脂肪来源细胞和透明质酸钠复合物构建裸鼠皮下软组织

目的探讨脂肪来源细胞(ADCs)作为新型真皮充填物的可能性。方法ADCs取自3例行整复手术的男性患者的残余脂肪组织,支架材料为透明质酸钠。实验分为三组,实验组:ADCs(25×106/mL)与透明质酸钠混合,每一样本0.2mL注射于雌性BLAB/c裸鼠皮下;对照组1:单纯运用透明质酸钠,每一样本0.2mL注射于裸鼠皮下;对照组2:单纯运用ADCs(25×106/mL),每一样本0.2mL注射于裸鼠皮下。8周后取材,通过大体和组织学观察,以及性染色体RT-PCR检测,对再生组织进行评价。结果实验组形成软组织呈球形,平均体积(0.0352±0.0115)mL;组织学观察显示,生物材料完全降解,组织排列紊乱,间有大量排列紊乱的胶原纤维,无脂肪组织;两对照组均无任何组织形成。结论应用组织工程技术,以人脂肪来源细胞为种子细胞,透明质酸钠为支架材料,能构建出良好的组织工程化软组织;为探索一种安全、有效的除皱方法,提供了新的研究方向。     

带蒂筋膜脂肪片联合透明质酸钠预防椎管粘连的实验研究

目的通过动物实验探讨预防椎板切开后硬脊膜外瘢痕粘连的有效材料和方法。方法20只大白兔随机分为4组，每只切除L1、L3、IJ5椎板造成3处椎板缺损。A组将透明质酸钠注于硬膜周围，后用带蒂筋膜脂肪片覆盖；B组用筋膜脂肪片覆盖；C组仅注透明质酸钠；D组不用任何间置物履盖。术后2、4、6、8、12周进行肉眼及光镜观察，并进行硬脊膜粘连程度分级。结果术后12周时B、C、D组均形成了致密粘连，A组无粘连发生。结论筋膜脂肪片联合透明质酸钠为预防椎管内粘连的有效方法。     

脂肪来源干细胞免疫原性和免疫调节作用的实验研究

目的 探讨脂肪来源干细胞(ADSCs)在体外的免疫原性,以及ADSCs在家兔同种异体皮片移植中的免疫调节作用.方法 将家兔淋巴细胞分别与自体和异体ADSCs混合培养48h后加入CCK-8试剂,并用酶标仪检测OD值;在家兔同种异体移植皮片下注射自体ADSCs,观察移植皮片的坏死时间,并于术后第7日切取移植皮片的周边组织进行组织学观察.结果 家兔淋巴细胞与自体、异体ADSCs混合培养后用酶标仪检测OD值分别为(1.527±0.402)和(1.615±0.351),两组OD值差异无统计学意义;家兔同种异体移植皮片下注射ADSCs的移植皮片的坏死时间为(7.170±1.472)d,未注射ADSCs的对照组移植皮片的坏死时间为(5.830±1.169)d,两组皮片坏死时间差异具有统计学意义:术后第7日组织学观察见实验组皮下浸润的炎症细胞较少,皮下组织结构完整、清晰;对照组皮下浸润的炎症细胞较多.结论 脂肪来源干细胞在体外的免疫原性低,对家兔同种异体皮片移植有免疫调节作用.     

脂肪来源干细胞分化潜能的现状研究

与骨髓间充质干细胞一样,来源于中胚层的脂肪,亦具有多向分化潜能,其内含有大量能自我更新和向多系分化潜能的细胞群称为脂肪来源干细胞.其取材方便,来源丰富,可在体外稳定增殖传代.并与骨髓间充质干细胞有相似的多向分化表面标志CD105、STRO-1以及CD166受体.研究发现它具有向多系分化潜能,除可以分化为间充质来源的脂肪...     

脂肪来源干细胞复合不同生物支架在裸鼠皮下的促血管化作用

目的:探讨脂肪来源干细胞复合不同生物支架在裸鼠皮下的促血管化作用。方法:根据所选支架的不同,将实验分为4组,A组为脂肪颗粒,B组为透明质酸钠,C组为Ⅰ型胶原支架,分别按体积比1∶1与25×106mL-1的脂肪来源干细胞混合,D组为单纯脂肪来源干细胞,将4组试剂注射到12只裸鼠皮下构建软组织,每只裸鼠各注射4个点,3个月后获取相应标本,测定湿质量、存活率、微血管密度。结果:4组间湿质量、存活率、微血管密度比较,差异均有统计学意义(F=47.523、48.425和47.619,P均<0.05),且A、B、C组湿质量、存活率、微血管密度均高于D组(P均<0.05)。结论:脂肪来源干细胞复合生物支架可加速软组织血管化,且效果优于单纯脂肪来源干细胞。     

人毛囊细胞来源双层皮肤替代物的构建和组织学特征

目的 探索人毛囊细胞构建的双层皮肤替代物的组织学特征.方法 用毛乳头细胞、真皮鞘细胞分别与外根鞘细胞构建复合壳多糖双层皮肤替代物,分析其体外和移植至大白鼠后的组织学特征.结果 毛囊来源细胞构建的皮肤替代物中表皮细胞排列更紧密、角化突出,真皮内可见与表皮相连的上皮细胞柱及球形膨大细胞团形成.结论 毛囊细胞是构建皮肤替代物的良好细胞来源.     

新生牛血清对大鼠脂肪来源细胞生长的影响

目的探索新生牛血清对大鼠脂肪来源细胞生长状态的影响。方法用新生牛血清代替传统的胎牛血清对脂肪来源细胞进行体外培养,倒置相差显微镜下观察细胞形态,与胎牛血清培养条件下的脂肪来源细胞形态进行比较。结果新生牛血清培养条件下的大鼠脂肪来源细胞镜下呈短梭形或多角形,与胎牛血清培养的脂肪来源细胞形态相似,但细胞在P2～P3代即出现了衰老趋势。结论新生牛血清对体外培养的脂肪来源细胞的活力有负面影响,可能不适用于脂肪来源细胞的培养。     

脂肪组织来源干细胞的细胞生物学研究

目的 探索从脂肪抽吸物中脂质部分分离、培养脂肪组织来源干细胞(ASCs)的方法,并通过其生长动力学、形态学、分化能力、细胞衰老和表面标记物轮廓5个方面的特征进行鉴定.方法 酶消化法处理脂类抽吸物,分离培养ASCs,观察细胞形态;MTT比色法测细胞活性并绘制细胞生长曲线,流式细胞仪测定细胞周期,丫啶橙染色检测细胞的衰老;流式细胞仪、免疫组织化学染色法鉴定其表面分子表达;成脂定向诱导分化后油红"O"染色定性.结果 原代培养的ASCs呈成纤维细胞样贴壁生长,具有很强的增殖能力;MTT比色法活性测定均证实ASCs具有很强的增殖活性,细胞周期研究发现ASCs具有干细胞的特性.丫啶橙染色3、4、6、8代无明显衰老.流式细胞仪检测显示干细胞标志的CD29、CD44、CD34的表达均成阳性;HLA-DR、CD133表达为阴性;免疫化学染色发现Ⅷ因子、CD31、CD34、CD105、SMA表达阳性;成脂诱导分化2周后,细胞内可见有大量脂滴,油红"0"染色可见胞浆内有大量红染颗粒.结论 自人体脂类抽吸物中通过酶消化法能分离和培养出具有干细胞特性的成纤维细胞样细胞群,该细胞具有很强的增殖活性且不易衰老,能稳定表达干细胞表面标志并能实现定向成脂分化.     

以表皮细胞及脱细胞真皮构建组织工程皮肤

目的 体外扩增培养表皮细胞，复合脱细胞真皮构建组织工程皮肤，以促进其进一步临床应用。方法 将人表皮细胞进行体外培养扩增后，以生长良好的表皮细胞接种于制备好的异种（猪）无细胞真皮支架上，行气液界面联合体外培养，构建组织工程皮肤。观察细胞生长情况及复合皮结构。结果 培养的表皮细胞扩增良好，脱细胞真皮支架去细胞完全，表皮细胞在脱细胞真皮上可以生长，可体外构建复合皮肤。结论 利用体外扩增的表皮细胞及制备的脱细胞真皮可体外联合构建具有复层结构的组织工程皮肤。     

软骨组织工程中脂肪来源的多能干细胞的研究进展

骨软骨组织工程需要来源广泛、采集容易、痛苦小、分化潜能大的种子细胞。脂肪来源干细胞具有比骨髓间质干细胞更多的优点,成为种子细胞的热选之一。本文将对脂肪干细胞在成软骨方面的研究进行评述,供同行参考、借鉴。     

不同细胞促进脂肪移植存活的实验研究

摘要：目的探讨应用自人脂肪组织来源的不同细胞辅助脂肪移植,寻找促进移植物存活率的最佳种子细胞的有效方法,为干细
胞进一步运用于临床提供实验依据。方法从临床抽脂病人获取脂肪组织并提炼细胞,将0.3 ml待移植的脂肪颗粒分别与以下
细胞进行混合处理：（1）低氧脂肪来源间充质干细胞（A组）;（2）脂肪来源间充质干细胞（B组）;（3）血管基质层细胞（SVFs）（C
组）;（4）加完全培养基的单纯脂肪颗粒为对照组（D组）脂肪颗粒与相应细胞混合后,注射移植于6只裸鼠背部皮下。术后3个月
观察移植物情况,通过组织学、HE染色等方法进行分析。结果A~D组湿重分别为（61.67±8.165）、（91.67±1.472）、（96.67±
5.164）和（40.83±4.916）mg,A、B、C组脂肪存活率均高于D组（P<0.05）,B、C两组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）且都高
于A组。A、B、C组血管密度均高于组D,且C组明显高于其他3组（P<0.05）。A、B、C组存活脂肪细胞计数均高于D 组,且B、C
组最高（P<0.05）,纤维组织计数均低于D组（P<0.05）。结论来源于人自体干细胞复合脂肪颗粒能够显著提高移植脂肪组织的
成活率,其中血管基质层细胞及脂肪来源间充质干细胞移植脂肪的存活率最高。
     

不同浓度人脂肪干细胞与脂肪颗粒混合种植对裸鼠脂肪细胞增长的影响

目的 探讨不同浓度脂肪干细胞对自体脂肪移植的作用,为临床提供理论依据。方法 BALB/c裸鼠随机分为4组（n=2）,裸鼠背部两侧筋膜下分别注入0.5mL待移植脂肪颗粒与不同浓度脂肪干细胞的混合物,脂肪干细胞浓度如下： 200μL脂肪颗粒.A组1×106、B组1×105、C组1×104脂肪干细胞,D组（对照组）注入单纯脂肪颗粒。每2周测量脂肪团块长短径观察裸鼠背部脂肪团块生长情况。6周后处死裸鼠,取出脂肪组织,称质量,H-E染色及CD31血管免疫组化染色对脂肪组织存活、脂肪细胞形态及组织血管化状态进行评价。结果 脂肪团块长短径测量显示,脂肪团块均有缩小且各组间差异无统计学意义。6周后,A、B、C、D各组之间脂肪组织质量差异均有统计学意义（P<0.01）。H-E染色提示B、C、D组脂肪细胞生长良好。CD31血管免疫组化检测显示B组微血管形成情况良好。结论 脂肪干细胞浓度过高时,与脂肪组织的生长竞争导致脂肪细胞的存活率降低。受区空间容量也对脂肪干细胞混合脂肪颗粒的生长产生了影响。     

人颅咽管瘤裸鼠皮下移植瘤模型的初步建立

目的初步建立人颅咽管瘤(CP)的裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用胰蛋白酶消化法将新鲜颅咽管瘤组织进行原代细胞培养,然后将纯化的第3代颅咽管瘤细胞接种于到BALB/c裸小鼠背部皮下。观察接种成瘤后瘤组织生长情况和特点,明确肿瘤性质。结果 CP细胞可以在裸鼠皮下存活,接种后8d可见有移植瘤形成,成瘤率为33.3%,病理切片显示肿瘤样鳞状上皮细胞团增生。结论利用颅咽管瘤细胞初步建立了人颅咽管瘤裸鼠皮下移植瘤模型,为进一步研究颅咽管瘤的生长特性奠定了基础。     

人脂肪基质细胞在骨组织工程学中的应用

口腔颌面部及全身骨组织缺损是临床医生经常要面对的困境。造成骨缺损的原因有很多,包括先天发育异常、炎症、肿瘤、外伤等,然而治疗骨缺损的方法却十分有限,以往主要应用自体骨移植或人工骨替代材料,但是,自体骨移植取材受限并且会增加手术创伤,人工材料生物相容性差并且成骨能力有限,因此,骨组织工程技术有望在今后成为主要的骨     

在体诱导表皮细胞去分化的初步实验研究

目的 在体诱导表皮细胞去分化,探索与表皮细胞去分化有关的信号通路.方法 包皮皮片去除皮下组织,用中性蛋白酶分离表皮,Ⅳ型胶原反复粘贴并牵拉表皮去除基底细胞层.处理后表皮片移植于裸鼠全层皮肤下,分别于3、5、7 d取出移植皮片,采用免疫组织化学染色、流式细胞仪检测、Western blot和RT-PCR等方法检测皮片移植前后表型的改变和ERK MAPK通路各信号分子表达的变化情况.结果 去基底细胞层处理的表皮片干细胞标志物CK19和β1整合素染色阴性;移植后5 d,存活皮片CK19和β1整合素染色呈多层分布,而不是正常表皮中的单层分布.流式细胞仪检测结果显示,表皮片移植后CK19阳性细胞和β1整合素阳性细胞由移植前的0.00%分别增加到7.54%和5.24%,而CK10阳性细胞由99.62%下降为86.56%.Western blot和PCR检测也证实CK19和β1整合素蛋白水平和mRNA水平表达在移植后明显增强.ERK及上下游信号分子(p-Raf、p-MEK1/2、p-ERK1/2和c-myc)表达增强.t-MEK1/2和t-ERK1/2移植前后表达无显著差异(P＞0.05).结论 处于终末分化阶段的表皮细胞可以向干细胞状态逆转,这个过程可能与ERK MAPK信号通路有关.     

酪酪肽对荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤的影响

目的 研究酪酪肽(PYY)对荷人肝癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响并初步探讨其作用机制.方法 用含1×107/ml的HepG2人肝癌细胞悬液0.2 ml打人裸鼠皮下,待其长出的肿瘤直径约1cm时将瘤块取出,在无菌PBS液中剪成大小1 min×1 mm×1mm的小块,用组织插块法制作裸鼠皮下肝癌模型.选取成瘤的32只裸鼠平均分为4组:PYY大、小剂量组,阳性对照组给与腹腔注射氟尿苷,阴性对照组给与皮下注射生理盐水.实验过程中观察裸鼠的一般情况.结果 PYY大、小剂量组在肿瘤体积、血清AFP、瘤重及瘤组织cAMP中均低于阴性对照组(P＜0.05).结论 PYY可以抑制裸鼠肝癌皮下移植瘤的生长,其机制可能与抑制肝癌细胞内cAMP的含量有关.     

玻璃酸钠结合针刀疗法对早期膝骨性关节炎软组织张力的影响

目的 对照研究玻璃酸钠及玻璃酸钠结合针刀松解2种疗法的临床疗效,分析针刀松解对膝关节周围软组织张力的影响.方法 随机将纳入病例分为玻璃酸钠关节腔内注射对照组(30例)和注射结合针刀松解治疗组(30例),比较治疗前后临床疗效及局部软组织张力变化情况.结果 治疗组总有效率93.33%,对照组为83.33%,2组比较,有显著性差异.治疗后治疗组500 g压力时张力计刻度位移及软组织吸收能量占所做功的百分比均显著高于对照组(P<0.05).结论 2种疗法治疗早期膝骨性关节炎均能取得较好的疗效,而针刀松解术能够降低局部软组织张力,改善关节周围软组织力学平衡,对疼痛的缓解明显,且远期疗效更加明显.     

人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立

目的：建立人肝癌裸鼠皮下－肝原位移植癌模型。方法：先用组织学完整的新鲜人肝癌组织接种于裸鼠皮下,形成皮下移植癌,然后用此移植癌组织再接种于裸鼠肝内,建立肝原位移植癌模型（间接肝原位移植癌模型）,并将其与直接肝原位移植癌模型、皮下移植癌模型和腹腔内移植癌模型作比较。结果：建立的间接肝原位移植癌模型能稳定传代,移植癌存活率达１００％,自发转移率达５７．８％。与直接肝原位移植癌模型比较,该模型移植瘤存活     

ILK反义寡核苷酸对人上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用

目的 探讨整合素连接激酶(integrin linked kinase,ILK)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用.方法 将人卵巢癌H0-8910细胞株接种于裸鼠皮下,建立人卵巢癌裸鼠模型,并将裸鼠随机分为对照组和治疗组,每次腹腔注射治疗后称量裸鼠体重、肿瘤体积及重量,并计算抑瘤率.同时,分别用脂质体和脂质体-ILK-ASODN转染H0-8910细胞,用WST-1法检测转染后两组细胞体外的增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡情况.结果 治疗组裸鼠肿瘤体积及重量增长速度受到明显抑制,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).转染了ILK-ASODN的治疗组细胞增殖受到显著抑制,凋亡率明显增高,与对照组比较差异均具有极显著意义(P＜0.01).结论 ILK-ASODN在体外能抑制细胞生长、促进细胞凋亡;在体内能明显地抑制肿瘤生长,对人卵巢癌裸鼠移植瘤具有一定的治疗作用.