microRNA-126靶向PIK3R2调控肝癌细胞SMMC-7721的增殖和凋亡

【摘要】 目的 研究microRNA-126(miR-126)对肝癌细胞SMMC-7721迁移能力的影响以及对靶基因PIK3R2表达的影响。方法 通过慢病毒转染肝癌细胞株SMMC-7721使其过表达miR-126,利用CCK-8法检测细胞增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡;采用实时定量PCR和蛋白印迹检测细胞PIK3R2表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证miR-126与PIK3R2基因的直接调控关系。结果 与对照组相比,转染miR-126组的SMMC-7721细胞的增殖能力减弱,凋亡增加。过表达miR-126后,SMMC-7721细胞PIK3R2的蛋白表达下调(P=0.0135)。荧光素酶报告基因实验显示,miR-126能明显抑制PIK3R2-3’UTR的荧光素酶活性(P=0.0016)。结论〓过表达miR-126可能通过靶向降低PIK3R2基因的蛋白表达,抑制肝癌细胞的迁移。     

microRNA-34a的表达对膀胱癌细胞系J82生物学行为的影响

目的:探讨microRNA-34a(miR-34a)的外源性表达对人膀胱癌J82细胞生物学行为的影响。方法:将miR-34a表达质粒或对照质粒转染J82细胞,实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-34a在转染细胞中的表达水平,细胞计数法、流式细胞术、Transwell侵袭实验分别检测外源性miR-34a表达后J82细胞增殖、凋亡、周期和侵袭能力的变化情况。结果:miR-34a表达质粒组与对照组比较,其miR-34a表达诱导性升高(P=0.002 6),细胞增殖受到抑制(P=0.000 1),细胞凋亡率增加(1.237%±0.116%vs 5.497%±0.293%;P<0.000 1),细胞周期阻滞于G0～G1期(54.510%±1.501%vs 62.200%±0.754%;P=0.001 5);细胞侵袭能力降低,(65.01±11.79)vs(34.33±9.71),P=0.025 4。结论:在膀胱癌J82细胞中增加miR-34a的表达,可抑制细胞增殖和侵袭,促进细胞凋亡和周期阻滞,并通过影响上述细胞生物学行为降低肿瘤细胞恶性度,miR-34a在膀胱癌细胞系中发挥潜在的抑癌基因作用。     

miR-124抑制结肠癌细胞增殖和侵袭与TET蛋白家族的关系

目的:探讨miR-124是否通过靶向调节TET蛋白家族的表达而抑制结肠癌细胞增殖与侵袭。方法:用双荧光素酶报告基因检测系统分别检测miR-124对TET家族(TET1、TET2、TET3)的3'UTR-荧光素酶活性的影响;用q RT-PCR与Western blot检测miR-124模拟物转染结肠癌HT29细胞后TET家族的m RNA与蛋白表达水平的变化;用MTS和Transwell实验观察HT29细胞转染miR-124模拟物及TET si RNA后增殖和侵袭能力的变化。结果:双荧光素酶报告基因检测结果显示,各TET m RNA的3'UTR均被miR-124特异性结合,其荧光素酶活性被明显抑制(均P0.05);转染miR-124模拟物后的HT29细胞TET的m RNA与蛋白表达水平明显减低(均P0.05);HT29细胞转染miR-124模拟物或TET si RNA后,增殖和侵袭能力均明显降低(均P0.05)。结论:miR-124可能通过直接靶向调控TET基因的表达,而抑制结肠癌细胞增殖和侵袭。     

过表达miR-101-3p可下调TOP2A基因表达抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移

目的发现并确认膀胱癌致癌基因TOP2A的上游miRNA,并探讨其在膀胱癌中发挥的具体作用及可能机制。方法starBase数据库用于预测膀胱癌中潜在和TOP2A结合的miRNAs,并运用TCGA数据库挖掘对所有预测的miRNAs与靶基因的相关性和生存分析进行排序;根据预测的结合位点情况构建双荧光素酶报告基因实验和干扰实验,以确认候选基因miR-101-3p和TOP2A基因的结合情况;qRT-PCR用于分析两基因在临床组织水平表达相关性;运用细胞转染技术在膀胱癌细胞中分别转染miR-101-3p mimics和inhibitor及各自的阴性对照,随后采用CCK8,细胞划痕愈合实验和Transwell实验测定细胞的增殖及迁移能力变化情况;细胞共转染技术和细胞功能回复实验以明确miR-101-3p/TOP2A信号轴在肿瘤细胞恶性表型中的调控作用。结果 starBase数据库预测获得147个miRNAs;TCGA数据库分析显示,miR-101-3p和TOP2A基因相关系数最高,且与膀胱癌患者不良预后密相关,作为后续实验候选基因;双荧光素酶报告基因实验和干扰实验证实两者在膀胱癌中的结合能力,miR-101-3p可以下调TOP2A基因的表达;临床组织标本中,miR-101-3p和TOP2A基因的表达具有负相关性;此外,体外实验显示,miR-101-3p可以抑制膀胱癌细胞的增殖和迁移能力;过表达TOP2A基因,可以恢复膀胱癌细胞的增殖和迁移能力。结论过表达miR-101-3p可以下调TOP2A基因表达抑制膀胱癌细胞增殖和迁移。     

lncRNA SCAMP1靶向miR-197-3p对肝癌SNU-449细胞增殖和侵袭的影响

目的：研究lncRNA SCAMP1靶向miR-197-3p对肝癌SNU-449细胞增殖和侵袭的影响。方法：q RT-PCR方法测定肝癌组织及细胞内SCAMP1表达变化。肝癌SNU-449细胞分成Control组、si-NC组（转染si RNA control）、si-SCAMP1组（转染SCAMP1 si RNA）组,CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化,克隆形成实验测定各组细胞克隆能力的变化,Transwell小室检测各组细胞迁移和侵袭能力的变化,Western blot检测各组细胞中N-cadherin、E-cadherin蛋白表达水平的变化。在线靶基因软件预测SCAMP1的靶基因可能是miR-197-3p,经双荧光素酶报告系统鉴定两者之间的靶向关系。在肝癌SNU-449细胞中分别把SCAMP1 siRNA、miR-197-3p inhibitor共转染,利用上述方法检测细胞增殖、克隆、侵袭、迁移能力。结果：肝癌组织中SCAMP1表达水平高于癌旁组织,肝癌细胞内SCAMP1表达水平高于正常肝细胞,差异均有统计学意义（P<0.05）。与Control组、si-NC组比较,si...     

miR-183作用于Ezrin抑制结肠癌细胞侵袭和迁移的研究

目的:探讨miR-183对结肠癌细胞SW620侵袭和迁移能力的影响及是否通过作用于其靶基因Ezrin来发挥作用。方法:采用脂质体转染细胞,高表达或沉默miR-183,用Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化,用Western Blot分析细胞Ezrin蛋白表达的改变;通过共表达miR-18和Ezrin,以及共沉默miR-18和Ezrin,观察miR-183对细胞侵袭和迁移能力的影响的变化,进一步证实miR-183是否通过作用于其靶基因Ezrin来发挥作用。结果:高表达miR-183后,与对照组相比,细胞侵袭及迁移能力明显下降,Ezrin蛋白的表达水平降低(P0.01,P0.001);反之,沉默miR-183的表达,细胞侵袭和迁移能力明显增强,Ezrin蛋白的表达水平增高(P0.01);高表达miR-183和Ezrin蛋白,与对照组(仅高表达miR-183)相比,细胞侵袭和迁移能力增强(P0.05);沉默miR-183和Ezrin的表达,与对照组(仅沉默miR-183)相比,细胞侵袭和迁移能力降低(P0.001)。结论:miR-183能够抑制结肠癌细胞SW620的侵袭和迁移,且通过调控其靶基因Ezrin蛋白的表达发挥作用。     

microRNA-155对于人膀胱癌细胞um-uc-3的迁移和侵袭能力影响的研究

【摘要】〓目的〓前期研究发现miR-155在多种实体瘤中具有促肿瘤细胞增殖的作用,本研究探讨miR-155对人膀胱癌细胞um-uc-3转移相关的生物学行为的影响。方法 (1)通过组织RNA研究,来讨论miR-155在膀胱癌组织中的表达差异;(2)将人工合成miR-155-mimics转入人膀胱癌细胞um-uc-3,并设立对照组;(3)通过qRT-PCR检测miR-155的转染效率;(4)划痕试验研究过表达miR-155的um-uc-3细胞迁移能力变化;(5)Transwell试验检测miR-155对um-uc-3细胞迁移、侵袭的影响;(6)Western-blot及qPCR检测肿瘤转移相关基因的表达情况。结果〓(1)组织中,qRT-PCR证实miR-155的表达量在膀胱癌组织中较癌旁组织增高;(2)qRT-PCR检测miR-155转染效率,实验组表达量明显增高(P<0.01);(3)划痕实验证实miR-155过表达的um-uc-3细胞有更强的迁移能力;(4)Transwell试验发现miR-155可以促进um-uc-3细胞迁移、侵袭,与对照组差异显著(P<0.01);(5)过表达miR-155的um-uc-3细胞中,β-catenin、vimentin、snail的表达量在RNA水平和蛋白水平都比对照组显著增高,但不涉及claudin-1。结论〓miR-155可以促进人膀胱癌细胞um-uc-3的迁移和侵袭。     

NORE1基因在肾透明细胞癌细胞迁移侵袭和血管生成中的作用及相关机制的研究

目的探讨NORE1基因过表达对肾透明细胞癌细胞迁移侵袭及血管生成的影响及其分子作用机制。方法利用NORE1过表达质粒和对照组质粒,分别转染人肾透明细胞癌786-O和ACHN细胞,Western blot检测细胞转染效率,Transwell细胞迁移实验和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭的能力,体外血管生成实验观察其血管生成能力,Western blot检测NORE1基因过表达后肾癌细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的蛋白表达水平。结果转染NORE1过表达质粒后,肾透明细胞癌786-O、ACHN细胞中NORE1表达量增加。NORE1基因过表达后肾透明细胞癌细胞迁移及侵袭能力减弱,血管生成能力减弱,差异均具有统计学意义(P0.001)。NORE1过表达组肾透明细胞癌细胞中MMP-9表达较对照组显著下降,而两组间MMP-2表达水平无显著性差异。结论肾透明细胞癌细胞中NORE1基因可以通过调节MMP-9的表达影响细胞的迁移侵袭及血管生成。     

miR-195-5p通过靶向ROCK1抑制肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化

目的探讨miR-195-5p对肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。方法通过转染miR-195-5p mimics或inhibitors分别过表达或抑制肾癌细胞中miR-195-5p的表达,转染靶向Rho相关螺旋蛋白激酶1(ROCK1)的小干扰RNA敲低肾癌细胞中ROCK1的表达量,利用细胞划痕实验和Transwell小室实验分别检测肾癌细胞的迁移和侵袭能力。通过双荧光素酶报告实验验证miR-195-5p对ROCK1的靶向调控作用,利用免疫印迹试验检测ROCK1及上皮-间质转化相关蛋白的表达水平。结果过表达miR-195-5p可显著抑制肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化,而抑制miR-195-5p的表达可明显促进肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化(P<0.05)。miR-195-5p可通过靶向ROCK1调控其在肾癌细胞中表达。敲低ROCK1后可部分抵消miR-195-5p inhibitors对肾癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响。结论miR-195-5p可通过靶向ROCK1抑制肾癌细胞的迁移、侵袭和上皮-间质转化。     

miR-184靶向AGO2调控AKT/mTOR信号通路对膀胱癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 研究miR-184在膀胱癌发生、发展过程中的作用及其相关机制。方法 收集2015年1月至2017年1月南阳市中心医院87例膀胱癌患者的手术切除标本,采用qRT-PCR检测膀胱癌及癌旁组织中miR-184的表达;通过生物信息学方法预测miR-184的靶基因并采用双荧光素酶实验及免疫荧光进行验证。在人膀胱癌细胞系T24中转染miR-184过表达质粒,MTT、Transwell侵袭和划痕实验检测细胞增殖、侵袭和迁移能力,Western blot检测AKT/mTOR通路蛋白的表达。结果 miR-184在膀胱癌组织中的相对表达水平1.238±0.026明显低于癌旁组织2.601±0.054,差异有统计学意义(t=22.57,P0.01);且其表达水平与膀胱癌患者的TNM分期(t=-5.61,P0.001)、淋巴结转移(t=-2.35,P=0.011)及组织学分级存在明显相关(t=2.171,P=0.033)。生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验证实miR-184能直接靶向结合AGO2基因3′-UTR。体外实验结果表明,转染miR-184模拟物后,膀胱癌细胞T24中AGO2mRNA和蛋白的表达水平明显下调,细胞增殖、迁移及侵袭能力降低,p-mTOR、p-AKT蛋白表达降低(P0.05)。结论 miR-184在膀胱癌组织中低表达,上调miR-184表达可抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力,其作用机制可能与AKT/mTOR信号通路的调节有关。     

microRNA-139-5p及其靶基因Notch1在结直肠癌中的作用

目的：探讨microRNA-139-5p（miR-139-5p）在结直肠癌中的表达及其对结直肠癌细胞转移和侵袭的影响。 方法：用荧光定量PCR方法检测miR-139-5p在结直肠癌组织与不同结直肠癌细胞株中的表达变化;用Boyden小室分析和伤口愈合实验检测miR-139-5p转染及miR-139-5p抑制对结直肠癌细胞转移和侵袭能力的影响;生物信息学方法预测miR-139-5p的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证,Western blot方法检测miR-139-5p转染对靶基因表达的影响。 结果：与各自的正常对照组比较,结直肠癌组织与结直肠癌细胞系中miR-139-5p表达均明显降低（P<0.05）。结直肠癌DLD1细胞和HCT116细胞转染miR-139-5p后,转移与侵袭能力均明显降低（均P<0.05）,而miR-139-5p抑制剂处理后,两种细胞的的侵袭能力均明显增强（均P<0.05）。生物信息学预测显示,Notch1是miR-139-5p的靶基因,且得到荧光素报告实验结果证实。Western blot结果显示,转染miR-139-5p后,结直肠癌DLD1细胞和HCT116细胞中Notch1蛋白表达均明显下调（均P<0.05）。 结论：miR-139-5p可能通过调节Notch1的表达而抑制肿瘤细胞的转移和侵袭,而下调的miR-139-5p可能在结直肠癌的发生发展中起了重要作用。     

MiR-519d靶向调控OCT4抑制膀胱癌细胞系5637增殖

目的:探讨miR-519d对膀胱癌细胞系5637增殖的影响及分子机制。方法:通过转染miRNA mimics在膀胱癌细胞系5637中过表达miR-519d,分别利用MTS及细胞集落形成试验,检测膀胱癌细胞系5637增殖能力的改变。通过双荧光素酶报道实验和Western Blot方法验证miR-519d对OCT4的靶向调控。利用OCT4特异性干扰RNA证实miR-519d通过靶向调控OCT4抑制膀胱癌细胞系5673增殖。结果:在膀胱癌细胞系过表达miR-519d后,细胞活性、增殖能力明显下降;双荧光素酶报道实验结果表明,相对于各对照组,共转染OCT4 3'UTR载体与miR-519d组荧光素酶相对活性明显降低(P0.05)。过表达miR-519d后5637细胞中OCT4蛋白表达下调。利用siRNA特异性下调OCT4表达后,5637细胞活性及增殖能力同样受到抑制。结论:miR-519d能靶向结合OCT4 3'UTR序列,通过下调OCT4的表达抑制膀胱癌细胞系5637的增殖。     

microRNA-31对AGS人胃癌细胞增殖、迁移及其LRH-1表达的影响

目的 探索microRNA-31 （miR-31） 的高表达对AGS人胃癌细胞生物学行为及其成纤维细胞核受体 （LRH-1） 蛋白表达的影响,并探索miR-31调控胃癌发生和发展的机理。方法 将AGS细胞分为3组,分别给予转染miR-31 （MT组）、转染miR-31阴性对照序列即空脂质体 （NC组） 及滴加PBS溶液 （BC组） 处理。分别采用细胞增殖和细胞毒性试剂盒 （CCK-8试剂盒）、流式细胞仪和Transwell实验检测3组细胞的增殖、凋亡、细胞周期和细胞迁移情况。采用Western blot法检测3组细胞中LRH-1蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告系统检测miR-31的作用位点。结果 CCK-8实验结果显示,转染4 d后,MT组、NC组及BC组细胞A450值的均值分别为1.31、2.26和2.14,MT组较低（P＜0.01）;流式细胞仪检测结果表明,MT组、NC组及BC组细胞凋亡率的均值分别为39.5%、9.3%和10.0%,G1＋S期细胞比例分别为92.54%、73.23%及74.58%,MT组的该2个指标均较高（P＜0.05）;Transwell实验结果表明,MT组的迁移细胞数低于NC组及BC组（P＜0.05）。Western blot结果表明,MT组细胞LRH-1蛋白的表达较BC组和NC组下调（P＜0.01）。结论 上调miR-31的表达对AGS细胞的增殖具有明显的抑制作用,且可促进其凋亡并降低细胞的迁移能力;miR-31可使LRH-1蛋白的表达下调,推测LRH-1基因可能是miR-31参与胃癌发生和发展的靶标之一。     

肿瘤相关巨噬细胞通过PI3K/Akt途径促进胰腺癌浸润迁移的研究

目的研究PI3K/Akt信号通路对胰腺癌细胞PANC-1浸润迁移能力的影响,进一步探讨肿瘤相关巨噬细胞促进胰腺癌发生发展的分子机制。 方法通过密度梯度离心法从健康成人外周血中分离单个核细胞,用IL-4体外诱导选择性激活的巨噬细胞(M2)。采用实时荧光定量PCR和Western blotting法检测胰腺癌PANC-1细胞PI3K、Akt mRNA和蛋白表达水平的变化,利用Transwell侵袭实验与划痕实验观察细胞浸润迁移能力的变化。 结果体外模拟胰腺癌微环境,将胰腺癌PANC-1细胞与不同激活状态的巨噬细胞共培养,证明M2可显著上调胰腺癌PANC-1细胞PI3K、Akt的mRNA和蛋白水平,共培养20 h后可明显促进胰腺癌PANC-1细胞的浸润与迁移能力。 结论肿瘤相关巨噬细胞可通过PI3K/Akt信号通路促进胰腺癌细胞的浸润与迁移。     

miR-152对前列腺癌细胞株迁移和侵袭能力的影响

目的研究miR-152在前列腺癌、前列腺正常组织中的表达情况及其在前列腺癌细胞系中的作用。方法采用TaqMan荧光定量RT—PCR方法检测8例前列腺癌和8例前列腺正常组织的样本中miR-152的表达水平。运用Transwell细胞迁移实验及侵袭实验评估miR一152对前列腺细胞系PC-3和DU145细胞功能的影响。结果与正常前列腺组织相比,miR-152在前列腺癌组织中的表达水平显著下调（P〈0．05）。体外实验中上调miR152的表达可以显著降低前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力（P〈O．05）。结论miR-152在前列腺癌中可作为一种肿瘤抑制因子,影响前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力。     

LncRNA DANCR regulates lymphatic metastasis of bladder cancer via the miR-335/VEGF-C axis

BackgroundSubstantial evidence indicate that long non-coding RNA (lncRNA) and microRNA (miRNA) act as key role in bladder cancer. Differentiation antagonistic ncRNA (DANCR) could be used as a biomarker in the occurrence and development of cancer. This study aims to explore the mechanism of DANCR/miR-335/VEGF-C axis affecting lymphatic metastasis of bladder cancer.MethodsqRT-PCR detects the expression of DANCR in bladder cancer cell lines (SW780, 5637, T24, UM-UC-3) and normal bladder cell lines (SV-HUC-1), and selects T24 cell lines for subsequent experiments. The expression levels of DANCR, miR-335 and VEGF were measured by qRT-PCR, and the dual luciferase reporter gene verified the targeted regulation of DANCR on miR-335 and miR-335 on VEGF. CCK-8, Transwell and Wound healing assay detect the proliferation, invasion and migration ability of bladder cancer cells, Endothelial cell adhesion assay and Western blot further prove the lymphatic metastasis of bladder cancer.ResultsIn this study, DANCR was highly expressed in bladder cancer cell lines. Transfection of si-DANCR significantly inhibits the proliferation, migration, invasion and lymphatic metastasis of bladder cancer cells. Dual luciferase assay confirmed that DANCR targets miR-335/VEGF-C. Transfection of miR-335 mimic promotes the proliferation, migration, invasion and lymphatic metastasis of bladder cancer cells, overexpression of DANCR eliminates the promotion of miR-335 mimic on bladder cancer cells. Further experiments proved that inhibition of miR-335 and overexpression of VEGF-C can reverse the inhibitory effect of silencing DANCR on bladder cancer cells.ConclusionsIn bladder cancer, DARCR plays an important role, which regulates the proliferation, migration, invasion and lymphatic metastasis of bladder cancer cells through the miR-335/VEGF-C molecular axis.     

MiR-134通过靶向调节KRAS抑制786-0肾透明细胞癌细胞上皮间质转化过程

目的探索miR-134在肾癌组织中的表达并研究其对肾透明细胞癌细胞786-0上皮间质转化的影响。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测miR-134在20对肾癌组织和786-0细胞中的表达情况;miR-134模拟物转染786-0后,划痕实验和Transwell实验分别检测肾癌细胞迁移和侵袭能力的改变情况,Western blot检测细胞中靶蛋白KRAS及其相关信号通路蛋白表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-134与KRAS 3′-UTR结合情况。结果 MiR-134在20对肾癌组织和786-0细胞中明显低表达(P0.01);miR-134模拟物转染后能够抑制肿瘤细胞侵袭(P0.01)和迁移的能力(P0.05),显著降低肿瘤细胞中KRAS蛋白的水平(P0.05)并抑制RAS/MAPK/ERK通路中关键蛋白p-ERK的表达(P0.05);双荧光素酶报告基因显示miR-134能与KRAS 3′-UTR结合,显著降低荧光值(P0.05)。结论 MiR-134在肾透明细胞癌中显著低表达,能通过靶向抑制KRAS表达调控下游RAS/MAPK/ERK通路活性,阻滞786-0细胞上皮间质转化过程,抑制肿瘤细胞的侵袭和转移。     

miRNA-639在乳腺癌中表达及其意义

目的：探讨miRNA-639（miR-639）在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌生长、侵袭及转移的关系。 方法：采用荧光定量PCR方法检测miR-639在60例乳腺癌组织（转移性乳腺癌30例,非转移性30例）与30例癌旁组织、以及人乳腺癌MD231细胞与MCF-7细胞中的表达;分析miR-639表达水平与乳腺癌患者临床病理特征关系;分别通过CCK-8实验、细胞划痕实验、Boyden小室实验检测miR-639在乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。 结果：miR-639的表达水平在乳腺癌组织中明显高于癌旁组织、在转移性乳腺癌组织中明显高于非转移性乳腺癌组织、在高侵袭性MD231细胞中明显高于低侵袭性MCF-7细胞,差异均有统计学意义（均P<0.05）。在各项临床病理因素中,miR-639的表达与仅乳腺癌患者的M分期有关（P<0.01）。转染miR-639抑制物后,MD231细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低,而转染miR-639后,MCF-7细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显升高（均P<0.05）。 结论：miR-639在乳腺癌中表达升高,且乳腺癌的增殖、迁移和侵袭能力随miR-639的表达水平升高而增加。