绿原酸提取及分析测定方法研究进展

绿原酸为金银花的主要抗菌有效成分,它具有抗菌、抗病毒、解热、升高白细胞、保肝利胆、免疫调节、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基等作用。现将绿原酸的提取及分析测定方法的研究近况作一综述。     

金银花中绿原酸的快速测定方法

目的建立金银花主要有效成分绿原酸总量的快速比色测定方法。方法采用酚类物质中酚羟基与三氯化铁的显色反应,对绿原酸与三氯化铁的显色反应的一些特征参数(如显色反应的条件、显色产物的吸收波长、稳定性、标准工作曲线及回收率等)进行考察与测定。结果显色反应物的检测波长755 nm;以绿原酸的吸光度和浓度得出工作曲线,回归方程y(μg/mL)=231.77x+5.4114,相关系数0.9982;绿原酸浓度0~181.0μg/mL,符合比耳定律;表观摩尔吸收系数ε=1.495×103L.mol-1.cm-1,检出限3.78μg/mL,回收率92.22%。结论快速比色测定方法简单、快速,可望用于金银花的检测与评价。     

绿原酸提取纯化工艺对比实验研究

目的：通过对比实验,优选提取金银花有效成分绿原酸的最佳工艺。方法：用已知绿原酸含量的同批金银花作原料,分别依照文献报道的石硫法、异戊醇法及醋酸乙酯法进行提取纯化友紫外分光光度法测定各提取物中绿原酸的含量。结果：提取物绿原酸含量依次分别为５０．５％,６８．３％,８０．５％;绿原酸转移率分别为６４．７％,７０．１％。８６．２％。结论：改变醋酸乙酯法具有收得率高,纯度大,毒性小的优点。     

正交试验优化金银花中绿原酸的提取工艺

目的:优化金银花中绿原酸的水提工艺.方法:设计正交试验,以绿原酸对原药材的收率为指标,以紫外分光光度法为检测手段,优化金银花中绿原酸的提取工艺.结果:最佳提取工艺为药材粒度60目,加入15倍量水(pH=4),于70℃浸提3次,每次1h.结论:本文建立的方法操作简便,重复性好,绿原酸收率高.     

金银花中绿原酸的微波辅助提取

采用微波辅助提取金银花中的绿原酸。考察了溶剂种类及浓度、提取时间、液固比、溶剂PH、提取次数等对绿原酸得率的影响;结合正交实验设计确定了绿原酸的最优提取工艺条件：液固比15,φ=0．4的乙醇溶液提取2次,每次60s。将优化后的微波提取结果与其他方法比较,结果表明：微波法具有操作简单、快速高效、节能环保等优点。     

高效液相色谱法测定金银花中绿原酸的含量

金银花具清热解毒、凉散风热之功效。用于痈肿疔疮 ,喉痹 ,丹毒 ,热血毒痢 ,风热感冒 ,温病发热 [1 ] ,为临床常用中药。金银花化学成分主要含有绿原酸 (Chlorogenic acid)和异绿原酸 (Isochlorogenic acid) [2 ] ,为抗菌有效成分。通过测定金银花中绿原酸的含量 ,可以有效控制金银花药材的质量 ,但原药材质量标准中尚缺含量测定项 ,因此 ,我们采用高效液相色谱法 ,对 2 8批不同产地金银花中绿原酸的含量进行测定 ,现报告如下。1　仪器与试药　　美国 Waters5 10型高效液相色谱仪 ,Waters4 90 E型紫外检测器、Waters6 80型梯度控制器、Wa…     

均匀设计法优化金银花中绿原酸的提取工艺

目的：筛选金银花中绿原酸提取最佳工艺条件。方法：采用均匀设计安排试验，以紫外吸光度为考察指标，数据经多元回归处理，建立绿原酸的定量评价方法。对金银花中绿原酸提取工艺中影响效果的乙醇浓度、料液比、超声时间三因素及条件进行优化，根据回归方程并结合经验，优选绿原酸提取工艺的最佳实验条件。结果：选择乙醇浓度40％，超声时间30min，料液比1／25，超声频率40Hz，提取温度45℃为最佳条件，提取次数为3次。     

正交试验比较金银花中绿原酸、异绿原酸A的提取工艺

目的优化金银花的提取工艺,建立高效液相色谱法（HPLC）快捷检测绿原酸和异绿原酸A的方法。方法以HPLC同时测定绿原酸、异绿原酸A的含量为指标,通过比较醇浓度、回流时间、超声功率、超声时间4因素对提取工艺的影响,优化超声波辅助醇法提取金银花的工艺。结果以绿原酸、异绿原酸A的综合评分为指标,最佳提取工艺是60%乙醇超声（功率500 W）45 min,再回流提取1 h。结论建立了准确灵敏的检测方法,优化的提取工艺经济、高效,能为生产提供理论依据。     

HPLC测定金银花冰爽含片中绿原酸的含量

目的:建立金银花冰爽含片中绿原酸的含量测定方法.方法:采用HPLC法测定绿原酸的含量,色谱柱:Dikma Kromasil C18柱(51μm,250×4.6mm);流动相:甲醇-0.5%磷酸溶液(26:74);流速:0.8 ml·min-1;检测波长:326nm;柱温:300℃;进样量:10μl.结果:绿原酸在0.08～0.8μg范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),平均回收率为98.68%,KSD为1.26%(n=5).试验测得金银花冰爽含片中绿原酸的含量为3.56mg/片.结论:该方法简便、快速、有效、灵敏、准确、具有良好的重复性和回收率,可作为该制剂的定量分析方法.     

毛细管电泳-安培检测测定金银花中的绿原酸和木犀草素

目的测定金银花中的绿原酸和木犀草素。方法采用毛细管电泳-安培检测，以微碳圆盘电极为检测电极，检测电位0．95V、pH8的50mmol／LNa2B4O7-100mmol／L NaH2PO4缓冲液为运行液，使用长70cm、内径25μm的熔融石英毛细管分离。结果当分离电压为21kV时，绿原酸和木犀草素在26min内完全分离。绿原酸和木犀草素的线性范围为0．35～21．0μg/ml和0．20～12．0μg/ml，检出限为0．08μg/ml和0．01μg/ml。结论毛细管电泳-安培检测法可用于金银花中绿原酸和木犀草素含量的测定。     

高效液相色谱法测定金银花有效部位中绿原酸的含量

目的建立测定金银花有效部位中绿原酸含量的高效液相色谱法(HPLC)法。方法用高效液相色谱法测定金银花有效部位中绿原酸的含量,采用Hypersil ODS2色谱柱,以乙腈∶水∶冰醋酸(15∶85∶0.2)为流动相,流速0.8 ml.min-1,检测波长327 nm,柱温25℃,灵敏度0.001 AUFS。结果绿原酸含量在0.058-0.290μg范围内呈良好的线性关系,回收率为104.8%,RSD值3.6%(n=6)。结论该方法简便,重复性好,可作为金银花有效部位的含量检测方法。     

不同产地梅花中绿原酸含量测定

目的 采用高效液相色谱法测定梅花中绿原酸含量,为梅花药材质量控制提供依据.方法 采用Shimpack VP-ODS色谱柱（250 mm×4.6 mm,5 μm）,以乙腈-0.4%磷酸水（13：87）为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长为327 nm,柱温为30 ℃.结果 绿原酸在0.040 7～0.814 0 μg（r=0.999 9）范围内与峰面积呈现良好的线性关系.平均加样回收率（n=6）为98.60%,RSD=1.68%.结论 所建立的高效液相色谱法准确、可靠、简单,可作为梅花药材质量控制的参考依据.     

HPLC法测定小儿解表颗粒中金银花及单味金银花绿原酸的含量

目的建立高效液相色谱法测定小儿解表颗粒中绿原酸含量的方法。方法采用Hypersil C18（250mm×4．6mm,5um）,色谱柱;以乙腈-0．4％磷酸溶液（13：87）为流动相,流速为1．0mL／min,柱温为室温,检测波长为327nm,以外标法测定金银花药材及小儿解表颗粒中绿原酸的含量。结果绿原酸在11．2～134．4ug·mL^-1内呈线性关系。绿原酸在制剂中的平均回收率（n=5）为99．18％（RSD=0．60％）。结论该方法准确、简便、重现性好,可用于小儿解表颗粒的质量控制。     

壮药水银花中绿原酸含量测定方法的建立

目的建立壮药水银花绿原酸含量测定方法。方法采用高效液相色谱法（HPLC）,对色谱条件进行摸索,并采用正交设计法优化供试品溶液的制备条件。结果色谱条件为Gemini C18柱（4．6 mm ×250 mm,5μm）,流动相为乙腈－0．4％磷酸（13∶87）,流速1．0 ml／min,检测波长327 nm。样品供试液制备条件为：药材破碎度为过四号筛,称样量0．2 g,提取溶剂为50％甲醇,提取时间30 min。结论建立的HPLC含量测定方法准确可靠,符合技术要求,可作为壮药水银花中绿原酸的测定方法。     

HPLC测定山银花药材中常春藤皂苷元的含量

目的建立山银花药材中的常春藤皂苷元含量的测定方法。方法以盐酸一乙醇溶液为水解溶剂,山银花样品加热回流4h,再用三氯甲烷萃取;采用HPLC,以Waters Symmetry C18（150min×4．6mm,5μm）色谱柱,甲醇-0．4％冰醋酸水溶液（80：20）为流动相,流速为1．0mL／min,柱温为30℃,检测波长为210nm,测定常春藤皂苷元含量。结果山银花中常春藤皂苷元的线性范围为2-12μg,平均加样回收率99．O％,RSD为1．9％。不同产地山银花的常春藤皂苷元含量差异较大．湖南隆回野生的含量高达2＋8％,而云南、贵州产的未检出。结论所建立方法操作简便、准确、可靠、重复性好．可用于山银花药材中常春藤皂苷元的含量测定。     

山东平邑金银花三个品系RAPD分析及绿原酸含量分析

目的：分析山东平邑金银花3个品系的遗传信息和绿原酸含量,为金银花品系的研究开发提供科学数据。方法：运用RAPD分析技术和HPLC方法采集数据。结果 ：金银花3种品系的RAPD遗传距离结果是：新品种与鸡爪花的遗传距离较近,在聚类分支图上归为一类;毛花与鸡爪花的遗传距离稍远。绿原酸含量结果 ：毛花品系〉新品种〉鸡爪花品系。结论：山东平邑金银花的新品种从遗传距离上分析与鸡爪花品系的亲缘关系较近,与毛花品系的稍远;新品种的绿原酸含量介于毛花品系与鸡爪花品系之间。     

金银花多糖的提取、精制及含量测定

目的提取金银花中的多糖,精制并进行含量测定。方法采用热水法提取、乙醇沉淀制备粗多糖;Sevag法去蛋白制备精制多糖;苯酚-硫酸法测定多糖含量。结果粗多糖和精制多糖中多糖的含量分别为61．27％和80．54％。结论得到了高纯度的精制多糖。     

金银花药材脱氧核糖核酸(DNA)提取方法的研究

目的:研究金银花药材总脱氧核糖核酸(DNA)的提取方法。方法:对经典的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法进行了改良,采用改良的CTAB法提取金银花药材的总DNA,通过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和浓度。结果:用改良的CTAB法提取的总DNA的OD260/OD280比值在1.76-1.85之间,干药材提取率为89.8-325.4μg/g。结论:用改良CTAB法提取的基因组DNA纯度高,符合分子生物学的要求。     

金银花中裂环环烯醚萜苷类化学成分研究

目的 系统研究金银花Lonicera japonica水提物中的化学成分.方法 利用D101、Sephadex LH-20、硅胶等各种柱色谱法进行分离纯化,通过波谱分析手段(IR、UV、NMR等)及化合物的理化性质进行结构鉴定.结果 从金银花水提物中分离得到7个裂环环烯醚萜苷类化合物,分别为:vogeloside(Ⅰ)、7-epi-vogeloside(Ⅱ)、secologanic acid(Ⅲ)、sweroside(Ⅳ)、secoxyloganin(Ⅴ)、secologanoside(Ⅵ)、(E)-aldosecologanin(Ⅶ).结论 其中化合物Ⅲ和Ⅵ为首次从忍冬属植物中分离得到,化合物Ⅶ为迄今为止较为罕见的通过碳碳键相连的二聚体环烯醚萜苷.