生长相关蛋白-43及mRNA在大鼠损伤坐骨神经中的表达

目的 探讨坐骨神经离断后。其远侧靖组织中生长相关蛋白-43mRNA(GAP-43mRNA)及其蛋白表达的变化。为临床神经修复过程中更好地改善微环境提供实验依据。方法 正常SD大鼠24只，行坐骨神经横断术，术后l，2，3，4周取坐骨神经远侧端组织，以WesternBlot和RT-PCR法检测GAP-43及其mRNA的表达。结果 RT-PCR结果显示。正常大鼠坐骨神经组织中GAF-43mRNA表达量较低。损伤坐骨神经远侧端GAP-43mRNA的表达量明显增加，于损伤第2周时达高峰。采用抗GAP-43抗体，进行WesternBlot检测结果：正常坐骨神经43kDa处出现弱阳性反应的蛋白区带。损伤后坐骨神经远侧端43kDa处阳性反应条带着色明显加深。损伤后第3周时阳性反应着色最强。结论 GAP-43及其mRNA在大鼠损伤坐骨神经远侧端组织中表达增强，其mRNA表达上调高峰在神经损伤后的第2周；而其蛋白合成增加最为明显的时间是在神经损伤后的第3周。     

移植坐骨神经大鼠相应背根神经节中生长相关蛋白43的表达

背景:周围神经移植后,相应的背根神经节感觉神经元胞体内生长相关蛋白43(GAP-43)表达的时程与规律尚未明确.目的:观察大鼠坐骨神经移植术后GAP-43在相应背根神经节中的表达变化.方法:取健康成年雄性Wistar大鼠,随机分为2组,对照组行假手术组:实验组行坐骨神经移植,分别于术后3 d,1,2,4,6,8周6个时间点处死后取其手术侧L4~L5背根神经节,应用Fn-PCR和Westem Blot技术检测GAP-43 mRNA及其蛋白表达.结果与结论:对照组大鼠背根神经节中GAP-43 mRNA表达量较低,且随时间无明显改变;实验组术后1周时GAP-43 mRNA在相应背根神经节中即有表达增强,2周时达到高峰,6~8周表达逐渐减弱.两组大鼠背根神经节中GAP-43蛋白与GAP-43mRNA表达的变化规律相同.结果表明神经损伤后相应神经元的再生能力存在损伤反应性变化.     

810 nm低能量镓铝砷激光对大鼠视神经钳夹伤后的再生作用

目的通过对视网膜和视神经神经再生的标志物生长相关蛋白-43（GAP-43）的测定和闪光视觉诱发电位（F-VEP）的测定,观察810 nm低能量镓铝砷(Ga-Al-As)激光对大鼠视神经钳夹伤后视神经再生的影响。 方法健康成年Wistar大鼠88只,体重（180～220）g,分成激光治疗组40只、单纯损伤组32只、正常对照组16只,每组又分成1,3,6,9周4个时间点。标准的视神经钳夹伤模型制备成功后,激光治疗组行激光照射,照射参数为：光导子直径5 mm,照射强度60 mW,持续时间3 min,经皮至视神经损伤处,每日照射1次。单纯损伤组及正常对照组在进行激光照射时,激光器无功率输出。激光治疗1,3,6,9周后测量视网膜、视神经GAP-43mRNA含量和GAP-43蛋白的表达。并且测量损伤前,损伤即刻,治疗1,3,6,9周后患侧眼F-VEP。 结果大鼠视神经损伤后,F-VEP有很大变化,表现在N1、P1、N2波潜伏期延长,在视神经损伤即刻,潜伏期瞬间延长,随后有所恢复,第1~3周进行性延长,在第3~9周之间N1、P1、N2波潜伏期有所恢复。激光治疗组N1、P1、N2波的潜伏期也延长,但是明显小于单纯损伤组。正常的视网膜和视神经中几乎没有GAP-43蛋白的表达,视神经损伤后,GAP-43蛋白的表达在伤后第1周时达到高峰,随后下降,激光治疗后第1,3,6周与同一时间单纯损伤组GAP-43蛋白表达相比有所提高(P<0.05),视网膜的GAP-43mRNA的含量与GAP-43蛋白表达相一致。 结论810 nm低能量镓铝砷激光能够促进大鼠视神经钳夹伤后视神经再生。     

督脉电针对脊髓损伤大鼠生长相关蛋白43 表达的影响

目的研究督脉电针对大鼠脊髓损伤后生长相关蛋白43(GAP-43)基因及蛋白表达的影响。方法利用多中心急性脊髓损伤打击器建立Sprague-Dawley 大鼠T11脊髓损伤模型,造模成功后分为对照组(A 组,n=18)和督脉电针组(B 组,n=18)。造模后1 周,B 组接受督脉电针治疗每天1 次。两组大鼠于造模后1、2、4、8 周行BBB 后肢运动功能评分;造模后2、4、8 周,采用RT-PCR检测GAP-43 mRNA表达,采用免疫组化染色检测GAP-43 蛋白表达。结果造模后,与A组比较,B组BBB评分明显升高(P<0.01),GAP-43 mRNA相对表达量明显升高(P<0.01),GAP-43 蛋白阳性表达明显增强(P<0.01)。结论督脉电针可促进脊髓损伤大鼠GAP-43 表达。     

坐骨神经损伤后脊髓肝细胞生长因子mRNA及蛋白的表达

目的 研究坐骨神经损伤后再生过程中脊髓肝细胞生长因子（HGF）mRNA和蛋白的表达及经时变化规律，探讨周围神经损伤的机制。方法 采用原位杂交及免疫组化技术检测坐骨神经损伤后再生过程中脊髓HGF的mRNA及蛋白的表达。结果 大鼠坐骨神经损伤模型损伤侧的神经细胞胞质颗粒阳性染色强于未损伤侧；神经损伤后第3，7和14天，感觉。运动和副交感神经元内杂交信号明显增强，以第7天的变化最为显著。HGF蛋白的表达均于坐骨神经损伤后第1周开始增强，第2周时达峰值，然后下降。结论 周围神经损伤后，内源性HGF mRNA和蛋白表达增强，对神经元具有保护作用。     

胶质细胞源性神经营养因子在坐骨神经切断后的表达变化

目的探讨大鼠坐骨神经切断后胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)mRNA在远侧断端的表达变化及其意义.方法切断SD大鼠左侧坐骨神经,不同时间、半定量RT-PCR方法,观察远侧断端GDNFmRNA的表达变化.结果GDNFmRNA在坐骨神经切断前微量表达,坐骨神经切断后远断端表达逐渐增加(1、7、14、28d分别增加20%、60%、85%、90%).结论坐骨神经切断导致“胞体-轴突-靶器官”轴中断,使靶组织产生GDNF聚集于坐骨神经远断端,表现为GDNFmRNA高表达.     

微波对坐骨神经损伤大鼠脊髓内生长相关蛋白-43表达的影响

目的:观察微波对坐骨神经损伤大鼠脊髓内生长相关蛋白-43(GAP-43)表达的影响,探讨微波促进周围神经再生的作用机制。方法:选取成年雄性SD大鼠64只,制成右侧坐骨神经钳夹损伤模型,随机分为微波治疗组和非治疗对照组,各32只,每组又分为3d、7d、14d、28d四个时间段各8只。治疗组于造模24h后取俯卧位,双腿伸直固定于实验台上,采用2450MHz微波辐射治疗,输出功率为6W,6min/次,5次/周,休息2d,直到取材的前一天。对照组于治疗组治疗同时予6min空白对照。于相应时间行大鼠一般状态观察,坐骨神经功能指数(SFI)测定及免疫组化染色观察GAP-43的表达。结果:微波治疗组术后大鼠一般状态优于对照组,治疗组SFI指数在术后第14天即出现明显升高,对照组则在术后第21天才开始明显升高,并且术后第14、21、28天治疗组SFI指数明显高于对照组(P<0.01),免疫组化染色示坐骨神经损伤后脊髓内GAP-43表达增强,在术后第3、7、14天治疗组GAP-43明显高于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:周围神经损伤后早期应用微波辐射治疗能增加GAP-43的表达,促进损伤神经再生及功能恢复。     

电针对坐骨神经损伤大鼠脊髓生长相关蛋白-43mRNA表达的影响

目的:探讨电针对坐骨神经损伤大鼠的脊髓中神经生长相关蛋白-4(GAP-43)mRNA表达的影响。方法:60只Wistar大鼠制成坐骨神经损伤模型,经电针穴位刺激治疗后用原位杂交技术观察坐骨神经相应脊髓节段GAP-43mRNA的表达。结果:电针组第1天阳性细胞数增多(23.5±4.1)个/mm2,3d达高峰(46.8±6.8)个/mm2,14d后明显减少(9.7±3.6)个/mm2,28d后基本未见阳性细胞存在(1.0±1.2)个/mm2;模型组第1天(16.3±2.9)个/mm2至第7天(20.1±2.5)个/mm2持续阳性细胞数增多,1d略减少(19.1±3.2)个/mm2,28d后仍可见阳性细胞存在(8.5±2.0)个/mm2。与电针组比较差异有显著性意义(t=2.36～4.25,P0.05)。结论:穴位电针能增强并缩短GAP-43mRNA表达时间,有利于突触重建。     

聚乳酸-聚三亚甲基碳酸酯/GDNF导管对大鼠脊髓损伤区GAP-43mRNA表达的影响

目的探讨PLA-PTMC/GDNF复合导管对脊髓损伤功能恢复的影响。方法我们采用RT-PCR的方法对GAP-43的mRNA表达进行分析,从基因水平上来检测植入PLA-PTMC/GDNF复合导管与其他治疗组GAP-43基因表达上的差异。结果术后第2周时,A组、B组、C组和D组的GAP-43mRNA相对表达水平与正常组相比明显增高;术后4周时,B组和D组的GAP43mRNA表达与第2周时相比明显增高,与A组和C组相比明显增高,有显著性差异;术后6周时,D组的GAP-43mRNA表达仍明显增高,与A组、B组和C组相比增高有显著性差异;第8周时各组GAP-43mRNA表达均有所下降,但D组的GAP-43mRNA相对表达水平与A组、B组和C组相比仍高,有显著性差异。结论 PLA-PTMC/GDNF复合导管更有利于轴突再生的修复连接和脊髓损伤的功能恢复。     

实时定量RT-PCR法检测健侧C7神经移位前后神经生长相关蛋白43的变化

背景:已有研究证实,周围神经损伤后大脑皮质会出现功能可塑性变化;神经生长相关蛋白43在发育中神经系统的表达特征提示,它与神经发育中突起延伸和突触形成有关,参与突触重建过程.目的:实时定量RT-PCR方法检测实验动物健侧颈7神经根移位前后,不同阶段相应大脑皮质组织神经生长相关蛋白mRNA的相对表达量及动态变化,探讨周围神经修复与中枢神绎可塑性的关系.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-09/2008 12在上海市周围神经重点实验室和复旦大学实验动物科学部完成.材料:成年SD火鼠108只,分为臂从损伤未修复组(n=48)、臂丛损伤修复组(n=8)及对照组(n=12).方法:大鼠左侧为实验侧,臂丛损伤未修复组在大鼠左侧取锁骨下横形切口,找到臂从各神经根并造成全臂丛根性撕脱伤.臂丛损伤修复组同法将大鼠全臂从神经根性撕脱后,取右侧锁骨下切口,显露健侧颈C7神经根备用:取左侧前臂尺神经通过皮下隧道桥接健侧颈7神经根与正中神经端端吻合.对照组为成年雌性正常大鼠,不进行任何处理.主要观察指标:于术后1 d.3d,1周,2周.1个月,3个月,6个月,10个月共8个时段及对照组取材,采用SYBRGreen Ⅰ实时定量RT-PCR法检测健侧颈7神经根移位术前后对侧(右侧)大脑前肢投射区域皮质组织生长相关蛋白43 mRNA相对表达量及动态变化.结果:臂丛损伤未修复组对侧(右侧)大脑前肢投射区域皮质组织生长相关蛋白43 mRNA的相对表达量变化规律为术后第1天开始升高,第3天达到高峰,然后逐渐降低.术后1 d,3 d和1周与对照组比较差片具有显著性意义(P<0.05,P<0.01).臂丛损伤修复组对侧(右侧)大脑前肢投射区域皮质组织生长相关蛋白43 mRNA的相对表达量变化规律为术后第1天开始升高.第3人达到高峰,然后逐渐降低.至术后3个月再次升高,6个月达到高峰,然后逐渐降低.术后1 d,3 d,1周和6个月与对照组比较差异具有显著性意义(P<0.05.P<0.01).结论:臂丛损伤健侧颈7移位术前后相应大脑皮质生长相关蛋白表达变化与临床现象一致,提示生长相关蛋白在大脑皮质及突触可塑性方面发挥作用.     

氦氖激光照射对大鼠神经损伤后脊髓内生长相关蛋白表 …

目的　研究 10mW氦氖 (He Ne)激光照射对大鼠神经损伤后脊髓生长相关蛋白 (growthassociatedprotein ,GAP 43 )表达的影响。 方法　将 96只SD大鼠制成坐骨神经损伤模型 ,用免疫组化方法观察脊髓内GAP 43表达的变化。结果　 1周内激光照射组和对照组无明显差异。 2、4周时照射组脊髓内GAP 43表达明显高于对照组。 8周时激光照射组脊髓内GAP 43表达下降。结论　激光照射可引起损伤神经GAP 43表达的变化 ,有促进完成神经再生的作用。     

运动疗法促进坐骨神经损伤小鼠的运动功能恢复

目的:评估运动疗法对坐骨神经损伤小鼠运动功能恢复的促进作用。方法:将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、坐骨神经损伤组和运动治疗组,每组20只。通过挤压坐骨神经建立坐骨神经损伤小鼠模型。对各组小鼠脚趾形态和坐骨神经功能指数(Sciatic Functional Index,SFI)进行评估。通过免疫荧光染色观察各组小鼠神经纤维的形态及数量。使用透射电子显微镜检查小鼠坐骨神经损伤部位远端的有髓神经纤维数量。使用real-time PCR检测与神经损伤修复相关的基因。结果:与假手术组比较,坐骨神经损伤组小鼠脚趾不能张开,SFI高且下降速度慢,差异有统计学意义(P<0.001)。与坐骨神经损伤组比较,运动治疗组小鼠脚趾张开功能轻度恢复,SFI下降速度快,差异有统计学意义(P<0.001)。免疫荧光染色结果显示:坐骨神经损伤组受损部位远端神经纤维数量少,密度低;而运动治疗组受损部位远端神经纤维数量和密度均升高。电镜结果显示:与假手术组比较,坐骨神经损伤组小鼠受损部位远端有髓神经纤维比例降低,差异有统计学意义(P<0.001);与坐骨神经损伤组比较,运动治疗组小鼠受损部位远端有髓神经纤维比例升高,差异有统计学意义(P<0.01)。Real-time PCR结果显示:与假手术组比较,坐骨神经损伤组BDNF,Mpz和Cdh1基因表达均降低(P<0.01或P<0.001),Artn基因表达升高(P<0.001);与坐骨神经损伤组比较,运动治疗组BDNF,Mpz,Cdh1,Gap-43,cJun基因表达水平升高(P<0.01或P<0.001),Artn基因表达降低(P<0.01)。结论:运动疗法对坐骨神经损伤小鼠的运动功能恢复有促进作用。     

坐骨神经夹伤与心脏毒素注射导致腓肠肌功能损伤中Calpains和FoxOs的差异表达及相关性分析

背景：钙蛋白酶家族和FoxO转录因子在肌萎缩过程中发挥着重要的作用。目的：观察钙蛋白酶家族成员及FoxO转录因子（FoxO1和FoxO3a）在心脏毒素注射与坐骨神经夹伤致腓肠肌失功能损伤中表达的变化。方法：分别采用坐骨神经夹伤和心脏毒素注射建立大鼠腓肠肌功能损伤模型,于造模后的第3,7,14,21天取大鼠腓肠肌进行实时荧光定量PCR检测,并采用线性回归法进行相关性分析。结果与结论：结果显示,腓肠肌组织中的钙蛋白酶Ⅰ、钙蛋白酶Ⅱ和FoxO3amRNA在坐骨神经夹伤7d达到高峰,随后下降;钙蛋白酶Ⅲ和FoxO1mRNA在坐骨神经夹伤后14d达到高峰,随后下降。钙蛋白酶Ⅰ、钙蛋白酶Ⅱ、FoxO3amRNA在心脏毒素注射后第3天达高峰,随后逐渐下降;FoxO1mRNA在心脏毒素注射后7d时达最高;而钙蛋白酶ⅢmRNA在心脏毒素注射后3d时表达显著下降,随后逐渐恢复至正常水平。线性回归分析结果显示,在失神经肌损伤过程中钙蛋白酶Ⅲ的表达与FoxO1呈正相关（r=0.9015）;在心脏毒素注射肌损伤过程中钙蛋白酶Ⅰ（r=0.8987）和钙蛋白酶Ⅱ（r=0.9374）表达趋势与FoxO3a呈正相关。可见,在不同的肌损伤模型中,钙蛋白酶Ⅰ和钙蛋白酶Ⅱ的表达趋势相似,而钙蛋白酶Ⅲ的表达不同。     

坐骨神经损伤模型大鼠神经传导速度及损伤运动神经元内生长相关蛋白43表达与磁刺激干预

背景：磁刺激可促进损伤神经的修复。目的：观察磁刺激对大鼠损伤坐骨神经神经传导速度及相应水平脊髓运动神经元内生长相关蛋白43表达的影响。方法：将60只SD大鼠随机分为实验组（n=24）、模型组（n=24）和假手术组（n=12）,用一新的长17cm的止血钳钳夹坐骨神经至第二扣,以21.95×103Pa维持10s制备损伤模型。造模后24h,实验组每天给予0.09T的磁刺激。结果与结论：造模后第2,4,8,12周,免疫组织化学染色显示实验组脊髓L4～5运动神经元生长相关蛋白43的表达较模型组相应时间点明显增高（P〈0.05）;造模后12周,电生理检测发现,与模型组比较,实验组再生神经传导速度加快,波幅升高,潜伏期缩短（P〈0.05）。说明磁刺激能提高损伤坐骨神经的传导速度,增加其对应脊髓节段运动神经元中生长相关蛋白43的表达,对大鼠损伤坐骨神经的修复起促进作用。     

慢性坐骨神经缩窄损伤导致大鼠背根神经节内质网应激反应

目的:研究坐骨神经慢性缩窄(chronic constriction injury,CCI)引起大鼠背根神经节内质网应激反应。方法:56只SD雄性大鼠随机分为两组:假手术组(sham组)和手术组(CCI组)(n=28)。手术前、术后1天、4天、7天、14天、21天和28天测定动物机械痛敏和热痛敏,背根神经节GRP78葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78,内质网应激反应的标志蛋白)的含量。结果:与假手术组相比,CCI组的机械痛阈和热痛阈在术后明显下降,背根神经节GRP78蛋白表达在第1天开始升高,第7天达到高峰。结论:坐骨神经慢性缩窄模型可以激活大鼠背根神经节GRP78蛋白表达和内质网应激反应,可能与神经病理性疼痛的形成有关。     

实验性大脑皮层梗死后中枢神经系统相关部位的神经可塑性

目的 :探讨实验性大脑皮层梗塞后同侧纹状体、丘脑及对侧脊髓前角的神经结构可塑性。方法 :采用易卒中型肾血管性高血压大鼠制作右侧大脑中动脉皮层支闭塞模型 ,分别于术后第 1周、2周、3周和 4周 ,取鼠脑行免疫组化检查 ,检测大鼠不同时点纹状体、丘脑腹后外侧核及对侧脊髓前角的微管相关蛋白 2 (MAP 2 )、突触生长素(SYN)和生长相关蛋白 (GAP 43)表达的变化。结果 :大脑皮层梗塞后第 1周 ,同侧纹状体、丘脑腹后外侧核和对侧脊髓前角GAP 43阳性信号开始增加 ,第 2周达到高峰 ,之后增加幅度逐渐减弱 ;这些部位SYN阳性信号第 1周较对照组高 ,至第 2周恢复正常 ,第 3周和第 4周逐渐降低 ,且显著低于对照组 ;脑皮层梗塞后第 2周 ,同侧纹状体和丘脑腹后外侧核MAP 2阳性细胞数开始减少 ,至 3周、4周显著低于对照组。结论 :大脑皮层梗死后早期远离梗塞灶的相关神经组织有明显的可塑性 ,后期神经细胞继发性死亡且可塑减缓     

Bestrophin-1 Participates in Neuropathic Pain Induced by Spinal Nerve Transection but not Spinal Nerve Ligation

Previous studies have reported that L5/L6 spinal nerve ligation (SNL), but not L5 spinal nerve transection (SNT), enhances anoctamin-1 in injured and uninjured dorsal root ganglia (DRG) of rats suggesting some differences in function of the type of nerve injury. The role of bestrophin-1 in these conditions is unknown. The aim of this study was to investigate the role of bestrophin-1 in rats subjected to L5 SNT and L5/L6 SNL. SNT up-regulated bestrophin-1 protein expression in injured L5 and uninjured L4 DRG at day 7, whereas it enhanced GAP43 mainly in injured, but also in uninjured DRG. In contrast, SNL enhanced GAP43 at day 1 and 7, while bestrophin-1 expression increased only at day 1 after nerve injury. Accordingly, intrathecal injection of the bestrophin-1 blocker CaCC_inh-A01 (1-10 µg) reverted SNT- or SNL-induced tactile allodynia in a concentration-dependent manner. Intrathecal injection of CaCC_inh-A01 (10 µg) prevented SNT-induced upregulation of bestrophin-1 and GAP43 at day 7. In contrast, CaCC_inh-A01 did not affect SNL-induced up-regulation of GAP43 nor bestrophin-1. Bestrophin-1 was mainly expressed in small- and medium-size neurons in naïve rats, while SNT increased bestrophin-1 immunoreactivity in CGRP+, but not in IB4+ neuronal cells in DRG. Intrathecal injection of bestrophin-1 plasmid (pCMVBest) induced tactile allodynia and increased bestrophin-1 expression in DRG and spinal cord in naïve rats. CaCC_inh-A01 reversed bestrophin-1 overexpression-induced tactile allodynia and restored bestrophin-1 expression. Our data suggest that bestrophin-1 plays a relevant role in neuropathic pain induced by SNT, but not by SNL.PerspectiveSNT, but not SNL, up-regulates bestrophin-1 and GAP43 protein expression in injured L5 and uninjured L4 DRG. SNT increases bestrophin-1 immunoreactivity in CGRP+ neurons in DRG. Bestrophin-1 overexpression induces allodynia. CaCCinh-A01 reduces allodynia and restores bestrophin-1 expression. Our data suggest bestrophin-1 is differentially regulated depending on the neuropathic pain model.