中性粒细胞胞外诱捕网通过诱导巨噬细胞M2型极化促进非小细胞肺癌增殖和侵袭

目的：探究中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）诱导巨噬细胞极化在非小细胞肺癌（NSCLC）增殖和侵袭中的作用及其相关机制。方法：采集28例NSCLC患者肿瘤组织及其癌旁组织,通过免疫组化检测PAD4和Arg-1表达水平。采用PMA/LPS和PMA/IL-4极化THP-1细胞为M1和M2型巨噬细胞的过程中加入NETs共孵育,qRT-PCR检测巨噬细胞iNOS、IL-6、TNF-α、Arg-1、IL-10和TGF-β表达水平。将各组M2型巨噬细胞与A549细胞共孵育,CCK8检测A549细胞增殖变化,Transwell检测细胞侵袭能力变化,qRT-PCR和Western blot检测细胞VEGF表达水平变化。结果：与癌旁组织比较,NSCLC患者肿瘤组织PAD4和Arg-1表达水平升高。在向M1型巨噬细胞极化过程中,加入NETs后巨噬细胞iNOS、IL-6、TNF-α表达水平降低,Arg-1、IL-10、TGF-β表达水平升高。在向M2型巨噬细胞极化过程中,加入NETs后巨噬细胞Arg-1、IL-10、TGF-β表达水平升高。与Control组比较,M2组A549细胞增殖、侵袭能力和VEGF表达...     

褪黑素促进糖氧剥夺诱导的BV2小胶质细胞向M2极化

目的:研究褪黑素处理对糖氧剥夺(OGD)诱导的小鼠小胶质细胞系BV2细胞功能的影响。方法:BV2细胞分为对照组(control)、氧糖剥夺组(OGD)和褪黑素处理组(OGD+Mel)。利用流式细胞仪检测各组细胞CD16/32和兔多克隆抗体CD206的表达,real time RT-PCR方法检测BV2细胞中iNOS和Arg-1 mRNA表达,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测BV2细胞培养上清中IL-1β和IL-4的水平。结果:OGD诱导可促进BV2细胞向M1极化,表现为CD16/32上调、iNOS mRNA表达增加,培养上清中IL-1β水平升高;经过褪黑素处理后,CD16/32、iNOS mRNA,培养上清中IL-1β表达下降,CD206、 Arg-1和IL-4表达增加。结论:OGD可诱导BV2细胞向M1方向分化,而褪黑素可使OGD诱导的BV2细胞向M2极化。     

延髓小胶质细胞极化参与实验性牙髓炎疼痛的研究

目的:检测小鼠实验性牙髓炎发生、发展过程中，延髓背角小胶质细胞的极化状态及其变化，探究延髓背角小胶质细胞不同极化状态与牙髓炎疼痛的相关性。方法:随机抽样法将C57小鼠分为对照组(Control)和实验性牙髓炎症模型组(Pulpitis)。牙髓暴露法建立实验性牙髓炎症模型，HE染色观察不同时间点牙髓炎症的变化情况；擦面实验观察小鼠牙髓炎性痛程度；Western Blot检测小胶质细胞特异性标志物离子钙结合衔接分子1(Iba-1)、M1型小胶质细胞极化标记物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及M2型小胶质细胞极化标记物精氨酸酶1(Arg-1)在延髓背角的表达及变化；免疫荧光组织化学染色法观察Iba-1、iNOS、Arg-1的表达及定位情况；real time RT-PCR检测IL-1β和IL-4 mRNA的表达变化。结果:HE染色结果显示，牙髓暴露1 d小鼠牙髓组织出现明显的炎性反应，3 d炎性发展至整个冠髓，7 d炎症扩散至根髓，14 d牙髓几乎全部坏死。痛行为学检测结果显示，牙髓暴露后1 d疼痛最为明显，随后开始逐渐减弱，7 d后恢复至正常水平。Western Blot、免疫荧光组织化学染...     

PYNOD对LPS活化的BV2小胶质细胞炎症因子释放的影响

 目的:观察PYNOD对LPS活化的BV2小胶质细胞炎症因子释放的影响。方法: 将表达PYNOD的重组质粒pEGFP-C2-PYNOD瞬时转染BV2细胞后,加入LPS作用24 h,Griess 法检测一氧化氮（nitric oxide, NO）的释放,实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测诱导型一氧化氮合酶（inducible NO synthase, iNOS）和白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）mRNA的表达,此外Western blotting和ELISA法检测iNOS和IL-1β的蛋白表达。结果: 转染PYNOD重组质粒能显著抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞炎症因子NO的释放（P＜0.05）。Real-time PCR证实PYNOD可抑制iNOS和 IL-1β 的mRNA表达,差异有统计学意义（P＜0.05）。ELISA和Western blotting证实PYNOD可下调iNOS和 IL-1β 蛋白的表达（P＜0.05）。结论: PYNOD蛋白可以在转录水平和翻译水平显著抑制LPS刺激的BV2小胶质细胞活化产生的炎症反应。     

川续断皂苷Ⅵ对M1/M2型巨噬细胞极化的调节作用及机制

目的：研究川续断皂苷Ⅵ对M1/M2型巨噬细胞极化的调节作用及机制。方法：MTT法检测川续断皂苷Ⅵ对RAW264.7细胞活力的影响。ELISA检测脂多糖（LPS）诱导状态下RAW264.7细胞上清中TNF-α和IL-6的分泌量；Griess法检测LPS诱导状态下RAW264.7细胞上清中一氧化氮（NO）含量；荧光定量PCR检测TNF-α、IL-6、精氨酸酶-1(Arg-1)、血红素加氧酶1(HO-1)和细胞因子信号转导抑制蛋白-2(SOCS2)基因表达水平。Western blot检测一氧化氮合酶（iNOS）和p-p65蛋白表达。结果：在LPS诱导的RAW264.7细胞中，川续断皂苷Ⅵ抑制TNF-α、IL-6、iNOS和p-p65蛋白或基因表达水平，同时增加HO-1基因表达。川续断皂苷Ⅵ能抑制LPS诱导下RAW264.7细胞分泌的NO。川续断皂苷Ⅵ增加IL-4诱导下M2型巨噬细胞标志物Arg1和SOCS2基因表达。结论：川续断皂苷Ⅵ可以抑制RAW264.7巨噬细胞向M1型极化，同时促进其向M2型极化，可通过调节M1/M2型巨噬细胞极化发挥其抗炎免疫调节作用。     

小胶质细胞中小泛素样修饰蛋白特异性蛋白酶3参与小鼠光化学栓塞法缺血性脑卒中早期的疾病进展

目的 探讨小泛素样修饰蛋白特异性蛋白酶3(SENP3)在光化学栓塞法缺血性脑卒中小鼠小胶质细胞中的表达变化,以及与光化学法栓塞缺血性脑卒中疾病进展的关系。 方法 实验小鼠分对照组、缺血性脑卒中1 d组和缺血性脑卒中7 d组（每组3只）,应用Western blotting检测各组纹状体诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶1（ARG-1）和SENP3的表达和c-Jun氨基末端激酶（JNK）磷酸化水平;应用免疫荧光双标法检测小鼠纹状体小胶质细胞中iNOS和ARG-1的表达。 结果 与对照组相比,缺血性脑卒中1 d组SENP3的表达与JNK的磷酸化水平均显著上升,同时M1型小胶质细胞的标志物iNOS的表达水平显著上升;缺血性脑卒中7 d组M2型小胶质细胞的标记物ARG-1的表达显著增高。纹状体小胶质细胞特异性抗体1（Iba1）与iNOS、Iba1与ARG-1的免疫荧光双标结果与免疫印迹结果一致。 结论 光化学栓塞法缺血性脑卒中早期,小胶质细胞SENP3表达增加,进而影响JNK磷酸化的水平和小胶质细胞的极化,促进大脑炎症反应,参与缺血性脑卒中的疾病进展。     

单羧酸转运蛋白1在低糖条件下促进M1型小胶质细胞中诱导型一氧化氮合酶表达

目的 探讨在缺血环境下诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和单羧酸转运蛋白1(MCT1)与M1型 促炎性小胶质细胞的关系。 方法 小鼠6只,采用光化学栓塞法制作脑缺血模型;BV2细胞使用含5mmol/L低糖培养基刺激2h。 使用免疫荧光染色、Western blotting方法检测缺血小鼠大脑中小胶质细胞和低糖刺激的BV2细胞中iNOS、MCT1及精氨酸酶1(ARG1)的表达。用RNA干扰及质粒转染技术分别调控未处理BV2细胞中的MCT1表达,检测iNOS及ARG1的变化。 结果 激光制作脑缺血模型成功后,缺血侧半球中iNOS和MCT1以及ARG1的表达升高（P<0.01）,且MCT1主要表达在离子钙接头蛋白分子1（Iba1）阳性和iNOS阳性的小胶质细胞中。低糖刺激BV2小胶质细胞后,iNOS和MCT1表达升高（P<0.001）,而ARG1表达降低（P<0.01）,MCT1主要表达在iNOS阳性的BV2细胞中。RNA干扰BV2细胞后,细胞中MCT1表达降低,iNOS表达下降（P<0.01）;质粒转染BV2细胞后,MCT1表达增高,iNOS表达增加（P<0.01）。但在两种情况下,ARG1表达水平均未发生明显变化。 结论 在低糖环境中小胶质细胞向M1表型极化,MCT1和iNOS表达同时增高,MCT1参与iNOS的表达上调,可能处于iNOS调节通路的上游。     

IL-6促进小鼠小胶质细胞系BV2坏死性凋亡

目的 探究在神经炎性反应中小胶质细胞凋亡的调控机制。方法 脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导小鼠小胶质细胞系BV2,构建神经炎性反应细胞模型,使用白介素-6(IL-6)拮抗剂塞妥昔单抗(siltuximab)处理LPS诱导的BV2细胞。CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;ELISA检测IL-6与TNF-α含量;RT-qPCR检测BV2细胞M1极化标志物IL-1β、IFN-γ与M2极化标志物CD206、Arg-1表达;Western blot检测JAK-STAT3信号通路关键蛋白及坏死性凋亡相关蛋白(RIP1)和RIP3表达。结果 LPS诱导后BV2细胞的增殖活力下降,凋亡增加,炎性因子IL-6与TNF-α含量增加(P<0.01)。M1极化标志物IL-1β、IFN-γ表达增加(P<0.01),M2极化标志物CD206、Arg-1表达减少(P<0.01)。JAK-STAT3通路关键蛋白磷酸化增加(P<0.01),RIP1、RIP3蛋白表达增加(P<0.01)。IL-6拮抗剂siltuximab处理细胞后,JAK-ST...     

瑞舒伐他汀预处理对缺血再灌注大鼠大脑中动脉血管平滑肌细胞炎症因子的影响及其机制

目的 探讨瑞舒伐他汀预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注后大脑中动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）中炎性细胞因子白细胞介素（IL）-1β、IL-6、肿瘤坏死因子ɑ（TNF-α）表达的影响以及可能的机制。 方法 36只健康成年SD大鼠,雌雄不限,随机分为假手术组,局灶性脑缺血再灌注组,瑞舒伐他汀预处理组,每组12只。大脑中动脉缺血2 h再灌注24 h后, Real-time PCR及Western blotting法检测大鼠大脑中动脉VSMCs中IL-1β、IL-6和TNF-α以及核因子κB（NF-κB）mRNA和蛋白的表达。 结果 再灌注24 h后,模型组VSMCs IL-1β、IL-6 以及TNF-αmRNA和蛋白的表达明显增加,而给予瑞舒伐他汀预处理后,可明显抑制大脑中动脉VSMCs中IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA和蛋白的高表达,同时也可发现,VSMCs中NF-κB mRNA和蛋白的表达也明显减少。 结论 瑞舒伐他汀预处理可有效抑制大脑中动脉VSMCs中IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA和蛋白的表达,从而减轻缺血再灌注后炎症反应对脑组织的进一步损伤作用。瑞舒伐他汀预处理对IL-1β、IL-6及TNF-α的作用可能与其减少VSMCs中NF-κB的表达有关。     

天麻素对脂多糖激活的小胶质细胞M2型极化的影响

目的:研究天麻素对脂多糖(LPS)激活的小胶质细胞M2型极化的影响.方法:小鼠小胶质细胞来源的BV2细胞分为对照组(control)、LPS激活组(LPS)和LPS+天麻素预处理组(LPS+G).免疫荧光双标染色和Western Blot检测M2型小胶质细胞标记物IL-10、Arg-1和Ym1/2的表达变化.结果:We...     

白细胞介素-11在小鼠脑缺血再灌注损伤中的保护作用及其机制

目的 探讨白细胞介素-11(interleukin-11,IL-11)在小鼠脑缺血再灌注损伤中的保护作用及机制研究.方法 选择SPF级C57BL/6雄性小鼠60只,随机分成为对照组、模型组和IL-11组,每组各20只,通过线栓法构建脑缺血再灌注损伤.应用TTC染色检测脑组织梗死面积,采用Longa评分法评估各组小鼠的神...     

M1和M2型巨噬细胞表型的比较分析

通过对M1和M2型巨噬细胞表型相关指标的比较分析,评价各鉴定巨噬细胞类型的表型指标及其意义。按常规方法以IFN-γ及LPS将骨髓来源巨噬细胞诱导成M1型巨噬细胞,以IL-4诱导出M2型巨噬细胞。分别以RT-PCR和酶活性定量方法检测精氨酸代谢相关酶的表达和活性;以ELISA检测IL-12和IL-10的分泌;以FACS检测巨噬细胞膜分子的表达。结果显示:M1型巨噬细胞诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达和活性水平较未刺激组明显升高,IL-12产生显著增加,CD16/32表达上调;而M2型巨噬细胞I型精氨酸酶(arginase 1,Arg-1)的表达水平和酶活性较未刺激巨噬细胞显著提高,IL-10分泌轻度增加,并且表达高水平的CD206和DECTIN-1。表型比较分析结果表明,iN-OS表达和活性、IL-12的分泌和膜蛋白CD16/32可用于鉴定M1型巨噬细胞,而Arg-1、CD206和DECTIN-1是鉴定M2型巨噬细胞较为理想的表型指标。     

电针对受损展神经小胶质细胞分型的影响

目的:探讨电针治疗对Beagle犬展神经损伤模型中小胶质细胞表型的影响。方法:健康成年Beagle犬随机分为4组:正常对照组、假手术组、损伤组及电针处理组,每组各5只。其中假手术组仅暴露分离展神经;损伤组制作模型后于电针刺激组接受电针刺激时仅进行束缚;电针处理组模型建立后进行电针刺激。实验连续2周。运用Western blot检测展神经小胶质细胞亚型M1型标志分子[诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和白细胞介素1β(IL-1β)]及M2型标志分子[精氨酸酶(arginase)和脑源性神经营养因子(BDNF)]的表达水平。结果:损伤组iNOS的表达较正常对照组明显增加(P0.05);而电针处理组经电针治疗较损伤组iNOS表达明显降低(P0.05);损伤组和电针处理组IL-1β的表达较正常对照组均增加(P0.05),其中与损伤组相比,电针处理组IL-1β表达降低(P0.05)。损伤组和电针处理组arginase表达较正常对照组均增加(P0.05),其中电针处理组的arginase表达较损伤组增加(P0.05);同时BDNF在损伤组和电针处理组的表达均增加(P0.05),电针处理组的BDNF表达较损伤组增加(P0.05)。结论:展神经损伤后,电针治疗能降低小胶质细胞M1型标志分子表达水平,同时增加M2型标志分子表达水平。     

IL-13对大鼠急性肾缺血再灌注时IL-1β表达的影响

目的:观察IL-13对急性肾缺血再灌注时IL-1β表达的影响。方法:Wistar雄性大鼠57只,随机分为8组:正常组(normal);假手术组(sham);缺血组:(I)缺血再灌注组(I/R);治疗对照组-1(C-1);治疗对照组-2(C-2);治疗组-1(T-1)和治疗组-2(T-2)。阻断大鼠双侧肾脏血流45min再灌注24h建立急性肾缺血再灌注模型;治疗组分别于阻断血流前、后分别从双侧肾动脉开口注射入1.5μg/50gbw鼠重组白细胞介素13(rmIL-13);检测各组大鼠IL-1β血清水平和肾脏表达,以及肾功能和肾脏病理。结果:(1)治疗组肾脏IL-1β基因(TtoC:P＜0.01)和蛋白表达(T-1toC-1:P＜0.01;T-2toC-2:P＜0.05)明显减少,血清IL-1β水平明显下降;(2)肾功能障碍和肾组织病理变化明显减轻,肾小管损害评分减少(C-1toT-1:45.20±8.64to21.05±8.82,P＜0.01;C-2toT-2:42.25±11.15to23.25±7.31,P＜0.01);(3)血清IL-1β水平与BUN、Cr成正相关(r=0.708,P＜0.01;r=0.770,P＜0.01)。结论:IL-13能有效地抑制大鼠急性肾缺血再灌注损伤IL-1β的表达。     

沉默排斥性导向分子A对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障的保护作用

目的 观察沉默排斥性导向分子A（RGMa）对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障及紧密连接蛋白的影响。 方法 雄性成年 SD 大鼠立体定位侧脑室注射腺病毒后建立大脑中动脉闭塞(MCAO) /再灌注（I/R）模型。将成年雄性SD大鼠40只,分为空白对照组（sh-con）和RGMa干扰组（sh-RGMa）,分别在注射后1 d和3d观察腺病毒对RGMa的影响。将其余120只SD大鼠随机分为假手术组（sham）、缺血再灌注组（I/R）、空病毒组（I/R+sh-con）及病毒组（I/R+sh-RGMa）;I/R 72 h 后采用神经功能缺损评分评估各组大鼠神经功能恢复情况; 采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测量脑梗死体积;采用静脉注射伊文思蓝观察血脑屏障通透性的改变;应用Western blotting和免疫组织化学染色检测RGMa的变化;应用Western blotting检测血脑屏障完整性相关紧密连接蛋白5（claudin-5）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和闭锁小带蛋白1（ZO-1）的表达。 结果 缺血再灌注后 72 h,I/R组较 sham 组神经功能评分降低,沉默RGMa能改善血脑屏障通透性,减少脑梗死体积;可下调MMP-9及上调claudin-5和ZO-1的表达。 结论 沉默RGMa对脑缺血再灌注损伤大鼠的血脑屏障有保护作用。     

后处理对缺血再灌注损伤大鼠肺Egr-1和IL-1β表达的影响

目的: 研究后处理对在体缺血再灌注损伤大鼠肺早期生长反应因子1(Egr-1)和白细胞介素1β(IL-1β)表达的影响,并分析其可能的肺保护作用机制。方法: 建立大鼠在体肺脏缺血再灌注损伤模型,将SD大鼠24只随机分为假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组和缺血后处理(IPostC)组,每组8只。在体鼠I/R损伤模型制备完成后,阻断左肺门,终止血供及通气,造成左肺缺血,达预定时间后松开阻断带恢复血供及通气形成再灌注损伤。sham组只游离左侧肺门、套阻断带但不阻断,等待3 h后直接取标本;I/R组缺血1 h后再灌注2 h;IPostC组缺血1 h后给予重复3次的5 min灌注和5 min缺血的后处理,继以恢复血供行再灌注1.5 h。3组实验结束后均留取左侧肺组织,制成10%的组织匀浆,用于测定髓过氧化物酶(MPO)的含量;留取小块肺组织测定肺湿／干重比(W/D),并在光镜下观察肺组织的病理变化;RT-PCR法检测Egr-1 mRNA及IL-1β mRNA的表达量。结果: 3组间各项检测指标比较,差异均显著(P<0.05)。与sham组比较,I/R组肺组织中Egr-1 mRNA、IL-1β mRNA的表达量、MPO的活性及W/D值均明显升高(P<0.05);肺组织炎症反应明显加重。IPostC组肺组织中Egr-1 mRNA及IL-1β mRNA的表达量、MPO的活性及W/D值与I/R组相比均明显下降(P<0.05);肺组织炎症反应明显减轻。结论: 后处理能够明显减轻大鼠肺缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制Egr-1和IL-1β的表达有关。     

远隔缺血后处理对脑缺血模型大鼠再灌注损伤炎性反应相关信号的影响

背景：虽然目前已有一些研究表明远隔缺血后处理可以发挥神经保护作用,但是具体的机制尚不明了。 目的：探讨远隔缺血后处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。 方法：应用线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞局灶性脑缺血再灌注模型,并进行远隔缺血后处理,同时设假手术组和缺血再灌注组作对照。于缺血再灌注24 h后进行神经功能评分,检测梗死体积及脑含水量;RT-PCR检测缺血周围区脑组织内白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和单核细胞趋化蛋白1 mRNA表达情况;Western blot检测Bcl-2和Bax蛋白表达情况。 结果与结论：与缺血再灌注组相比,远隔缺血后处理组神经功能评分有所降低,但差异无显著性意义,梗死范围和脑组织含水量显著降低(P < 0.05)。远隔缺血后处理组与缺血再灌注组相比,大鼠缺血周围区脑组织白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、单核细胞趋化蛋白1 mRNA和Bax蛋白表达降低(P < 0.05),Bcl-2蛋白表达升高(P < 0.05)。结果证实,远隔缺血后处理可以减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注产生的损伤,其机制可能与减轻炎性反应有关。  中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程     

Glial activation with concurrent up-regulation of inflammatory mediators in trimethyltin-induced neurotoxicity in mice

Trimethyltin (TMT), a potent neurotoxic chemical, causes dysfunction and neuroinflammation in the brain, particularly in the hippocampus. The present study assessed TMT-induced glial cell activation and inflammatory cytokine alterations in the mouse hippocampus, BV-2 microglia, and primary cultured astrocytes. In the mouse hippocampus, TMT treatment significantly increased the expression of glial cell markers, including the microglial marker ionized calcium-binding adapter molecule 1 and the astroglial marker glial fibrillary acidic protein. The expression of M1 and M2 microglial markers (inducible nitric oxide synthase [iNOS] and CD206, respectively) and pro-inflammatory cytokines (interleukin [IL]-1β, IL-6 and tumor necrosis factor [TNF]-α) were significantly increased in the mouse hippocampus following TMT treatment. In BV-2 microglia, iNOS, IL-1β, TNF-α, and IL-6 expression increased significantly, whereas arginase-1 and CD206 expression decreased significantly after TMT treatment in a time- and concentration-dependent manner. In primary cultured astrocytes, iNOS, arginase-1, IL-1β, TNF-α, and IL-6 expression increased significantly, whereas IL-10 expression decreased significantly after TMT treatment in a time- and concentration-dependent manner. These results indicate that significant up-regulation of pro-inflammatory signals in TMT-induced neurotoxicity may be associated with pathological processing of TMT-induced neurodegeneration.