敲低Runt相关转录因子2(Runx2)表达抑制结肠癌细胞生长和迁移

目的构建稳定低表达Runt相关转录因子2(Runx2)的HCT-8结肠癌细胞,检测对结肠癌细胞生长和迁移等生物学行为的影响。方法首先采用Western blot法检测Runx2在不同结肠癌细胞系中表达,确定HCT-8结肠癌细胞高表达Runx2;将含有Runx2的慢病毒短发卡RNA(shRNA)的干扰载体与慢病毒包装辅助质粒共转染人胚肾HEK293FT细胞后,收集病毒上清,感染HCT-8结肠癌细胞。经嘌呤霉素筛选后,获得慢病毒介导的Runx2 shRNA的稳定表达细胞,利用实时定量PCR和Western blot法检测Runx2的shRNA的干涉效果;用CCK-8法检测细胞增殖活性、平板克隆形成实验检测癌细胞生长、Transwell~(TM)侵袭实验和划痕愈合实验检测Runx2 shRNA转染对癌细胞侵袭和迁移的影响。结果建立了稳定敲低Runx2水平的HCT-8结肠癌细胞;敲低HCT-8细胞Runx2表达水平后,癌细胞的生长、侵袭和迁移受到明显抑制。结论敲低Runx2抑制结肠癌细胞的生长、侵袭和迁移。     

miR-126 对结肠癌细胞生物学行为的影响及其在调控结肠癌EMT 转化中的作用

目的:观察miR-126 在不同转移潜能的人结肠癌细胞系中的表达情况及其对结肠癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响并探讨可能的作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR 检测结肠癌细胞系(SW480、SW620 及HCT116)中miR-126 的表达量。通过脂质体瞬时转染法将miR-126 过表达(miR-126 mimics),并设置阴性对照组,然后采用CCK8 法检测细胞的增殖能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell 侵袭小室实验检测细胞的侵袭能力,Western blot 实验检测E-cadherin 和Vimentin 蛋白表达量的变化。结果:相对于低转移潜能的结肠癌细胞株SW480,miR-126 在高转移潜能的SW620 和HCT116细胞中的表达降低。过表达miR-126 可使SW620 细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,E-cadherin 蛋白表达增加,Vimentin 蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:低表达的miR-126 与结肠癌的转移密切相关,miR-126 影响结肠癌细胞生物学行为的作用可能是通过调控EMT 进程实现的。     

miR-186上调Dicer1抑制结肠癌细胞侵袭转移的分子机制

为探讨miR-186通过Dicer1影响结肠癌细胞侵袭转移及其作用机制,RT-qPCR检测miR-186在结肠癌组织及正常癌旁组织、人结肠癌细胞及正常人肠上皮细胞HIEC中的表达;荧光显微镜观察稳定过表达/下调miR-186细胞系GFP荧光并采用RT-qPCR检测miR-186表达效率;Transwell及划痕实验检测miR-186对结肠癌细胞SW620和HT29侵袭、迁移能力的影响;免疫荧光法检测上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)相关分子N-cadherin表达;生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验验证miR-186和Dicer1的靶向关系;免疫组织化学法检测Dicer1在结肠癌组织及正常癌旁组织中的表达;Western blotting检测Dicer1在各细胞株中的表达。结果显示,肿瘤组织中miR-186的表达水平显著低于正常癌旁组织(P0.05);miR-186在肿瘤细胞中的表达水平显著低于HIEC(P0.05)。转染过表达/下调miR-186慢病毒阳性质粒及阴性对照的SW620和HT29细胞均出现大量绿色荧光;RT-qPCR显示稳定过表达细胞SW620-mimic-miR-186中miR-186水平显著升高,HT29-inhibitor-miR-186中miR-186水平显著下降,分别与SW620和SW620-mimic-NC、HT29和HT29-inhibitor-NC相比差异有统计学意义(P0.05)。过表达miR-186能显著降低SW620的侵袭迁移能力,同时抑制N-cadherin水平,而下调miR-186能显著增加HT29的侵袭迁移能力。经www.microRNA.org网站预测发现miR-186和Dicer1有互补结合序列,双荧光素酶报告实验证实两者的靶向结合关系。SW620中Dicer1表达水平显著低于HIEC(P0.05);稳定过表达细胞系SW620-mimic-miR-186中Dicer1表达水平明显升高,分别与SW620和SW620-mimic-NC相比差异有统计学意义(P0.05)。由此,miR-186通过靶向正调控Dicer1的表达降低N-cadherin水平从而抑制EMT进程,最终抑制结肠癌细胞的侵袭迁移能力。     

USP22 siRNA通过TIMP-2抑制人结肠癌细胞系SW480侵袭

目的探讨泛素特异性蛋白酶22(USP22)调控基质金属蛋白酶组织抑制物-2(TIMP-2)对人结肠癌细胞侵袭的影响。方法 Western blot检测USP22在不同结肠癌细胞系的表达,选定高表达USP22的SW480细胞用于后续实验;将SW480细胞分为对照组(NC siRNA)和转染组;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测对照组及转染组Hif-1α、Hif-1β、cdc42、RhoA、Smad7、TIMP-1和TIMP-2 mRNA表达;RT-qPCR和Western blot检测对照组及2种转染组中USP22及TIMP-2蛋白的表达;Transwell小室法检测细胞的侵袭能力。结果 USP22在SW480细胞中表达量较高(P0.05);与对照组相比敲低USP22基因后,TIMP-2表达及SW480细胞侵袭能力均下降(P0.05);敲低TIMP-2基因后,USP22表达无明显变化,SW480细胞侵袭能力下降(P0.05)。结论 USP22可能通过调控TIMP-2的表达抑制人结肠癌细胞的侵袭与转移。     

癌相关成纤维细胞对结肠癌细胞增殖侵袭能力的影响

目的 观察结肠癌相关成纤维细胞(cancer associated fibroblast,CAF)对结肠癌HCT-116细胞增殖及侵袭能力的影响,探讨癌细胞微环境在结直肠癌发生、发展过程中的作用.方法 采集结肠癌手术标本CAF及结肠正常成纤维细胞进行原代及纯化培养.观察HCT-116细胞被CAF及成纤维细胞作用后其形态学、增殖能力及侵袭能力的变化.结果 结肠CAF较成纤维细胞异型性明显,接触抑制和密度抑制丧失.结肠CAF及成纤维细胞免疫组化标记CK(AE1/AE3)均(-),成纤维细胞和CAFα-SMA均(+);CAF条件培养基组HCT-116增殖活性增高,CAF间接共培养HCT-116细胞G2期和S期所占比例明显增加,CAF作用下HCT-116细胞侵袭能力明显增强(P＜0.05).结论 CAF促进结肠癌HCT-116细胞增殖、侵袭及迁移;CAF条件培养基中可能存在可溶性活性物质,具有促进HCT-116细胞增殖侵袭能力的作用.     

miR-124在结直肠癌中的研究进展

microRNA(miRNA)是一类具有调控作用的单链小分子RNA,与肿瘤的增殖、侵袭和转移密切相关。miR-124在多种肿瘤的细胞或组织中均表达下调,发挥抑癌基因的作用。过表达miR-124可显著抑制人结肠癌SW620细胞的侵袭能力,上调miR-124的表达能促进结肠癌SW480细胞凋亡,同时抑制人结肠癌SW620细胞生长及运动能力,miR-124还能够调节结直肠细胞对放疗辐射的敏感性。     

敲减NOB1基因表达对人结肠癌SW480细胞药物敏感性及侵袭和迁移能力的影响

目的:探讨通过小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)技术敲减NOB1基因表达对人结肠癌SW480细胞活力、药物敏感性、凋亡、细胞周期及侵袭和迁移能力的影响。方法:利用脂质体Lipofectamine 3000将NOB1 siRNA转染至SW480细胞,采用real-time PCR和Western blot检测转染后SW480细胞中NOB1 mRNA和蛋白表达的变化;采用MTT法检测敲减NOB1基因表达后SW480细胞活力及其对不同化疗药物(顺铂、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂和卡培他滨)敏感性的变化;流式细胞术检测敲减NOB1基因表达对SW480细胞凋亡和周期的影响;Transwell方法检测敲减NOB1基因表达对结肠癌SW480细胞侵袭和迁移能力的影响。结果:转染NOB1 siRNA后,SW480细胞中NOB1的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05);与对照组和阴性对照siRNA组相比,NOB1 siRNA转染组的SW480细胞在24～72 h的细胞活力显著降低,顺铂、5-氟尿嘧啶、奥沙利铂和卡培他滨对该细胞的半数抑制浓度均显著降低,细胞凋亡率显著增加,细胞周期受到阻滞,细胞侵袭和迁移能力显著降低(P0.05)。结论:NOB1 siRNA转染能够抑制结肠癌SW480细胞活力及侵袭和转移能力,并增强细胞对药物的敏感性,促进细胞凋亡。NOB1能够成为结肠癌诊断和治疗的新靶点。     

长链非编码RNA AGAP2-AS1对肾细胞癌侵袭转移能力的影响

目的观察长链非编码RNAAGAP2-AS1(lnc RNAAGAP2-AS1)对肾细胞癌(renalcell carcinoma, RCC)细胞侵袭转移能力的影响,及其可能机制。方法采用实时荧光聚合酶链反应法(RT-PCR)检测近端肾小管上皮细胞(HK-2)和RCC细胞(A498、ACHN)中lnc RNA AGAP2-AS1和EZH2的表达水平,在肾癌细胞A498中敲除AGAP2-AS1后,通过RT-PCR检测EZH2的表达水平。在肾癌细胞A498中敲降AGAP2-AS1后,再过表达EZH2,应用划痕实验与Transwell实验检测肾癌细胞侵袭转移能力的改变。结果与肾小管上皮细胞相比,RCC细胞中EZH2和lnc RNA AGAP2-AS1的表达水平均明显升高(P0.05);抑制AGAP2-AS1表达后肾癌细胞中EZH2表达下调;肾癌A498细胞敲降AGAP2-AS1后细胞侵袭转移能力明显减弱(P0.05),而过表达EZH2后侵袭与转移能力明显恢复(P0.05)。结论 lnc RNA AGAP2-AS1促进RCC细胞的侵袭和转移,与上调EZH2的表达水平相关。     

VEGF-DsiRNA干扰对人结肠癌细胞增殖及侵袭能力的影响

目的利用人血管内皮生长因子-D(vascular endothelial growth factor-D,VEGF-D)小RNA干扰(siRNA),研究VEGF-D表达下调对人结肠癌细胞增殖和侵袭的影响。方法设立3个细胞组:未处理的人结肠癌SW480细胞作为空白对照组,转染阴性对照siRNA的SW480细胞作为阴性对照组,转染VEGF-D siRNA的SW480细胞作为实验组。RT-PCR和Western-blot检测转染后SW480细胞VEGF-D基因和蛋白的表达,MTT法检测VEGF-D RNA干扰对结肠癌细胞增殖的影响,Transwell小室实验检测VEGF-D RNA干扰对结肠癌细胞侵袭的影响。结果 VEGF-D siRNA转染人结肠癌细胞SW480,VEGF-D基因和蛋白水平表达量明显低于对照组,MTT实验显示体外细胞存活率下降,Transwell小室中穿膜细胞数减少。结论 VEGF-D siRNA显著抑制结肠癌细胞SW480中VEGFD的基因和蛋白表达,明显抑制SW480细胞的体外增殖和侵袭能力。     

重楼皂苷Ⅶ抑制结肠癌细胞迁移、侵袭及机制研究

目的研究重楼皂苷Ⅶ对人结肠癌HCT116细胞和SW620细胞迁移、侵袭的抑制作用,初步探讨其可能的作用机制。方法用MTT方法测定重楼皂苷Ⅶ对HCT116细胞和SW620细胞的半数抑制浓度;划痕实验和Transwell迁移实验观察重楼皂苷Ⅶ抑制HCT116细胞和SW620细胞的迁移能力;侵袭实验观察重楼皂苷Ⅶ抑制HCT116细胞和SW620细胞的侵袭能力。Western blot检测蛋白E-cadherin和N-cadherin的表达。结果重楼皂苷Ⅶ抑制HCT116细胞和SW620细胞增殖,其IC50值分别为(3.72±0.09)μmol/L和(3.46±0.13)μmol/L;重楼皂苷Ⅶ对人结肠癌HCT116细胞和SW620细胞迁移、侵袭有一定的抑制作用,其作用呈明显的剂量依赖性;Western blot检测发现,给予重楼皂苷Ⅶ处理细胞后,明显升高E-cadherin蛋白表达水平,降低N-cadherin蛋白表达水平,均具有统计学意义(P<0.05)。结论重楼皂苷Ⅶ对人结肠癌HCT116细胞和SW620细胞增殖、迁移、侵袭有一定的抑制作用,其作用呈明显剂量依赖性,并影响上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-cadherin、N-cadherin的表达,其机制可能是调控EMT过程抑制细胞迁移和侵袭。     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.