRNA的表达（P<0.05）,Ang-(1-7) 浓度为1 000 nmol/L时,虽然蛋白和mRNA表达仍高于对照组,但无显著差异（P>0.05）;加入 A-779 组与AngⅡ组比较无显著差异（P>0.05）。结论: Ang-(1-7) 通过其特异性受体MAS拮抗AngⅡ诱导的HUVEC MCP-1和ICAM-1的表达,并呈浓度依赖性。     

血管紧张素Ⅱ通过抑制原癌基因c-SKI表达促进小鼠高血压性心肌纤维化

目的：探讨原癌基因c-SKI (cellular Sloan-Kettering Institute)表达变化对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ, Ang Ⅱ)诱导的小鼠高血压性心肌纤维化的影响。方法：将12只雄性C57BL/6小鼠随机分成PBS组（n=6）和Ang Ⅱ组（n=6），利用渗透压微泵皮下植入小鼠慢性持续给予等体积的PBS和Ang Ⅱ，给药4周，测定小鼠血压。取小鼠心脏组织进行HE和Masson染色检测病理学变化；免疫组织化学染色和Western blot检测c-SKI、CD31、平滑肌蛋白22(smooth muscle protein 22, SM22)、Ⅰ型胶原（collagen type Ⅰ, Col Ⅰ）和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）水平。用不同浓度的AngⅡ处理人冠状动脉内皮细胞（humancoronaryarteryendothelialcells,HCAECs），显微镜观察细胞形态，CCK-8法检测细胞活力；用最低有效剂量的Ang Ⅱ处理HCAECs，免疫荧光染色和Western blot检测c-SKI...     

CTGF反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、胶原合成的抑制效应

目的：研究结缔组织生长因子（CTGF）反义寡核苷酸对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及CTGF表达的抑制作用。 方法： 差速贴壁法分离新生SD大鼠心肌成纤维细胞(CFs)。反义、正义、错义CTGF寡核苷酸分别经阳离子脂质体介导转染CFs，并与血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)10-6mol/L共培养48 h，采用MTT法测CFs生长数目，羟脯氨酸法测胶原蛋白含量，RT-PCR法及Western blotting法分别测CTGF mRNA及蛋白水平的表达。 结果： AngⅡ可以在mRNA及蛋白水平明显促进CFs CTGF的表达(P<0.01)，且呈浓度-时间依赖性。CTGF反义链组的MTT反应A值、胶原蛋白含量、CTGF mRNA及蛋白水平的表达量均明显低于AngⅡ组（P<0.01），而CTGF正义链组和错义链组与AngⅡ组无显著差异(P>0.05)。 结论： AngⅡ刺激下产生的CFs CTGF mRNA和蛋白水平的表达上调，可能是心肌纤维化传导通路中的关键环节，CTGF反义寡核苷酸可以序列特异性地阻断CTGF的介导，从而抑制AngⅡ对心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及CTGF表达的诱导作用，进一步证实CTGF可能是拮抗心肌纤维化的特异性靶位。     

钙蛋白酶调节致心肌细胞肥大的信号转导

目的： 探讨钙敏感的calpain对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导的致心肌细胞肥大的钙调神经磷酸酶（CaN）信号通路的调节。方法: 原代培养的乳鼠心肌细胞为模型，AngⅡ刺激细胞Ca2+内流和（或）内贮细胞Ca2+释放， ［3H］-Leu掺入法反映心肌细胞蛋白合成速率，Fura-2/AM比率荧光成像分析细胞内钙信号变化，免疫印迹检测心肌细胞μ-calpain、m-calpain、CaN磷酸化及蛋白表达。结果: Ang Ⅱ呈浓度依赖性（10^-8-10^-5 mol·L^-1）促心肌细胞［Ca2+］i增加,各刺激组［Ca2+］i与对照组差异显著(P<0.01或P<0.05)。AngⅡ（10-7 mol·L^-1）剌激心肌细胞15 min后, μ-calpain的磷酸化明显增加，但其蛋白表达量无显著改变（P>0.05）, m-calpain蛋白表达及磷酸化量显著差异，CaN的蛋白表达量无显著改变，但其磷酸化增强, 环孢素A（CsA）抑制CaN的磷酸化。AngⅡ可使无血清培养新生大鼠心肌细胞［3H］-Leu掺入率随时间增加而增加，与对照组差异显著(P<0.01或P<0.05)，且在10^-8-10^-5 mol·L^-1范围内呈量效依赖关系。结论: AngⅡ剌激细胞外Ca2+跨膜内流和（或）内贮Ca2+的释放导致μ-calpain的激活，进一步激活钙敏感的CaN信号通路，在心肌肥厚的病理过程中起重要作用。     

一氧化氮在肾缺血再灌注肾小球损伤中的作用

目的:探讨一氧化氮(NO)对肾缺血再灌注（ischemia-reperfusion injury，I-RI）时大鼠肾小球超微结构及负电荷位点的影响。 方法:SD大鼠15只，建立肾缺血再灌注模型，动物随机分为5组：（1）假手术（sham）组（n=6）；（2）I-RI组（n=6），缺血前20 min舌静脉注入生理盐水0.3 mL；（3）SNP+I-RI组（n=6），缺血前20 min舌静脉注入2.5 μg/kg硝普钠（SNP）；（4）AG+I-RI组（n=6），缺血前20 min舌静脉注入10 mg/kg氨基胍（AG）；（5）L-NNA+I-RI组（n=6），缺血前20 min舌静脉注入10 mg/kg L-硝基精氨酸（L-NNA）。以聚乙烯亚胺（PEI）为阳离子探针标记肾小球滤过膜负电荷位点，透射电镜观察肾I-RI对大鼠肾小球超微结构及负电荷位点的影响。 结果:(1) sham组电镜下见肾小球结构正常，肾小球基底膜（GBM）外透明层负电荷位点（AS）清晰，呈连续的规则点线状排列［（19.3±1.7）个/1 000 nm］。I-RI组肾小球足细胞足突有明显的融合现象；GBM外透明层AS排列稀疏［（16.6±1.0）个/1 000 nm，P<0.05］，PEI颗粒小。（2）与I-RI组相比，给予SNP使肾I-RI大鼠肾小球滤过膜上皮细胞足突融合现象加重，肾小球GBM的AS［（11.7±3.2）个/1 000 nm］显著少于假手术组（P<0.05），且PEI颗粒的电子致密度也明显低于假手术组；而AG的应用使I-RI大鼠肾小球滤过膜损伤减轻，可见清晰的足突间隙；L-NNA+I-RI组大鼠肾小球上皮细胞足突融合也明显加重，但和I-RI组相比，L-NNA+I-RI组大鼠GBM的AS数量［（14.7±0.9）个/1 000 nm］无显著差异（P>0.05）。 结论:肾I-RI时出现肾小球上皮细胞足突融合、肾小球滤过膜的负电荷位点减少等病理性损伤，NO可加重这些损伤；肾I-RI时肾小球滤过膜超微结构的损伤与NO的生成及其作用有关。     

莫索尼定及贝那普利对肾脏致纤维化因子影响的对比研究

目的： 应用莫索尼定(moxonidine)及贝那普利(benazepril)干预阿霉素肾病（ADR）大鼠，比较二者对致纤维化生长因子的影响。方法： 大鼠右肾切除加尾静脉注射阿霉素复制肾病模型，随机分为模型组、莫索尼定组(1.5 mg·kg^-1·d^-1)、贝那普利组(10 mg·kg^-1·d^-1)、假手术对照组，每组10只。12周测蛋白尿、血压及血生化水平；显微镜下观察肾组织改变；免疫组化检测肾组织转化生长因子-β₁（TGF-β₁）、 血小板源性生长因子（PDGF）、结缔组织生长因子（CTGF）蛋白表达；原位杂交测TGF-β₁ mRNA、PDGF mRNA表达。结果： 模型组大鼠尿蛋白、血压、血浆NE、AngⅡ水平、肾间质纤维化面积、肾小球体积、肾重/体重比值均显著高于对照组（P<0.01）；肾组织内TGF-β₁、PDGF、CTGF蛋白及TGF-β₁ mRNA、PDGF mRNA表达均显著高于对照组（P<0.01）；莫索尼定及贝那普利干预组，上述上调指标除血压无明显改变之外，其余都被显著抑制（P<0.01）。2种药物之间比较，贝那普利较莫索尼定更明显降低蛋白尿、血浆AngⅡ水平及下调PDGF及CTGF蛋白、PDGF mRNA表达；莫索尼定下调TGF-β₁ mRNA表达较贝那普利明显。结论： 莫索尼定及贝那普利通过抑制交感神经活性，调节致纤维化因子的表达而起肾保护作用。     

葛根素对自发性高血压大鼠心肌纤维化的影响及其机制

 目的：观察葛根素对自发性高血压大鼠（SHR）心肌局部血管紧张素II (Ang II)、巨噬细胞及心肌组织形态学的影响,探讨其保护心肌的可能机制。方法：35只12周龄SHR随机分为葛根素高、中、低剂量组（100 mg/kg、50 mg/kg、25 mg/kg,腹腔注射）、卡托普利组（30 mg/kg灌胃）和SHR对照组（生理盐水腹腔注射）。另设WKY空白对照组（生理盐水腹腔注射）。每组7只,给药6周。给药6周后麻醉下迅速处死取出心脏,称量左心室湿重后,备做Masson染色、组织匀浆和RT-PCR。结果：与WKY大鼠相比,SHR左室质量指数增高（P<0.01）,心肌组织Ang II含量上升（P<0.01）,单核细胞趋化蛋白1 （MCP-1）和蛋白酶激活受体2（PAR2） mRNA表达增加（P<0.01）,巨噬细胞浸润明显（P<0.01）,间质纤维化严重（P<0.01）。高剂量葛根素和卡托普利明显降低左室质量指数（P<0.01）,降低心肌Ang II含量（P<0.01）,下调MCP-1和PAR2 mRNA表达（P<0.01）,减少巨噬细胞浸润（P<0.01或P<0.05）,减轻心肌间质纤维化（P<0.01）。结论:葛根素具有治疗自发性高血压大鼠心肌纤维化作用,其机制可能与降低心肌局部Ang II含量、下调MCP-1和PAR-2 mRNA表达及减少巨噬细胞浸润有关。     

AngⅡ诱导血管内皮细胞衰老及凋亡相关基因的表达

目的： 探讨血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)衰老及凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达。方法: 体外培养人脐静脉内皮细胞, 采用四甲基偶氮唑蓝比色法测定内皮细胞存活率，用AngⅡ(10^-6mol/L)及valsartan（AngⅡ1型受体特异性拮抗剂）干预,分为实验对照组、AngⅡ诱导组及valsartan组，采用β-半乳糖苷酶染色和流式细胞术鉴定细胞衰老，通过Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学变化，并利用免疫细胞化学染色法、RT-PCR法和Western blotting分析各组细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA及蛋白的表达水平。结果: 与对照组相比，10^-6mol/L AngⅡ诱导组存活的细胞数为对照组的（81.90±0.04)%; (80.10±6.81)%的细胞呈现β-半乳糖苷酶阳性染色。流式细胞仪检测细胞周期停滞于G₀-G₁［(91.36±6.45)%］，证实细胞衰老；荧光显微镜可见明显的细胞凋亡［(31.84±2.86)%］。与AngⅡ诱导组相比，valsartan组Bcl-2mRNA及蛋白表达水平明显增高(P<0.05), Bax mRNA及蛋白表达水平降低（P<0.05）。结论: AngⅡ可诱导体外培养的HUVECs老化。经AngⅡ诱导的衰老HUVECs发生凋亡，提示细胞凋亡参与了AngⅡ诱导HUVECs细胞的衰老过程。AngⅡ诱导血管内皮细胞衰老的分子机制之一可能与Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达的失衡有关。缬沙坦对血管内皮细胞衰老有一定保护作用。     

Ghrelin对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞损伤保护作用的研究

目的研究促生长激素释放肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）体外诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用。方法体外培养的HuVEcs，随机分为6组：正常对照组；Ghrelin（10^-7mol／L）组；AngⅡ（10^-7mol／L）组；AngⅡ（10^-7mol／L）＋Ghrelin不同浓度组：（Ghrelin 10^-7mol／L、10^-7mol／L和10^-7mol／L三个浓度组）。每组设6个复孔。用AngⅡ和Ghrelin联合干预细胞18h后，采用放射免疫方法测定内皮素-1（ET-1）含量；硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）含量；流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平。结果Ghrelin呈浓度依赖性地显著减少AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞的ROS生成及ET-1释放，且明显促进NO生成（P〈0．05）。结论Ghrelin对AngⅡ体外诱导的HUVECs损伤有保护作用。     

二肾一夹和肾下主动脉缩窄模型对高血压大鼠右室纤维化的影响

目的探讨二肾一夹（2K1C）及肾下主动脉缩窄（INAC）高血压模型大鼠右室功能与结构的改变及其Ang（1-7）的影响。方法建立2K1C及INAC模型，并采用微渗泵植入技术，用Ang（1-7）进行体内干预，采用无创及有创方法检测动物血压及右心功能；定性及定量分析这两种高血压模型右室心肌细胞及纤维化程度的变化。结果在血压增高的过程中，2K1C模型右室的功能和结构均发生明显的变化，术后14d时其右室收缩及舒张功能均已受损；其心肌细胞无明显变化，但其胶原已明显增多，CVF及PVCA均明显增加；应用Ang（1-7）干预可明显改善2K1C大鼠右室功能并减轻心肌纤维化的发生。在INAC动物模型，14d时其右心功能并无明显变化，无心肌细胞的改变及心肌纤维化的发生，Ang（1-7）对其亦无明显影响。结论在这两种动物模型，其右心功能的改变与其是否发生心肌纤维化有关，而心肌纤维化的发生是RAAS激活的结果。Ang（1-7）可抑制2K1C模型右室心肌纤维化进而改善右心功能，其机制可能与直接抑制RAAS有关。