Urantide对动脉粥样硬化大鼠脾组织中ERK1/2及P38表达的影响

目的 观察Urantide对动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）大鼠脾组织中MAPK信号通路ERK1/2和P38蛋白表达的影响,探究Urantide抗AS大鼠脾损伤的作用及机制。 方法 180只Wistar大鼠随机分为：正常组,模型组,辛伐他汀组,Urantide 3 d、7 d、14 d组。HE染色观察大鼠胸主动脉、脾组织;免疫组织荧光染色、Western blot检测大鼠脾中ERK1/2、P38蛋白表达。 结果 AS组与正常组相比,大鼠胸主动脉内出现典型AS病变,脾中央动脉出现玻璃样变,大鼠脾中p-ERK1/2、p-P38蛋白阳性表达升高（P<0.05）。Urantide各组与AS组相比,脾组织中玻璃样病变减轻,脾内p-ERK1/2、p-P38蛋白阳性表达降低,其中以Urantide 14 d组最明显（P<0.05）。 结论 Urantide可通过抑制ERK1/2、P38的表达,发挥抗AS作用,进而改善AS大鼠脾组织病变程度。     

Urantide减轻高脂饮食引起的大鼠非酒精性脂肪肝损伤

目的探讨多肽化合物urantide对高脂饮食引起动脉粥样硬化大鼠非酒精性脂肪肝的保护作用。方法 72只SD大鼠随机分为:对照组(Con)、模型组(Mod)[用腹腔注射维生素D3(VD3)及高脂饮食方法复制大鼠动脉粥样硬化模型]、阳性药组(辛伐他汀,Sim)、urantide 3(Ut 3)、 7(Ut 7)及14 d组(Ut 14),给药剂量为30μg/kg。给药结束后,检测血清学及肝功能指标;HE染色胸主动脉、肝脏;RT-qPCR检测肝脏中尾加压素Ⅱ(UⅡ)、G蛋白偶联受体14(GPR14)的mRNA表达;免疫组织化学检测肝组织UⅡ、GPR14蛋白质表达。结果模型组大鼠血清中谷丙转氨酶氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)等水平较对照组显著升高(P0.05);urantide治疗组大鼠上述各项指标较模型组均显著回降(P0.05);模型组大鼠肝脏中UⅡ及GPR14 mRNA与蛋白表达均较对照显著增高(P0.05);与模型组大鼠相比,urantide治疗组随着给药时间的增加,UⅡ及GPR14 mRNA与蛋白表达显著回降(P0.05)。结论 Urantide对高脂饮食所引起动脉粥样硬化大鼠非酒精性脂肪肝具有明显的保护作用。     

Urantide对动脉粥样硬化大鼠肝功能及组织形态学的影响

目的:探讨urantide对动脉粥样硬化(AS)大鼠肝功能及组织形态学的影响。方法:采用腹腔注射维生素D3(VD3)及高脂饮食的方法复制Wistar大鼠AS模型,随机分为正常对照组、AS模型组、阳性药组和uran-tide组。生化分析仪检测各组大鼠肝功能指标;HE染色观察大鼠胸主动脉和肝脏的病理学变化;RT-qPCR和Western blot法检测大鼠肝脏中尾加压素Ⅱ(UII)及其受体GPR14的mRNA和蛋白表达水平。结果:AS模型组大鼠血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转移酶(γ-GT)、乳酸脱氢酶(LDH)、总胆红素(TBIL)、间接胆红素(IBIL)和碱性磷酸酶(ALP)水平较正常对照组显著升高(P 0.05);urantide组大鼠上述各项指标较模型组均显著降低(P 0.05);各组血清中直接胆红素(DBIL)、总蛋白(TP)、球蛋白(GLB)和白蛋白(ALB)水平均无显著变化。Urantide可延缓AS大鼠肝细胞脂肪变性,修复肝细胞损伤。AS组大鼠肝脏中UII和GPR14mRNA及蛋白表达水平均较正常组显著增高(P 0.05);随着给药时间的延长,urantide治疗组大鼠肝脏中UII和GPR14 mRNA及蛋白表达水平较AS模型组显著降低(P 0.05)。结论:Urantide可明显减轻AS大鼠肝脂肪变性所引起的肝功能损伤。     

Urantide降低动脉粥样硬化大鼠胸主动脉中p38 MAPK表达

目的探讨尾加压素拮抗剂urantide对动脉粥样硬化(AS)大鼠胸主动脉中p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)基因和蛋白的影响。方法 180只Wistar大鼠分为:正常组(NC)、模型组(AS)[采用腹腔注射维生素D_3(VD_3)并联合高脂饲料喂养的方法建立AS大鼠模型]、辛伐他汀组(灌胃给予辛伐他汀5μg/kg)、urantide 3、7、14 d组(尾静脉注射urantide 30μg/kg)。给药结束后,HE染色大鼠胸主动脉;免疫组织化学染色、RT-qPCR以及Western blot检测大鼠胸主动脉中p38 MAPK mRNA和蛋白表达。结果 AS组大鼠胸主动脉出现典型的AS病理改变,urantide使胸主动脉AS病变明显减轻。AS组大鼠胸主动脉中p38 MAPK阳性表达以及基因和蛋白水平与NC组相比显著升高(P0.01);Urantide各给药组大鼠胸主动脉中p38 MAPK阳性表达以及基因和蛋白水平与AS组相比显著降低(P0.01)。结论 Urantide可通过抑制p38的表达而起到保护胸主动脉,防治AS的作用。     

肝卵圆细胞对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:探讨肝卵圆细胞(HOCs)对肝纤维化(HF)大鼠肝组织TGF-β/Smad信号通路蛋白表达的影响。方法:采用CCl4和复方因素制备HF大鼠模型,取模型组大鼠分离纯化HOCs,从门静脉植入HF大鼠肝组织内,连续观察30d,同时以五灵胶囊为阳性对照。在植入后8d、15d、23d、30d各组大鼠尾静脉采血,酶法测定血清天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT),实验结束取肝组织Masson染色观察肝组织形态学变化,Western blotting检测肝组织Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(ERK)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-ERK)、转化生长因子β受体Ⅰ(TβRI)、转化生长因子β受体Ⅱ(TβRⅡ)、果蝇MAD类似基因2/3(Smad2/3)、果蝇MAD类似基因7(Smad7)蛋白的表达。结果:HOCs植入组与五灵胶囊组在植入后15d、23d、30dAST、ALT水平显著降低;肝组织胶原纤维增生程度明显减轻;肝组织表达ERK、p-ERK、TβRI、TβRⅡ蛋白作用显著降低,表达Smad7的作用显著增加。结论:植入HOCs可阻止大鼠HF的进展,其作用机制可能与其抑制肝组织内TGF-β/Smad信号通路p-ERK、TβRⅠ、TβRⅡ蛋白的表达有关。     

Urantide抑制动脉粥样硬化大鼠心脏中Ⅲ型胶原表达

<正>尾加压素Ⅱ(urotensinⅡ, UⅡ)及其受体构成的UⅡ/UT受体系统可促进动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)等心血管疾病的发生发展~([1])。Urantide是一种UⅡ/UT受体系统的阻断剂~([2])。Urantide对由AS引起缺血缺氧所造成的心肌纤维化是否有效,尚未报道。本研究以AS大鼠作为研究对象,探讨Urantide对心肌组织中Col Ⅲ的表达影响,为临床治疗AS及其并发症提供新的视角。1 材料与方法     

尾加压素Ⅱ通过ERK1/2途径诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和上调Egr-1表达

 目的:研究不同浓度尾加压素Ⅱ（UⅡ）及其受体拮抗剂urantide对培养大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）增殖的影响,探讨丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）途径及早期生长反应因子1（Egr-1）在UⅡ诱导大鼠PASMCs增殖中的作用。 方法: 以组织贴块法原代培养大鼠PASMCs：(1) 采用BrdU掺入实验测定不同浓度（1 μmol/L、0.1 μmol/L和0.01 μmol/L）UⅡ及其受体拮抗剂对大鼠PASMCs 增殖的影响;(2) 采用real-time PCR检测UⅡ及其受体拮抗剂对细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)、应激活化蛋白激酶（SAPK）、p38 MAPK及Egr-1 mRNA 表达的影响;(3) 采用Western blotting检测UⅡ、urantide及ERK1/2抑制剂PD98059对PASMCs磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）、p-SAPK、p-p38 MAPK和Egr-1蛋白表达的影响。 结果: （1）UⅡ在一定浓度范围（1 μmol/L、0.1 μmol/L和0.01　μmol /L）呈浓度依赖性地促进肺动脉平滑肌细胞增殖(P＜0.01或P＜0.05),这种增殖作用可被urantide拮抗(P＜0.05);（2）UⅡ上调ERK1/2、SAPK及Egr-1 mRNA表达(P＜0.01或 P＜0.05),PD98059和(或)urantide可拮抗UⅡ诱导的ERK1/2、SAPK和Egr-1 mRNA的表达(P＜0.01或 P＜0.05),但对p-p38 MAPK无影响;（3）UⅡ可增加PASMCs p-ERK1/2、p-SAPK及Egr-1蛋白表达(P＜0.01或 P＜0.05),urantide及PD98059可拮抗UⅡ诱导的p-ERK1/2、p-SAPK和Egr-1蛋白表达(P＜0.01, P＜0.05)。 结论: UⅡ可能通过ERK1/2途径诱导PASMCs增殖和上调Egr-1表达,Egr-1可能通过激活ERK1/2途径参与了PASMCs的增殖。     

辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞增殖及bFGF与ERK1/2表达的干预作用

目的:观察辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)与细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白表达的影响.方法:体外培养大鼠胸主动脉VSMC,MTT法测定细胞增殖活力;Western blot法检测bFGF与ERK1/2蛋白的表达.结果:与对照组比较,辛伐他汀各浓度组细胞增殖活力均显著降低(P＜0.05).与对照组比较,低、中剂量组bFGF、ERK1/2蛋白表达均显著降低(P＜0.05),高剂量组bFGF、ERK1/2蛋白表达进一步降低(P＜0.01);与低剂量组比较,中剂量组bFGF、ERK1/2蛋白的表达均无统计学意义(P＞0.05),高剂量组则显著降低(P＜0.05);高剂量组bFGF、ERK1/2蛋白的表达又较中剂量组显著降低(P＜0.05),并呈剂量依赖性.结论:辛伐他汀能抑制平滑肌细胞增殖,该作用是通过抑制bFGF及其相应信号通路ERK1/2蛋白的表达来实现的,这可能是辛伐他汀治疗动脉粥样硬化、再狭窄及高血压等心血管疾病的重要机制之一.     

银杏酮酯对抑郁大鼠脑内ERK1 / 2 及其磷酸化水平的影响

目的:探讨银杏酮酯对抑郁大鼠前额叶与海马区细胞外信号调节激酶(ERK1/2)及其磷酸化水平的影响。方法:将50只成年SD大鼠随机分为对照组、模型组、银杏酮酯低、中、高剂量组。用慢性轻度不可预见性应激配合分养方法建立抑郁大鼠模型,采用荧光实时PCR检测大鼠前额叶、海马ERK1/2和磷酸化p-ERK1/2 mRNA表达水平,采用蛋白印迹法检测大鼠前额叶、海马ERK1/2蛋白和磷酸化p-ERK1/2蛋白的表达水平。结果:与给药前比较,银杏酮酯低、中、高剂量组旷场试验得分显著提高(P0.05),模型组旷场试验得分差异无统计学意义(P0.05)。模型组前额叶与海马p-ERK1/2 mRNA与蛋白质的表达水平显著低于对照组(P0.05),银杏酮酯低、中、高剂量组前额叶与海马p-ERK1/2 mRNA与蛋白表达水平较模型组显著升高(P0.05),各组ERK1/2 mRNA与蛋白的表达水平差异无显著统计学意义(P0.05)。结论:银杏酮酯可改善抑郁模型大鼠的抑郁样行为,其机制可能与上调前额叶与海马ERK1/2磷酸化水平有关。     

不同治法方药对大鼠脂肪肝Kupffer细胞ERK1/2蛋白活性的影响

目的: 观察疏肝、健脾、活血、祛湿、综合不同治法方药对大鼠脂肪肝Kupffer细胞ERK1/2蛋白活性的影响。方法： 利用高脂饮食、白酒灌胃复制大鼠脂肪肝实验动物模型，同时给予疏肝、健脾、活血、祛湿、综合不同方药进行干预。12周后以Ⅳ型胶原酶、蛋白酶E联合灌注消化、梯度离心、选择性贴壁分离不同组别大鼠Kupffer细胞，采用Western blotting方法检测不同组别大鼠Kupffer细胞ERK1/2蛋白的表达及其磷酸化水平的变化。结果： 模型组大鼠Kupffer细胞ERK1/2蛋白的表达和磷酸化ERK1/2蛋白的表达较正常组明显增加（P<0.01），各干预组ERK1/2表达和磷酸化ERK1/2蛋白的表达较模型组显著降低（P<0.01），其中疏肝组(柴胡疏肝散: 柴胡、川芎、枳壳、陈皮、白芍、香附、炙甘草)、健脾组(参苓白术散: 人参、白术、茯苓、薏苡仁、砂仁、山药、桔梗、白扁豆、莲子、炙甘草)ERK1/2蛋白表达和磷酸化ERK1/2蛋白的表达下降最为明显。结论： 在大鼠脂肪肝的形成过程中Kupffer细胞ERK1/2蛋白高表达和磷酸化ERK1/2蛋白高表达可能起到了重要作用，Kupffer细胞ERK1/2蛋白的高表达和磷酸化ERK1/2蛋白高表达可能参与并促进了脂肪性肝损伤，抑制ERK1/2蛋白的表达及磷酸化可能是健脾疏肝等治法方药抗实验性大鼠脂肪肝的作用机制之一。     

尾加压素Ⅱ促进大鼠心肌胶原蛋白表达及乳鼠心肌成纤维细胞的增殖

目的探讨尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠心肌纤维化的影响。方法腹主动脉缩窄术建立慢性压力超负荷大鼠心力衰竭模型,大鼠分为假手术组、造模4、8和12周组。利用Western blot分析心肌组织中UⅡ、G蛋白偶联受体(GPR14)、胶原Ⅰ(col-Ⅰ)、Ⅲ(col-Ⅲ)及蛋白激酶A(PKA)的表达。体外培养乳鼠成纤维细胞,分为对照组、UⅡ处理组、UⅡ+KT5720处理组及UII+SB-611812组。镜下观察及CKK-8法检测细胞增殖。结果模型组大鼠心肌组织中UⅡ、GPR14、col-Ⅰ、col-Ⅲ蛋白及PKA的表达显著增加,且呈时间依赖性。UⅡ促进乳鼠成纤维细胞(CFs)的增殖(P0.05),而KT5720、SB-611812可抑制UⅡ对乳鼠成纤维细胞的促增殖作用。结论 UⅡ及其受体系统促进大鼠心肌纤维化的发生发展。     

PARP抑制剂3-AB对糖尿病大鼠血脑屏障的影响

目的探讨多聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂3-氨基苯甲酰(3-AB)对实验性糖尿病(DM)大鼠血脑屏障(BBB)的影响。方法实验动物分为正常对照组(control组),糖尿病组(DM组),糖尿病加3-AB组(DM加3-AB组),3个月后检测各组大鼠BBB通透性,BBB紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达;Western blot法检测各组大鼠PARP1,p-ERK1/2和ERK1/2的表达。结果和control组相比,DM组体质量显著下降(P0.01),血糖明显升高(P0.01),3-AB对DM大鼠的体质量和血糖没有显著影响。DM组大鼠BBB通透性显著增加(P0.01),ZO-1和occludin的表达显著降低(P0.01),PARP1的表达明显增加(P0.01),p-ERK1/2/ERK1/2的表达显著增加(P0.01)。上述作用可被3-AB抑制。结论应用3-AB可通过增加ZO-1和occludin的表达,降低DM大鼠BBB通透性,保护DM大鼠的BBB。其保护作用可能与ERK1/2通路有关。     

ERK/c-Fos通路在Ang-(1-7)抑制Ang-Ⅱ诱导大鼠肾系膜细胞株增殖中的作用

目的：研究ERK1/2/c-Fos通路在血管紧张素-（1-7）［Ang-(1-7)］抑制血管紧张素Ⅱ（Ang-Ⅱ）诱导的大鼠肾系膜细胞株（GMCS）增殖中的作用。方法：在培养的大鼠肾系膜细胞(GMC)中，加入不同浓度的Ang-(1-7)与Ang-Ⅱ共同培养，用结晶紫计数法检测GMC数目；Western blotting检测GMC中p-ERK1/2和c-Fos蛋白的表达。结果： Ang-(1-7)呈剂量依赖性地抑制Ang-Ⅱ诱导的GMC数目的增加和GMC内p-ERK1/2和c-Fos蛋白的表达。结论：ERK/c-Fos通路参与Ang-(1-7)抑制Ang-Ⅱ诱导的GMC的增殖。     

纳布啡抑制瑞芬太尼诱导的大鼠痛觉过敏

目的研究纳布啡预处理对瑞芬太尼诱发痛觉过敏反应的影响及其可能的机制。方法将大鼠随机分为对照组、瑞芬太尼组(R组)、切口痛模型组(M组)、瑞芬太尼+切口痛模型组(RM组)及纳布啡预处理组(N+RM组)。R组、RM组和N+RM组静脉输注瑞芬太尼1.0μg(/kg·min),M组、RM组和N+RM组施足底切口术建立切口痛模型,N+RM组于瑞芬太尼输注前静脉注射纳布啡0.6 mg/kg。分别于造模前24 h(T-1)、造模后2 h(T1)、6 h(T2)、24 h(T3)和48 h(T4)测定热刺激缩足潜伏期(PWL)和机械刺激缩足阈值(PWT)。用蛋白免疫印迹法检测造模后48 h脊髓组织NR1、NR2A、NR2B、ERK1/2和p-ERK1/2的表达水平。结果与对照组相比,各组PWL和PWT均显著降低(P<0.05),NR1、NR2B和p-ERK1/2表达及p-ERK/ERK升高(P<0.05);与M组相比,RM组PWL和PWT均显著降低(P<0.05),NR1、NR2B和p-ERK1/2表达及p-ERK/ERK升高(P<0.05);与RM组相比,N+RM组PWL和PWT升高(P<0.05),NR1、NR2B和p-ERK1/2表达及p-ERK/ERK显著降低(P<0.05)。结论纳布啡可拮抗瑞芬太尼诱导的大鼠痛觉过敏。     

咳喘宁对病毒诱发哮喘大鼠气道重塑及肺组织p-ERK1/2蛋白表达的影响

目的:探讨咳喘宁对病毒诱发哮喘大鼠气道重塑及肺组织p-ERK1/2蛋白表达的影响。方法:构建呼吸道合胞病毒感染诱发哮喘建立大鼠哮喘模型,实验分为正常组、哮喘模型组、咳喘宁低剂量(0.33 mL/kg)组、咳喘宁中剂量(3 mL/kg)组、咳喘宁高剂量(10 mL/kg)组及PD98059(3 mg/kg)组;采用动物呼吸机测量大鼠气道反应性;HE染色法观察肺组织的病理形态学改变;PAS染色法和Masson染色法观察杯状上皮化生和气道胶原沉积情况。免疫组织化学染色法检测大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)和基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)的表达;Western blot法检测大鼠肺组织中的ERK1/2和p-ERK1/2表达。结果:与模型组相比,咳喘宁中、高剂量组大鼠气道反应性显著降低(P0.01),肺组织损伤显著减轻,杯状上皮化生和气道胶原沉积显著减少(P0.01),肺组织中MMP-9和TIMP-1表达显著减少(P0.01);此外,咳喘宁高剂量组肺组织p-ERK1/2蛋白表达较模型组显著减少(P0.01)。结论:咳喘宁可能是通过调节肺组织p-ERK1/2蛋白的表达,改善病毒诱发哮喘大鼠的气道重塑症状而治疗哮喘的。     

低氧性肾间质纤维化和游泳运动对大鼠尾加压素Ⅱ及其受体表达的影响

目的: 探讨慢性低氧性肾纤维化大鼠尾加压素Ⅱ(UⅡ)及其受体(GPR14)的变化,以及游泳运动在其中的作用。方法: 45只雄性SD大鼠随机分成3组,即对照组、低氧组(低氧7周)和游泳组(低氧+游泳锻炼7周组,即低氧3周后,每天1 h无负重游泳4周)。测定血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)和血桨UⅡ含量,以及肾组织羟脯氨酸(Hyp)含量、UⅡ及GPR14 mRNA表达和UⅡ蛋白表达。结果: (1)Scr和BUN含量:低氧组较对照组分别低18.5%和14.1%(均P< 0.05),而游泳组与低氧组间无显著差别;(2)肾组织Hyp含量:低氧组较对照组高42.9%(P<0.01),而游泳组较低氧组低26.1%(均P<0.05);(3)血浆UⅡ含量:低氧组较对照组高380.8%(P<0.01),而游泳组较低氧组低42.6%(P<0.01);(4)肾组织UⅡ mRNA表达:低氧组较对照组上调104.5%,游泳组较低氧组下调33.2%(均P<0.01);GPR14 mRNA表达:低氧组较对照组上调35.4%(P<0.01),而游泳组与低氧组间无显著差异;(5)肾组织UII蛋白的表达:低氧组明显高于对照组(P<0.01),而游泳组低于低氧组(P<0.01);(6)van Gieson染色显示低氧组肾血管胶原纤维增生明显,而游泳组明显改善。结论: 慢性低氧性肾纤维化大鼠尾加压素Ⅱ及其受体的表达上调;适度游泳运动有减轻慢性低氧肾间质纤维化的作用,并下调尾加压素Ⅱ基因与蛋白的表达。     

双氢青蒿素缓解脓毒症大鼠急性肝损伤

目的 探讨双氢青蒿素（DHA）对脓毒症大鼠急性肝损伤作用以及丝氨酸苏氨酸激酶（AKT）/细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径的影响。方法 将SPF级雄性SD大鼠分为对照组、模型组、DHA(25、50、100 mg/kg)组，除对照组外其余各组大鼠均用盲肠结扎术制成脓毒症动物模型，DHA组大鼠于造模前2 h腹腔注射上述剂量的DHA，造模48 h后，HE染色观察肝组织病理损伤情况、检测肝功能和血脂代谢指标变化、ELISA法检测血清炎性因子水平、Western blot检测肝组织凋亡相关蛋白、AKT和ERK1/2蛋白水平和免疫组化检测肝组织中AKT表达水平。结果 对照组肝组织细胞形态完整、结构正常，模型组肝细胞分布排列紊乱、细胞核固缩严重、细胞结构不完整，DHA(50、100 mg/kg)组肝细胞结构完整性、核固缩和细胞分布情况均明显改善。模型组ALT、AST、TC、TG、LDL水平和cleaved cas9、cleaved cas3蛋白水平均高于对照组（P<0.05），血清IL-6、MCP-1、IL-10含量和肝组织中iNOS、IL-10、p-AKT/AKT、p-ERK1/2...     

丹参酮ⅡA通过PI3K/AKT/ERK信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响北大核心CSCD

目的:探讨丹参酮ⅡA通过磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/细胞外调节激酶(ERK)信号通路对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法:取对数生长期的U251细胞,并分为空白组(未处理的U251细胞)、对照组(0.1%DMSO)、丹参酮ⅡA组(20μmol/L丹参酮ⅡA)、IGF-1组(100 ng/ml PI3K/AKT/ERK通路激活剂IGF-1)、丹参酮ⅡA+IGF-1组(20μmol/L丹参酮ⅡA与100 ng/ml IGF-1同时处理),倒置显微镜观察各组细胞形态;CCK-8法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Transwell实验检测各组细胞侵袭与迁移;Western blot检测各组细胞中细胞周期素D1(CyclinD1)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9及PI3K/AKT/ERK通路相关蛋白的表达。结果:与空白组、对照组比较,丹参酮ⅡA组U251细胞数量减少,细胞皱缩,出现大量细胞碎片,而IGF-1组U251细胞数量增多,细胞形态未发生改变;与丹参酮ⅡA组比较,丹参酮ⅡA+IGF-1组细胞数量增多,细胞贴壁性变强。与空白组、对照组比较,丹参酮ⅡA组U251细胞OD450值(24 h、48 h)、侵袭细胞数目、迁移细胞数目、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而IGF-1组U251细胞OD450值(24 h、48 h)、侵袭细胞数目、迁移细胞数目、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与丹参酮ⅡA组比较,丹参酮ⅡA+IGF-1组U251细胞OD450值(24 h、48 h)、侵袭细胞数目、迁移细胞数目、CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著升高,细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:丹参酮ⅡA通过抑制PI3K/AKT/ERK通路抑制U251细胞增殖、侵袭、迁移,并诱导其凋亡。     

腺病毒介导的shRNA下调PTEN表达对体外活化肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨腺病毒介导的shRNA下调第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)表达对体外培养的大鼠活化肝星状细胞(HSCs)增殖和凋亡的影响及其信号转导机制。方法:体外培养活化HSCs,以腺病毒为载体将靶向PTEN的shRNA干扰重组体转染至体外活化的大鼠HSCs;四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HSCs增殖;末端转移酶标记技术(TUNEL)及流式细胞术测定HSCs凋亡;Western blotting方法检测PTEN、Bax、Bcl-2、Akt、p-Akt、ERK1/2及p-ERK1/2蛋白表达情况;实时荧光定量PCR方法检测PTEN、Akt及ERK1 mRNA表达情况。结果:(1)靶向PTEN的RNA干扰重组腺病毒成功感染体外活化HSCs,并在一定范围内呈时间依赖性地促进HSCs增殖,腺病毒感染HSCs后72 h,HSCs凋亡率显著下降(P<0.05);(2)Bax表达降低,Bcl-2表达增加(P<0.05);(3)p-Akt和p-ERK1/2蛋白表达显著增加(P<0.05);而Akt蛋白及其mRNA、ERK1蛋白及其mRNA表达均无显著改变(P>0.05)。结论:RNA干扰下调PTEN基因表达可能通过Bcl-2/Bax途径促进体外活化HSCs增殖并抑制其凋亡,此外,RNA干扰下调PTEN基因表达促进p-Akt和p-ERK1/2表达增多,提示PTEN可能通过影响PI3K/Akt和ERK1/2信号通路而在调控HSCs增殖和凋亡中发挥重要作用。     

UⅡ/UT系统在LPS刺激大鼠肝枯否细胞前炎细胞因子TNF-α和IL-1β表达与分泌中的作用研究

目的探讨UⅡ/UT系统在LPS刺激大鼠肝枯否细胞(Kupffer cell,KC)TNF-α和IL-1β表达和分泌中的作用。方法采用胶原酶灌注消化和密度梯度离心分离大鼠KC。细胞分组和处理方法:正常对照组urantide(-)LPS(-)、urantide或UⅡ处理组urantide/UⅡ(+)LPS(-)、LPS刺激组urantide(-)LPS(+)、urantide或UⅡ预处理组urantide/UⅡ(+)LPS(+);细胞内基因表达采用RT-PCR和real-time PCR方法检测,细胞培养上清液中蛋白质分泌水平采用ELISA分析方法检测。结果 LPS刺激后,KC内UⅡ、UT mRNA相对表达水平和细胞培养上清液UⅡ多肽水平显著升高,但urantide预处理组显著低于LPS刺激组(P0.01)。Urantide处理组细胞UⅡ/UT mRNA和上清液UⅡ多肽水平与正常对照组之间无明显统计学差异(P0.05);LPS刺激后(LPS刺激组、UⅡ预处理组和urantide预处理组),TNF-α和IL-1βmRNA表达和蛋白质分泌水平较正常对照组明显升高(P0.01),但urantide预处理组较LPS刺激组和UⅡ预处理组显著降低(P0.01),LPS刺激组与UⅡ预处理组之间无明显统计学差异(P0.05)。UⅡ或urantide处理组KC上述前炎细胞因子的表达和分泌水平与正常对照组之间无明显统计学差异(P0.05)。结论 UⅡ/UT信号系统可能在LPS刺激肝KC前炎细胞因子TNF-α和IL-1β的表达和分泌中起重要作用。