肝癌细胞通过Fas/FasL途径触发T淋巴细胞的凋亡

目的：研究肝癌细胞表面Fas/FasL系统的变化及对其逃避机体免疫监控的影响。方法：采用流式细胞术和RT-PCR检测肝癌细胞株HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5Fas和FasL的表达;观察化疗药物争光霉素诱导肝癌细胞FasL表达及FasL表达上调后的肝癌细胞触发淋巴细胞株Jurkat细胞凋亡的作用。结果：HepG2、Hep3B和PLC/PRF/5肝癌细胞株Fas表达均阴性;HepG2 FasL mRNA的表达为阴性,而Hep3B 和PLC/PRF/5FasL mRNA的表达均阳性。经争光霉素（0.6mg/ml）诱导后,上述肝癌细胞Fas的表达无明显变化,而其FasL的表达却增加,与Jurkat细胞混合孵育则触发后发生显性调亡。结论：肝癌细胞可能一方面降低或不表达Fas而对Fas介导的凋亡耐受,另一方面又增强自身FasL的表达以诱发与之接触的T淋巴细胞凋亡,在完成免疫逃避的同时,可对周围的T细胞实施反攻击。     

Sertoli细胞诱导异基因T淋巴细胞凋亡的研究

目的 探讨大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)在体外与同种异体来源T淋巴细胞共同培养能否诱导T淋巴细胞凋亡.方法 用SABC法检测T淋巴细胞Fas和Sertoli细胞FasL的表达率.Sertoli细胞和异基因T淋巴细胞共同培养实验分为,A组(对照组)只有T淋巴细胞培养,B组为T淋巴细胞与经过FasL单克隆抗体处理过的等量Sertoli细胞共同培养;C组T淋巴细胞与培养Sertoli细胞24 h的培养液上清共同培养;D组为T淋巴细胞与等量Sertoli细胞共同培养;用TUNEL法检测各组淋巴细胞的凋亡指数.结果 T淋巴细胞Fas的表达率为(91.67±2.08)%;Sertoli细胞FasL的表达率为(90.43±3.52.)%.C组和D组淋巴细胞的凋亡指数显著大于A组和B组(P＜0.01);D组T淋巴细胞的凋亡指数显著大于C组(P＜0.01).结论 T淋巴细胞高表达Fas,Sertoli细胞高表达FasL;在体外共同培养的条件下,Sertoli细胞能够诱导异基因T淋巴细胞的凋亡,T淋巴细胞凋亡原因可能与Sertoli细胞产生FasL有关.     

肾癌FasL表达异常对T淋巴细胞凋亡的影响

目的探讨凋亡相关基因产物FasL蛋白在肾癌中的表达及对T淋巴细胞凋亡的影响.方法采用免疫组织化学方法(VP法)对44例肾癌组织和10例相邻正常肾组织FasL蛋白表达进行检测;TUNEL法检测44例肾癌组织浸润性T淋巴细胞的凋亡;体外培养786-0肾癌细胞株和JurkatT淋巴细胞,流式细胞仪(FCM)检测JurkatT淋巴细胞的凋亡.结果肾癌组织FasL阳性表达率46.5%,高于正常肾组织中FasL的表达(23.2%,P＜0.05);肾癌浸润性T淋巴细胞凋亡率33.1%,和肾癌FasL表达呈正相关(r=0.96,P＜0.01);表达FasL的786-0肾癌细胞株可引起Fas(+)的JurkatT淋巴细胞凋亡.经干扰素-γ(IFN-γ)处理后的786-0细胞株可增强对JurkatT淋巴细胞的细胞毒效应.抗FasL抗体(NOK-1)对Fas介导的凋亡有抑制作用.结论肾癌组织免疫逃避机制之一是通过高表达FasL而引起肾癌浸润性T淋巴细胞凋亡;肾癌组织表达FasL能通过Fas/FasL通路主动杀伤Fas(+)的JurkatT淋巴细胞.     

反义人端粒酶RNA诱导肝癌细胞凋亡的分子生物学机制研究

目的 探讨反义人端粒酶RNA( human telomerase RNA,hTR)基因对肝癌细胞株Bel-7402凋亡的诱导作用及其分子生物学机制.方法 利用前期实验成功转染人端粒酶正、反义RNA基因的肝癌细胞,分为正义转染组(Bel-7402-hTR-EcoRI)、反义转染组(Bel-7402-hTR-BamHI)和空白对照组(Bel-7402).PCR鉴定转染结果,hoechst 33258荧光染色观察3组细胞的变化,实时荧光定量PCR法和Western blot法分别检测凋亡相关基因p53、Bcl-2和Bax的mRNA和蛋白的表达水平.结果 与正义转染组及空白对照组细胞相比,反义转染组部分细胞出现凋亡特征性改变,p53、Bax的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).结论 反义端粒酶RNA可诱导肝癌细胞凋亡,其机制可能是通过上调p53和Bax的表达并下调Bcl-2的表达.     

反义bcl—2RNA促进HL—60细胞的凋亡

目的：分析反义ｂｃｌ－２对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用，为进一步研究凋亡机制打基础，方法：我们用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将插有反义ｂｃｌ－２基因片段的重组逆转病毒载体ｐＤＯＲ－ＡＢ转染ＨＬ－６０细胞，用核酸打点杂交方法检测转染效果和载体表达效果，用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２的改变及细胞周期的变化，用光镜和电镜观察转染细胞的形态学改变，并用转染的细胞对足叶乙甙敏感性的变化间接证明反义ｂｃｌ－２的作用，结果：ｐ     

慢性肝炎患者外周血单个核细胞Fas抗原及T淋巴细胞亚群的检测意义

[目的 ]探讨Fas抗原系统和T淋巴细胞亚群在慢性肝炎发病机制中的作用及意义。 [方法 ]提取患者外周血单个核细胞 ,应用流式细胞术检测Fas抗原、CD3 、CD4 、CD8 ,进行统计学方差分析。共检测 2 5例慢性肝炎患者 ,其中慢性乙型肝炎 (CHB)患者 1 6例 ,脂肪性肝炎患者 9例。[结果 ]2 5例慢性肝炎患者总的Fas抗原及 1 6例慢性乙型肝炎和 9例脂肪肝患者的Fas抗原阳性率分别为 (4 7.35± 6 .1 4 ) %、(4 8.31± 6 .6 8) %和 (4 7.1 9± 8.71 ) % ,明显高于对照组 (2 5 .0±7.0 7) % ,P均 <0 .0 1 ,有显著性差异。各组慢性肝病之间Fas抗原含量无显著性差异。对T淋巴细胞亚群的分析 ,慢性乙型肝炎组CD3 与对照组呈显著性差异 (P <0 .0 1 ) ,其余均无差异。 [结论 ]慢性肝炎患者 ,包括CHB及脂肪性肝炎 ,外周血单个核细胞Fas抗原表达明显增高 ,同时外周血T淋巴细胞数量 (CD3 )有明显下降     

Bcl-2反义RNA对人多发性骨髓瘤凋亡影响的研究

目的　探讨 bcl- 2反义 RNA对人多发性骨髓瘤内源性Bcl- 2蛋白水平及细胞调亡的影响 ,以期为转基因治疗人多发性骨髓瘤提供实验依据。　方法　利用 DNA重组技术 ,构建反义 bcl- 2逆转录病毒表达载体 ,并将其导入人多发性骨髓瘤细胞株 U2 6 6细胞。通过 RT- PCR检测 bcl- 2反义RNA是否导入了细胞 ,应用 Western Blot检测内源性 Bcl- 2蛋白表达的改变 ,应用形态学、流式细胞术、片段化 DNA电泳及定量分析和 TUNEL 法检测靶细胞的凋亡。　结果　(1)成功地构建了反义 bcl- 2逆转录病毒载体 ,获得的重组病毒上清滴度为 4.5 X10 5 CF…     

两种状态抗CD_3单抗诱导人T淋巴细胞活化增殖的初步观察

目的：观察并比较粘附状态抗ＣＤ３单抗和游离状态抗ＣＤ３单抗诱导人外周血单个核细胞（ＨＰＢＭＣ）活化增殖的能力。方法：采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入淋巴细胞增殖试验、苔盼蓝拒染法、间接免疫荧光染色法以及ＣＴＬＬ细胞ＩＬ－２检测法，分别检测人外周血单个核细胞，经两种状态抗ＣＤ３单抗刺激后，其增殖活性、外源性ＩＬ－２的协同作用、内源性ＩＬ－２释放以及ＩＬ－２Ｒ表达等生物免疫学指标。结果：粘附状态抗ＣＤ３单抗刺激ＨＰＢＭＣ，其增殖活性、活细胞总数以及增殖活性维持的时间均高于游离状态抗ＣＤ３单抗，且前者不依赖外源性ＩＬ－２；粘附状态抗ＣＤ３单抗诱导ＨＰＢＭＣ释放内源性ＩＬ－２以及细胞表面ＩＬ－２Ｒ表达的能力也强于游离状态抗ＣＤ３单抗。结论：粘附状态抗ＣＤ３单抗比游离状态抗ＣＤ３单抗具有更强的诱导人Ｔ淋巴细胞活化增殖能力。     

胶质瘤RNA致敏的人脐血树突状细胞诱导细胞毒T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用

目的:制备人脐血来源的树突状细胞(DCs),用胶质瘤RNA诱导其成熟,并观察DCs诱导细胞毒T淋巴细胞(CTL)体外杀伤肿瘤细胞的活性.方法:以rhGM-CSF、IL-4诱导人脐血单个核细胞向DCs分化并鉴定.提取胶质瘤RNA与DCs混合,使DCs致敏,未致敏的DCs为对照组.观察细胞形态并检测致敏前后DCs的表型.将DCs与外周血T细胞共培养,以胶质瘤细胞为靶细胞,采用MTT比色法检测T细胞抗肿瘤活性差异.结果:人脐血单个核细胞于诱导第5 d呈现典型的DCs形态;经rhGM-CSF、IL-4诱导培养后,CD86、CD11c、CD54、MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类分子表达与培养前比较均明显增高(P＜0.01).负载抗原后,MHC-Ⅰ和CD54表达与负载抗原前相比进一步增高(P＜0.05).以DCs诱导活化的T细胞与胶质瘤细胞共培养可使胶质瘤细胞的生长受到抑制,并最终导致其死亡;杀伤率与未负载抗原的对照组相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论:人脐血单个核细胞在细胞因子的诱导下扩增并分化为DCs.经抗原致敏后,能增强淋巴细胞对相应肿瘤细胞的体外杀伤效应.     

莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡与Fas/FasL途径的相关性研究

目的 研究莱菔硫烷对人肝癌HepG2细胞Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响,探讨其诱导HepG2细胞凋亡过程中Fas/FasL途径的作用。方法 Caspase-8试剂盒检测莱菔硫烷对HepG2细胞Caspase-8活性的影响;流式细胞仪检测莱菔硫烷对HepG2细胞中Fas、FasL、Bid蛋白表达的影响。结果 莱菔硫烷10、20、40 μmol/L作用于HepG2细胞48 h,可显著升高HepG2细胞Caspase-8活性（P＜0.01）;可使HepG2细胞 Fas、FasL蛋白的表达显著升高（P＜0.01）;莱菔硫烷20、40 μmol/L时,可显著提高Bid蛋白的表达（P＜0.01）,上述作用均呈剂量相关性。结论 激活Fas/FasL途径可能是莱菔硫烷诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的重要机制之一。     

苦参碱对Raji细胞凋亡及凋亡相关蛋白Fas/FasL表达的影响

目的：探讨中药苦参碱对人Burkitts淋巴瘤Raji细胞凋亡的作用及其可能机制.方法：应用MTT法测定苦参碱对Raji细胞生长的抑制作用;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;WesternBlot检测Fas,FasL,Caspase-3蛋白的表达量.结果：苦参碱0.2～1.6g/L作用Raji细胞24,48,72h后,对Raji细胞生长具有增殖抑制作用,且呈明显的量效和时效关系,48h半数抑制浓度（IC50）为1.34g/L.苦参碱0.4,0.8,1.6g/L组作用48h后,Raji细胞总凋亡率分别为15.10%,27.88%,48.08%,与对照组8.78%相比较差异具有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）.Western Blot检测结果显示Fas,FasL,Caspase-3蛋白表达水平随苦参碱浓度的提高而增加.结论：一定浓度苦参碱可诱导Raji细胞发生凋亡,其凋亡机制可能与上调Fas,FasL蛋白的表达以及激活Caspase-3有关.     

Investigation on etretin effects on expression of Fas／FasL ligand and apoptosis in cultured human keratinocytes

Objective: To further illuminate a possibme mechanism of Fas/FasL in the treatment of psoriasis, the expression of it and apoptosis of KC were investigated. Methods: With cell culmre,immunocytochemistly, the expression of Fas/FasL protein after the treatment with etretin was observed in cultured human normal keratinocytes. Then, the state of apoptosis in cultured keratinocyte after stimulation with etretin was detected with FACS(Fluorescence Activited Cell Sortor). Results:(1) There was no expression of Fas/FasL protein in the cultured normal human KC. (2)After the treatment with etretin, the strongest expression of FasL protein appeared after 16h, so did Fas after 4Oh. (3) The higher the concentration of etretin, the stronger the expression of Fas/FasL protien. Under the same condition, the expression of Fas is stronger than that of FasL. (4) Keratinocytes‘ apoptosis occurred after stimulation with etretin. Conclusion: Fas/FasL system wasn‘ t involved in apoptosis in cultured normol human keratinocytes. But during limited period, the apoptosis of KC could be induced by etretin, thus it can antagonize benign proliferate of keratinocytes. Our data showed up-regulation of the expression of Fas/FasL and apoptosis in cultured human keratinocytes stimulated by etretin, and its function may be involved in the therapeutic machanism of psoriasis.     

转染反义Bcl-2对柔红霉素诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响

目的 :观察转染反义Bcl 2对柔红霉素诱导人视网膜色素上皮细胞 (RPE)凋亡的影响 .方法 :用Annexin V fluo ,琼脂糖凝胶电泳 ,TUNEL分别观察柔红霉素诱导正常RPE与转染反义Bcl 2的RPE的凋亡作用 .结果 :Annex in V fluo法在 4h即可检测到凋亡细胞膜的变化 ,琼脂糖凝胶电泳在 36h可检测到确切的梯状带纹 ,1 80 μg·L-1 柔红霉素作用 72h转染组与正常组凋亡指数分别为 0 .5 9和 0 .4 5 (P <0 .0 1 ) .结论 :转染反义Bcl 2可增加柔红霉素诱导的RPE凋亡的敏感性 .     

细胞凋亡、增殖和Fas/FasL系统在大肠癌中的作用

目的 :探讨细胞凋亡、增殖及相关基因Fas、FasL在大肠癌发生发展中的作用。方法 :用免疫组化SP法检测 4 0例大肠腺癌、15例腺瘤及 15例正常组织Fas、FasL、PCNA蛋白的表达 ,并以TUNEL法对相应标本行凋亡细胞检测。结果 :凋亡指数随肿瘤分化程度的降低呈下降趋势 ,与淋巴结转移相关 (P <0 .0 5 )。增殖指数随肿瘤分化程度的降低呈上升趋势 ,但与淋巴结转移无相关性 (P >0 .0 5 )。在正常粘膜、大肠腺瘤、大肠腺癌中Fas表达逐渐降低 ,FasL表达逐渐增高 ,均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 :Fas、FasL异常表达促使肿瘤细胞逃避自身免疫攻击 ,细胞凋亡、增殖的平衡失调及Fas FasL系统异常表达在大肠癌发生发展中起重要作用。     

Fas／FasL系统介导的细胞凋亡与卵泡闭锁及稽留流产的关系

Fas／FasL是细胞表面的两种跨膜蛋白。目前研究认为FasL是死亡因子,Fas则是其受体。当一个细胞的FasL与另一个细胞的Fas结合时,可以导致表达Fas的细胞凋亡。Fas又称Apo—l,即CD95分子。人Fas基因定位于10号染色体q23,基因长度约25Kb。人FasL基因定位于1号染色体q23,基因长度约8Kb。Fas／FasL系统与卵泡闭锁生理过程、自身免疫疾病、肿瘤发生、移植物耐受等均有密切关系。近年来细胞凋亡因素导致稽留流产的发生受到人们的关注,而其中Fas／FasL系统在促进绒毛组织细胞凋亡方面占据重要的地位。     

卡介苗有效成分罗莫肽刺激人PBMCs表达IL-12、IL-4和GM-CSF的研究

目的:探讨卡介苗(BCG)细胞壁有效成分罗莫肽(RM)对人外周血单个核细胞(HPBMCs)表达细胞因子的刺激作用.方法:获得正常人HPBMCs,采用不同浓度的RM体外刺激HPBMCs72h,收集培养上清液,用ELISA法检测上清液中IL-4、IL-12和GM-CSF的含量.结果:RM能诱导HPBMCs产生较高水平的IL-12和GM-CSF,并呈剂量依赖性;但对IL-4的产生没有促进或抑制作用.结论:RM能有效诱导人外周血单个核细胞产生诱导细胞免疫应答的细胞因子IL-12和GM-CSF,为下一步探讨RM治疗膀胱肿瘤的可行性以及进一步研究其增强策略提供先期的实验基础.     

Fas/FasL及增殖细胞核抗原表达与人黑素瘤恶性程度

目的 探讨Fas和Fas配体(Fas/FasL)及增殖细胞核抗原(PCNA)在人黑素瘤中表达情况及其与黑素瘤恶性程度的关系.方法 按不同病理分级,将标本分为恶性黑素瘤(MM)组、黑素细胞痣组和正常皮肤对照组,应用免疫组化SP法,检测Fas/FasL及PCNA在各组标本中表达情况.结果 Fas、FasL及PCNA在三组中表达强度差异有统计学意义(P＜0.01);MM组PCNA阳性细胞指数(PI)(55.0%±14.8%)明显高于正常皮肤组(4.0%±2.0%)和黑素细胞痣组(6.2%±3.0%)(P＜0.01),而后二者间差异则无统计学意义(P＞0.05).随着PI增加MM浸润深度增加、伴有淋巴结转移可能性明显增加、肿瘤细胞分化程度越差、恶性度越高(P＜0.01);但是PI与MM病理分型之间没有直接量效关系(P＞0.05).结论 Fas/FasL及PCNA表达情况反映人黑素瘤恶性程度,PCNA表达越强,恶性度越高;Fas/FasL及PCNA表达与黑素瘤发展过程密切联系.     

Detection of Replicative Form of HCV RNA in Peripheral Blood Leukocytes and Its Clinical Significance

ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＲｅｐｌｉｃａｔｉｖｅＦｏｒｍｏｆＨＣＶＲＮＡｉｎＰｅｒｉｐｈｅｒａｌＢｌｏｏｄＬｅｕｋｏｃｙｔｅｓａｎｄＩｔｓＣｌｉｎｉｃａｌＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅＨＥＹｏｎｇ－ｗｅｎ（贺永文）；ＦｅｒｅｎｃｉｋＳ；ＬＵＯＤｕａｎ－ｄｅ（罗...