内皮祖细胞灌注供心延长心脏移植物存活时间的实验研究

 目的 研究供体内皮祖细胞（endotherial progenitor cell, EPC）灌注供心对同种异体心脏移植物生存时间的影响。方法 获取Sprague Dawley （SD）大鼠的骨髓细胞,通过密度梯度离心法分离培养单个核细胞,取贴壁细胞选择性诱导培养2周以上,获取内皮祖细胞（EPC）。以Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双荧光染色法鉴定EPC。20只体重200～250g的雄性SD大鼠为供体,20只体重200～250g的雌性Wistar大鼠为受体,分为4组,每组5对。组I：术后不使用环胞霉素;组II：术后7d每天使用环胞霉素5mg/kg;组III：术中供心经冠脉灌注内皮祖细胞1×106个,术后不使用环胞霉素;组IV：术中供心经冠脉灌注内皮祖细胞,术后7d每天使用环胞霉素5mg/kg。观察各组供心存活时间。结果 贴壁细胞经诱导培养后3d开始伸展,5d形成集落,7~10d增殖加速并出现条索状结构,2周大部分细胞呈多角形。Dil-ac-LDL、FITC-UEA-1双染,免疫荧光染色阳性率大于70％。组I、II、III、IV各组供心平均存活时间分别为6.2±0.8、11.6±1.1、9.4±1.1和18.8±1.6d。组II、III、IV移植物的平均存活时间较组I显著延长（P<0.05）。结论 内皮祖细胞灌注合并环胞霉素运用可以延长大鼠心脏移植物的存活时间。     

趋化因子受体-5相关的心脏移植物血管病变的研究进展

心脏移植物血管病变（CAV）是影响心脏移植物长期存活的主要因素,也是导致受者在术后1年死亡或再次心脏移植的主要原因。目前,普遍认为CAV的发病机制主要是免疫性因素和非免疫性因素共同参与的血管内皮损伤,使血管内膜增厚,最终引起移植心脏缺血。趋化因子及其受体共同参与调控移植物局部的免疫应答。其中,趋化因子受体-5（CCR5）可能在CAV发病机制中起着重要的作用,但其调控CAV的机制目前尚不明确。迄今,CAV的治疗方法仍较为局限;但随着对CCR5研究的不断深入,出现了一些新的研究成果,为CAV的治疗和预防提供了新的方向。     

激光心肌血管重建术后冠脉流量变化的实验研究

目的观察激光心肌血管重建术（TMLR）后心肌血流量的变化,探讨TMLR的作用机制。方法18只犬随机等分为3组：A组－对照组;B组－缺血组;C组－激光组。采用连续型Nd：YAG激光行心肌打孔,光纤直径0．6mm,功率20～25W,脉冲时间0．3～0．5s,孔间距离8～10mm。LAD结扎前、结扎后30min和60min收集冠状静脉窦血计算心肌血流量。采用随机分组设计的方差分析（α＝0.05）。结果缺血组LAD结扎后心肌血流量进行性下降（P＜0．05）,而激光组LAD结扎前后比较无显著性差异（P＞0．05）,但结扎后明显高于缺血组（P＜0．05）。结论TMLR可迅速有效地改善心肌缺血。     

茵陈五苓散对小鼠心脏移植排斥反应的抑制作用

目的 探讨中药茵陈五苓散对大鼠心脏移植排斥反应抑制作用的效果及机制.方法 将实验动物随机分为两组,即对照组与实验组,腹部触诊观察移植心脏存活时间,移植7天后部分心脏做病理检查,取脾脏行脾细胞培养,并检测脾细胞培养液中白细胞介素(IL)2、4、6及干扰素(IFN)-Υ的浓度.结果 与对照组相比,实验组心脏移植物存活时间...     

内皮祖细胞(EPCs)在心脏移植物血管病变(CAV)中的研究进展

 内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)是一类能分化为成熟内皮细胞(endothelial cells,ECs)的内皮前体细胞,具有促进损伤血管修复和新生血管形成的特点。研究发现EPCs在心脏移植物血管病变(cardiac allograft vasculopathy,CAV)的发生和发展中起着重要作用,移植后供心血管内皮损伤可以触发EPCs的修复过程。本文综述了移植物血管病变的发生发展过程中EPCs的归巢和分化,探讨了EPCs对CAV的预测、诊断和治疗价值。     

腺苷对犬心肌缺血再灌注后冠脉血管损伤的保护作用

腺苷对犬心肌缺血再灌注后冠脉血管损伤的保护作用刘庆军，吴明媚，臧益民，王跃民（唐都医院心脏内科生理学教研室）关键词腺苷；心肌再灌注损伤；冠脉储备；内皮依赖性舒张因子；内皮素类中图法分类号Ｒ３６３．２１作者在犬冠脉重度狭窄后再灌注模型上，观察了冠脉内灌...     

过氧化酶体增殖物激活受体α抑制血管紧张素Ⅱ促心肌纤维化作用的试验研究

目的：探讨体外条件下过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）促心肌纤维化的抑制作用。方法：培养新生Wistar大鼠原代心脏成纤维细胞(CFs),以AngⅡ10-7mol/L刺激,体外模拟心肌纤维化,再用不同浓度的PPARα激动剂苯扎贝特作用于细胞。用MTT比色法检测CFs的增殖情况,采用RT PCR法检测Ⅰ型胶原（collagen I）、基质金属蛋白酶（MMP） 2、金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP)-1 mRNA的表达。 结果：① AngⅡ刺激后12h,CFs的collagen Ⅰ、TIMP-1 mRNA表达明显增加,MMP-2 mRNA表达减少;苯扎贝特呈剂量依赖性抑制AngⅡ的作用, PPARα特异性抑制剂MK886可以完全抑制苯扎贝特的作用;② AngⅡ明显促进CFs增殖,苯扎贝特不能抑制AngⅡ的促增殖作用。结论： PPARα途径活化后抑制AngⅡ的促心肌纤维化作用。     

华盛顿放射治疗对支架内再狭窄影响试验：对支架内再狭窄病人血管成形术后冠脉内γ-射线治疗抑制再狭窄的再次发生

针对疾病冠状动脉疾病。 试验目的评价支架再狭窄病人冠脉内γ-射线治疗对临床和血管造影预后的影响。 试验设计前瞻性，随机，双盲试验。 试验病人130个有症状的支架内再狭窄病人（支架位置直径狭窄≥50％），经使用球囊、消融装置、附加支架或这些技术的组合而进行了成功的手术（残余狭窄〈30％，无并发症）。     

人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2的表达与纯化

 目的  构建人源吲哚胺2,3-双加氧酶-2 (human indoleamine 2,3-dioxygenase-2,hIDO2)原核表达载体,表达、纯化获得hIDO2蛋白。方法  采用基因工程手段获得hIDO2原核表达载体并转化表达菌株,筛选合适的重组质粒及异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)浓度进行蛋白表达;通过亲和层析纯化重组hIDO2,BCA法测定蛋白浓度并计算蛋白收率;SDS-PAGE电泳检测hIDO2表达情况,通过软件分析得到蛋白纯度;Western blot检测目的蛋白特异性。结果  重组质粒经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明构建成功;经筛选发现重组质粒pET28a-hIDO2比pGEX-4T-1-hIDO2的hIDO2表达效果好;SDS-PAGE电泳及Western blot均验证了在相对分子质量45 000处的特异性目的条带的存在;经测定及计算得出蛋白纯度为97.1%,蛋白浓度为20 mg/mL,蛋白收率为15 mg/L。结论  成功构建重组质粒用于表达及纯化hIDO2,蛋白浓度、纯度、收率及特异性均较高。     

鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶活性检测方法的建立

 目的  建立鼠源吲哚胺2,3-双加氧酶 (mouse indoleamine 2,3-dioxygenase,mIDO) 活性检测方法。方法 利用基因工程方法表达纯化重组mIDO (recombinant mIDO,rmIDO),建立酶水平mIDO活性检测体系;构建过表达mIDO的小鼠Lewis肺癌 (Lewis lung cancer,LLC) 细胞株,建立细胞水平mIDO活性检测体系。比较L-1-甲基色氨酸 (L-1-methyl tryptophan,L-1-MT) 在酶及细胞水平上对mIDO及人源IDO （human IDO,hIDO）的抑制作用,测定抑制类型、抑制常数Ki值及半数抑制浓度 (IC50) 值。 结果 L-1-MT对mIDO和hIDO均有抑制作用,抑制类型及抑制常数Ki值相似,但IC50值在酶水平及细胞水平上均有差异。 结论 mIDO酶活性检测体系是筛选IDO抑制剂的有效工具,与hIDO酶活性检测体系联用,能反映种属差异,可更好地利用小鼠模型来替代人类进行IDO抑制剂治疗疾病的研究。     

改善供心保护对移植后冠状血管病的影响

本研究探讨供心缺血对冠状血管内皮和移植后冠状血管的影响。实验采用离体鼠心非循环式Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ灌流功能测定模型,鼠心冷停搏后恒温（４℃）生理盐水保存１０ｍｉｎ、４ｈ、８ｈ和１６ｈ后,恢复再灌注３０ｍｉｎ时取冠状动脉有瓣支及周围心肌行透射电镜观察;临床上改善供心保护,缩短了供心缺血时间。     

Recombinant Adenovirus with Human IDO and HBV preS was Constructed and Expressed in HepG2 cell

BACKGROUNDS. Indoleamine-2,3-dioxygenase (IDO) is proven to suppress HBV specific immune response and depletion of IDO may be a useful approach for HBV therapy. To test this concept, we constructed recombinant adenovirus with human IDO and HBV preS, which would form the basis for future in vivo experiments. METHODS The fragment of human IDO and HBVpreS cDNA were subcloned into multiple cloning sites in an adenoviral vector system containing two CMV promoters. Recombination was conducted in the Escherichia coli BJ5183. The recombinant adenovirus containing hIDO gene and HBVpreS genes was packaged and amplified in 293T cells. Integration was confirmed by PCR analysis as well as the quantification of viral titers. HepG2 cells were infected with the recombinant adenovirus and mRNA and protein specific for hIDO and HBVpreS was detected by RT- PCR and Western blot respectively. RESULTS The recombinant adenovirus was produced successfully. Its titer was 2.5×109 efu/ml. IDO and HBVpreS mRNA as well as the encoded proteins could be found in transfected HepG2 cells, but not in control HepG2 cells. CONCLUSIONS The transfer of hIDO-HBVpreS with double-promoter adenoviral vector was efficient. The recombinant adenovirus with human IDO and HBV preS would provide the experimental basis for future studies.     

乳腺癌中吲哚胺2,3-双加氧酶和调节性T细胞的表达

[目的]通过研究在乳腺癌和引流淋巴结中吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)和调节性T细胞(Treg cells)的表达,探讨两者之间的关系.[方法]采用半定量RT-PCR法和免疫组织化学检测IDO mRNA和蛋白及Foxp3蛋白在乳腺癌、淋巴结和乳腺良性病变中表达情况.[结果]乳腺癌引流淋巴结中IDO的mRNA水平高于乳腺癌组织(P＜0.05),乳腺癌组织中IDO的mRNA水平高于乳腺良性病变组织(P＜0.05).免疫组化结果显示示乳腺癌引流淋巴结内IDO表达水平高于原发癌(P＜0.05),乳腺癌组织中IDO表达水平高于乳腺良性病变组织(P＜0.05).乳腺癌中IDO的表达与病理类型和临床分期相关(P＜0.05).乳腺癌中Treg细胞Foxp3+比例高于乳腺良性病变,乳腺癌引流淋巴结中Treg细胞Foxp3+比例高于乳腺原发癌(P＜0.05).乳腺癌组织中IDO与Treg细胞间呈正性相关(r2=0.409,P＜0.05),与引流淋巴结中Treg细胞正性相关(r2=0.528,P＜ 0.05).[结论]IDO和Treg细胞有可能在乳腺癌免疫逃逸机制中发挥重要作用.     

IDO基因转染对裸鼠体内宫颈癌种植瘤生长的影响

 目的 通过建立裸鼠皮下肿瘤生长模型,研究吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）在裸鼠体内对人宫颈癌细胞的生长促进作用。方法 IDO基因表达质粒和空白质粒分别稳定转染至人宫颈癌SiHa细胞。应用Western blot检测IDO在SiHa、SiHa/Mock 和SiHa/IDO细胞中的表达情况,用MTT试剂盒检测3种肿瘤细胞体外生长速度。种植3种肿瘤细胞至裸鼠皮下,比较其在裸鼠体内的生长速度。结果 IDO蛋白在SiHa/IDO细胞中表达阳性,在SiHa和SiHa/Mock细胞中无表达。3种肿瘤细胞体外生长曲线无统计学差异（P＞0.05）。3周后接种SiHa/IDO细胞的肿瘤与接种SiHa和SiHa/Mock细胞的肿瘤相比生长迅速,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 IDO可作为宫颈癌评价预后的指标之一,也可能是宫颈癌基因治疗潜在的靶点。     

吲哚胺-2,3-双加氧酶在非小细胞肺癌中的表达

目的 探讨吲哚胺-2,3-双加氧酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)在非小细胞肺癌中的表达及意义.方法 收集38例非小细胞肺癌组织和10例癌旁正常肺组织.用半定量免疫组织化学方法 检测肺组织中IDO蛋白阳性率,实时荧光定量PCR检测肺组织中IDO mRNA表达水平.结果肺癌组IDO蛋白阳性率和IDO mRNA表达水平均明显高于对照组,差异均具有统计学意义(均P＜0.05);而肺癌组按不同病理分型中,腺癌组和鳞癌组比较差异无统计学意义(P＞0.05).肺癌组按不同分化程度分为高、中、低3组,经统计学分析,3组中IDO阳性表达率和IDO mRNA表达水平差异均有统计学意义(均P＜0.05).肺癌组按有和无淋巴结转移分组比较,IDO蛋白阳性率和IDO mRNA表达水平差异也均有统计学意义(均P＜0.05).结论 IDO在非小细胞肺癌中呈高表达,与分化程度及有无淋巴结转移有关,但与肺癌病理分型无关.     

小鼠腹部异位心脏移植技术的改进

目的　探讨改进的小鼠腹部异位心脏移植技术的应用效果。方法　同系BALB c小鼠 80只 ,均为雄性 ,体重 2 3～ 2 7g。苯巴比妥纳 (70mg kg)行腹腔内注射麻醉。心脏移植 :在受体腹主动脉及下腔静脉游离后 ,用一弧形小动脉钳将上述血管一并钳夹阻断血流。在 2 5倍显微镜下用 11- 0的尼龙线将供心主动脉与受体腹主动脉 ,肺动脉与下腔静脉作端侧连续吻合。经阴茎背静脉注入林格氏液 0 3ml,然后松开阻断钳恢复血流。结果　成功施行心脏移植术 4 0例。受体手术时间为 (6 1 8± 6 5 )min ,血管阻断时间为 (2 8 6± 3 4 )min ,供体心脏缺血(36 2± 3 7)min。 7d成功率为 92 % (37 4 0 ) ,30d为 90 % (36 4 0 ) ,10 0d为 80 % (32 4 0 )。结论　改进的小鼠腹部异位心脏移植技术是一种简便、成功率高的方法。     

小鼠异位心脏移植的经验与体会

目的为了方便器官移植的实验研究,我们在国内首先开展了小鼠的异位心脏移植,为今后的器官移植研究奠定基础.方法以昆明种小鼠为实验对象,参照国外心脏移植的手术方式,将供体心脏的主动脉和肺动脉与受体小鼠的腹主动脉和下腔静脉作端侧吻合.结果在进行了20次预实验的基础上,进行了14次正式定型实验手术,手术后动物关键成活(＞72h)率在78.5%(11/14).结论在熟练掌握动物心脏手术基本技术的基础上,处理好移植心脏的复苏等五个步骤,小鼠异位心脏移植即可顺利完成.     

小鼠颈部异位心脏移植技术的改进

目的 建立简便易行的同种小鼠颈部异位心脏移植模型，探讨小鼠颈部异位心脏移植模型的建立与手术方式的改进。方法 在显微镜和低温条件下切取供心；分离受体右侧的颈外静脉及颈总动脉。采用供心主动脉与受体颈总动脉侧壁长度相近的切口行端—侧间断缝合，供心肺动脉与受体颈外静脉后壁连续缝合、前壁间断缝合的吻合方法进行小鼠颈部异位心脏移植。术后通过视诊和触诊检测供心心跳，病理学检查确定排斥情况。结果 应用该方法共进行移植正式实验40次，成功36次，供心总缺血时间为30min，7d存活率达90％。结论 这种移植术式降低了手术难度，易于暴露，手术时间短，创伤小、污染少，观察方便，成功率高，是一种简单、实用的方法。     

原位心脏移植手术的麻醉管理

目的探讨同种原位心脏移植手术麻醉管理的经验和方法.方法回顾分析2003年4月至2012年12月昆明市延安医院7例终末期心脏病患者的同种原位心脏移植手术.全麻诱导遵循分次小量渐增剂量的用药原则,麻醉维持采用芬太尼为主的静吸复合麻醉,体外循环下实施心肺联合移植手术.结果 7例患者麻醉过程平稳,手术过程顺利.例1、例2和例5患者生存至今,已分别存活10 a、9 a和5 a;例3患者术后存活1 a;例4和例6患者死于移植术后右心衰、急性排斥反应;例7患者死于停机困难、严重低心排.结论充分的术前准备,合理的麻醉方法和药物,维持围术期血流动力学稳定,及时有效处理右心功能不全和低心排是心脏移植手术麻醉成功的关键.