沉默信息调节因子1对缺氧心肌细胞凋亡和自噬的影响

目的:分析沉默信息调节因子1(Sirt1)对缺氧条件下心肌细胞凋亡和自噬的影响。方法:将心肌H9c2细胞分为Control组、Hypoxia组(缺氧处理24h)、NC+Hypoxia组(转染阴性对照并缺氧处理24h)和Sirt1+Hypoxia组(转染Sirt1过表达载体并缺氧处理24h)。以qRT-PCR和Western blot测定心肌细胞中Sirt1mRNA和蛋白表达水平,MTT方法评估细胞存活率,流式细胞术测定细胞总凋亡水平,Western blot检测凋亡蛋白Bax、Cleaved Caspase-3水平和自噬蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1水平。结果:与Control组比较,Hypoxia组细胞中Sirt1mRNA和蛋白表达水平降低,细胞存活率降低,细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平升高,LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白水平降低(P0.05)。与NC+Hypoxia组比较,Sirt1+Hypoxia组细胞中Sirt1mRNA和蛋白表达水平升高,细胞存活率升高,细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白水平降低,LC3-Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1蛋白水平升高(P0.05)。结论:Sirt1可抑制缺氧心肌细胞凋亡并诱导细胞自噬。     

黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍对PC12细胞氧糖剥夺复糖复氧后细胞自噬和PI3K信号通路的影响

目的:探讨黄芪甲苷和人参皂苷Rg1配伍对PC12细胞氧糖剥夺后再复糖复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的细胞自噬的影响及作用机制。方法:以PC12细胞建立OGD/R自噬性损伤模型,观察黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍对细胞自噬的影响,并通过PI3KⅠ/Akt/m TOR和PI3KⅢ/beclin-1/Bcl-2信号通路研究黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍的作用机制。结果:氧糖剥夺2 h复糖复氧24 h后,PC12细胞内LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值增加。黄芪甲苷、人参皂苷Rg1及黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍均能下调OGD/R后PC12细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值,且配伍组的效应强于药物单用组。机制研究表明,人参皂苷Rg1单用及黄芪甲苷和人参皂苷Rg1配伍能升高PI3KⅠ、Akt、m TOR蛋白磷酸化水平,配伍的效应强于药物单用;黄芪甲苷单用及黄芪甲苷和人参皂苷Rg1配伍均能抑制PI3KⅢ、beclin-1蛋白表达,而配伍还能上调Bcl-2蛋白表达,且配伍的效应强于药物单用组。结论:PC12细胞在缺糖缺氧2 h再复糖复氧24 h后,细胞出现自噬;黄芪甲苷和人参皂苷Rg1均能减轻OGD/R诱导的PC12细胞自噬,且2者配伍对细胞自噬具有协同抑制作用,其机制可能与调节PI3KⅠ/Akt/m TOR和PI3KⅢ/beclin-1/Bcl-2信号通路有关。     

紫檀芪对宫颈癌细胞自噬及SIRT1-FoxO信号通路的影响

目的:探讨紫檀芪(PTE)对宫颈癌细胞自噬及SIRT1-FoxO信号通路的影响。方法:以人宫颈癌HeLa细胞作为研究对象。采用CCK-8法和流式细胞术分别测定不同浓度的PTE对HeLa细胞活力和凋亡率的影响;透射电镜观察细胞中自噬体数目;qPCR测定细胞中SIRT1和FoxO的mRNA表达;Western blot测定细胞中SIRT1、FoxO、LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p62、Bax和Bcl-2水平。结果:PTE作用于HeLa细胞24和48 h后,细胞活力抑制率随浓度增加而升高。与0μmol/L PTE相比,15、30和60μmol/L PTE处理后,HeLa细胞凋亡率、细胞中自噬体数目及Bax、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、SIRT1和FoxO水平显著升高(P<0.05),Bcl-2和p62水平显著降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论:PTE可能通过激活SIRT1-FoxO信号通路诱导HeLa细胞自噬和凋亡,从而抑制HeLa细胞活力。     

雷帕霉素减轻氧糖剥夺对SH-SY5Y细胞的损伤

目的:观察雷帕霉素(Rapa)对氧糖剥夺(OGD)的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的影响,并探讨自噬在其中的作用。方法:SH-SY5Y细胞随机分为4组:正常对照组(常规培养,不进行OGD处理)、Rapa组、OGD组(无糖培养基、1%O_2的三气培养箱内孵育细胞12 h)和Rapa+OGD组。进行形态学观察;MTT法检测细胞活力;乳酸脱氢酶(LDH)漏出率判断细胞损伤的程度;caspase-3活性检测试剂盒检测酶活性;原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡水平;Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、自噬标志蛋白LC3B-Ⅱ及自噬调控蛋白beclin-1的表达。结果:与OGD组相比,Rapa+OGD组的细胞存活率明显升高(P0.05),LDH漏出率及caspase-3酶活性明显降低(P0.05)。TUNEL染色观察结果显示,与OGD组相比,Rapa+OGD组的细胞凋亡明显减少(P0.05);Western blot实验结果显示Rapa+OGD组的Bcl-2、beclin-1及LC3B-Ⅱ蛋白的表达水平显著高于OGD组(P0.05),而Bax蛋白水平明显低于OGD组(P0.05)。结论:Rapa对OGD损伤的SH-SY5Y细胞具有保护作用,其机制可能与上调beclin-1蛋白、激活自噬有关。     

骨髓间充质干细胞通过上调EPO表达减轻缺氧损伤引起的PC12细胞凋亡

 目的：观察骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）对氯化钴（CoCl2）诱导的PC12细胞缺氧损伤及凋亡的影响并探讨其作用机制。方法：将PC12细胞分为以下几组：空白对照组、CoCl2处理组、BM-MSCs-siCTL+CoCl2处理组和BM-MSCs-siEPO +CoCl2处理组。应用MTT、流式细胞术（FCM）及Hoechst  33258染色法检测BM-MSCs对CoCl2诱导的细胞活性下降及凋亡的影响。采用逆转录PCR（RT-PCR）和Western blotting检测BM-MSCs的促红细胞生成素（EPO）表达情况。同时通过RT-PCR法检测PC12细胞的Bcl-2与Bax表达情况。此外应用分光光度法检测caspase-9和-3活性。结果：MTT结果显示BM-MSCs共培养能够提高PC12细胞活力, 0.6 mmol/L CoCl2单独处理组24 h和48 h细胞存活率仅为（43.0±6.4）%和（33.8±5.7）%,1∶15细胞比BM-MSCs共培养24 h和48 h后细胞存活率明显上升,分别为（77.9±3.8）%和（75.2±9.7）%（P＜0.01）。RT-PCR 和Western blotting显示0.6 mmol/L CoCl2处理24 h和48 h明显诱导BM-MSCs的EPO表达上调,而EPO siRNA可完全抑制BM-MSCs的EPO表达（P＜0.01）。FCM及Hoechst 33258结果表明CoCl2处理能诱导PC12细胞损伤及凋亡,BM-MSCs-siCTL与PC12细胞共培养可有效抑制CoCl2的细胞毒性作用,减少细胞缺氧性损伤及凋亡,而EPO siRNA可明显阻断BM-MSCs的抗细胞凋亡作用（P＜0.01）。 RT-PCR结果显示BM-MSCs共培养组PC12细胞的Bcl-2表达较CoCl2处理组明显升高,而Bax表达较CoCl2处理组明显降低;EPO siRNA明显抑制BM-MSCs介导的Bcl-2表达升高和Bax表达降低（P＜0.01）。分光光度法结果显示BM-MSCs-siCTL共培养组的caspase-9和-3活性较CoCl2处理组明显降低,而BM-MSCs-siEPO共培养组的caspase-9和-3活性较BM-MSCs-siCTL共培养组明显增加（P＜0.01）。结论：BM-MSCs共培养能抑制CoCl2诱导的PC12细胞凋亡,其细胞保护作用的机制可能与其上调EPO的表达有关。     

胡桃醌诱导HeLa细胞凋亡的机制

目的 探讨胡桃醌对宫颈癌HeLa细胞促凋亡作用的机制,及其相关的信号转导通路。方法 选取处于对数生长期的HeLa细胞将其分为空白对照组和30μmol/L胡桃醌组。采用MTT法观察胡桃醌对不同时间点HeLa细胞的抑制作用;Hoechst 33258试剂盒,流式细胞仪测定胡桃醌对不同时间点HeLa细胞凋亡的影响;Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax 和Caspase-3, 磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/Akt通路中AKt及pAkt的表达。 结果 MTT实验显示,与对照组比较,各时间点HeLa细胞具有抑制作用,且差异显著均有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）;Hoechst 33258检测表明,30μmol/Ｌ胡桃醌处理细胞4,8,12 h后可出现明显的细胞核典型凋亡细胞形态;细胞凋亡检测表明,30μmol/Ｌ胡桃醌培养不同时间后,与对照组相比早期凋亡率明显增高;Western blotting检测显示,与正常对照组相比,30μmol/L胡桃醌处理细胞12h后,HeLa细胞Bcl-2,pAkt蛋白的表达明显降低,而Bax、Cleave-Caspase-3,Akt 蛋白表达明显升高。 结论 胡桃醌通过抑制PI3K/Akt通路,进而促进HeLa细胞凋亡。     

红藻氨酸诱导PC12细胞凋亡及阿魏酸对神经元的保护作用

 目的： 探讨阿魏酸(ferulic acid, FA)对红藻氨酸(kainic acid, KA)诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制。方法：采用50 μmol/L KA诱导PC12细胞凋亡建立阿尔茨海默病神经细胞模型,然后将处理后的PC12细胞分为KA模型组和KA＋FA (25、50和100 μmol/L)处理的低、中、高剂量组,同时设立正常对照组。采用MTT比色法检测PC12细胞的存活率;采用免疫细胞化学法观察PC12细胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax和细胞色素C (Cyt C)的表达;annexin Ⅴ+PI双染流式细胞术检测PC12的细胞凋亡率;蛋白免疫印记技术检测PC12细胞中Bcl-2、Bax和Cyt C的表达水平。结果：MTT法和免疫细胞化学检测显示,与正常组相比,模型组PC12细胞的存活率明显下降,且细胞中Bcl-2表达减少(P<0.01),而Bax和Cyt C表达升高,Bcl-2/Bax比值下降(P<0.01),流式细胞术检测细胞的凋亡率显示,模型组细胞的凋亡率显著上升(P<0.01)。蛋白印迹术检测显示,模型组细胞中Bcl-2表达量减少,Bax和Cyt C表达量升高,与正常组比较差异显著(均P<0.01)。当采用FA干预后,与模型组相比,25、50和100 μmol/L组细胞的存活率明显上升,细胞凋亡率减少,而且能增加Bcl-2阳性百分率和表达水平,明显减少Bax和Cyt C阳性百分率和表达水平,使Bcl-2/Bax比值增加 (P<0.05或P<0.01)。结论：KA在50 μmol/L时可明显诱导PC12发生凋亡,FA在25～100 μmol/L时能显著抑制KA诱导的PC12细胞凋亡,其神经保护机制可能是通过抑制Bax和Cyt C的表达,升高Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值,从而阻断内源性细胞凋亡通路而提高神经细胞的存活率。     

圣草素促进成骨细胞自噬减轻糖皮质激素诱导的细胞凋亡

背景：糖皮质激素诱导的骨质疏松症是系统性糖皮质激素治疗的常见并发症，主要表现为对成骨细胞的抑制作用。圣草素可抑制破骨细胞分化和卵巢切除术引起的骨质疏松，然而，圣草素是否调节糖皮质激素诱导的成骨细胞凋亡尚不清楚。目的：探究圣草素是否在地塞米松诱导的成骨细胞凋亡中发挥作用，及其潜在的作用机制。方法：采用不同浓度(0,0.5,1,2.5,5,10μmol/L)的圣草素或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(5μmol/L)处理地塞米松预处理的成骨细胞MC3T3-E1，然后用血红素加氧酶1的过表达载体(pcDNA-HMOX1)和空载体(pcDNA vector)转染MC3T3-E1细胞。分别采用CCK-8和流式细胞术检测细胞活力和凋亡；采用ELISA检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性；采用Western blotting检测自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62、Atg5和Atg12表达，凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达，以及AMP蛋白激活激酶(AMPK)和p-AMPK蛋白表达。结果与结论：(1)低浓度的圣草素对MC3T3-E1细胞无毒性，且促进细胞增殖，并以剂量依赖性的方式促进自噬相关蛋白LC3-...     

甲基莲心碱通过调控miR-29a-3p/AQP4表达抑制Aβ1-42致PC12细胞的损伤

目的探讨甲基莲心碱(Nef)在β淀粉样蛋白(Aβ1-42)损伤大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞PC12的作用及其分子机制。方法将PC12细胞分为对照组、模型组(4μg/mL Aβ1-42培养24 h)和干预组(低、中、高剂量甲基莲心碱)。MTT法检测PC12细胞存活;流式细胞计量术检测细胞凋亡;Western blot检测水通道蛋白4(AQP4)、Bcl-2和Bax表达量;qPCR检测细胞中miR-29a-3p和AQP4 mRNA表达。生物学信息预测和双荧光素酶基因报告分析miR-29a-3p和AQP4的靶向关系。在模型组转染miR-29a-3p、si-AQP4,或转染anti-miR-29a-3p并进行高剂量Nef干预,考察其对Aβ1-42损伤PC12细胞存活和凋亡的影响。结果与模型组相比,甲基莲心碱组细胞存活率和Bcl-2、miR-29a-3p表达明显升高,细胞凋亡率和Bax、AQP4 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05)。AQP4是miR-29a-3p的靶基因。miR-29a-3p过表达和抑制AQP4表达均显著提高PC12细胞存活率和Bcl-2表达量(P<0.05),降低细胞凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05)。抑制miR-29a-3p表达逆转甲基莲心碱对Aβ1-42损伤PC12细胞存活、Bcl-2蛋白水平的促进作用,以及逆转甲基莲心碱对细胞凋亡率、Bax蛋白表达的抑制作用。结论甲基莲心碱通过miR-29a-3p/AQP4抑制Aβ1-42所致PC12细胞损伤,促进细胞存活,并抑制细胞凋亡。     

血管紧张素Ⅱ 1型受体自身抗体通过上调自噬诱导INS-1胰岛β细胞凋亡

目的:本研究旨在探究血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体(AT1-AA)能否引起胰岛β细胞的凋亡,自噬是否参与其中以及其所发挥的作用。方法:10-6mol/L AT1-AA处理INS-1细胞24 h后,用流式细胞术、Western blot及Hoechst 33258染色检测细胞的凋亡水平;Western blot检测自噬相关蛋白LC3和beclin 1的蛋白水平。使用血管紧张素Ⅱ1型受体拮抗剂替米沙坦以及经典的自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)预处理细胞1 h之后再加入AT1-AA处理24 h,检测细胞凋亡、自噬及存活率的变化情况。结果:10-6mol/L AT1-AA处理INS-1细胞24 h可明显降低细胞存活率(P0.05)。与阴性Ig G对照组相比,AT1-AA分别处理细胞12 h、24 h和36 h后细胞凋亡水平明显增高(P0.05);此外,LC3及beclin 1的蛋白水平也随处理时间的延长逐渐升高,且凋亡和自噬水平的升高均可被替米沙坦所阻滞。使用自噬抑制剂3-MA预处理之后,细胞的凋亡率较单独给予AT1-AA处理组明显降低(P0.05)。结论:AT1-AA可通过血管紧张素Ⅱ1型受体上调自噬来诱导INS-1胰岛β细胞凋亡。     

程序化细胞死亡因子5对缺氧/复氧诱导的心肌细胞凋亡和自噬的影响及机制

目的:探讨程序化细胞死亡因子5(PDCD5)对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞凋亡和自噬的影响及其作用机制。方法:以H9c2心肌细胞系为研究对象,建立H/R损伤模型,采用RNA干扰方法抑制PDCD5的表达,MTT法检测心肌细胞的存活率,TUNEL显色法检测细胞凋亡率,RT-qPCR和Western blot法分别检测mRNA和蛋白的表达水平。结果:H/R损伤的H9c2心肌细胞中,PDCD5表达水平升高,同时细胞的存活率降低,细胞凋亡率和自噬水平增加,而PDCD5沉默能够增加细胞存活率,同时减少细胞凋亡率,促进Bax表达且抑制抑Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及自噬相关蛋白beclin-1的表达。此外,沉默PDCD5可通过降低p-P65的蛋白水平抑制NF-κB通路。结论:沉默PDCD5通过阻断NF-κB信号通路而抑制H/R损伤诱导的心肌细胞凋亡和自噬,从而保护心肌细胞。     

汉黄岑素通过调节P53 信号通路增强宫颈癌对顺铂的化疗敏感性

目的:探究汉黄岑素增强宫颈癌对顺铂的化疗敏感性的作用机制。方法:体外培养CC细胞株,建立顺铂敏感性的CC细胞株CaSki/DDP并检测CaSki和CaSki/DDP的IC_(50)值,分为:空白对照组(Control)、贝伐单抗组(BVZ 2.5μg/ml)、顺铂组(DDP 10 mg/L)、低剂量汉黄岑素组(DDP 10 mg/L+WG 5μmol/L)、中剂量汉黄岑素组(DDP10 mg/L+WG 10μmol/L)、高剂量汉黄岑素组(DDP 10 mg/L+WG 20μmol/L)、P53抑制剂组(DDP+PFT-α)和汉黄岑素+P53抑制剂组(DDP+WG 20μmol/L+PFT-α)。使用CCK8检测细胞生长;使用蛋白质印迹法检测Ki67、PCNA Bcl-2、Bax、cytC、Caspase3、LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Beclin1、P62的表达水平;流式细胞术分析检测细胞凋亡;使用免疫荧光检测自噬LC3核转位;使用蛋白印迹法检测P53水平;使用P53抑制剂Pifithrin-α处理后,使用蛋白印迹法、CCK8、流式和免疫荧光检测P53水平和细胞生长、凋亡、自噬情况。结果:宫颈癌细胞株CaSki/DDP的IC_(50)值为50 mg/L;相比空白对照组,贝伐单抗组宫颈癌细胞Ki67、PCNA、Bcl-2、P62表达水平和细胞存活率显著降低(P0.05),Bax、cytC、Caspase3表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值、细胞凋亡率、细胞内荧光强度显著升高(P0.05);相比顺铂组,使用汉黄岑素处理各组宫颈癌细胞Ki67、PCNA、Bcl-2、P62表达水平、细胞存活率显著降低,Bax、cytC、Caspase3表达水平、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值、细胞凋亡率、细胞内荧光强度显著升高(P0.05),且呈剂量依赖性;相比P53抑制剂组,汉黄岑素+P53抑制剂组P53宫颈癌细胞凋亡率、单个细胞内LC3+荧光点数显著升高(P0.05),宫颈癌细胞存活率显著降低(P0.05)。结论:汉黄岑素可以通过调节P53信号通路增强宫颈癌细胞的自噬和凋亡,抑制其增殖,实现增强宫颈癌对顺铂的化疗敏感性,且在一定剂量范围内呈剂量依赖性。     

shRNA 沉默CCAT2 通过抑制自噬对非小细胞肺癌细胞A549 化疗敏感性的 影响

目的:探究shRNA沉默CCAT2抑制自噬对非小细胞肺癌细胞A549化疗敏感性的影响及机制。方法:细胞分为A549/DDP组、Scramble组、CCAT2 shRNA组,转染相应的shRNA处理细胞,RT-PCR检测CCAT2基因表达水平,CCK8检测A549/DDP的细胞活力,Hoeschst和流式细胞法检测细胞凋亡,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活性半胱天冬酶3(cl-caspase-3)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)、LC3Ⅰ、Beclin1、p62蛋白表达水平。结果:与A549细胞株相比,A549/DDP细胞株中CCAT2表达水平显著升高。与A549/DDP组相比,CCAT2 shRNA组CCAT2表达水平显著降低,细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,凋亡相关蛋白Bax、cl-caspase-3蛋白表达水平显著升高,Bcl-2蛋白表达水平显著降低,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平比率显著降低,Beclin1蛋白表达水平降低,p62蛋白表达水平升高。结论:沉默CCAT2可提高非小细胞肺癌细胞A549株化疗敏感性,作用机制可能与抑制自噬作用有关。     

PCSK9在oxLDL介导PC12细胞凋亡中的作用及机制研究

<正>目的:观察PCSK9在ox LDL诱导PC12凋亡中的作用及机制。方法:用ox LDL单独处理或PCSK9 siRNA转染后处理PC12细胞,Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR、Western blot分别检测PCSK9、BACE1、caspase-3、caspase-9、Bcl-2和Bax的表达,ELISA检测培养液中Aβ40和Aβ42含量。结果:75 mg/L ox LDL可诱导PC12凋亡,增加PCSK9 mRNA和蛋白     

电针联合跑轮训练对 MCAO 模型大鼠自噬、 神经细胞凋亡和神经发生的影响

目的 探究电针联合跑轮训练对大脑中动脉栓塞 (middle cerebral artery embolism, MCAO) 模型 大鼠自噬、 神经细胞凋亡和发生的影响。 方法 30 只 SD 大鼠随机分为 MCAO 模型组、 联合干预组和假手术 组, 每组10 只。 测量神经系统评分和脑梗塞体积。 检测自噬效应蛋白 (Beclin1) 和膜型微管相关蛋白 1A/ 1B-轻 链3 (LC3) (LC3B-Ⅱ) / 胞浆型微管相关蛋白1A/ 1B-轻链3 (LC3) (LC3B-Ⅰ) 表达以及凋亡相关蛋白 B 淋巴细胞 瘤-2 基因 (bcl-2)、 BCL2 关联 X 蛋白 (BAX) 和半胱氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3) 表达。 检测神经细胞凋亡和超 氧化物歧化酶 (SOD) 和过氧化氢酶 (CAT) 的活性以及丙二醛 (MDA)、 p-AMPK 和 p-mTOR 的表达。 结果 MCAO 模型组 Tunel 阳性细胞、 神经系统评分、 脑梗塞体积、 BAX、 Caspase-3、 Beclin-1、 LC3B-Ⅱ/ LC3B-I、 p-AMPK 表达、 MDA 含量增加, SOD 和 CAT 活性、 p-mTOR、 Bcl-2 表达降低 (P<0. 05)。 联合干预组 Tunel 阳性细 胞、 神经系统评分、 脑梗塞体积、 BAX、 Caspase-3、 Beclin-1 和 LC3B-Ⅱ/ LC3B-I、 p-AMPK 表达、 MDA 含量降低, SOD 和 CAT 活性、 Bcl-2、 p-mTOR 表达增加 (P<0. 05)。 结论 联合干预抑制氧化应激、 自噬相关蛋白 Beclin-1 和 LC3B-Ⅱ/ LC3B-I 以及 BAX 和 Caspase-3 表达并促进 Bcl-2 表达。     

[Gly14]-Humanin对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨神经保护肽[Gly14]-Humanin过表达对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的影响.方法:采用脂质体法将重组真核表达载体pcDNA3.1(-)/HNG-FLAG转入PC12细胞,G418筛选获得抗性亚克隆细胞株,免疫细胞化学法分析[Gly14]-Humanin基因的表达.用25μmol/L Aβ25-35作用细胞24 h,MTT法分析细胞存活率,流式细胞术(FCM)监测细胞凋亡,Hoechst 33258染色观察凋亡细胞核形态改变.结果:建立了稳定过表达[Gly14]-Humanin的PC12细胞系.经25 μmol/L Aβ25-35作用后,稳定表达[Gly14]-Humanin的PC12细胞存活率较空质粒转染组明显提高(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.05).Hoechst 33258染色结果表明,空质粒转染组细胞核出现浓缩及断裂等凋亡形态,而过表达[Gly14]-Humanin组细胞核形态正常.结论:过表达[Gly14]-Humanin能够抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡.     

[Gyl14]-Humanin对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨神经保护肽[Gly14]-Humanin过表达对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法:采用脂质体法将重组真核表达载体pcDNA3.1(-)/HNG-FLAG转入PC12细胞,G418筛选获得抗性亚克隆细胞株,免疫细胞化学法分析[Gly14]-Humanin基因的表达。用25μmol/LAβ25-35作用细胞24h,MTT法分析细胞存活率,流式细胞术(FCM)监测细胞凋亡,Hoechst33258染色观察凋亡细胞核形态改变。结果:建立了稳定过表达[Gly14]-Humanin的PC12细胞系。经25μmol/LAβ25-35作用后,稳定表达[Gly14]-Humanin的PC12细胞存活率较空质粒转染组明显提高(P0.05),凋亡率显著降低(P0.05)。Hoechst33258染色结果表明,空质粒转染组细胞核出现浓缩及断裂等凋亡形态,而过表达[Gly14]-Humanin组细胞核形态正常。结论:过表达[Gly14]-Humanin能够抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡。     

CEPO对6-OHDA诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨氨甲酰化促红细胞生成素(CEPO)对6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)诱导PC12细胞损伤及凋亡的保护作用及其可能机制。方法借助CCK8、流式细胞(Flow cytometry,FCM)、Western-blotting和逆转录PCR(RT-PCR)技术检测PC12模型细胞相关指标的变化,实验数据以SPSS15软件统计分析。结果 CCK8结果显示6-O-HDA处理能够显著降低PC12模型细胞的存活率,而CEPO处理对其变化显示抑制作用;FCM技术探察结果显示,6-OHDA处理能够明显诱导PC12模型细胞的损伤与凋亡,而CEPO预处理能够减轻PC12模型细胞的损伤与凋亡(P<0.05);借助Western-blotting技术探察显示6-OHDA+CEPO处理组的PC12细胞的Cleaved caspase-3蛋白表达量显著低于6-OHDA处理组(P<0.05);RT-PCR结果显示,6-OHDA处理明显降低PC12模型细胞的Bcl-2 mRNA的表达(P<0.05)以及上调PC12模型细胞的Bax mRNA的表达(P<0.01),而CEPO处理明显上调Bcl-2 mRNA的表达水平(P<0.05)以及抑制Bax mRNA的表达(P<0.05)。结论CEPO处理能够显著抑制6-OHDA所诱导的PC12细胞的损伤及凋亡,其作用机制可能与其上调Bcl-2,并下调Bax和Caspase-3的表达有关。     

京尼平对缺氧/复氧损伤后大鼠心肌细胞凋亡及自噬的影响

目的 探讨京尼平对缺氧/复氧(H/R)损伤后大鼠心肌细胞凋亡及自噬的影响。方法 建立H/R损伤模型,体外培养的大鼠H9c2心肌细胞行缺氧12 h、复氧4 h。实验分为对照组（Con）、京尼平组(GE)、缺氧/复氧组(H/R)、缺氧/复氧+京尼平组(H/R+GE)。细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡,透射电子显微镜观察自噬体,Western blotting检测Bax、Bcl-2、P62、Beclin1、LC3-Ⅱ、蛋白激酶B(Akt)、p-Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和p-mTOR蛋白的表达。结果 京尼平预处理增强了H/R损伤后的H9c2心肌细胞活力,抑制细胞凋亡及自噬体累积,降低自噬结构断面积与细胞质断面积的比值。Western blotting结果显示,京尼平预处理减少了H/R损伤后Bax、LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白表达,增加Bcl-2、P62、p-Akt和p-mTOR蛋白表达。结论 京尼平可以抑制H/R损伤后心肌细胞凋亡及自噬,其机制可能与上调Akt/mTOR信号通路有关。     

青藤碱在JNK/c-Jun信号通路中对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响

目的：探究青藤碱（SIN）通过JNK/c-Jun信号通路对LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和自噬的影响。方法：培养肺上皮细胞MLE-12,通过CCK-8检测SIN的毒性。流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光检测自噬体形成数量,Western blot检测细胞中凋亡、自噬以及JNK/c-Jun信号通路相关蛋白表达水平。结果：LPS造模后,细胞凋亡率和自噬体数量升高,Cleaved caspase-3、Bax和Beclin-1蛋白水平及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-JNK/JNK和p-c-Jun/c-Jun均升高（P<0.05）;Bcl-2、P62蛋白水平均降低（P<0.05）。SIN处理可明显改善LPS对细胞凋亡和自噬的影响,以及对JNK/c-Jun信号通路的调控（P<0.05）。细胞自噬抑制剂3-MA或JNK激动剂ANISO处理均可部分逆转SIN对LPS诱导的肺上皮细胞的保护作用（P<0.05）。结论：SIN可通过调控JNK/cJun信号通路相关蛋白提高细胞自噬,保护被LPS损伤的肺上皮细胞。