醛糖还原酶基因敲除对小鼠脊髓损伤的保护作用及机制研究

目的:研究醛糖还原酶(AR)在小鼠脊髓损伤(SCI)的作用及分子机制。方法:利用野生型(WT)小鼠和AR敲除(AR KO)小鼠，制备小鼠脊髓钳夹伤模型，通过BMS评分对比观察损伤后两种小鼠在不同时间点(3、7、14和28 d)的运动功能恢复情况；采用免疫荧光染色观察小胶质细胞活化状态和损伤面积恢复程度；利用试剂盒和Western Blot检测损伤后小鼠脊髓组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、磷酸化核因子-κB(NF-κB)家族p65、4-羟基壬烯醛(4-HNE)和活性氧(ROS)的表达。通过体外培养来源于小鼠小胶质细胞系BV2,给予脂多糖(LPS)及4-HNE联合刺激，利用免疫荧光染色观察BV2细胞极化状态，Western Blot检测iNOS和p-p65蛋白表达水平。结果:与WT小鼠相比，AR基因敲除促进小鼠脊髓损伤后的运动功能恢复，损伤区面积显著减小，并且抑制小鼠脊髓损伤区小胶质细胞活化，NF-κB信号通路相关炎性分子iNOS表达水平明显下调。WT小鼠和AR KO小鼠在脊髓损伤后ROS、4-HNE的含量逐渐上升，在损伤后7 d表达较高，并且具有相似的表达变化模式。LPS联合4-H...     

微囊化异种雪旺细胞移植修复脊髓损伤的研究进展

轴突再生障碍是脊髓损伤(Spinal cord injury，SCI)导致永久性残疾的主要原因。研究发现，中枢神经系统(Central nervous system，CNS)的轴突再生障碍与其所处的抑制性胶质环境有关，如少突胶质细胞分泌的N1—35和N1—250(一种髓鞘相关阻断因子)、和MAG(髓鞘相关糖蛋白)，星形胶质细胞分     

坐骨神经选择性损伤痛模型小鼠脊髓背角线粒体解偶连蛋白UCP4的表达变化

目的:观察线粒体保护蛋白解偶联蛋白4(uncoupling protein 4,UCP4)在坐骨神经选择性损伤(sparednerve injury,SNI)模型小鼠脊髓背角中的表达变化。方法:健康C57BL/6小鼠分为假手术对照组(n=21)和坐骨神经分支选择性损伤SNI组(n=21),实验组损伤后饲养3,7,14 d。行为学采用测定小鼠热痛阈和Von Frey机械性痛阈;用免疫荧光组织化学染色法检测对比小鼠脊髓L3-6节段背角内UCP4免疫阳性细胞的数量。结果:SNI术后3 d,小鼠手术侧热痛阈和机械性痛阈明显低于假手术组,术后14 d达最低值。UCP4分布于正常小鼠脊髓背角,SNI后3 d损伤组小鼠脊髓背角中的UCP4表达降低,图像分析表明UCP4的光密度与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);脊髓背角中UCP4的表达在14 d时其降低程度最明显,图像分析表明光密度与对照组、3d和7 d比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:SNI后脊髓背角线粒体保护蛋白UCP4表达降低可能参与神经病理性疼痛的中枢敏化过程。     

腹内侧前额叶皮质锥体神经元参与选择性坐骨神经损伤小鼠疼痛和焦虑样行为调控的研究

目的 探究腹内侧前额叶皮质（ventromedial prefrontal cortex,vmPFC）锥体神经元对选择性坐骨神经损伤（spared nerve injury,SNI）小鼠疼痛和焦虑样行为的调控作用。方法 构建SNI神经病理性疼痛（neuropathic pain,NP）动物模型，假手术组（sham）仅暴露神经。向SNI小鼠损伤对侧腹内侧前额叶皮质（ventromedial prefrontal cortex,vmPFC）注射红藻氨酸/生理盐水，或化学遗传学抑制病毒/空载对照病毒。采用von frey纤维丝检测SNI术后损伤侧机械缩足反射阈值（paw withdrawl threshold,PWT）；高架十字迷宫评估SNI术后焦虑情况；免疫荧光染色观察SNI损伤对侧vmPFC中c-fos表达及注射红藻氨酸后神经元毁损、星形胶质细胞活化情况，RNA-scope原位杂交染色与免疫荧光染色双标明确Vgat基因和Vglut1基因分别与c-fos的共表达情况。结果 术后7 d及14 d，相比于sham小鼠，SNI小鼠损伤侧足底PWT、进入开臂次数和停留时间明显减少（P<0.0...     

存储条件对骨髓间充质干细胞的生物学特性和修复脊髓损伤效能的影响

目的探讨0.9%生理盐水(Saline)、0.01M磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)对骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)存活、增殖等生物学特性以及对修复脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)模型大鼠损伤效能的影响。方法体外,分离培养C57BL/6小鼠BMSCs,进行生理盐水、PBS及增殖培养基(PCM)处理不同时间,通过台盼蓝染色法检测各组细胞的活力,通过Brd U法检查各组细胞增殖情况。体内,通过LFB染色法检测各移植组SCI大鼠脊髓组织髓鞘再生情况;通过BBB运动功能评分检测大鼠运动功能恢复情况。结果存储液处理的BMSCs呈现出时间依赖的存活与增殖能力下降,PBS-BMSCs组存活率下降程度小于Saline-BMSCs组。移植组大鼠运动功能和损伤脊髓横断面髓鞘化程度显著恢复,并且PBS-BMSCs治疗组优于Saline-BMSCs治疗组。结论存储液处理BMSCs对SCI有治疗作用。     

补阳还五汤联合神经干细胞移植促进脊髓损伤髓鞘再生

目的:探讨补阳还五汤(BYHWD)灌胃联合神经干细胞(NSCs)移植对脊髓损伤(SCI)后髓鞘再生的影响.方法:将48只成年雌性SD大鼠随机分为脊髓损伤(SCI)组、BYHWD灌胃组、NSCs移植组、NSCs移植联合BYHWD灌胃(BYHWD+ NSCs)组.SCI组不做治疗;NSCs组于脊髓横断后局部移植NSCs; BYHWD+ NSCs组移植NSCs,并每天BYHWD灌胃;各组在损伤后14、28 d后分别留取损伤脊髓标本,用免疫荧光双标法检测髓磷脂碱性蛋白(MBP)表达情况,透射电镜观察脊髓白质内髓鞘超微结构变化.结果:BYHWD+ NSCs组MBP阳性表达最多,较其他3组差异有统计学意义.电镜下BYHWD+NSCs组髓鞘结构较为规整,轴突微丝、微管排列有序,线粒体结构完整,可见薄髓的再生髓鞘.结论:SCI后BYHWD灌胃联合NSCs移植能够促进损伤脊髓MBP的表达及脱髓的轴突再髓鞘化.     

Chondroitinase对成年大鼠脊髓完全性横断损伤后胶质瘢痕的影响

目的研究Chondroitinase(chABC)对成年大鼠脊髓完全性横断性损伤(spinal cord injury,SCI)后胶质瘢痕及纤维浸润的长期影响。方法 Wistar大鼠24只,在第10胸段脊髓(T10)给予破坏脊膜的完全性横切术,然后随机分为2组,在SCI处分别给予chABC或生理盐水。14周后,脊髓横断从胸9至胸11(10mm组织块)连续切片,首先用Trichrome组织学染色切片确定SCI中心及距中心头侧和尾侧各500μm位置,Trichrome染色和免疫组织化学染色测量损伤脊髓中胶原蛋白浸润的面积,硫酸软骨素蛋白聚糖(CSPGs)的免疫反应强度。免疫荧光共聚焦显微成像检测pCREB(1:25)和GFAP表达,以及测量在SCI处纵向的最短GFAP阴性距离。结果应用chABC治疗可降低脊髓完全性横断后结缔组织的浸润。在SCI处胶原蛋白的纵向最大浸润距离以及在脊髓横断切片上的浸润面积,在chABC组显著减小(p0.05)。在SCI处纵向的最短GFAP平均阴性距离在chABC组中显著低于未治疗组(p0.05),表明更多的剩余正常组织在SCI后得以保留。chABC还能有效地清除轴突再生的抑制因子CSPGs(p0.05)。结论 Chondroitinase通过减少纤维浸润和胶质瘢痕以及清除抑制性细胞外基质分子CSPGs,可为脊髓损伤后神经功能恢复和轴突再生提供有利的局部环境。     

直流电场诱导神经干细胞桥接横断脊髓的实验研究

目的:探讨直流电场(direct current field,DC)诱导神经干细胞(neural stem cells,NSCs)桥接横断脊髓的作用。方法:将54只雌性成年SD大鼠随机分为脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)组、NSCs移植组、NSCs移植联合直流电场诱导组(DC+NSCs组),各组分7,14,28d三个时间点取材,HE染色观察神经纤维再生情况,透射电镜下观察脊髓白质内髓鞘结构变化,免疫荧光染色检测髓磷脂碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)表达变化。结果:在光镜下,DC+NSCs组神经纤维较其他两组都多,排布均匀且走行较规则,部分纤维穿越损伤脊髓断端两侧。在电镜下,DC+NSCs组髓鞘松散程度明显减轻,部分髓鞘结构规整,排列有序,线粒体肿胀减轻,微管空泡样变较轻,可发现大量突触,薄髓的再生髓鞘明显增多。DC+NSCs组大鼠脊髓组织中可见直径大小不等的MBP阳性的圆形结构,MBP阳性表达最多,较其他两组有显著性差异(P0.01)。结论:直流电场诱导NSCs治疗SCI可以促进损伤处脱髓的轴突再髓鞘化和MBP的表达,促进神经纤维再生,从而起到桥接横断脊髓的作用。     

突触后密度蛋白-93在大鼠脊髓损伤后的表达变化

目的 探讨突触后密度蛋白-93(PSD-93)在脊髓损伤(SCI)后的表达变化以及定位情况.方法 使用改良Allen法制备大鼠急性脊髓损伤模型,致大鼠脊髓(T9、T10)重度撞击伤.采用实时定量PCR(Real-time PCR)和Western blotting测定损伤后各时间段PSD-93 mRNA及其蛋白水平在脊髓中的表达变化.采用免疫荧光双标方法检测PSD-93在正常脊髓中的分布以及损伤后的定位改变.结果 PSD-93 mRNA水平在SCI后呈现逐渐下降的趋势,在3d降到最低水平;蛋白水平则在SCI后显著上调,于1d达高峰.免疫荧光双标显示,PSD-93在SCI后除与神经型一氧化氮合酶(nNOS)存在着共定位之外,还高表达于损伤局部活化的小胶质细胞和星形胶质细胞.结论 脊髓损伤后PSD-93在基因和蛋白水平呈现明显的时相变化,并且与nNOS、活化的胶质细胞存在共定位,提示PSD-93参与了脊髓继发性损伤过程.     

microRNA在脊髓损伤中的研究进展

<正>脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是临床上有严重危害的急性病损,主要导致感觉和运动功能永久丧失的中枢系统神经损伤。SCI后神经元微弱的再生能力、快速出现机械阻碍轴突再生的胶质疤痕等共同造成脊髓难以进行组织修复和功能重建。因此,SCI的治疗一直是困扰医学界的难题。MicroRNAs(miRNAs)是一种内源性的小分子ncRNAs,针对3’端非编码区有着极高的保守性[1,2],在组织中广泛表     

突发性成批伤、灾害伤的早期救治

突发性成批伤、灾害伤是一个群体性事件,是指在没有准备的情况下,同一时间、同一地点、同一致伤原因引起的多人伤害,具有突发性、人数多、病情复杂、救治难度大等特点。近年来各类突发事件不断发生,全球每年死伤人数在数千万人以上。对于此类灾害的医学救援,笔者认为专业技术力量前伸至受灾现场、协助拣伤分类及现场急救;区域性灾害救援网络及通讯网络的组建;急救现场及运输途中早期救治的详实记录;入院后的再次伤情甄别,频繁和持续地复查和再评估;对危重伤员实行专组管理、责任到人;实施灾后早期心理干预及提升灾前备灾阶段医疗资源的储备能力等措施,可以更好地应对突发灾害事故,提高救治效率和质量。     

踝关节Logsplitter损伤的影像学特征与损伤机制的研究

目的 总结高能量踝关节骨折Logsplitter损伤的影像学表现及踝关节周围各解剖结构的损伤特征,探讨Logsplitter损伤的发生机制。方法 回顾性分析2009年4月-2018年12月西安交通大学附属红会医院足踝外科62例Logsplitter损伤患者的影像资料。其中男44例、女18例,年龄21~69(42.3±11.7)岁,左侧27例、右侧35例。提取术前X线和CT影像,分析腓骨损伤、胫骨损伤、下胫腓联合损伤、踝关节内侧损伤及外侧韧带损伤的特征及其不同损伤类型在本组Logsplitter损伤中的占比;结合踝关节骨折的Lauge-Hansen分型,分析不同踝关节骨折类型在本组Logsplitter损伤中的占比。结果 腓骨损伤特征:横行或短斜形骨折占61.3%(38/62),存在蝶形骨块占25.8%(16/62),粉碎性骨折占11.3%(7/62),腓骨无骨折占1.6%(1/62)。胫骨损伤特征:外侧关节面压缩占38.7%(24/62),合并后侧压缩占6.5%(4/62);内侧损伤包括内踝骨折占87.1%(54/62),三角韧带断裂占12.9%(8/62)。下胫腓联合损伤特征:单纯韧带断裂占11.3%(7/62),合并Tillux结节撕脱骨折占8.1%(5/62),合并Volkmann结节撕脱骨折占43.5%(27/62),同时合并Tillux结节与Volkmann结节撕脱骨折占37.1%(23/62);合并踝关节外侧副韧带完全断裂占12.9%(8/62)。根据Lauge-Hansen分型显示,其中旋前外展损伤占87.1%(54/62),旋前外旋损伤占8.1%(5/62),旋后外旋损伤占1.6%(1/62),无法分类的占3.2%(2/62)。结论 Logsplitter损伤的影像学特征多样化,在严重骨折脱位的同时,可合并侧副韧带损伤;损伤机制以外展位垂直暴力最为多见,部分也可为外旋位垂直暴力所致。     

甲状腺功能减退大鼠 肾脏损伤与足细胞损伤相关

足细胞是构成肾小球滤过屏障的重要结构,当足细胞发生损伤时,可大量表达结蛋白(Desmin,是足细胞骨架中间丝蛋白的一种)而发生表型转化,因此Desmin可作为光镜下足细胞损伤的标志.     

Degree of endothelium injury promotes fibroelastogenesis in experimental acute lung injury

We tested the hypothesis that at the early phase of acute lung injury (ALI) the degree of endothelium injury may predict lung parenchyma remodelling. For this purpose, two models of extrapulmonary ALI induced by Escherichia coli lipopolysaccharide (ALI-LPS) or cecal ligation and puncture (ALI-CLP) were developed in mice. At day 1, these models had similar degrees of lung mechanical compromise, epithelial damage, and intraperitoneal inflammation, but endothelial lesion was greater in ALI-CLP. A time course analysis revealed, at day 7: ALI-CLP had higher degrees of epithelial lesion, denudation of basement membrane, endothelial damage, elastic and collagen fibre content, neutrophils in bronchoalveolar lavage fluid (BALF), peritoneal fluid and blood, levels of interleukin-6, KC (murine analogue of IL-8), and transforming growth factor-β in BALF. Conversely, the number of lung apoptotic cells was similar in both groups. In conclusion, the intensity of fibroelastogenesis was affected by endothelium injury in addition to the maintenance of epithelial damage and intraperitoneal inflammation.     

桡神经损伤的神经电生理检测与医源性损伤预防

目的：探讨桡神经损伤的神经电生理检测方法及其医源性桡神经损伤的预防。方法：测定40例桡神经损伤病人的桡神经运动神经传导速度（MCV）及感觉神经传导速度（SCV）。根据桡神经损伤定位诊断和鉴别诊断的需要,按不同阶段分布选择肌肉进行肌电图（EMG）检查。结果：40例患者桡神经肘以上完全性（或严重）损伤20例,不全性损伤9例;桡神经肘以下完全性（或严重）损伤7例,不全性损伤3例;桡神经腋部严重损伤1例。医源性桡神经损伤11例,占总病例的28％。结论：桡神经损伤诊断应用神经电生理检查很重要,EMG在桡神经损伤的定位诊断与鉴别诊断中有着重要价值,其中肱桡肌、肱三头肌、三角肌是重要的鉴别诊断及定位肌肉。医源性桡神经损伤难以回避且发生率较高,应用术中持续肌电监测可以提高手术的准确性与操作的精确性,减少神经损伤的发生。     

Pathology of bone injury

Although the response to injury in bone has some characteristics in common with that in soft tissues, bone repair differs in that it occurs in a mineralized tissue that has a high degree of cellular and molecular organization. Bone is a unique tissue in the body as it is capable of reconstituting itself following injury. Almost any pathological insult to bone can be said to cause a bone injury. This review deals with the response to bone injury that occurs secondary to physical agents, notably mechanical trauma, pressure and ionizing radiation. These agents evoke a common pathological response, but a number of specific aspects are seen in particular types of bone injury.