miR-214通过MAPK信号通路对非小细胞肺癌放疗敏感性的影响

目的：探讨miR-214通过MAPK信号通路对非小细胞肺癌放疗敏感性的影响。方法：体外培养构建放射抵抗性的肺癌H358细胞株（H358-RR）;qPCR实验检测H35和H358-RR细胞中miR-214的表达水平,qPCR检测miR-214-mimic在H358-RR中的转染效率及miR-214的表达情况;Western blot检测miR-214-mimic对ERK1、jnk和p38MAPK蛋白表达水平的影响;免疫荧光检测γ-H2AX聚集点的情况及对放射的敏感性;CCK-8实验检测H358-RR细胞株接受放射后活性的变化;单细胞凝胶电泳检测放射线照射后不同组肺癌细胞DNA损伤情况。结果：成功构建H358-RR放射抵抗细胞株,qPCR检测H358-RR细胞中miR-214的表达水平高于H358细胞,qPCR检测miR-214-mimic的转染效率良好,可以有效增加miR-214的表达水平,Western blot检测转染miR-214-mimic后ERK1、jnk和p38MAPK的表达水平相应升高;过表达miR-214之后,免疫荧光检测γ-H2AX聚集点的表达明显较少,DNA损伤较少;过表达miR-214后,H358-RR细胞接受放射后细胞活力降低水平减少;过表达miR-214后H358-RR抵抗放射线及对DNA损伤修复的能力增强。结论：miR-214通过影响MAPK信号通路调控非小细胞肺癌的DNA损伤及修复能力,影响其对放疗的敏感性。     

X射线诱导非小细胞肺癌Axin表达增加并促进A549和BE1细胞系凋亡

目的研究在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中,Axin(Axis inhibitor)与细胞凋亡的关系以及X射线能否上调NSCLC组织中Axin表达,并促进NSCLC细胞凋亡。方法用免疫组织化学和TUNEL(TdT-mediated dUTP-X射nick end labeling)法检测95例NSCLC组织内Axin的表达及凋亡情况。将新鲜的NSCLC组织及培养的细胞系(A549和BE1)用X射线照射后,用免疫印迹和RT-PCR方法检测组织中Axin、凋亡蛋白caspase-3表达,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果在hNSCLC组织内,可见少量凋亡细胞和Axin阳性细胞,凋亡与Axin的表达呈正相关。X射线照射后,部分病例的hNSCLC组织内Axin表达明显上调并促进A549和BE1细胞系凋亡。结论 X射线能诱导NSCLC组织Axin表达上调并促进A549和BE1细胞凋亡。     

Axin、p53在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的 Axin(Axis inhibitor)作为Wnt信号传导通路最为重要的负性调节因子可以与p53结合,而两者均有促进细胞凋亡的作用。探讨Axin与p53在非小细胞肺癌中表达的关系及其与临床病理因素及患者预后的相关性。方法采用免疫组织化学染色及Western blot检测Axin、p53在95例有随访资料的非小细胞肺癌患者癌组织中的表达。结果 Axin在非小细胞肺癌组织中的阳性率为45.26%(43/95),明显低于正常肺组织。Axin的表达与非小细胞肺癌的分化正相关(=0.012),与TNM分期及淋巴结转移相关(<0.05),与突变型p53的表达负相关(=0.000)。Axin高表达的患者预后明显好于低表达的患者(<0.05)。结论 Axin与突变型p53的表达负相关,Axin高表达者预后较好。     

非小细胞肺癌中Frat1与Axin表达的相关性及意义

目的近年来肺癌的发病率及死亡率逐年升高,寻找新的靶向治疗方向的要求日益迫切。作为Wnt通路中的一个新成员,Frat1在肺癌组织中的表达情况以及Frat1与Axin在肺癌组织中表达相关性的研究甚少。方法用免疫组化SP法对120例原发性非小细胞肺癌(NSCLC)患者手术标本中Frat1和Axin的表达进行检测,使用SPSS 16.0统计数据。结果在NSCLC中Frat1的阳性表达与肺癌组织的低分化(P=0.004)、淋巴结转移(P=0.033)、TNM分期相关(P=0.039);Axin的异常表达与肺癌组织的低分化(P=0.001)、淋巴结转移(P=0.036)、TNM分期相关(P=0.043);Frat1的阳性表达与Axin的异常表达有相关性(P=0.025)。结论 Frat1和Axin在NSCLC中与肺癌的低分化、转移、高级别TNM分期等恶性表型有关,Frat1和Axin在癌组织中的表达有相关性,Frat1可能成为非小细胞肺癌患者靶向治疗的新靶点。     

一例因基因突变致LIG4综合征病例的临床特点及分析

目的探讨DNA连接酶Ⅳ(LIG4)综合征的临床特点。方法分析一例LIG4综合征病例的临床资料,对患儿及其父母进行二代高通量基因测序。结合文献总结该病的临床特点。结果本例患儿的临床表现有小头畸形,特殊面容,发育迟缓,免疫功能缺陷,反复呼吸道感染,慢性腹泻。基因检测结果显示患儿LIG4基因存在纯合性改变:c.833G>T(p.R278L),故诊断LIG4综合征。结合文献复习包括本研究在内的共42例LIG4综合征病例的临床特点。结论LIG4综合征临床特点主要有小头畸形,免疫功能缺陷,特殊面容,血细胞下降和发育迟缓。临床上反复呼吸道感染、小头畸形伴免疫缺陷患儿应警惕此病,基因检测可协助诊断。     

姜黄素通过下调nectin-4抑制肺癌PC-9细胞的迁移和侵袭

目的:探讨姜黄素对肺癌PC-9细胞迁移和侵袭的抑制作用及其与nectin-4表达的关系。方法:用MTT、划痕修复和Transwell小室实验检测姜黄素对肺癌PC-9细胞活力、迁移和侵袭能力的影响;用Western blot技术检测姜黄素对nectin-4表达及AKT通路的影响;经siRNA干扰nectin-4后观察姜黄素对PC-9细胞活力、迁移、侵袭及AKT通路的影响。结果:姜黄素能抑制PC-9细胞活力,10、20μmol/L姜黄素组与对照组相比,划痕修复率降低,穿膜细胞数目显著下降。姜黄素作用肺癌PC-9细胞24 h后,nectin-4表达下调。转染siNectin-4 48 h和72 h后,siNectin-4组比对照组的细胞活力显著降低(P0.01),划痕修复率及穿膜细胞数目显著下降(P0.01)。姜黄素与siNectin-4均抑制了PC-9细胞AKT通路的激活。姜黄素与siNectin-4联用时细胞活力降低(P0.01),划痕修复率、细胞侵袭能力及AKT磷酸化水平下降。结论:在肺癌PC-9细胞中,姜黄素通过下调nectin-4表达、调控下游AKT通路来抑制细胞迁移和侵袭。     

X射线诱导NSCLC组织Axin表达并通过p53或JNK途径促进细胞凋亡

目的研究X-射线对非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)组织中Axin表达的作用,以及X射线上调Axin表达的机制。方法应用Westernblot、RT-PCR方法检测15例经过X射线照射后NSCLC组织中Axin在蛋白水平及RNA水平的表达变化情况以及caspase-3活化情况。转染Axin及AxinΔp53ΔHIPK2至A549、BE1细胞中,并施加p53或JNK抑制剂,细胞经X线照射后用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,研究Axin上调细胞凋亡的机制。结果经X射线照射后,在15例NSCLC肺癌组织中,有8例Axin在RNA水平和蛋白水平上表达上调,与Axin未上调组相比,细胞凋亡显著增加(P<0.05)。转染Axin能使A549、BE1细胞凋亡明显增加,AxinΔp53ΔHIPK2不能上调A549细胞凋亡,p53抑制剂和JNK抑制剂分别抑制A549和BE1细胞凋亡。结论 X射线诱导部分NSCLC组织Axin表达增加并促进细胞凋亡,Axin通过p53或JNK途径促进X射线诱导的细胞凋亡。检测NSCLC组织中是否存在p53基因突变并不能作为判定是否对X射线敏感的指标。     

抑制miR-421表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性

目的:研究抑制miR-421表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性的分子机制。方法:运用脂质体2000将miR-421 inhibitor转染4株宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A和CaSki,以转染阴性核苷酸为对照,real-time PCR检测子宫内膜上皮细胞ESC细胞和4株宫颈癌细胞中miR-421的表达水平;转染的细胞经不同剂量电离辐射(0、2、4、6和8 Gy)处理48 h后运用MTT法、ELISA和Annexin V-FITC/PI染色法联合流式细胞术分别测定细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率和细胞凋亡率;运用Western blot检测细胞中cleaved caspase-9、caspase-9、cleaved PARP、PARP、Bcl-2和Bax蛋白的水平。结果:miR421在ESC细胞中低表达,而在4株宫颈癌细胞中高表达,转染miR-421 inhibitor后miR-421显著低于阴性对照组(P0.05)。相同条件下,辐照后低表达miR-421的宫颈癌细胞活力和LDH漏出率显著低于阴性对照组,72 h的细胞凋亡率明显增加(P0.05)。Western blot结果显示,电离辐射后与阴性对照组比较,低表达miR-421的宫颈癌细胞中cleaved caspase-9、cleaved PARP和Bcl-2的蛋白水平明显增高,而Bax蛋白水平显著降低(P0.05)。结论:miR-421在正常子宫内膜上皮ESC细胞中低表达,而在宫颈癌细胞系中高表达;下调miR-421表达能抑制宫颈癌细胞的活力,显著增强宫颈癌细胞的辐射敏感性,其机制至少部分通过激活caspase-9细胞凋亡通路进而促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达和抑制促凋亡蛋白Bax表达而实现。     

食管癌放疗敏感性与个体化治疗

放射治疗是目前食管癌主的、有效的、安全的治疗手段,是食管癌综合治疗的重手段之一.然而多项临床研究表明局部控制失败仍然是治疗失败的首原因.因此,提高食管癌细胞放射敏感性是治疗的关键.放射增敏剂可有效提高肿瘤细胞的放射敏感性,一直是放射肿瘤治疗学中的一个研究热点.使用放射增敏剂是改善相当一部分患不能够耐受同期放化疗的不良反应这一现状,提高放疗效果.本文从凋亡、乏氧、血管生成三个角度介绍食管癌放疗增敏的转化医学及临床研究,力求为食管癌综合治疗提供新思路.针对不同靶点通过不同药物增加其敏感性是未来食管癌个体化医疗的发展方向.     

Axin基因异常高甲基化对肺癌细胞生物学行为的调节

目的体轴抑制因子Axin是Wnt信号传导通路的关键抑制因子,本研究探讨部分肺癌细胞系中Axin表达下调的原因,及其表达下调对肺癌生物学行为的影响。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)对BE1和SPC-A-1细胞系中Axin基因启动子区和第一内含子区的甲基化状态进行了检测,应用RT-PCR方法检测了两细胞系中AxinmRNA表达。利用野生型Axin质粒转染两种细胞,并且应用MTT和Transwell细胞侵袭实验观察两种细胞系在转染后细胞生物学行为的变化。结果 BE1细胞中Axin基因的启动子区和第一内含子区为高甲基化状态,而SPC细胞为非甲基化状态,BE1细胞中AxinmRNA的表达明显低于SPC细胞系(P<0.05),5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine)作用于BE1细胞可以使高甲基化的Axin基因去甲基化并上调Axin的转录。转染野生型Axin可以明显抑制BE1细胞和SPC-A-1细胞的增殖和侵袭(P<0.05),其中BE1细胞受到的抑制程度更为明显。结论 Axin基因高甲基化可能是其在肺癌中表达下调的重要原因,过表达Axin可以明显抑制Axin高甲基化肺癌细胞的增殖和侵袭能力。     

TRPV4 induces apoptosis via p38 MAPK in human lung cancer cells

Lung cancer is one of the most common cancers worldwide. TRPV4 belongs to the ‘transient receptor potential'' (TRP) superfamily. It has been identified to profoundly affect a variety of physiological processes, including nociception, heat sensation, and inflammation. Unlike other TRP superfamily channels, its roles in cancers are unknown. Here, we elucidated the effects of TRPV4 and molecular mechanisms in human lung cancer cells. The levels of TRPV4 were detected in human lung cancer tissues and the paired paracarcinoma tissues by real-time PCR and western blotting analysis. The proliferation of human lung cancer cells was determined by MTT assay. Cell apoptosis was determined by FACS assay. The results demonstrated that low levels of TRPV4 were detected in clinical lung carcinoma specimens. Over-expression of TRPV4 induced cell death and inhibited cell proliferation and migration in A549 cells and H460 cells. Moreover, over-expression of TRPV4 enhanced the activation of p38 MAPK signal pathway. Inhibition of p38 MAPK abolished the effects of TRPV4 on cell proliferation, apoptosis, and migration in A549 cells. Collectively, our findings indicated that TRPV4 induced apoptosis via p38 MAPK in human lung cancer cells and suggested that TRPV4 was a potential target for therapy of human lung cancers.     

非小细胞肺癌中Axin与β-连环素异常表达的关系

目的 探讨Axin（axis inhibition protein）和β-连环素（β-catenin）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达、β-catenin突变及它们与各临床病理因素的关系。方法 采用免疫组织化学（SP法）和直接测序方法对100例NSCLC标本中Axin和β-catenin的表达和β-catenin基因突变进行了检测。结果 β-catenin的细胞膜表达降低率为80．0％,细胞核表达率为26．0％。高、中分化和低分化NSCLC中,β-catenin的表达降低率分别为70．0％（35／50）和90．0％（45／50）,差异有统计学意义（P=0．012）。有淋巴结转移和无淋巴结转移NSCLC中β-catenin表达降低率分别为87．3％（48／55）和71．1％（32／45）,差异有统计学意义（P=0．044）。Axin的阳性表达率为48．0％,高、中分化和低分化NSCLC中,Axin的阳性率分别为60．0％（30／50）和36．0％（18／50）,差异有统计学意义（P=0．016）。在β-catenin核表达阳性的病例中,Axin阳性表达率为15．4％（4／26）,低于β-catenin核表达阴性的病例（59．5％,44／74）（P〈0．001）。100例肺癌新鲜标本中未发现β-catenin基因第三外显子突变。结论 β-catenin的膜表达降低与NSCLC的低分化和淋巴结转移相关,Axin的表达与NSCLC的低分化和β-catenin的细胞核蓄积负相关。β-catenin基因第三外显子的突变可能不是NSCLC中β-catenin蛋白异常表达的主要原因。     

In vitro chemosensitivity and radiosensitivity of an adriamycin-resistant subline of human small cell lung cancer cells

Using a cell line (SBC-3/ADM) of human small cell lung cancer, which is 30-fold more resistant to adriamycin than the parent cell line (SBC-3), the activity of a variety of anticancer agents was analyzed by soft agar clonogenic assay to search for a means of circumventing drug resistance. The SBC-3/ADM cells were markedly resistant to some anthracycline antibiotics in comparison with the SBC-3 cells: 28-fold for daunomycin, 26-fold for 4'-epiadriamycin, 18-fold for THP-adriamycin, and 8.4-fold for aclarubicin. However, the cells were as sensitive to mitoxantrone, one of the anthraquinone derivatives, as the parent cells. The cells were resistant to structurally or pharmacodynamically unrelated compounds such as vincristine, mitomycin C, and an active form of ifosfamide, whereas they were susceptible to cisplatin to some extent. The in vitro radiosensitivity of both cell lines was also evaluated, and they were found to be equally sensitive to X-ray. These results suggest that mitoxantrone and cisplatin may exert sufficient activity for small cell lung cancer which has acquired resistance to adriamycin, and that consolidative chest irradiation may be clinically useful after combination chemotherapy including adriamycin.     

p21 蛋白激活激酶4 在乳腺癌上皮间质转化中的作用研究

目的:探讨p21 蛋白激活激酶4(PAK4)在乳腺癌细胞上皮间质转化中的作用。方法:在乳腺癌MCF7 细胞中超表达PAK4,而在乳腺癌MDA-MB-231 细胞中干扰PAK4 表达,通过迁移和侵袭实验检测其对乳腺癌细胞迁移侵袭的影响,荧光定量法和免疫印迹分析检测PAK4、E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin mRNA 和蛋白质表达量变化,免疫印迹法检测EMT 相关转录激活因子Snail、Slug 表达量变化。结果:MCF7 细胞超表达PAK4 后,细胞的迁移侵袭能力显著增加,并且上皮标志分子E-Cadherin 蛋白表达下调,而间质标志分子N-Cadherin 和Vimentin 蛋白则表达上调,EMT 相关转录激活因子Slug 表达量增加;MDA鄄MB鄄231 细胞中,抑制内源PAK4 表达能显著降低细胞的迁移侵袭能力,上调E-Cadherin 蛋白表达,下调N-Cadherin、Vimentin 和Slug 蛋白的表达。结论:PAK4 通过上调Slug 促进乳腺癌发生上皮间质转化,可作为抑制乳腺癌转移的分子靶点。