靶向超声造影评价裸鼠肾癌新生血管的实验研究

目的 探讨以血管内皮生长因子受体2 (VEGFR2)为靶点的靶向超声造影评价裸鼠肾癌新生血管的应用价值.方法 建立人肾透明细胞癌皮下移植瘤裸鼠模型,制备携VEGFR2抗体的靶向造影剂(MBV),每只裸鼠分别随机注射普通造影剂(MBC)和MBV并行超声造影检查,比较两种造影剂的视频强度,并对肿瘤组织行VEGFR2免疫组化检测.结果 超声造影示MBV组视频强度(6.50±1.43)Db,MBC组视频强度(2.59±0.99)Db,两者差异有统计学意义(P<0.01),且MBV组持续强化时间较MBC组长,免疫组化结果证实肿瘤血管内皮VEGFR2高表达.结论 以VEGFR2为靶点的靶向造影剂可特异性增强肾癌显影,对评估肿瘤新生血管有重要价值.

Abstract：

Objective To investigate the value of contrast enhanced ultrasound(CEUS) with microbubbles targeted to vascular endothelial growth factor receptor type 2 (VEGFR2) for imaging tumor angiogenesis in murine tumor models.Methods Established human renal cell carcinomas(RCC) subcutaneous xenograft tumor model in nude mice,microbubbles targeted to VEGFR2(MBV) was prepared,control microbubbles(MBC) and MBV were injected respectively in each mouse,the intensity of each microbubble was compared,the expressions of VEGFR2 in tumors were tested by immunohistochemistry.Results CEUS imaging showed the intensity of MBV and MBC was (6.50±1.43)dB,(2.59±0.99)dB,respectively.There was significantly higher intensity when using MBV compared with MBC (P<0.01).The time to wash out was longer in MBV contrast group compared with MBC group.Immunohistochemistry showed VEGFR2 was highly expressed in novel vessel walls.Conclusions Contrast microbubbles targeted to VEGFR2 can specially enhance the images of RCC and has tremendous significance in the assessment of angiogenesis.     

肝细胞肝癌超声造影与微血管密度的相关性研究

目的 探讨肝细胞肝癌(HCC)的超声造影定量参数与其组织中微血管密度(MVD)的相关性,探讨超声造影无创评价HCC血管生成的价值.方法 应用Sequoia 512超声诊断仪及造影剂SonoVue对28个HCC病灶行超声造影检查,脱机应用新型超声造影定量分析软件(SW-UCS)获得肿瘤及同深度癌旁肝实质的感兴趣区的时间强度曲线(TIC)和灌注定量参数.术后病理切片行CD34免疫组织化学染色并测得MVD.分析比较超声造影定量参数与MVD的相关性.结果 HCC与肝实质TIC曲线可以直观反映HCC相对于肝实质"快进快出"的典型增强表现.两者曲线上升速率(a3)、达峰时间(TTP)、峰值强度(PI)、强度增量(ISI)、加速时间(AcT)差异有统计学意义(P＜0.05).HCC的MVD(49.36±12.57)明显高于癌旁肝实质(32.46±11.78).两者差异有统计学意义(P=0.000).HCC的PI、ISI、曲线下面积(AUC)与MVD呈正相关,峰值减半斜率(a2)与MVD呈负相关(P＜0.05).结论 HCC的超声造影定量参数与MVD有一定的相关性,能无创地评估活体内HCC的血管生成.     

超声破坏微泡促进骨骼肌血管新生的时间-效应关系研究

目的 探讨超声破坏微泡促进大鼠骨骼肌血管新生的时间-效应关系.方法 将48只SD大鼠随机分为4组(超声破坏微泡组、单纯超声组、单纯微泡组、对照组),超声破坏微泡组经尾静脉输入自制的脂质全氟丙烷微泡造影剂0.5 ml,同时用1.0 MHz、2.0 W/cm2的超声在其大腿骨骼肌局部作用3min;单纯超声组仅在骨骼肌局部用同等的超声能量作用;单纯微泡组仅由尾静脉输入脂质全氟丙烷微泡造影剂0.5 ml;对照组不作任何处理.实验结束后的第3、7、10、14、21、28 d,各组分别取两只大鼠处死,取局部骨骼肌行石蜡切片HE染色观察显微结构的变化,CD34免疫组化计数微血管密度(MVD),酶联免疫吸附试验(ELISA)定量评价血管内皮生长因子(VEGF)的表达.结果 超声破微泡组有较多的血管新生;单纯超声组新生血管较少;单纯微泡组和对照组几乎无血管新生.随着时间的变化,超声破坏微泡组的MVD值和VEGF表达在第10 d达到高峰;单纯超声组的高峰出现在第14 d.结论 超声破坏微泡可刺激骨骼肌中内源性VEGF较快、较多地分泌,从而更好地促进新生血管生成.     

原发性肝癌超声造影彩色血管密度与病理微血管密度的对比分析

目的 探讨原发性肝癌(HCC)术前超声造影(CEUS)定量、半定量血流灌注参数与术后病理微血管密度(MVD)的相关性.方法 HCC 34例术前行CEUS,超声造影能量多普勒(CEUS-PD)状态下选取血流信号最丰富的切面,计算机计测病灶平均彩色血管密度(MCVD),并对图像血流信号进行半定量分级,所得定量、半定量参数与术后病理组织免疫组化染色计测的MVD对照,进行相关性分析.结果 CEUS-PD状态下34例病灶血流信号最丰富切面MCVD为0.17±0.09,术后病理组织切片免疫组化染色计测的MVD为(62.59±23.96)/400倍视野,二者呈正相关(r=0.56.P<0.05);病灶血流信号分级为:Ⅰ级3例,Ⅱ级12例,Ⅲ级19例;血流信号各半定量分级的MVD存在差异(F=8.06,P<0.05),趋势检验表明各半定量分级的MVD无线性趋势(F=7.57,P>0.05).结论 HCC术前CEUS-PD状态下计测的MCVD与术后病理MVD呈正相关,可于术前评价肿瘤的血流灌注.     

肝细胞癌的超声造影定量参数与肿瘤内新生动脉的相关性研究

目的 探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的超声造影(contrast-ehhanced ultrasonography,CEUS)定量参数与HCC内新生动脉的关系.方法 对115例HCC的CEUS图像进行脱机分析和免疫组化染色,获得感兴趣区的灌注曲线及CEUS定量参数:峰值强度(maximum of intensity,IMAX)、上升时间(rise time,RT)、达峰时间(time to peak,TTP)、平均渡越时间(mean trasit time corresponding to the center of grayity,mTT)、上升斜率(rise slope,RS)和始消时间(washout time,WT).获得82例HCC内的非成对动脉数,将CEUS定量参数和非成对动脉数进行统计学分析.结果 HCC中非成对动脉数与RT、TTP、RS呈中度相关,r分别为-0.446,-0.432,0.431(P＜0.05),与IMAX和WT呈弱相关,r分别为0.303和0.285(P＜0.05).结论 HCC内的新生动脉是HCC动脉相增强的病理生理基础,CEUS定量参数反映了肿瘤灌注情况,与HCC中的非成对动脉数有关.

Abstract：

Objective To explore the relationships between the quantitative parameters for contrastenhanced ultrasonography(CEUS) in hepatocellular carcinoma (HCC) and arteries in neoangiogenesis.Methods One hundred and fifteen HCCs in CEUS were analyzed off-line with dynamic vascular curve of ImageArena and immunohistochemical stained in the tissue slices.Parameters including maximum of intensity(IMAX),rise time(RT),time to peak(TTP),mean trasit time corresponding to the center of gravity(mTT) ,rise slope(RS) and washout time(WT) were analyzed by statistics.Unpaired arteries(UAs)of 82 HCC cases were succesfully stained.Results The number of UAs had moderate correlation with RT (r = - 0.446),TTP (r = - 0.432) and RS (r = 0.431) (P ＜ 0.05),and it had mild correlation with IMAX (r = 0.303) ,WT (r = 0.285) (P ＜0.05).Conclusions Neoangiogenesis is a functional adaptation to altered vascular dynamics.Quantitative parameters of CEUS,reflecting hemodynamics of tumors,are correlated with UAs.     

彩色编码参数量化技术结合靶向微泡造影剂评价干细胞移植后微血管新生

目的 探讨彩色编码参数量化(parametric quantification,PQ)技术结合靶向造影剂评价干细胞移植治疗兔急性心肌梗死(AMI)的微血管新生效应.方法 制备携CD34单克隆抗体靶向微泡超声造影剂.新西兰大白兔80只,分别于AMI前、AMI后3d、干细胞移植术后4周进行心肌超声造影(MCE),采用PQ技术对比各组干细胞移植前后梗死区域色差评分及心肌灌注参数(A、β和A×β).移植4周后行CD34抗体免疫组化检测微血管密度(MVD).结果 普通造影剂组(T+C组)及靶向造影剂组(T+T组)干细胞移植后各心肌节段的PI色差评分(P＜0.05)及A、β和A×β值(P＜0.01)均较本组内移植前改善.实验组干细胞移植后MVD均较对照组增加(P＜0.01),T+T组增加最为明显(P＜0.05).T+C组A×β值与MVD具有相关性(r=0.658,P＜0.05),T+T组β和A×β与MVD具有相关性(r=0.620,0.859,P均＜0.05),A×β(X)与MVD(Y)建立回归方程Y=-130.986+ 34.505X (R 2=0.556,P＜0.05).结论 PQ技术结合靶向微泡造影剂对无创评价干细胞移植后微血管新生具有一定的价值.     

肝细胞癌的超声造影定量参数与肿瘤内新生动脉的相关性研究

Objective To explore the relationships between the quantitative parameters for contrastenhanced ultrasonography(CEUS) in hepatocellular carcinoma (HCC) and arteries in neoangiogenesis.Methods One hundred and fifteen HCCs in CEUS were analyzed off-line with dynamic vascular curve of ImageArena and immunohistochemical stained in the tissue slices.Parameters including maximum of intensity(IMAX),rise time(RT),time to peak(TTP),mean trasit time corresponding to the center of gravity(mTT) ,rise slope(RS) and washout time(WT) were analyzed by statistics.Unpaired arteries(UAs)of 82 HCC cases were succesfully stained.Results The number of UAs had moderate correlation with RT (r = - 0.446),TTP (r = - 0.432) and RS (r = 0.431) (P ＜ 0.05),and it had mild correlation with IMAX (r = 0.303) ,WT (r = 0.285) (P ＜0.05).Conclusions Neoangiogenesis is a functional adaptation to altered vascular dynamics.Quantitative parameters of CEUS,reflecting hemodynamics of tumors,are correlated with UAs.     

诊断超声加微泡造影剂对新生血管的作用

目的评价诊断超声加微泡造影剂对兔VX2肝肿瘤新生血管的作用.方法用二维灰阶超声监测6只大白兔肿瘤生长情况,待肿瘤长至长径约0.6～1.0 cm时进行实验.实验分为两组,处理组注射微泡造影剂(全氟显),对照组注射相同剂量的生理盐水.先用二维超声定位肿瘤,然后对处理组大白兔通过兔耳缘静脉缓慢注射微泡造影剂,剂量为0.10 ml/kg,注射时间约5 s.注射的同时行持续性二维超声显像(将MI调至1.4).整个显像过程持续6～7 min.然后两组肝肿瘤取材后送做透射电镜及切片HE染色检查.结果超声微泡造影剂能够显著增强肿瘤显像,同时也存在对肿瘤血管明显的生物学效应.在光镜下未见明显的肿瘤血管损坏,未见红细胞渗出等改变,但在电镜下可见肿瘤新生毛细血管明显的超微结构破坏,包括线粒体肿涨、髓样变及胞质空化等改变.结论高机械指数诊断超声加超声微泡造影剂能够破坏肿瘤新生血管的超微结构.     

超声击破造影剂微泡阻断正常肝血流灌注的造影观察

目的 采用视觉评分方法分析微泡增强的超声空化阻断兔正常肝血流灌注后的恢复情况.方法 健康新西兰兔24只,分为超声微泡组、单纯超声组及假照组.超声微泡组经兔耳缘静脉推注脂质微泡联合超声辐照兔肝,单纯超声组以生理盐水代替微泡,假照组超声假照.各组治疗前及治疗后0 min、15 min、30 min、45 min、60 min和24 h对兔肝进行超声造影,视觉评分分析各时间点造影灌注峰值灰阶变化.结果 各组治疗前肝血流灌注比较,视觉评分差异无统计学意义(P>0.05);超声微泡组的治疗前造影血流灌注评分显著优于治疗后0 min、15 min两个时间点,差异有统计学意义(P<0.05);但与治疗后30 min、45 min、60 min、24 h视觉评分差异无统计学意义(P>0.05);而单纯超声组、假照组的治疗前后各时间点之间超声造影评分差异均无统计学意义(P>0.05).结论 微泡增强的超声空化具有显著的暂时性阻断兔肝实质血流作用.     

彩色多普勒超声在评估肿瘤血管生成中的作用及应用价值

大量研究表明，肿瘤血管生成在实体肿瘤发生、发展、浸润及转移的各阶段皆起着重要的作用，而抗血管生成疗法作为肿瘤治疗的新方法，也显示出诱人的前景，已成为重要的抗癌策略之一。因此，评估肿瘤血管生成的活跃程度。对肿瘤的鉴别诊断、组织病理分级、治疗方案的选择、疗效预测及预后等方面均具有重要的临床意义。     

超声联合SonoVue微泡介导NET-1siRNA转染人肝癌细胞

目的探讨超声联合微泡造影剂介导NET-1siRNA在人肝癌细胞中的转染效果。方法将培养的HepG2细胞分为5组:A组为空白对照;B组培养瓶中仅加入NET-1siRNA;C组为加入脂质体及NET-1siRNA;D组为加入造影剂及NET-1siRNA并给予超声辐照;E组为加入脂质体、造影剂、NET-1siRNA,并给予超声辐照。之后以荧光显微镜检测NET-1siRNA转染率,RT-PCR法检测各组细胞NET-1 mRNA的基因表达,Western-Blotting法检测各组细胞NET-1表达情况,MTT检测HepG2细胞生长情况。结果与C组、D组相比,E组NET-1siRNA转染率明显提高(P<0.05);D组和E组细胞内NET-1mRNA及NET-1蛋白的表达抑制率均高于其他各组(P均<0.01),而转染后24～72hHepG2细胞增殖受到明显抑制。结论超声联合微泡造影剂能有效促进NET-1siRNA在肝癌细胞中的表达,并抑制肝癌细胞的增殖。     

载多西紫杉醇脂质微泡超声造影剂的制备及其性质

目的 制备载多西紫杉醇脂质微泡并测定性质及观察其体内显像效果.方法 制备载多西紫杉醇脂质微泡,测定粒径、包封率等性质;观察60Co射线灭菌前后微泡性质的差异,观察超声辐照后载药微泡药物的释放,并观察其对兔VX2肝癌的显像效果.结果 载多西紫杉醇微泡的浓度为2.2×109～3.2×109个/ml;粒径分布范围为473.4～706.6 nm,平均粒径为623.1 nm;微泡的包封率为70%以上,载药量为(17.5±0.8)%;Zeta电位为-(3.1±0.9)mV;超声辐照微泡溶液后,药物可释放;静脉注射此微泡后,兔肝实质见良好、持续的增强显像,肝癌病灶可见明显的"快进快出"显影表现.结论 载多西紫杉醇脂质微泡包封率较高,性质较佳,体内显像效果好,提高了超声在肝癌等肿瘤诊断中的价值,超声辐照能促使微泡中的药物释放,有望在实时监控下体内定点靶向给药,实现对肿瘤的靶向治疗.     

实时灰阶超声造影评价肝癌动物模型抗血管生成治疗的研究

SI)、曲线下面积(AUC)和血流量系数(BF)明显低于对照组,另外峰值减半斜率(a2)和曲线上升斜率(a3)明显大于对照组(P<0.05).定量参数与肿瘤体积增长率正相关(P<0.05).a3和ISI与坏死指数负相关(r=-0.54,P=0.008;r=-0.46,P=0.027).结论 实时灰阶超声造影能反映肿瘤内血流灌注变化,有助于监测肿瘤抗血管生成治疗的血管反应.     

不同剂量微泡造影剂在高强度聚焦超声消融活体羊肝组织中的增效效应

目的 探讨不同剂量超声造影剂对高强度聚焦超声(HIFU)消融活体羊肝组织的增效效应.方法 南疆黄羊20只,随机分为4组.第1组为HIFU联合0.01 ml/kg SonoVue.第2组为HIFU联合0.03 ml/kg SonoVue,第3组为HIFU联合0.05 ml/kg SonoVue,第4组为单纯HIFU组.麻醉状态下,微泡造影剂于HIFU辐照前静脉团注,20 s后开始HIFU辐照.每组采用定点辐照,所用辐照参数为频率0.8 MHz、声强19 100 W/cm2、辐照深度30 mm、辐照时间15 s.HIFU辐照结束后1周处死动物.观察并测量凝同性坏死大小,对凝固性坏死作组织病理分析.结果 在相同声辐照参数下,1、2、3组凝同性坏死区域均大于第4组,差异有统计学意义(P<0.05),且凝固性坏死体积随SonoVue剂量的增加而逐渐增大,差异有统计学意义(P<0.05).组织病理学检查发现凝同性坏死区内无正常组织残留.除实验3组出现消融灶邻近组织和皮肤损伤外,其余各组均未出现明显并发症.结论 微泡造影剂在HIFU消融过程中的增效效应与微泡造影剂的剂量有关,微泡造影剂的剂量越大,所形成的凝固性坏死的体积越大,增效越明显.     

兔肝VX2肿瘤超声造影时相划分:与多排螺旋CT增强扫描对照实验研究

目的 探讨灰阶实时超声造影(CEUS)和多排螺旋CT(MDCT)增强扫描兔肝VX2肿瘤的增强显像特征及兔肝超声造影时相的划分标准.方法 运用超声造影剂SonoVue对33只荷肝VX2瘤兔行CEUS和64排螺旋CT增强扫描,以团注造影剂后肝动脉开始增强作为动脉期的起始时间,以VX2肿瘤增强达峰时间作为门脉期的起始时间,以肝实质增强达峰值强度时间作为实质期的起始时间,观察其增强特征,比较CEUS中肿瘤和瘤周同水平肝实质的时间强度曲线和MDCT中腹主动脉、门静脉、肝实质和肿瘤的时间密度曲线形态特征,制定划分各期时相的标准.结果 CEUS和MDCT对VX2肿瘤动脉期、门脉期、实质期起始时间的划定分别为(6.82±1.36)s、(11.64±2.03)s、(20.24±4.17)s和(9.43±2.23)s、(13.77±2.01)s、(22.71±4.58)s,CEUS较MDCT各相起始时间均提早(P<0.01),二者对兔肝VX2肿瘤增强显像特征一致,均表现为"快进快退".结论 CEUS可以对兔肝VX2肿瘤的灌注情况进行实时高分辨率显像,CEUS和MDCT时相标准可为相关的影像学评估研究提供基本的理论依据.     

超声击破微泡效应抑制兔VX_2肿瘤生长的实验研究

目的 探讨超声击破微泡效应抑制兔VX_2肿瘤生长的可行性.方法 21只移植有皮下VX_2肿瘤的新西兰大白兔,随机分为超声微泡治疗组、单纯超声组和假照组.经静脉注射脂质微泡的同时,脉冲式聚焦超声直接辐照肿瘤区域.单纯超声组和假照组分别用5 ml生理盐水和超声假照替代,每次10 min,每隔72 h治疗一次,采集各时间点肿瘤二维声像图和超声造影影像,测量肿瘤切面最大直径.结果 在30 d的实验周期内,微泡超声治疗组、单纯超声组和假照组的肿瘤平均直径分别从(1.1±0.1)cm、(1.2±0.1)cm、(1.2±0.1)cm生长至(2.1±0.5)cm、(3.0±0.9)cm、(3.4±0.7)cm,微泡超声治疗组肿瘤直径明显小于另两组.结论 超声击破微泡效应可阻断肿瘤微循环,有一定的抑制肿瘤生长作用.     

超声微泡造影剂实现肿瘤靶向性治疗研究进展

低功率超声辐照微泡栓塞肿瘤血管是治疗肿瘤的一种新方法,特异性抗体偶联微泡介导的药物或基因靶向运输在肿瘤治疗方面也显示出巨大潜力,具有广阔的应用前景。现对超声微泡造影剂介导肿瘤靶向性治疗的研究进展做一综述。     

不同浓度超声微泡结合共聚物P85对人肝癌细胞HepG2基因转染的影响

目的 不同浓度超声微泡造影剂(MB)结合共聚物P85后联合一定强度超声(US)辐照,初步摸索最适人肝癌细胞HepG2质粒转染及表达的MB浓度。 方法 以人肝癌细胞HepG2为研究对象,以绿色荧光蛋白(EGFP)质粒为报告基因,添加共聚物P85和不同浓度的MB后进行脉冲多普勒US辐照。24 h后台盼蓝染色评价细胞存活率,荧光显微镜和流式细胞仪评价细胞的基因转染率。 结果 MB浓度在30%时达到较理想的转染率(22.14±3.06)%,且细胞存活率无明显下降(55.73±3.32)%。添加MB后基因转染率均较pEGFP+P85+US转染率高。 结论 MB与共聚物P85结合同时给予US辐照可增强基因转染率,且在MB浓度为30%时达到较理想的转染率。