检测抗-HIV1的固相红细胞粘附免疫试验:一种简单、快速和准确的筛检供体的方法

本文报道了第二代检测人类免疫缺陷症病毒抗体(抗-HIV)的方法,即将与红细胞交联的抗人IgG作为与待检标本起反应的抗体指示剂,用以筛检器官和血液供体。以裂解病毒或病毒蛋白质吸附微量凝集板,以适量蛋白溶于50μl pH9.5的碳酸盐缓冲液中,全HIV-1为每孔0.14μg,肽为每孔5μg,吸附后将微量凝集板置1280g离心5分钟,于37℃培育2小时,再于4℃过夜,用含0.05%吐温20的生理盐水洗涤4次,干燥后,保存于4℃备用。血清以含5%奶粉的磷酸盐缓冲液(PBS)作1∶100稀释,将50μl稀释血清加至包被孔内,置室温作用5～10分钟,以含0.05%吐温20的0.9%盐水洗涤3次后加入1滴与红细胞交联的抗-人IgG,于180g离心3分钟并     

单向辐射状免疫扩散法检测狂犬病疫苗糖蛋白含量的评价

作者用单向辐射状免疫扩散法(SRID)对法国商品PM疫苗、加拿大SAD实验疫苗和西德Flury-LEP疫苗进行检测,并用第4代国际标准狂犬病疫苗(PM株)作SRID的参考品。用去垢剂分别溶解各株病毒糖蛋白,经纯化后加佐剂分别免疫绵羊制得抗血清。用此抗血清制备1%琼脂糖凝胶板,加入经去垢剂处理并稀释过的疫苗抗原,放湿盒24小时,再用PBS浸泡摇动24小时,干胶后加0.2%Coomassie R-250染色。在1年多时间内,测     

用表达AIDS病毒包膜糖蛋白的重组牛痘病毒免疫的黑猩猩的AIDS病毒糖蛋白特异性细胞毒T细胞及其增殖

作者用表达人类免疫缺陷症病毒(HIV)包膜(env)糖蛋白的牛痘病毒重组株v-env5免疫黑猩猩,并用表达Ⅰ型单纯疱疹病毒gD糖蛋白的重组牛痘病毒(v-HSV-gD1)作对照。采血后分离外周血淋巴细胞(PBL)。分别以纯化的HIV、env和灭活的牛痘病毒对两利PBL作抗原刺激,用~3H-胸苷(~3H-TαR)标记细胞,以~3H-TαR结合量来反映PBL的增殖应答。发现经v-env5免疫的黑猩猩的PBL在HIV或env刺激后均大幅度增殖。HIV刺激后PBL内~3H-TαR的结合量比无抗原刺激对照组高7～144倍,以env刺激后PBL中~3H-TαR结合量也提高16～80倍,而v-HSV-gD1     

脊髓灰质炎病毒嵌合体诱生广泛反应性HIV-1中和抗体

1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)包膜蛋白(env)具有广泛的序列异质性和抗原变异性,也存在着抗原性保守位点.理想的疫苗应含有此保守位点,以便诱生能与许多病毒分离株起反应的抗体.作者选用HIV-1跨膜糖蛋白gp41(组特异性抗原决定簇),以Ⅰ型脊髓灰质炎病毒Sabin疫苗株为表达载体(pCASl),用DNA重组技术构建成脊髓灰质炎病毒/HIV-1抗原嵌合体Sl/env/3.     

重组痘苗-HIV包膜和HIV包膜蛋白诱导的免疫应答

12名人类免疫缺陷症病毒(HIV)血清阴性的男性受试者经三角肌区划痕接种2剂编码gp160HIV-1包膜蛋白的重组痘苗(vac-env),11～14个月后肌注加强免疫2剂杆状病毒表达的HIV-1LAI株的重组糖蛋白(rgp)160μg,12～20个月后加强第3剂     

实验性多价ISCOM亚单位疫苗诱导中和人和牛呼吸道合胞病毒的抗体

用羊肾(OK)细胞系培养人呼吸道合胞病毒Long(RS)株和牛RS病毒A-51908株.细胞在加有50μg庆大霉素与5%胎牛血清的Hanks 199和最低必需培养基中生长.采用微滴板以OK细胞进行病毒滴定.细胞按密度为1×10~5/ml接种并在5%CO_2中培养.将25μl10倍稀释的病毒液加入各孔,经2小时吸附后,各孔再加0.15ml无血清培养基,微滴板在37℃个培育3天,然后用倒式     

基因工程人类免疫缺陷症病毒疫苗的安全性和免疫原性

作者研究了env2-3(SF2)抗原与胞壁酰三肽二棕榈磷脂酰乙醇胺(MtP-PE)佐剂合用作为1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)亚单位疫苗对人体的安全性和免疫原性。受试者为25名未感染过HIV的健康者。env2-3(SF2)为代表HIV-1SF2分离物env基因gp120区的未糖基化多肽,用基因工程方法制备,其分子量约56000,env2-3(SF2)抗原纯度>95%。佐剂为MTP-PE,最后疫苗是在注射前将乳化抗原与佐剂混合制得。采取两种免疫程序,单用佐剂(每次100μg)或在相同佐剂中加低剂量env2-3(SF2)(每次50μg)或加大剂量env2-3(SF2)(每次     

对HIV-1或HIV-1包膜糖蛋白(gp120)制备的免疫刺激复合物的免疫应答

作者用去垢剂溶解的1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)B和HIV-1B包膜糖蛋白(gP120)分别制备了两种免疫刺激复合物(ISCOM).HIV-1B ISCOM在电镜下呈开放的环形骨架样结构,平均直径为35nm,不含完整病毒.十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)胶上可观察到ISCOM与病毒的主要区别在于缺乏p24.由于HIV-1B     

一种检测抗-HIV-1和抗-HIV-2的微量ELISA系统

除1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)外,HIV-2也是引起艾滋病的病因。故抗-HIV的筛检试验对HIV-1和HIV-2两种抗体均应充分敏感。本文介绍一种夹心型的免疫试验,采用HIV-1病毒裂解物和HIV-2包膜(env)合成肽联合作固相抗原。HIV-2 env合成肽经液相和固相技术结合制得,通过硅胶层析纯度达95%以上,与牛血清白蛋白     

艾滋病病毒结构蛋白与IFNα-2b表达产物的细胞免疫

为观察艾滋病病毒结构蛋白与IFNα-2b表达产物诱导机体产生细胞免疫的变化,将编码艾滋病病毒(HIV-1)外膜蛋白env、核心蛋白gag与编码干扰素(IFNα-2b)基因分别插人pSFJ16与pSFJ38真核表达载体,利用分子克隆技术构建重组质粒,经脂质体转染与野生型痘病毒在Cos-7细胞内同源重组、筛选、纯化,获得重组痘苗病毒vJ16env/IFNα-2b和vJ38gag/IFNα-2b。免疫小鼠后,检测小鼠周围血与脾淋巴细胞对ConA及LPS的反应性,用流式细胞仪测定小鼠脾细胞CD4~+、CD8~+细胞计数。结果表明,周围血与脾淋巴细胞对ConA、LPS的反应性,实验组与对照组比较差异有显著性(P<0.05);CD4~+T细胞与对照组比较差异有显著性(P<0.05);CD8~+T细胞与对照组比较差异无显著性,但呈增高趋势。结论:重组痘苗病毒能诱导小鼠产生较强的细胞免疫。重组痘苗病毒体外与HIV-1gag阳性血清发生特异性反应,具有免疫原性和免疫反应性。     

HIV-1包膜糖蛋白gp120小分子抑制剂的研究进展

人类免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus-1, HIV-1)包膜糖蛋白gp120与CD4的结合是病毒侵入细胞的第一步,干扰此过程就能阻止病毒识别靶细胞而抑制其复制,因此HIV-1 gp120作为HIV-1生命周期中的重要靶标,针对该靶标的药物已成为当前抗艾滋病药物研发的热点。其中, gp120小分子抑制剂BMS-626529经前药策略修饰后得到的磷酸酯前药福替沙韦(fostesavir)已分别于2020年和2021年被美国和欧洲批准上市用于治疗具有多重耐药性HIV-1感染的成年患者。该篇综述从药物化学的角度重点描述了靶向gp120-CD4相互作用环节的各种结构类型小分子抑制剂的研究进展,以期为gp120抑制剂的研究提供启发。     

用单克隆抗体溶液杂交法检测人类免疫缺陷症病毒核酸

作者介绍了一种新的检测生物标本中病毒RNA的非同位素杂交法.此法系将含有1μg/ml事先制备的生物素化探针的杂交缓冲液(120μl)加入等体积的标本中.将所得的混合物加热到100℃3分钟使探针变性,并在68℃水浴下进行3小时杂交反应.杂交反应完成后,将混合物冷却至室温并加24μl10%Triton X-100,从而形成含有十二烷基硫酸钠(SDS)的微胶粒,以防止高浓度SDS从下一步所用的包被微量稀释板中吸收抗体.为进行免疫反应,将100μl杂交标本加入黑色聚苯乙烯96孔微量稀释板的双排孔中.该板经与100μl山羊抗生物素抗体于4℃下培育过夜制成.使用前,先用含有0.05% Tween20的PBS(PBST)     

重组HIV-金丝雀痘疫苗在乌干达HIV血清阴性志愿者中的免疫原性

作者在人类免疫缺陷病毒( HIV)流行的重灾区乌干达进行了重组HIV-金丝雀痘疫苗的 期临床研究,旨在评价B亚型疫苗在乌干达未感染人群中的安全性和亚型间交叉免疫原性。　　该项研究为随机双盲安慰剂对照的现场试验。选择4 0名血清阴性的乌干达志愿者,其中2 0名受试者接受含B亚型HIV- 1 env和gag- pro抗原的金丝雀痘病毒载体,1 0名受试者接种含狂犬病病毒糖蛋白G基因的对照载体,其他1 0名受试者接种盐水对照。按照标准的艾滋病疫苗评价工作组的方案测定HIV特异性细胞毒性T细胞( CTL )数目,以标准铬释放测定法评价细胞毒活性,以改良的…     

快速斑点免疫结合试验在硝酸纤维素膜上检测病毒抗体

ELISA所用的聚苯乙烯板结合蛋白的能力很低。本文报道以硝酸纤维素(NC)为基质的快速斑点免疫结合试验(DIA)检测病毒抗体。作者用10μg/ml补骨脂素衍生物和长波紫外线灭活几种病毒抗原。每种抗原取1μl,滴在8×11cm的NC膜上(1cm间隔)或在印有3mm格子的8.8×8.8cmNC膜上,每3格滴1个抗原,干燥30分钟,将NC膜浸于PBS(含5%脱脂奶粉、0.01%抗泡剂A和0.0001%硫柳汞)中,封闭未结合位点。1小时后,用含0.1%吐温20的PBS洗涤。另将待     

对呼吸道合胞病毒亚单位疫苗局部免疫的体液、粘膜和细胞免疫应答

本文用霍乱毒素B链(CTB)作为佐剂在小鼠体内评价了呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)蛋白局部免疫作用.免疫4周龄CD1小鼠、每组4～6只,亚单位疫苗鼻内接种(inl)10μl(含F蛋白2μg和CTB5～10μg),肌肉接种(im)100μl(只含F蛋白2μg),在0和4周各免疫1次,活病毒疫苗inl 50μl[含5×10~5蚀斑形成单位(pfu)],只免疫1次.最后一次免疫后4周用RSV10~6pfu inl攻击,取攻击前的血清检测抗体,攻击后5天的鼻洗液(NW)和支气管肺泡灌洗液(BAL)滴定病毒效价和抗体.     

用体外毒素结合抑制试验测定人血清中破伤风和白喉抗毒素

作者将测定血清中破伤风抗毒素滴度的毒素结合抑制(ToBI)试验加以改进,可同时测定破伤风和白喉两种抗毒素.ToBI试验的操作方法是把200μl待测人血清和标准对照血清在封闭好的平底或圆底聚苯乙烯微量板孔中做倍比稀释后,每孔加入0.1Lf/ml破伤风和白喉毒素.取100μl血清-毒素混合液移到分别用破伤风和白喉抗毒素包被并封闭的聚氯乙稀微量板相应孔中,经培育和洗涤,每孔加入辣根过氧化物     

水痘-带状疱疹病毒亚单位候选疫苗的特性和免疫原性

作者选用MRC-5细胞及水痘-带状疱疹病毒(VZV)Hallworth株作为制备疫苗的细胞系和病毒株,通过去污剂和甲醛处理,蔗糖超速离心和丙酮沉淀制备出每剂分别含210、240、250和280μg蛋白(相当于1×10~7VZV感染细胞)的四批疫苗.该法保留了VZV蛋白和一些特异性糖蛋白的免疫原性,并使病毒DNA小于20pg/250μg蛋白(假定为1剂     

含有改变的包膜糖蛋白的基因工程人类免疫缺陷症病毒类似颗粒的表达和特征

作者为能研制安全和能产生交叉保护作用的AIDS候选疫苗,在1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)LAI株类似颗粒的pMTHIV载体中插入编码HIV-1MN株包膜糖蛋白(gP)的DNA片段,研究了含有嵌合包膜糖蛋白基因的构建体的免疫原性。     

疫苗诱导的抗天然及重组HIV-1包膜糖蛋白抗体

作者采用多中心、随机、双盲法,对以1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)LAV株gp160重组痘苗活病毒初免、再用杆状病毒表达的HIV-ILAV重组gp16O候选疫苗加强免疫所诱生的能识别感染细胞表面表达的天然外膜糖蛋白的抗体进行了测定.     

对HIV-1 env DNA疫苗免疫应答的遗传学控制

含有编码1型人类免疫缺陷症病毒(HIV-1)env蛋白的HIV-1特异性DNA疫苗可诱导强的体液和细胞介导免疫应答。作者用不同品系的小鼠研究了HIV-1特异性DNA疫苗诱导抗体产生及迟发型超敏反应(DTH)的遗传学控制。