铜诱导神经元凋亡及凋亡相关蛋白的表达

目的观察铜对原代培养神经元的凋亡以及Bax、Bcl-2、caspase-3表达的影响,探讨铜沉积对肝豆状核变性神经系统的损伤机制。方法以不同浓度醋酸铜(0、2、20、40、80、160、240、320μmol/L)诱导体外培养大鼠神经元48 h。MTT比色法检测细胞活力,Hoechst 33342/PI和Annexin-V/PI法检测神经元凋亡;Western blotting测定细胞Bcl-2、Bax、caspase-3表达。结果神经元细胞活力随醋酸铜浓度的升高而显著降低。醋酸铜低浓度诱导组(0~80μmol/L),神经元凋亡数随铜浓度的增加而增多(P<0.01);caspase-3表达上调,Bcl-2表达下调,Bcl-2/Bax比值下降(P<0.01)。醋酸铜高浓度诱导组(≥160μmol/L),神经元坏死较凋亡更为明显。结论Bax、Bcl-2、caspase-3在低浓度铜诱导神经元凋亡过程中发挥重要的调控作用。神经元凋亡或死亡导致神经元减少可能与肝豆状核变性神经系统症状有关。     

龙葵碱调控 Bcl-2 与 Bax 蛋白表达及 caspase-3 活性诱导HepG2 细胞凋亡的研究

目的 探讨龙葵碱诱导 HepG2 细胞凋亡的作用机制。方法 透射电镜观察凋亡细胞形态变化,原位缺口末端检测法 (TUNEL 法) 检测 DNA 断裂情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,间接免疫荧光法激光共聚焦扫描显微术检测 Bcl-2 与 Bax 蛋白表达,比色法检测 caspase-3 活性的变化。结果 在透射电镜下观察,龙葵碱组细胞出现细胞固缩,染色质致密,核凝聚固缩,染色体断裂形成核碎块,凋亡小体形成等细胞凋亡特征形态。TUNEL 法发现龙葵碱高、中、低剂量组 HepG2 细胞均有绿色荧光,阴性对照组无荧光。流式细胞术分析表明 0.4、2、10 μmol/L 龙葵碱作用 HepG2 细胞 24 h 凋亡率分别为 4.0%、8.5%、20.1%。同时,龙葵碱升高 caspase-3 活性,下调 Bcl-2 蛋白表达,上调 Bax 蛋白表达。结论 龙葵碱通过降低 Bcl-2/Bax 的值,激活 caspase-3 酶活性诱导 HepG2 细胞凋亡。     

苦瓜核糖体失活蛋白诱导HL-60细胞发生凋亡及其分子机制的研究

目的　探讨苦瓜核糖体失活蛋白 (Ribosomalinactivatingprotein ,RIP)诱导HL 60细胞凋亡的活性 ,以及对HL 60细胞Bcl 2、Bax、caspase 3表达变化的影响及其分子机制。方法　以一定浓度苦瓜RIP处理HL 60细胞 2 4～ 72h ,用TUNEL法检测细胞凋亡。运用RT PCR和Westernblot免疫印记法检测Bcl 2、Bax、caspase 3mRNA和蛋白表达的变化。结果　苦瓜RIP在一定作用浓度下可使HL 60细胞发生凋亡 ,且随着作用时间的延长凋亡细胞比例逐渐升高。在此过程中 ,HL 60细胞的caspase 3mRNA的表达及其胞内活性亚单位水平显著升高 (P <0 .0 5 ) ,Bcl 2mRNA表达变化虽不显著 ,但其蛋白水平明显降低 (P <0 .0 5 ) ,与此同时 ,BaxmRNA和蛋白表达均有所上调。结论　在苦瓜RIP诱导的HL 60细胞凋亡中 ,caspase 3发挥了极为重要的作用 ,而Bcl 2和Bax可能通过其表达量的变化、转录后调节等方式对细胞凋亡发挥重要的调控功能     

三七总皂苷对缺氧复氧致皮质神经元损伤细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响

【目的】研究三七总皂苷（PNS）对缺氧复氧致皮质神经元损伤细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响，探讨PNS抗神经元缺氧，复氧诱导的细胞凋亡的作用。【方法】体外原代培养大鼠胎鼠大脑皮质神经元细胞（CNC），采用缺氧／复氧（H／R）诱导皮质神经元细胞氧化应激损伤模型，采用PNS50、10、2mg／L进行干预。采用实时荧光定量逆转录酶-聚合酶链式反应（RT—PCR）技术检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关蛋白（Bax）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）mRNA表达的变化，采用福林-酚法（Lowrry）法检测caspase-3蛋白含量的变化。探讨PNS抑制神经元细胞凋亡的分子机制。【结果】PNS50、10mg／L剂量组可以显著降低Bax表达；PNS50mg／L组可以显著增加Bcl—2表达；PNS有降低caspase-3表达的趋势。PNS各剂量组均能够抑制cas—pase-3的活性，有剂量依赖性趋势。【结论】PNS可能是通过增加抑制凋亡基因Bcl-2的表达，抑制促凋亡基因Bax的表达，抑制caspase-3的活性等作用抑制神经元缺氧／复氧诱导的细胞凋亡。     

凋亡相关蛋白在汉坦病毒诱导HEK-293细胞凋亡过程中的表达及意义

目的 探讨Bcl-2、Bax及Caspase-3在汉坦病毒诱导人胚肾细胞(HEK-293)凋亡过程中的变化,为研究汉坦病毒诱导人胚肾细胞损伤的机制提供参考.方法 体外培养HEK-293细胞,分为正常对照组和汉坦病毒处理的感染组,采用间接免疫荧光法检测HEK-293内汉坦病毒抗原;用Westen blot方法检测Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白表达水平.结果 汉坦病毒感染HEK-293细胞1d后即开始出现荧光阳性细胞,随着时间延长,荧光强度逐渐增强,细胞胞浆内出现大量片状或颗粒性的黄绿色荧光;Western blot结果显示,与对照组比较,汉坦病毒感染1d后Bcl-2、Bax蛋白及Caspase-3酶原活化片段表达量未见明显变化(P＞0.05),感染3d和5d后Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达上调,Caspase-3酶原活化片段表达升高(P＜0.05).结论 汉坦病毒可感染HEK-293细胞并在其体内增殖,其损伤机制可能与Bcl-2表达减少和Bax蛋白表达上调,通过线粒体途径诱导HEK-293细胞发生凋亡有关.     

槲皮素诱导人肺癌GLC-82细胞凋亡及机制

目的：探讨黄酮类中药成分槲皮素（Quercetin）对人肺癌GLC-82细胞生长抑制和凋亡的影响.方法：采用细胞培养技术,用不同浓度的槲皮素作用GLC-82细胞48 h,用Hoechst33258染细胞核,在荧光显微镜下观察凋亡细胞核形态变化,用QWin图像分析软件测量细胞核面积和凋亡率.采用MTT法测定细胞的生长能力.采用荧光免疫细胞化学SABC-Cy3法检测Mdm2、p53、Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表达,用QWin图象分析软件测定Mdm2、p53、Bax、Bcl-2和caspase-3荧光强度值.结果：槲皮素剂量依赖性的抑制GLC-82细胞生长,呈现典型的凋亡形态学特征,胞核缩小,核质浓集,呈斑块状,有凋亡小体.上调凋亡抑制因子Mdm2和Bcl-2蛋白表达,下调凋亡促进因子Bax和Caspase-3的蛋白表达,对p53蛋白表达量没有明显影响.增加Mdm2、p53、Bax、Bcl-2的阳性表达率,降低caspase-3阳性表达率.结论：槲皮素能够抑制肺癌GLC-82细胞生长并诱导细胞凋亡,而Mdm2的蛋白表达增加,可能抑制了p53发挥促凋亡作用,使部分GLC-82肺癌细胞逃避死亡.     

三七总皂苷对缺氧复氧致皮质神经元损伤细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响*

【目的】研究三七总皂苷（PNS）对缺氧复氧致皮质神经元损伤细胞凋亡相关基因及蛋白表达的影响,探讨PNS抗神经元缺氧,复氧诱导的细胞凋亡的作用。【方法】体外原代培养大鼠胎鼠大脑皮质神经元细胞（CNC）,采用缺氧／复氧（H／R）诱导皮质神经元细胞氧化应激损伤模型,采用PNS50、10、2mg／L进行干预。采用实时荧光定量逆转录酶-聚合酶链式反应（RT—PCR）技术检测B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、B细胞淋巴瘤-2相关蛋白（Bax）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）mRNA表达的变化,采用福林-酚法（Lowrry）法检测caspase-3蛋白含量的变化。探讨PNS抑制神经元细胞凋亡的分子机制。【结果】PNS50、10mg／L剂量组可以显著降低Bax表达;PNS50mg／L组可以显著增加Bcl—2表达;PNS有降低caspase-3表达的趋势。PNS各剂量组均能够抑制cas—pase-3的活性,有剂量依赖性趋势。【结论】PNS可能是通过增加抑制凋亡基因Bcl-2的表达,抑制促凋亡基因Bax的表达,抑制caspase-3的活性等作用抑制神经元缺氧／复氧诱导的细胞凋亡。     

肝豆状核变性血清铜和铜蓝蛋白测定的意义

目的：研究肝豆状核变性（Wilson病）患儿血清铜（Cu）和铜蓝蛋白（CP）含量的变化。方法；采用原子吸收分光光度法和改进的酶化学法分别测定血清铜和铜蓝蛋白含量。结果：肝豆状核变性患儿血清铜和铅蓝蛋白含量有显著性差异（P＜0．05）。结论：肝豆状核变性患儿血清铜和铜蓝蛋白含量有明显变化，对疾病的诊断与治疗具有一定的指导意义。     

氯胺酮对离体海马神经元生存及凋亡的影响

目的:探究不同浓度氯胺酮对离体原代海马神经元生存活力和凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:取原代培养7d的海马神经元随机分为6组,分别给予0μM、0.1μM、1μM、10μM、100μM、1 000μM不同浓度的氯胺酮干预。采用MTT法检测各组神经元的存活率,AnnexinV/PI双染色法检测凋亡率,Western blot分析凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达量的变化。结果:与对照组相比,1μM、10μM和100μM组神经元存活率升高,凋亡率降低,Bcl-2蛋白的表达量升高,Bax蛋白表达量下降;而1 000μM组神经元存活率降低,凋亡率升高,Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高。结论:氯胺酮对离体海马神经元的存活及凋亡的影响具有双向调节作用,低浓度的氯胺酮能够抑制神经元凋亡,提高细胞存活率;高浓度氯胺酮则促进神经元凋亡,降低存活率,可能是通过调节Bcl-2、Bax蛋白的表达起作用的。     

肝豆状核变性细胞溶酶体内外铜及铜结构蛋白的分布

研究肝豆状核变性的病理机制。以培养的皮肤成纤维细胞为模型，利用电镜Ｘ射线显微分析技术研究ＨＬＤ不同等位基因组成及不同病程患者溶酶体内外铜，硫分布，并进行定量分析。结果：ＨＬＤ早期患者细胞中溶酶体外的铜含量高于溶酶体内，而随病程延长，铜逐渐呈现溶酶体内分布的特点且溶酶体外铜含量和硫含量呈正相关。     

高能X线诱导喉癌Hep-2细胞凋亡及相关基因的表达研究

目的：研究高能X线诱导人喉癌细胞株Hep-2凋亡的作用及其分子机制。方法：采用不同剂量的高能X线作用于Hep-2细胞株，流式细胞仪检测其凋亡率。Western blot和RT-PCR方法检测细胞的BCL-2和BAX蛋白及mRNA转录水平。结果：在一定范围内，随着剂量的增加和时间的延长，细胞凋亡率基本呈增加趋势。Western blot和RT-PCR结果显示辐射后BCL-2表达下调。而BAX无明显改变，BCL-2／BAX的比值明显降低。结论：高能X线诱导的Hep-2细胞凋亡具有时间剂量依赖性。BCL-2和BAX参与了辐射诱导的Hep-2细胞凋亡，BCL-2抑制细胞凋亡可能是Hep-2细胞恶性增殖的主要原因之一。     

凋亡及凋亡相关因子在胎儿生长受限胎盘滋养细胞中的表达

目的　研究胎儿生长受限（fetal growth restriction,FGR）胎盘滋养细胞的凋亡及凋亡相关因子Fas、Fasl的表达及意义。方法　收集2014年3月至2017年3月大连市妇女儿童医疗中心剖宫产分娩的胎盘,正常妊娠晚期（对照组）、FGR（实验组）,各50例。采用TUNEL法检测两组胎盘滋养细胞的凋亡,计算凋亡指数。采用免疫组化S-P法检测凋亡相关因子Fas、Fasl的表达。结果　对照组、实验组均可见胎盘滋养细胞的凋亡,凋亡指数AI分别为（17.64±6.97）%及（56.48±7.98）%,差异有显著性意义（P<0.05）。实验组Fas表达高于对照组,实验组Fasl表达低于对照组,差异均有显著性意义（P<0.05）。实验组AI与Fas表达呈正相关（r=0.634,P=0.000）,与Fasl呈负相关（r=-0.940,P=0.000）。结论　凋亡相关因子Fas、Fasl可能共同通过诱导胎盘滋养细胞的凋亡参与FGR的发病。     

胰岛素对糖尿病大鼠海马神经元凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察糖尿病大鼠海马神经元的病理形态学改变和BCL-2、BAX、caspase-3的异常表达及胰岛素干预后的影响。方法用链脲佐菌素（STZ）诱导制备糖尿病动物模型,每日长效胰岛素应用制备糖尿病胰岛素治疗动物模型。随机分为3组：高血糖组（DM组）、胰岛素治疗组（PDM组）、对照组（NC组）。12周后,用免疫组化法检测海马神经元凋亡蛋白BCL-2、BAX、caspase-3的表达,分别在光镜、透射电镜下观察各组海马神经元病理形态学改变及超微结构的变化。结果DM组BCL-2的表达较NC组显著下降,BAX、caspase-3显著升高（P〈0．05）,出现锥体细胞退变的典型病理改变。PDM组BCL-2的表达较DM组有所增高,BAX、caspase-3有所下降（P〈0．05）,病理改变较DM组有所改善。结论高血糖可引起海马神经元凋亡,胰岛素通过逆转糖尿病大鼠海马神经元caspase-3、BAX的表达,增加BCL-2的表达,对糖尿病脑病起保护作用。     

肝静脉闭塞型Budd-Chiari氏综合征患者病灶组织细胞凋亡及相关基因表达的观察

目的从肝静脉内膜增生、细胞凋亡及其相关基因角度,探讨肝静脉阻塞型布-加氏综合征的发病机理。方法选择32例肝静脉阻塞型Budd-Chiari氏综合征患者手术中切下的标本,即闭塞肝静脉以及增生狭窄的病灶组织,利用光镜、电镜进行病理学检查,同时进行免疫组织化学检查,观察病变组织的组织学变化、凋亡细胞及其相关基因表达情况;并与正常肝静脉和下腔静脉对照。结果内膜组织不规则增生,弹力纤维不完整,内见散在平滑肌细胞及大量纤维结缔组织增生,部分透明样变性或玻璃样变性,伴有大量炎性细胞浸润。病灶组织异常增生和凋亡并存,凋亡细胞数和PCNA、bcl-2阳性表达明显高于对照组。结论肝静脉病变组织不规则异常增生、细胞凋亡异常可能是肝静脉阻塞型布-加氏综合征的发病机理之一或疾病过程中的基本病理表现之一。     

脑室注入高浓度铁离子诱发大鼠神经细胞凋亡

目的研究脑脊液中铁离子对神经元的作用,探讨铁离子与老年性痴呆症的关系。方法将FeCl3(5.2μg/μl)溶解于人工脑脊液中,取10μl缓慢注入脑室,对照组只给等量的人工脑脊液,第5天、第10天重复输注,第10天将脑组织取出,用流式细胞仪测定凋亡细胞百分比及平均荧光强度。结果脑室注入铁离子组凋亡细胞发生的百分比(14.27±0.4)%明显高于对照组(3.2±0.19)%(P<0.05)。结论脑脊液中高浓度铁离子能促进神经元凋亡,考虑到神经元凋亡是老年性痴呆(AD)的特征性病变,脑脊液中高浓度铁离子可能与散发性老年性痴呆有关。     

神经毒性物质导致的培养神经元凋亡及维生素E的神经保护作用

目的:研究神经毒性物质β-淀粉样肽(β-AP)?N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)对原代培养鼠脑皮层神经细胞的致凋亡损伤和维生素E可能的神经保护作用?方法:通过形态学观察和MTT自动比色法检测存活细胞率;用DNA电泳和流式细胞技术分析细胞凋亡率;用免疫细胞化学技术分析细胞凋亡相关基因表达?结果:经β-AP?NMDA作用后,培养神经细胞出现明显的细胞凋亡特征:存活细胞减少,凋亡细胞数增多及特征性DNA断裂带,神经细胞凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降?Bax表达上升(均P<0.05)?加维生素E组细胞则表现以上凋亡特征减弱?结论:神经毒性物质β-AP?NMDA可诱导培养神经细胞凋亡,细胞凋亡机制与氧化损伤相关,维生素E可减缓细胞凋亡?     

三氧化二砷诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞株凋亡与c-myc的表达

目的：观察三氧化二砷(As2O3)诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞株凋亡和c-myc mRNA表达的作用，并探讨其作用机制。方法：应用MTT法、苔盼蓝拒染法、DNA凝胶电泳和细胞周期凋亡检测，观察0μmol／L、0．5μmol／L、lμmol／L、2μmol／L、4μmol／L、8μmol／LAs2O3分别作用24h、48h、72h后，对K562细胞增殖及活力的影响。应用RT-PCR和免疫组织化学法检测As2O3处理后K562细胞c-myc mRNA和蛋白表达的变化。结果：As2O3诱导后K562细胞核DNA凝缩，核片段化，最后形成凋亡小体。在一定范围内，随着As2O3浓度的增加和As2O3处理时间的延长，细胞存活率明显下降；流式细胞仪检测可见As2O3诱导K562细胞凋亡，影响细胞周期，细胞阻滞于G2／M期；As2O3处理后c-myc mRNA和c-myc蛋白表达均有先上调后回落的趋势。结论：As2O3可以抑制K562细胞增殖并诱导凋亡，其作用机制可能是使细胞受阻于G2／M期而进入凋亡程序，c-myc基因参与了As2O3诱导细胞凋亡的基因调控。     

SeO2诱导白血病细胞凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2和p53表达调控的影响

目的 研究SeO₂对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、红白血病细胞K562、急性粒细胞白血病细胞株HL-60的增生、凋亡及Bcl-2和p53表达水平的影响。方法 采用流式细胞术测定细胞的凋亡率及Bcl-2和p53的表达。结果 10和30mmol/LSeO2能抑制3种细胞增生。30mmol/LSeO₂作用48h能使54.0%的NB4细胞、46.5%的K562细胞和49.6%的HL-60细胞发生凋亡;能使NB4和K562细胞Bcl-2表达显著下降、促进p53的表达。结论 SeO₂对3种白血病细胞均有诱导凋亡作用,在凋亡过程中涉及了细胞内凋亡相关基因Bcl-2和p53表达和调控。     

PDCD5和TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨PDCD5及TRAIL对胃癌细胞株MKN28体外诱导凋亡的作用及机制。方法培养,MTT法分析细胞增殖抑制率及细胞存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期．AO／EB染色进行观察凋亡细胞？结果TRAIL可明显抑制MKN28细胞增殖,并可诱导凋亡。PDCD5对MKN28细胞抑制增殖、诱导凋亡作用不明显。PDCD5、TRAIL联合应用对MKN28细胞有显著的抑制增殖、诱导凋亡作用。两者具有协同作用。结论TRAIL对MKN28细胞株有一定程度的凋亡诱导作用。PDCD5对MKN28细胞的凋亡作用不明显。TRAIL联合PDCD5可以高效诱导MKN28细胞凋亡。