Twist1对胶质瘤样干细胞的增殖和侵袭影响

目的研究Twist1对胶质瘤样干细胞增殖和侵袭影响。方法通过无血清干细胞培养基方法从原代培养的多形性胶质母细胞瘤中获得悬浮生长的肿瘤细胞球,利用免疫荧光方法及血清诱导分化方法对培养的肿瘤球进行鉴定;通过Western blot方法比较胶质瘤样干细胞和原代培养的多形性胶质母细胞瘤中Twist1表达;SiRNA抑制Twist1表达后,应用CCK-8方法及Transwell方法检测Twist1对胶质瘤样干细胞增殖和侵袭影响。结果无血清干细胞培养基方法可以从原代培养的多形性胶质母细胞瘤中诱导出悬浮生长的肿瘤细胞球;肿瘤细胞球表达肿瘤干细胞标记物CD133和Sox2,在含血清培养基中可以分化为表达神经元和神经胶质细胞标记物的细胞;胶质瘤样干细胞高度表达Twist1;利用siRNA抑制Twist1后,可以抑制胶质瘤样干细胞增殖和侵袭。结论Twist1可能是维持胶质瘤样干细胞干性的关键基因。     

DNA拓扑异构酶-Ⅱα沉默对脑胶质瘤干细胞增殖和凋亡的影响

目的由U87MG细胞分离并鉴定脑胶质瘤干细胞,研究Topo-Ⅱα基因对脑胶质瘤干细胞增殖和凋亡的影响。方法培养脑胶质瘤U87MG细胞,分离和鉴定其中的胶质瘤干细胞。将Topo-Ⅱα基因特异性的siRNA转染胶质瘤干细胞。转染后,Western Blot检测转染后Topo-Ⅱα蛋白的表达,MTT法检测细胞增殖活力,双标流式法检测细胞凋亡率。结果成功分离出U87MG细胞球细胞,并鉴定其具有肿瘤干细胞特性。转染Topo-Ⅱα基因特异性的siRNA后,胶质瘤干细胞中的Topo-Ⅱα蛋白表达明显降低,同时,细胞增殖能力显著降低,凋亡率明显增加。结论由U87MG细胞系中分离出细胞球细胞具备肿瘤干细胞特性,Topo-Ⅱα基因沉默降低胶质瘤干细胞的增殖能力,促进细胞凋亡。     

小RNA干扰骨桥蛋白抑制人U251细胞的体外生长与侵袭

目的:研究慢病毒载体介导的骨桥蛋白(OPN) RNA干扰对人U251神经胶质瘤细胞体外生长和侵袭的影响,并探讨其对神经胶质瘤生长、侵袭的可能机制.方法:应用本实验室已构建并鉴定的OPN特异性短发卡RNA慢病毒表达载体(LV-OPN shRNA)感染U251神经胶质瘤细胞.RT-PCR检测干扰前、后U251细胞OPN mRNA的表达;免疫印迹法检测干扰前、后U251细胞OPN、MMP-2、MMP-9、uPA蛋白表达;MTT法检测细胞增殖能力的变化;Transwell体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化;细胞划痕实验观察细胞迁移能力的变化.结果:与未感染组、空载体感染组相比,LV-OPN shRNA感染组OPN mRNA、OPN蛋白及MMP-2、MMP-9、uPA蛋白表达均明显下降;LV-OPN shRNA感染组细胞增殖、侵袭能力及迁移能力也明显下降.结论:慢病毒载体介导的骨桥蛋白RNA干扰在体外能抑制U251细胞OPN mRNA和蛋白表达, 进而抑制U251细胞在体外的生长及侵袭,因此可以推测OPN是促进胶质瘤增殖和侵袭的基因之一,为胶质瘤的治疗提供新的靶点.     

兔垂体干细胞的培养鉴定及分化

背景：脑垂体是人体重要的内分泌器官。多种疾病可引起脑垂体损伤，如脑垂体瘤、垂体功能减退症等。垂体干细胞因具有自我更新和多向分化潜力的特性，有望成为一种新的治疗方式修复受损的垂体。目的：采用悬浮细胞球培养法分离培养垂体干细胞，鉴定其增殖及分化能力。方法：采用悬浮细胞球培养法从新生新西兰白兔垂体中分离培养垂体干细胞，观察其形态特征；免疫荧光细胞染色检测垂体干细胞标志蛋白SOX2及Nestin的表达；采用EdU标记法检测垂体干细胞增殖能力；经贴壁及诱导分化后，通过ELISA法检测培养基中的激素水平。结果与结论：通过悬浮细胞球培养法可成功分离得到垂体干细胞球，且具有较强的增殖能力；干细胞特异性标记物SOX2和Nestin阳性表达；经诱导分化后培养基中促肾上腺皮质激素、促甲状腺激素、促生长激素、促黄体生成激素、促卵泡素、催乳素水平显著升高(P <0.001)，具有较强的分化能力。     

MiR-144对人脑胶质瘤干细胞的生物学行为的影响

目的研究mi R-144对人U87来源的胶质瘤干细胞(glioma stem cells,GSCs)生物学行为的影响。方法以干细培养液培养人U87胶质瘤细胞2周后,应用免疫荧光法检测细胞球的Nestin及CD133的表达,同时细胞球在含有10%胎牛血清培养基中分化培养2周,应用免疫荧光法检测GFAP和tubulin III的表达。过表达或抑制mi R-144的表达,应用CCK8法检测GSCs的细胞活力,应用FITC-PI双染色方法检测细胞凋亡,应用Transwell小室方法检测细胞迁移及侵袭能力。结果细胞球表达Nestin及CD133。细胞球分化培养2周后,细胞表达GFAP及tubulin III。与non-GSCs相比,在GSCs中mi R-144的表达明显降低。与阴性对照组相比,过表达mi R-144显著抑制了GSCs的细胞活力和细胞迁移及侵袭能力,诱导了GSCs的凋亡。而抑制mi R-144的表达显著提高了GSCs的细胞活力和细胞迁移及侵袭能力,抑制了GSCs的凋亡。结论 Mi R-144能够显著抑制人U87来源的GSCs的细胞活力及细胞迁移及侵袭能力,诱导GSCs的凋亡。     

人肺癌NCI-H446细胞生成肿瘤干细胞球

目的 探索人肺癌NCI-H446细胞系干细胞球体的培养,并鉴定其生物学特性.方法 用无血清培养基培养人肺癌NCI-H446细胞得到肿瘤细胞球.将肿瘤细胞球传代扩增,并用含血清培养基培养促使其分化;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色检测肿瘤球和普通NCI-H446细胞的增殖能力,并将肿瘤球和普通NCI-H446细胞分别植入裸鼠皮下,观察肿瘤形成;Transwell侵袭实验检测肿瘤球和普通NCI-H446细胞的侵袭能力的不同;流式细胞术检测CD133、CD44在肿瘤球和普通NCI-H446细胞中的表达,并筛选细胞表面标志物.结果 在无血清培养基中,人肺癌NCI-H446细胞可以形成少量的肿瘤细胞球,并显示很强的自我更新和增殖能力,在含血清环境中能够诱导肿瘤球分化而贴壁生长;在动物实验中,接种5×105个细胞时,肿瘤球细胞较普通NCI-H446细胞显示更强的致瘤能力;在侵袭实验中,肿瘤球细胞的侵袭能力高于普通NCI-H446细胞;干细胞标志物CD133及CD44在肿瘤球细胞的表达较普通NCI-H446细胞明显增高.结论 人肺癌细胞NCI-H446中存在癌干细胞,且可以通过无血清培养、分离和富集.     

miR-361-5p对脑胶质瘤迁移和侵袭的影响

目的 探讨miR-361-5p对脑胶质瘤迁移和侵袭的影响。方法 应用miR-361-5p mimics转染人脑胶质瘤U251细胞,CCK-8法检测细胞增殖能力;采用Transwell实验检测U251细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)以及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的蛋白表达。结果 与对照组和NC组相比,mimics组U251细胞的增殖能力显著降低（P<0.01）,mimics组迁移和侵袭的细胞个数明显减少（P<0.05）;与对照组和NC组相比,mimics组MMP-2、MMP-9以及VEGF表达明显减少（P<0.05）。结论miR-361-5p能抑制胶质瘤U251细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并且降低MMP-2、MMP-9以及VEGF蛋白表达,从而能够控制胶质瘤的生长和转移。     

胶质瘤细胞及其干细胞的放疗敏感性差异

目的探讨脑胶质瘤细胞与脑肿瘤干细胞(BTSCs)的放射敏感性差异。方法胶质瘤细胞接种于含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行培养。用血清剥夺法(无血清的DMEM/F12培养基添加bFGF、EGF和B27,即干细胞培养液)培养胶质瘤干细胞。CD133免疫细胞化学染色鉴定BTSCs。用直线加速器分别以0、2、4、6、8、10Gy X线照射胶质瘤细胞及BTSCs,然后继续培养36h。流式细胞仪检测上述细胞中CD133+细胞比率。采用MTT法检测细胞的存活情况。结果胶质瘤细胞中存在BTSCs,后者能在干细胞培养液中存活并悬浮生长,增殖形成克隆球,具有自我更新和增殖能力,表达特异性标志物CD133。胶质瘤细胞及BTSCs在X线照射后,其增殖能力都下降,但BTSCs的下降幅度远没有胶质瘤细胞大(P0.05)。CD133+比率显示,X射线对普通胶质瘤细胞中极其微量的CD133+细胞几乎没有影响,而BTSCs中的CD133+细胞的比例在0-10GyX射线放射过程中,与放射剂量成正比(P0.05)。结论 BTSCs的放射敏感性明显低于胶质瘤细胞,其机制可能与放疗过程中CD133+细胞的增加有关。     

脂肪间充质干细胞通过激活EZH2促进卵巢癌的增殖及侵袭

目的探讨脂肪间充质干细胞是否通过调节EZH2的表达促进卵巢癌细胞生长、侵袭及迁移。方法体外分离、培养健康人大网膜脂肪间充质干细胞并制备脂肪间充质干细胞条件培养基(ADSCs-CM),建立EZH2shRNA稳定转染的卵巢癌细胞系。条件培养基处理稳定转染及未转染的卵巢癌细胞,实时定量PCR及Western blot免疫印迹法检测2组细胞中EZH2mRNA及蛋白的表达差异,CCK-8方法及Transwell培养体系检测条件培养基对2组卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响。结果条件培养基处理后的卵巢癌细胞较普通培养基培养的卵巢癌细胞EZH2表达显著升高,并伴随增殖及侵袭能力的增强;我们通过shRNA沉默卵巢癌细胞中的ezh2基因,建立稳定转染的卵巢癌细胞系,再用条件培养基处理EZH2shRNA稳定转染的卵巢癌细胞,处理后EZH2表达较未转染细胞未见明显升高,说明siRNA成功抑制细胞系中EZH2的表达。CCK-8检测和Transwell侵袭实验结果表明,稳定转染的卵巢癌细胞经条件培养基处理后,脂肪干细胞条件培养基对卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力的促进作用消失。结论人脂肪间充质干细胞可能通过调节卵巢癌细胞中EZH2的表达对卵巢癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力起促进作用。     

miR-26b-5p通过抑制REST表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭

目的探究miR-26b-5p通过抑制抑制元素1-沉默转录因子(repressor element 1-silencing transcrip-tion factor,REST)表达调节胶质瘤细胞生长和侵袭情况.方法逆转录-聚合酶链反应检测miR-26b-5p和REST表达水平;荧光素酶报告实验检测miR-26b-5p和REST的靶向关系;Hoechst染色检测细胞凋亡;Colony形成法检测细胞增殖;Transwell检测细胞侵袭;蛋白免疫印迹检测细胞Ki67、MMP-9、cleaved caspase-3蛋白表达水平.结果miR-26b-5p和REST存在直接靶向作用关系,与Control组比较,mimic组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显降低,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显升高,inhibitor组细胞增殖数、侵袭数和Ki67、MMP-9表达明显升高,凋亡率与cleaved caspase-3表达明显降低.结论miR-26b-5p可以通过抑制对REST的表达调节胶质瘤细胞生长、侵袭、凋亡能力.     

Level of functioning of siblings and parents of probands of varying degrees of retardation

A further analysis of already published data supports the position that retardates of low ability level less frequently have retarded siblings, retarded parents, and parents low in occupational level than do retardates higher in ability level. The analysis supports the position that there are two types of retarded individuals, persons retarded as a result of gene or chromosomal anomalies, brain injury, etc., who more frequently occur in the lower-level retardate group, and persons whose retardation represents polygenic segregation, who more frequently occur in the higher-level group.     

Modes of Inheritance of Errors of Refraction

Eighteen families in which both parents had refractions within the range of +4·0 D to −4·0 D and axial lengths seen in emmetropia (22·3-26·0 mm) showed coefficients of correlation of the order 0·5 indicative of polygenic inheritance. Such coefficients were seen for axial length (0·407) and for the cornea (0·487), but not for the lens (which is known to be yoked to the axial length). No such coefficients were seen in 19 families in which one of the parents had axial length outside the emmetropic range (nine families with long axes and 10 with short axes).

The pattern of polygenic inheritance for emmetropia (completely correlated optical components) and errors of refraction up to 4·0 D (inadequately correlated components: correlation ametropia) follows that seen in stature and other measurable characters. In contrast the high refractive errors with their abnormal axial lengths (component ametropia) are—like the extremes in stature—pathological anomalies with monofactorial inheritance.